米非司酮配伍米索前列醇抗早孕蜕膜与绒毛细胞凋亡及其调控基因的研究
作者：李瑞珍 王振海 吴瑞芳 张彤艳 卢士燕
单位：050000 石家庄，河北医科大学第二医院妇产科[李瑞珍，王振海，吴瑞芳， 张彤艳(现在河北省邯郸市中心医院妇产科)，卢士燕]
关键词：米非司酮；米索前列醇；脱噬作用；基因；bcl-2；蜕膜
中华妇产科杂志990507 【摘要】 目的 探讨细胞凋亡及其调控基因B-细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)基因的表达与药物终止早孕的关系。方法 对随机采用米非司酮负压吸引(15例，米非司酮组)、米非司酮并米索前列醇(米索)(14例，米非司酮米索组)、负压吸引(15例，对照组)终止早孕经碘化丙锭染色的蜕膜与绒毛组织，应用流式细胞定性定量分析技术进行DNA分析，采用免疫荧光标记对bcl-2、bax基因蛋白进行分析。结果 米非司酮组、米非司酮米索组及对照组蜕膜凋亡水平分别为(14.0±3.9)%、(22.9±6.3)%、(5.3±9.3)%，绒毛凋亡水平分别为(10.9±2.8)%、(13.9±4.7)%、(4.6±3.0)%，米非司酮组与米非司酮米索组蜕膜与绒毛组织细胞凋亡水平较对照组明显升高(P<0.01～0.001)，DNA直方图上均有亚二倍体峰。蜕膜中，米非司酮米索组较米非司酮组细胞凋亡明显升高(P<0.01)，两组的蜕膜细胞凋亡水平明显高于绒毛(P<0.01)，蜕膜bcl-2/bax比值分别为1.4±0.7、0.9±0.3和1.4±0.7，绒毛bcl-2/bax比值分别为1.0±0.4、0.8±0.3和1.4±0.6；米非司酮米索组蜕膜与绒毛bcl-2/bax比值较对照组明显下降(P<0.05～0.01)，与细胞凋亡发生一致。结论 米非司酮终止早孕可能是通过诱导蜕膜与绒毛细胞凋亡来实现的，米索对其有协同作用。bcl-2/bax比值明显下降是诱导蜕膜与绒毛细胞凋亡的原因之一。
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Study on Decidual and Villous Cells Apoptosis and its Control Gene
in Medical Abortion
LI Ruizhen, WANG Zhenhai, WU Ruifang
The Second Hospital, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000
【Abstract】 Objective To study relatinship of decidual and villous cells apoptosis and its control gene B-cell lymphoma/leukemia-2(bcl-2), bcl-2 associated X protein (bax) with medical abortion. Methods Forty four women who volunteered to terminate their pregnancy were divided into 3 group: mifepristone group (exp. I, n=15), mifepristone with misoprostol group (exp. Ⅱ, n=14) and control group (n=15). The cell cycles of DNA of the decidual and villous cells stained with Propidium Iodide (PI) were analyzed and bcl-2 and bax gene protein labeled with immuno-fluorescence were detected by flow cytometry. Results The percentage of decidual cells apoptosis were (14.0±3.9)%, (22.9±6.3)%, (5.3±9.3)% and of villous apoptosis were (10.9±2.8)%, (13.9±4.7)%, (4.6±3.0)% in exp. Ⅰ, exp. Ⅱ and control group respectively. The apoptotic percentages in decidual and villous cells of exp. Ⅰ and exp. Ⅱ groups were significantly higher than that of control (P<0.01～0.001). On DNA histogram, apoptosis peaks appeared in all the groups. The decidual cell apoptosis of exp. Ⅱ groups was significantly higher than that of exp. Ⅰ group (P<0.01). Both decidual apoptotic percentages of exp. Ⅰ and exp. Ⅱ groups were significantly higher than that of villous (P<0.01). Decidual bcl-2/bax ratio were 1.4±0.7, 0.9±0.3, 1.4±0.7 and villous bcl-2/bax ratio were 1.0±0.4, 0.8±0.3, 1.4±0.6 in the 3 groups respectively. Both decidual and villous bcl-2/bax ratio of exp. Ⅱ group was significantly lower than that of control (P<0.05～0.01) which was in consistent with apoptosis. ConclusionsThese data indicated that mifepristone with misocprostol for terminating human early pregnancy might be realized by inducing decidual and villous cells excessive apoptosis. The descent of bcl-2/bax ratio could be one of the factors of inducing decidual and villous apoptosis.
