鼻咽癌组织p53蛋白积聚与血清EB病毒抗体ⅠgA/VCA的关系
作者：李群 宗永生 刘克拉 张昌卿
单位：宗永生 中山医科大学病理教研室(广州，510089)；刘克拉 张昌卿 中山医科大学肿瘤防治中心(广州，510060)
关键词：p53；鼻咽肿瘤；爱波斯坦-巴尔病毒；血清学
癌症99zk01
【摘要】目的：研究鼻咽癌活检组织中p53积聚与患者血清EB病毒抗体ⅠgA/VCA滴度水平的相关关系。材料和方法：用免疫组化方法检测取自36例鼻咽癌组织中p53表达和细胞增生情况；用免疫酶标法检测患者血清ⅠgA/VCA滴度。结果：鼻咽癌活检组织中p53蛋白表达与患者血清ⅠgA/VCA几何平均滴度(geometricmeantitre,GMT)和细胞增生核抗原(PCNA)表达程度正相关。10例p53高积聚(+++)患者的ⅠgA/VCAGMT(519.88±2.53)明显高于12例无p53积聚患者(226±2.84)。PCNA表达强度与ⅠgA/VCAGMT亦呈正相关。结论：p53积聚强度与PCNA呈正相关提示鼻咽癌组织中积聚的p53已丧失阻止细胞从G1期进入S期的生理功能。而p53积聚强度与患者血清ⅠgA/VCAGMT升高呈正相关提示，鼻咽癌细胞中EB病毒随癌细胞增生加速而增多可能是患者ⅠgA/VCA滴度升高的原因。
, 百拇医药
中图号：R739.63 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)s0-0001-03
Relationship between p53 accumulation and immunoglobulin A against
viral capsid antigen of Epstein- Barr virus(Ⅰ gA/VCA)
in nasopharyngeal carcinoma(NPC)
LI Qun， ZONG Yong-sheng， LIU Ke-la,et al.
Dcpartmcnt of Pathology,Sun Yat-sen Univcrsity of Mcdical Scicnccs,Guangzhou 510089,P.R.China
, 百拇医药
【Abstract】 Objective：To investigate the relationship between p53 accumulation of NPC tissues and patients serum ⅠgA/VCA titre. Material and Methods： Using immunohistochemistry to detect the p53 accumulation and ccll prolifcration muclcar antigen and immunocnzymatic mcthod to assay the serum ⅠgA/VCA titre in 36 NPCs. Results：The p53 accumulation was positively correlated with both patients serum ⅠgA/VCA titre and NPC cell proliferation nuclear antigen expression. The geometric mean titre(GMT)of ⅠgA/VCA in 10 NPCs with marked p53 accumulation(+++)(519.88± 2.53)was significantly highcr than that in 12 NPCs without accumulation(- ～ + )(226.26± 2.84). Conclusions： The correlation between p53 accumulation and PCNA expression in NPC tissues indicates that accumulated p53 in NPC cells has lost its physiological function to check the cells from G1-to S-phase,and the phenomenon of p53 accumulation correlated to the serum ⅠgA/VCA GMT in NPC paticnts implies that EB virus in NPC cell replication following the increased carcinomous cell proliferation might be the reason of elevatlion of serum ⅠgA/VCA GMT in NPC patients.