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【Key words】 Mifepristone Misoprostol Apoptosis Genes, bcl-2 Decidua
本研究采用流式细胞分析技术，对米非司酮并米索前列醇(米索)终止早孕的蜕膜与绒毛组织进行细胞凋亡及其调控基因B-细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2, bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bcl-2 associated X protein, bax)的测定，以便在分子生物学水平探讨药物流产的机理。
资料与方法
一、研究对象
1997年10月至1998年3月在我科门诊要求终止早孕的妇女，44例。年龄20～30岁，身体健康，月经规则，停经5～7周，3个月内未服用过甾体类激素药物，未放置宫内节育器。经妇科检查、尿妊娠试验及B超检查确诊。随机分为3组，米非司酮组：15例；米非司酮米索组：14例；对照组：15例。各组年龄、孕龄、孕产次、身高、体重相似(P>0.05)。
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二、方法
1.标本采集：米非司酮组：首次口服米非司酮50 mg，之后每次25 mg、每日2次，总量150 mg，于第3天晨8时行人工流产时即刻取蜕膜与绒毛组织各0.5 g。米非司酮米索组：米非司酮服法同上，于第3天晨8时加服米索600 μg，留院观察孕囊排出后即刻收集蜕膜与绒毛组织各0.5 g。对照组：采用负压吸引人工流产后即刻收集蜕膜与绒毛组织各0.5 g。标本经70%冷乙醇固定后置4 ℃冰箱保存待测。
2. 主要试剂：鼠抗bcl-2基因蛋白抗体(100)、 bax 基因蛋白抗体(N-20)均为美国Santa Cruz Biotechnology 公司产品， 稀释度1∶100。
3.蜕膜与绒毛细胞凋亡测定组织样品制备: 采用机械法并5 g/L胃酶消化法制备单细胞悬液，取单细胞样品1×106/ml加入R Nase A(终浓度为60 μg/ml) 37℃作用30分钟，再加终浓度50 μg/ml 的碘化丙锭1.0 ml, 4℃避光染色20分钟上机检测。
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4.蜕膜绒毛bcl-2、bax基因蛋白测定组织样品的制备：(1) 机械法制备单细胞悬液; (2) 取细胞悬液0.1ml； (3) 加入0.1 ml工作液(稀释度1∶100)的单克隆抗体混匀，置室温30分钟；(4)加入磷酸缓冲液10 ml；(5) 1 000 r/min离心5分钟，弃上清；(6)加入FITC-羊抗鼠IgG工作液(稀释度1∶20)0.1 ml，室温孵育30分钟；(7)重复(4)、(5)步骤两次；(8)加入1 ml磷酸缓冲液混匀；(9)经300目网过滤至样品管中；(10)上机检测bcl-2、bax基因蛋白。
5.DNA及bcl-2、bax基因蛋白测定：流式细胞仪为FACS420型(美国BD公司产品)，以正常人外周血淋巴细胞作为流式细胞仪DNA定量标准。分析结果所用软件为美国BD公司 CONSORT 30。仪器CV值<5%，质量控制符合要求。
三、数据处理
各组数据均采用
±s表示。数据间显著性检验采用方差分析与t检验；数据间相关性采用最小二乘法直线回归法。
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结果
一、蜕膜细胞凋亡及bcl-2、bax基因蛋白的表达
在3组蜕膜标本DNA直方图上，均有亚二倍体峰(AP峰)。米非司酮组蜕膜细胞凋亡水平高于对照组，差异有显著性(P<0.01)；米非司酮米索组蜕膜细胞凋亡水平高于对照组，差异有极显著性(P<0.001)，也明显高于米非司酮组 (P<0.01)，增殖指数[PI，PI=(S+G2、M)/G0、G1+S+G2、M)]，各组间差异无显著性(P>0.05)，但米非司酮组及米非司酮米索组增殖指数有下降趋势。米非司酮米索组蜕膜bcl-2/bax比值明显低于对照组(P<0.05)。见表1。
表1 3组患者蜕膜组织细胞凋亡水平、细胞周期的分布及bcl-2、bax基因的表达(%，±s) 组别
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总例数
细胞凋亡
细胞周期
PI
bcl-2
bax
bcl-2/bax
G0、G1
S
G2、M
米非司酮组
15
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14.0±3.9
82.7±5.6
8.1±3.0
9.2±3.4
17.3±5.6
28.6±12.2
22.0±7.6
1.4±0.7
米非司酮米索组
14
22.9±6.3
80.7±5.5
, 百拇医药
9.0±2.0
10.4±4.1
19.4±5.5
22.4± 5.8
26.1±7.0
0.9±0.3
对照组
15
5.3±9.3
78.6±4.2
10.5±2.3
10.9±3.0
, 百拇医药
21.4±4.2
26.0± 5.9
20.5±6.7
1.4±0.8
二、绒毛细胞凋亡及bcl-2、bax基因蛋白的表达
3组绒毛标本DNA直方图上，均有亚二倍体峰。米非司酮组与米非司酮米索组绒毛组织细胞凋亡水平均明显高于对照组(P<0.01)，米非司酮米索组与米非司酮组比较，差异无显著性(P>0.05)，虽然米非司酮米索组细胞凋亡较米非司酮组高,但差异无显著性(P>0.05)。各组增殖指数间差异无显著性(P>0.05)。米非司酮米索组绒毛bcl-2/bax比值明显低于对照组(P<0.01)，见表2。
表2 3组患者绒毛组织细胞凋亡水平、细胞周期的分布及bcl-2、bax基因的表达(%，±s) 组别
, 百拇医药
总例数
细胞凋亡
细胞周期
PI
bcl-2
bax
bcl-2/bax
G0、G1
S
G2、M
米非司酮组
11
, http://www.100md.com
10.9±2.8
75.4±4.8
10.5±2.1
14.2±3.3
24.6±4.8
18.6±6.6
23.2±8.8
1.0±0.4
米非司酮米索组
13
13.9±4.7
71.7±7.6
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11.5±4.0
16.0±5.7
28.3±7.6
19.6±5.5
25.7±5.6
0.8±0.3
对照组
15
4.6±3.0
72.2±5.1
12.3±3.0
15.7±3.6
, 百拇医药
28.1±5.8
25.1±6.7
19.2±5.0
1.4±0.6
三、蜕膜及绒毛细胞凋亡水平的比较及相关分析
米非司酮组、米非司酮米索组蜕膜细胞凋亡水平明显高于绒毛(P<0.05，P<0.001)。对照组蜕膜、绒毛间细胞凋亡水平差异无显著性(P>0.05)。各组蜕膜、绒毛组织细胞凋亡水平无相关关系(P>0.05)。
讨论
一、蜕膜与绒毛细胞凋亡对药物抗早孕作用的意义
本研究发现，单用米非司酮及米非司酮并米索，均可引起蜕膜、绒毛组织细胞的凋亡。米非司酮并米索作用后蜕膜组织细胞凋亡水平明显高于单用米非司酮者(P<0.01)。提示，米索与米非司酮对蜕膜组织的细胞凋亡有协同作用，而对绒毛组织无明显协同作用。米非司酮组蜕膜细胞凋亡水平高于绒毛的凋亡水平，而米非司酮米索组蜕膜细胞凋亡较绒毛细胞凋亡有明显增加，但两种组织细胞凋亡无直线相关关系，说明米非司酮对绒毛有直接作用，并非继发于蜕膜的损伤。因此认为，米非司酮的靶器官不仅仅是蜕膜组织，绒毛组织也是不容忽视的。这一结果，解决了米非司酮能否直接作用于滋养细胞这一长期争论的问题。绒毛细胞凋亡水平低于蜕膜，可能与绒毛中米非司酮浓度较低有关[1]。