, 百拇医药
Key words： p53;Nasopharyngeal carcinoma;Epstein Barr virus;Scrology
抗EB病毒壳抗原的血清免疫球蛋白(ⅠgA/VCA)滴度升高作为诊断鼻咽癌的辅助指标应用于临床已多年。晚期患者ⅠgA/VCA几何平均滴度(geometricmeantitre,GMT)常高于早期患者〔1〕。另外，鼻咽癌组织中常见p53积聚，且发现该现象与细胞增殖指标PCNA表达呈正相关〔2〕。Porter等曾观察鼻咽癌患者血清ⅠgA/VCA滴度与其癌组织中p53表达的关系，认为两者无关〔3〕。本文以鼻咽癌高发区广东省的36例鼻咽癌患者为研究对象，观察了两种现象之间的关系，现报告如下。
1材料和方法
1.1对象和材料
随机收集36例就诊于中山医科大学肿瘤医院的鼻咽癌患者血清和鼻咽活检组织，鼻咽癌组织用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋。
, 百拇医药
1.2免疫组化方法
采用LSAB免疫组化方法，DAB显色，甲基绿衬染。鼠抗人单克隆抗体p53(Do-7；M7001)、PCNA(pc10；M0879)以及LSAB试剂盒均购自DAKO公司。抗p53抗体工作浓度为1∶100，组织经微波处理修复抗原10分钟。抗PCNA抗体工作浓度为1∶50，组织不经微波处理。
阳性结果判断：肿瘤细胞核中出现棕色颗粒为阳性。根据阳性细胞占肿瘤细胞数的比例进行半定量分级：1).p53：阳性细胞数≤10%为(+)，11%～70%为(++)，≥71%为(+++)，大于两个(+)者视为积聚。2).PCNA：阳性细胞≤25%为(+)，26%～50%为(++)，≥51%为(+++)。
1.3免疫酶标法
检测患者血清中ⅠgA/VCA滴度根据曾毅等报道的方法〔4〕，以B95-8细胞为靶细胞，采用AEC作为显色底物，故抗原抗体复合物呈红棕色。玻片上有大于10%的细胞呈红棕色为阳性。
, 百拇医药
1.4统计学处理：t检验，χ2检验和等级相关分析。
2结果
2.1 p53表达与患者血清ⅠgA/VCA滴度的关系
p53表达率(1+～3+)和p53积聚率(2+～3+)分别为944%(34/36)和667%(24/36)。鼻咽癌组织中p53表达与患者血清ⅠgA/VCA滴度呈正相关(P<0.05)(表1)
p53高积聚(3+)的患者ⅠgA/VCAGMT(519.88±2.53)明显高于无p53积聚患者(226±2.84)(P<0.05)。
表1 36例鼻咽癌组织中p53蛋白表达与患者血清ⅠgA/VCA滴度的关系
P53
, 百拇医药
n
IgA/VCA滴度
1/20
1/40
1/80
1/160
1/320
1/640
1/1280
-
2
1
0
, 百拇医药
0
0
1
0
0
1+
10
0
1
0
1
6
2
0
, 百拇医药
2+
14
0
1
1
1
3
5
3
3+
10
0
0
0
, 百拇医药
3
1
2
4
合计
36
1
2
1
5
11
9
7
2.2 p53表达与PCNA表达的关系
, 百拇医药
鼻咽癌组织中PCNA表达率100%(36/36)。p53与PCNA表达呈正相关(P〈0.001)(表2)
表2 36例鼻咽癌组织中p53蛋白与PCNA表达的关系
P53
n
PCNA
+
++
+++
-
2
1
1
, http://www.100md.com
0
+
10
3
5
2
++
14
0
10
4
+++
10
0
, http://www.100md.com
2
8
合计
36
4
18
14
2.3PCNA表达与患者ⅠgA/VCA滴度的关系
鼻咽癌组织中PCNA表达与ⅠgA/VCA滴度也呈正相关(P<0.05)(表3)
表3 鼻咽癌组织中PCNA表达与患者血清ⅠgA/VCA滴度的关系
PCNA
, 百拇医药
n
IgA/VCA滴度
1/20
1/40
1/80
1/160
1/320
1/640
1/1280
1+
4
0
1
, http://www.100md.com
0
0
3
0
0
2+
18
1
1
1
1
7
4
3
, 百拇医药
3+
14
0
0
0
4
1
5
4
合计
36
1
2
1
, 百拇医药
5
11
9
7
3讨论
鼻咽癌组织中p53积聚是常见现象〔2〕。大多数鼻咽癌患者血清ⅠgA/VCA滴度升高〔5〕。本文结果再次证实上述结论。两者在鼻咽癌发生发展过程中有无关系是一个令人感兴趣的问题。