, 百拇医药
学者们认为，米非司酮与蜕膜组织中孕酮受体结合，阻断了孕激素的作用，使蜕膜变性坏死而终止早孕[2]。本研究显示，米非司酮的这一作用是通过诱导并促进蜕膜及绒毛组织细胞凋亡来实现的，米索对其有协同作用；孕囊排出后，可有少量绒毛和(或)蜕膜滞留于宫腔，因失去了米非司酮的继续作用而不能完全凋亡排出，是造成不全流产及流产后出血时间过长的原因之一。如果孕囊排出后继续应用小剂量米非司酮48小时以上，同时并用米索，有可能使残留绒毛与蜕膜组织继续凋亡，提高完全流产率、缩短药流后出血时间。这一观点为改进临床用药方法，减少不完全流产及缩短出血时间提供了理论依据，并已初步得到了临床证实[3]。
二、抗早孕药物对蜕膜与绒毛细胞凋亡调控的机理
细胞凋亡是米非司酮配伍米索抗早孕的机理之一，而细胞凋亡的调控是一个非常复杂的多因素作用过程。近年研究证实，细胞凋亡过程中其形态改变及死亡需有新基因的表达。原癌基因bcl-2在人类B细胞淋巴癌中过度表达，其作用主要是抑制细胞凋亡，延长细胞寿命[4]，是公认的抗凋亡基因。
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目前认为，细胞凋亡的发生是由抗凋亡基因(bcl-2)与凋亡诱导基因(bax)之间的比率所决定的。体外蜕膜模型研究发现，蜕膜细胞bcl-2基因表达下降，且随蜕膜化进展而下降更明显；bax 表达呈间质细胞特异性增加，尤其在腔上皮周围的间质首先出现，逐渐达整个间质。免疫组织化学研究显示，bax蛋白的表达伴随间质细胞的蜕膜化，bax表达增加是在凋亡核小体DNA片断出现之前，最终发生细胞凋亡[5]。本研究中，米非司酮米索组的蜕膜与绒毛中bcl-2基因蛋白较对照组表达下调，其抗凋亡作用减弱，bax基因蛋白表达上调，促进凋亡的作用增强，bcl-2/bax比值明显下降，诱导绒毛蜕膜组织细胞凋亡的发生。因此，本研究证实了米非司酮、米索可诱导蜕膜与绒毛组织bcl-2/bax基因蛋白比率下降，诱导细胞凋亡。但细胞凋亡是一个多因素控制的过程，可能尚有其他因素参与，尚需进一步研究。
参考文献
1 Shi WL, Wang JD, Fu Y, et al. The effect of RU486 on progesterone receptor in villous and extravillous trophoblast. Hum Reprod, 1993, 8:953-958.
, 百拇医药
2 Spitz IM, Bardin CW. Clinical pharmacology of RU486：an antiprogestin and antiglucocorticoid. Contraception, 1993,48：403-444.
3 李瑞珍，王振海，吴瑞芳.米非司酮配伍米索前列醇终止早孕的最佳剂量探讨. 河北医科大学学报，1998，19：299-300.
4 Reed JC. Bcl-2 and regulation of programmed cell death. J Cell Biol, 1994, 124：1-6.
5 Akcali KC, Khan SA, Moulton BC. Effect of decidualization on the expression of bax and bcl-2 in the rat uterine endometrium. Endocrinology, 1996,137： 3123-3131.
(收稿：1998-07-16 修回：1999-01-29), 百拇医药
单位：050000 石家庄，河北医科大学第二医院妇产科[李瑞珍，王振海，吴瑞芳， 张彤艳(现在河北省邯郸市中心医院妇产科)，卢士燕]
关键词：米非司酮；米索前列醇；脱噬作用；基因；bcl-2；蜕膜
中华妇产科杂志990507 【摘要】 目的 探讨细胞凋亡及其调控基因B-细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)基因的表达与药物终止早孕的关系。方法 对随机采用米非司酮负压吸引(15例，米非司酮组)、米非司酮并米索前列醇(米索)(14例，米非司酮米索组)、负压吸引(15例，对照组)终止早孕经碘化丙锭染色的蜕膜与绒毛组织，应用流式细胞定性定量分析技术进行DNA分析，采用免疫荧光标记对bcl-2、bax基因蛋白进行分析。结果 米非司酮组、米非司酮米索组及对照组蜕膜凋亡水平分别为(14.0±3.9)%、(22.9±6.3)%、(5.3±9.3)%，绒毛凋亡水平分别为(10.9±2.8)%、(13.9±4.7)%、(4.6±3.0)%，米非司酮组与米非司酮米索组蜕膜与绒毛组织细胞凋亡水平较对照组明显升高(P<0.01～0.001)，DNA直方图上均有亚二倍体峰。蜕膜中，米非司酮米索组较米非司酮组细胞凋亡明显升高(P<0.01)，两组的蜕膜细胞凋亡水平明显高于绒毛(P<0.01)，蜕膜bcl-2/bax比值分别为1.4±0.7、0.9±0.3和1.4±0.7，绒毛bcl-2/bax比值分别为1.0±0.4、0.8±0.3和1.4±0.6；米非司酮米索组蜕膜与绒毛bcl-2/bax比值较对照组明显下降(P<0.05～0.01)，与细胞凋亡发生一致。结论 米非司酮终止早孕可能是通过诱导蜕膜与绒毛细胞凋亡来实现的，米索对其有协同作用。bcl-2/bax比值明显下降是诱导蜕膜与绒毛细胞凋亡的原因之一。
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Study on Decidual and Villous Cells Apoptosis and its Control Gene
in Medical Abortion
LI Ruizhen, WANG Zhenhai, WU Ruifang
The Second Hospital, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000
【Abstract】 Objective To study relatinship of decidual and villous cells apoptosis and its control gene B-cell lymphoma/leukemia-2(bcl-2), bcl-2 associated X protein (bax) with medical abortion. Methods Forty four women who volunteered to terminate their pregnancy were divided into 3 group: mifepristone group (exp. I, n=15), mifepristone with misoprostol group (exp. Ⅱ, n=14) and control group (n=15). The cell cycles of DNA of the decidual and villous cells stained with Propidium Iodide (PI) were analyzed and bcl-2 and bax gene protein labeled with immuno-fluorescence were detected by flow cytometry. Results The percentage of decidual cells apoptosis were (14.0±3.9)%, (22.9±6.3)%, (5.3±9.3)% and of villous apoptosis were (10.9±2.8)%, (13.9±4.7)%, (4.6±3.0)% in exp. Ⅰ, exp. Ⅱ and control group respectively. The apoptotic percentages in decidual and villous cells of exp. Ⅰ and exp. Ⅱ groups were significantly higher than that of control (P<0.01～0.001). On DNA histogram, apoptosis peaks appeared in all the groups. The decidual cell apoptosis of exp. Ⅱ groups was significantly higher than that of exp. Ⅰ group (P<0.01). Both decidual apoptotic percentages of exp. Ⅰ and exp. Ⅱ groups were significantly higher than that of villous (P<0.01). Decidual bcl-2/bax ratio were 1.4±0.7, 0.9±0.3, 1.4±0.7 and villous bcl-2/bax ratio were 1.0±0.4, 0.8±0.3, 1.4±0.6 in the 3 groups respectively. Both decidual and villous bcl-2/bax ratio of exp. Ⅱ group was significantly lower than that of control (P<0.05～0.01) which was in consistent with apoptosis. ConclusionsThese data indicated that mifepristone with misocprostol for terminating human early pregnancy might be realized by inducing decidual and villous cells excessive apoptosis. The descent of bcl-2/bax ratio could be one of the factors of inducing decidual and villous apoptosis.