野生型p53调节细胞生长的作用主要在于它能控制细胞从G1晚期进入S期〔6〕。鼻咽癌中虽有p53积聚，但其基因的5-8外显子突变率很低〔7〕，这种积聚的p53是否已丧失控制细胞进入S期的功能?本文结果显示鼻咽癌组织中p53蛋白表达与PCNA表达呈正相关，与本研究组以前用抗p53多抗CM-1检测249例鼻咽癌组织中p53蛋白和PCNA表达的结果一致〔2〕。PCNA表达于增殖周期细胞，在细胞周期的S期合成最多。但不见于G0期细胞。
, http://www.100md.com
故是反映细胞增殖的指标。上述研究结果说明鼻咽癌组织中积聚的p53蛋白已丧失了抑制细胞生长的功能。p53可通过其下游基因p21WAF1调控PCNA的作用。失活的p53蛋白对一系列p53下游靶基因的调节作用丧失，最终可导致鼻咽癌细胞中PCNA升高〔8，9〕。本文p53蛋白和PCNA表达均与患者血清中ⅠgA/VCA滴度呈正相关的结果提示p53蛋白积聚增多与患者血清ⅠgA/VCA升高之间的正相关关系可能与p53失活后引起肿瘤细胞增殖加快有关。
众所周知，EB病毒DNA片段的复制是与肿瘤细胞DNA合成同时进行的，因此子细胞与母细胞拥有同等数量的EB病毒基因拷贝〔10〕。其机理可能是EB病毒的延迟促进子(Qp)在细胞增生时被激活，打开了EBNA-1mRNA的转录程序，而EBNA-1mRNA则启动了EB病毒DNA也就越多。这可为患者血清ⅠgA/VCAGMT与其癌组织中p53和PCNA的表达强度呈正相关提供理论上的依据。
综上所述，鼻咽癌组织中p53高积聚和血清ⅠgA/VCA高滴度这两个指标可能具有临床意义。
, 百拇医药
〔参考文献〕
钟建明，曾毅，廖建，等.EpsleinBarr病毒ⅠgA/VCA抗体变动规律和鼻咽癌发病的关系〔J〕.中华实验和临床病毒学杂志，1996；10(3)：225～228.
钱洪流，宗永生，张昌卿.鼻咽癌中p53蛋白积聚的生物学特征和临床意义〔J〕.临床与实验病理学杂志，1996，12(1)：15～18
李锦添，宗永生.鼻咽癌的病理改变与血清中EB病毒VCA/ⅠgA抗体滴度的关系〔J〕.中山医学院学报，1983，4(1)：17～26.
曾毅，刘育希，刘纯仁，等.应用免疫酶标法和放射自显影法普查鼻咽癌〔J〕.中华肿瘤
杂志，1992，69：3-7
Porter MJ,Field JK,Lee JCK,et al.Detection of the tumour suppressor gene p53 in nasopharyngeal carcinoma in Hong Kong Chinese〔 J〕 .Canccr Research,1994,14(B):1357～ 1360.
, http://www.100md.com
Mercer WE.Cell cycle regulation and the p53 tumor suppressor protein〔 J〕 .Cril Rev Eukaryol Gene Expr,1992,2(3):251～ 263.
Sun Y,Hcgamycr G,Cheng YJ,et al.Am infrequent point mutation of the p53 gene in human nasopharyngeal carcinoma〔 J〕 .Proc Natl Acad Sci USA,1992,89(14):6515- 6520.
Smith ML,Chen IT,Zhang Q,et al.Interaction of p53 regulated protein GADD45 with proliferation cell nuclear antigen〔 J〕 .Science,1994,266:1376.
, 百拇医药
Li R,WAga S,Hannon GJ,et al.Differential effect by the p21 CDK inhibitor on PCNA- dependent DNA replication and repair〔 J〕 .Nature,1994,371:534.
Liebowitz D,Kieff E.Epstein- Barr virus〔 A〕 .In The Human Herpesviruses〔 M〕 .Roizman B,Whitley RJ,Lopez C.eds.New York,New York:Raven Press,Ltd,1993:107.