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【Key words】 Mifepristone Misoprostol Apoptosis Genes, bcl-2 Decidua
本研究采用流式细胞分析技术，对米非司酮并米索前列醇(米索)终止早孕的蜕膜与绒毛组织进行细胞凋亡及其调控基因B-细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2, bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bcl-2 associated X protein, bax)的测定，以便在分子生物学水平探讨药物流产的机理。
资料与方法
一、研究对象
1997年10月至1998年3月在我科门诊要求终止早孕的妇女，44例。年龄20～30岁，身体健康，月经规则，停经5～7周，3个月内未服用过甾体类激素药物，未放置宫内节育器。经妇科检查、尿妊娠试验及B超检查确诊。随机分为3组，米非司酮组：15例；米非司酮米索组：14例；对照组：15例。各组年龄、孕龄、孕产次、身高、体重相似(P>0.05)。
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二、方法
1.标本采集：米非司酮组：首次口服米非司酮50 mg，之后每次25 mg、每日2次，总量150 mg，于第3天晨8时行人工流产时即刻取蜕膜与绒毛组织各0.5 g。米非司酮米索组：米非司酮服法同上，于第3天晨8时加服米索600 μg，留院观察孕囊排出后即刻收集蜕膜与绒毛组织各0.5 g。对照组：采用负压吸引人工流产后即刻收集蜕膜与绒毛组织各0.5 g。标本经70%冷乙醇固定后置4 ℃冰箱保存待测。
2. 主要试剂：鼠抗bcl-2基因蛋白抗体(100)、 bax 基因蛋白抗体(N-20)均为美国Santa Cruz Biotechnology 公司产品， 稀释度1∶100。
3.蜕膜与绒毛细胞凋亡测定组织样品制备: 采用机械法并5 g/L胃酶消化法制备单细胞悬液，取单细胞样品1×106/ml加入R Nase A(终浓度为60 μg/ml) 37℃作用30分钟，再加终浓度50 μg/ml 的碘化丙锭1.0 ml, 4℃避光染色20分钟上机检测。
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4.蜕膜绒毛bcl-2、bax基因蛋白测定组织样品的制备：(1) 机械法制备单细胞悬液; (2) 取细胞悬液0.1ml； (3) 加入0.1 ml工作液(稀释度1∶100)的单克隆抗体混匀，置室温30分钟；(4)加入磷酸缓冲液10 ml；(5) 1 000 r/min离心5分钟，弃上清；(6)加入FITC-羊抗鼠IgG工作液(稀释度1∶20)0.1 ml，室温孵育30分钟；(7)重复(4)、(5)步骤两次；(8)加入1 ml磷酸缓冲液混匀；(9)经300目网过滤至样品管中；(10)上机检测bcl-2、bax基因蛋白。
5.DNA及bcl-2、bax基因蛋白测定：流式细胞仪为FACS420型(美国BD公司产品)，以正常人外周血淋巴细胞作为流式细胞仪DNA定量标准。分析结果所用软件为美国BD公司 CONSORT 30。仪器CV值<5%，质量控制符合要求。
三、数据处理
各组数据均采用
±s表示。数据间显著性检验采用方差分析与t检验；数据间相关性采用最小二乘法直线回归法。, 百拇医药
结果
一、蜕膜细胞凋亡及bcl-2、bax基因蛋白的表达
在3组蜕膜标本DNA直方图上，均有亚二倍体峰(AP峰)。米非司酮组蜕膜细胞凋亡水平高于对照组，差异有显著性(P<0.01)；米非司酮米索组蜕膜细胞凋亡水平高于对照组，差异有极显著性(P<0.001)，也明显高于米非司酮组 (P<0.01)，增殖指数[PI，PI=(S+G2、M)/G0、G1+S+G2、M)]，各组间差异无显著性(P>0.05)，但米非司酮组及米非司酮米索组增殖指数有下降趋势。米非司酮米索组蜕膜bcl-2/bax比值明显低于对照组(P<0.05)。见表1。
表1 3组患者蜕膜组织细胞凋亡水平、细胞周期的分布及bcl-2、bax基因的表达(%，
±s) 组别, http://www.100md.com
总例数
细胞凋亡
细胞周期
PI
bcl-2
bax
bcl-2/bax
G0、G1
S
G2、M
米非司酮组
15
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14.0±3.9
82.7±5.6
8.1±3.0
9.2±3.4
17.3±5.6
28.6±12.2
22.0±7.6
1.4±0.7
米非司酮米索组
14
22.9±6.3
80.7±5.5
, 百拇医药
9.0±2.0
10.4±4.1
19.4±5.5
22.4± 5.8
26.1±7.0
0.9±0.3
对照组
15
5.3±9.3
78.6±4.2
10.5±2.3
10.9±3.0
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21.4±4.2
26.0± 5.9
20.5±6.7
1.4±0.8
二、绒毛细胞凋亡及bcl-2、bax基因蛋白的表达
3组绒毛标本DNA直方图上，均有亚二倍体峰。米非司酮组与米非司酮米索组绒毛组织细胞凋亡水平均明显高于对照组(P<0.01)，米非司酮米索组与米非司酮组比较，差异无显著性(P>0.05)，虽然米非司酮米索组细胞凋亡较米非司酮组高,但差异无显著性(P>0.05)。各组增殖指数间差异无显著性(P>0.05)。米非司酮米索组绒毛bcl-2/bax比值明显低于对照组(P<0.01)，见表2。
表2 3组患者绒毛组织细胞凋亡水平、细胞周期的分布及bcl-2、bax基因的表达(%，
±s) 组别, 百拇医药
总例数
细胞凋亡
细胞周期
PI
bcl-2
bax
bcl-2/bax
G0、G1
S
G2、M
米非司酮组
11
, http://www.100md.com
10.9±2.8
75.4±4.8
10.5±2.1
14.2±3.3
24.6±4.8
18.6±6.6
23.2±8.8
1.0±0.4
米非司酮米索组
13
13.9±4.7
71.7±7.6
, http://www.100md.com
11.5±4.0
16.0±5.7
28.3±7.6
19.6±5.5
25.7±5.6
0.8±0.3
对照组
15
4.6±3.0
72.2±5.1
12.3±3.0
15.7±3.6
, 百拇医药
28.1±5.8
25.1±6.7
19.2±5.0
1.4±0.6
三、蜕膜及绒毛细胞凋亡水平的比较及相关分析
米非司酮组、米非司酮米索组蜕膜细胞凋亡水平明显高于绒毛(P<0.05，P<0.001)。对照组蜕膜、绒毛间细胞凋亡水平差异无显著性(P>0.05)。各组蜕膜、绒毛组织细胞凋亡水平无相关关系(P>0.05)。
讨论
一、蜕膜与绒毛细胞凋亡对药物抗早孕作用的意义
本研究发现，单用米非司酮及米非司酮并米索，均可引起蜕膜、绒毛组织细胞的凋亡。米非司酮并米索作用后蜕膜组织细胞凋亡水平明显高于单用米非司酮者(P<0.01)。提示，米索与米非司酮对蜕膜组织的细胞凋亡有协同作用，而对绒毛组织无明显协同作用。米非司酮组蜕膜细胞凋亡水平高于绒毛的凋亡水平，而米非司酮米索组蜕膜细胞凋亡较绒毛细胞凋亡有明显增加，但两种组织细胞凋亡无直线相关关系，说明米非司酮对绒毛有直接作用，并非继发于蜕膜的损伤。因此认为，米非司酮的靶器官不仅仅是蜕膜组织，绒毛组织也是不容忽视的。这一结果，解决了米非司酮能否直接作用于滋养细胞这一长期争论的问题。绒毛细胞凋亡水平低于蜕膜，可能与绒毛中米非司酮浓度较低有关[1]。
, 百拇医药
学者们认为，米非司酮与蜕膜组织中孕酮受体结合，阻断了孕激素的作用，使蜕膜变性坏死而终止早孕[2]。本研究显示，米非司酮的这一作用是通过诱导并促进蜕膜及绒毛组织细胞凋亡来实现的，米索对其有协同作用；孕囊排出后，可有少量绒毛和(或)蜕膜滞留于宫腔，因失去了米非司酮的继续作用而不能完全凋亡排出，是造成不全流产及流产后出血时间过长的原因之一。如果孕囊排出后继续应用小剂量米非司酮48小时以上，同时并用米索，有可能使残留绒毛与蜕膜组织继续凋亡，提高完全流产率、缩短药流后出血时间。这一观点为改进临床用药方法，减少不完全流产及缩短出血时间提供了理论依据，并已初步得到了临床证实[3]。
二、抗早孕药物对蜕膜与绒毛细胞凋亡调控的机理
细胞凋亡是米非司酮配伍米索抗早孕的机理之一，而细胞凋亡的调控是一个非常复杂的多因素作用过程。近年研究证实，细胞凋亡过程中其形态改变及死亡需有新基因的表达。原癌基因bcl-2在人类B细胞淋巴癌中过度表达，其作用主要是抑制细胞凋亡，延长细胞寿命[4]，是公认的抗凋亡基因。
, http://www.100md.com
目前认为，细胞凋亡的发生是由抗凋亡基因(bcl-2)与凋亡诱导基因(bax)之间的比率所决定的。体外蜕膜模型研究发现，蜕膜细胞bcl-2基因表达下降，且随蜕膜化进展而下降更明显；bax 表达呈间质细胞特异性增加，尤其在腔上皮周围的间质首先出现，逐渐达整个间质。免疫组织化学研究显示，bax蛋白的表达伴随间质细胞的蜕膜化，bax表达增加是在凋亡核小体DNA片断出现之前，最终发生细胞凋亡[5]。本研究中，米非司酮米索组的蜕膜与绒毛中bcl-2基因蛋白较对照组表达下调，其抗凋亡作用减弱，bax基因蛋白表达上调，促进凋亡的作用增强，bcl-2/bax比值明显下降，诱导绒毛蜕膜组织细胞凋亡的发生。因此，本研究证实了米非司酮、米索可诱导蜕膜与绒毛组织bcl-2/bax基因蛋白比率下降，诱导细胞凋亡。但细胞凋亡是一个多因素控制的过程，可能尚有其他因素参与，尚需进一步研究。
参考文献
1 Shi WL, Wang JD, Fu Y, et al. The effect of RU486 on progesterone receptor in villous and extravillous trophoblast. Hum Reprod, 1993, 8:953-958.
, 百拇医药
2 Spitz IM, Bardin CW. Clinical pharmacology of RU486：an antiprogestin and antiglucocorticoid. Contraception, 1993,48：403-444.
3 李瑞珍，王振海，吴瑞芳.米非司酮配伍米索前列醇终止早孕的最佳剂量探讨. 河北医科大学学报，1998，19：299-300.
4 Reed JC. Bcl-2 and regulation of programmed cell death. J Cell Biol, 1994, 124：1-6.
5 Akcali KC, Khan SA, Moulton BC. Effect of decidualization on the expression of bax and bcl-2 in the rat uterine endometrium. Endocrinology, 1996,137： 3123-3131.
(收稿：1998-07-16 修回：1999-01-29), 百拇医药