Sung NS,Wilson J,Davenport M,et al.Reciprocal regulation of the Epstein- Barr virusBamHI- Fpromoter by EBNA- 1 and an E2F transeription factor〔 J〕 .Mol Cell Bio,1994,14:7144～ 7152.
〔 编 辑 ： 林 秀 健 ， 校 对 ： 周 玉 仁 〕
收稿日期：1998-07-09；修回日期：1998-09-17
基金项目：本课题获国家自然科学基金资助(39730200,39470295)
李群(现在海南医学院病理学教研室工作), http://www.100md.com
单位：宗永生 中山医科大学病理教研室(广州，510089)；刘克拉 张昌卿 中山医科大学肿瘤防治中心(广州，510060)
关键词：p53；鼻咽肿瘤；爱波斯坦-巴尔病毒；血清学
癌症99zk01
【摘要】目的：研究鼻咽癌活检组织中p53积聚与患者血清EB病毒抗体ⅠgA/VCA滴度水平的相关关系。材料和方法：用免疫组化方法检测取自36例鼻咽癌组织中p53表达和细胞增生情况；用免疫酶标法检测患者血清ⅠgA/VCA滴度。结果：鼻咽癌活检组织中p53蛋白表达与患者血清ⅠgA/VCA几何平均滴度(geometricmeantitre,GMT)和细胞增生核抗原(PCNA)表达程度正相关。10例p53高积聚(+++)患者的ⅠgA/VCAGMT(519.88±2.53)明显高于12例无p53积聚患者(226±2.84)。PCNA表达强度与ⅠgA/VCAGMT亦呈正相关。结论：p53积聚强度与PCNA呈正相关提示鼻咽癌组织中积聚的p53已丧失阻止细胞从G1期进入S期的生理功能。而p53积聚强度与患者血清ⅠgA/VCAGMT升高呈正相关提示，鼻咽癌细胞中EB病毒随癌细胞增生加速而增多可能是患者ⅠgA/VCA滴度升高的原因。
, 百拇医药
中图号：R739.63 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)s0-0001-03
Relationship between p53 accumulation and immunoglobulin A against
viral capsid antigen of Epstein- Barr virus(Ⅰ gA/VCA)
in nasopharyngeal carcinoma(NPC)
LI Qun， ZONG Yong-sheng， LIU Ke-la,et al.
Dcpartmcnt of Pathology,Sun Yat-sen Univcrsity of Mcdical Scicnccs,Guangzhou 510089,P.R.China
, 百拇医药
【Abstract】 Objective：To investigate the relationship between p53 accumulation of NPC tissues and patients serum ⅠgA/VCA titre. Material and Methods： Using immunohistochemistry to detect the p53 accumulation and ccll prolifcration muclcar antigen and immunocnzymatic mcthod to assay the serum ⅠgA/VCA titre in 36 NPCs. Results：The p53 accumulation was positively correlated with both patients serum ⅠgA/VCA titre and NPC cell proliferation nuclear antigen expression. The geometric mean titre(GMT)of ⅠgA/VCA in 10 NPCs with marked p53 accumulation(+++)(519.88± 2.53)was significantly highcr than that in 12 NPCs without accumulation(- ～ + )(226.26± 2.84). Conclusions： The correlation between p53 accumulation and PCNA expression in NPC tissues indicates that accumulated p53 in NPC cells has lost its physiological function to check the cells from G1-to S-phase,and the phenomenon of p53 accumulation correlated to the serum ⅠgA/VCA GMT in NPC paticnts implies that EB virus in NPC cell replication following the increased carcinomous cell proliferation might be the reason of elevatlion of serum ⅠgA/VCA GMT in NPC patients.
, 百拇医药
Key words： p53;Nasopharyngeal carcinoma;Epstein Barr virus;Scrology
抗EB病毒壳抗原的血清免疫球蛋白(ⅠgA/VCA)滴度升高作为诊断鼻咽癌的辅助指标应用于临床已多年。晚期患者ⅠgA/VCA几何平均滴度(geometricmeantitre,GMT)常高于早期患者〔1〕。另外，鼻咽癌组织中常见p53积聚，且发现该现象与细胞增殖指标PCNA表达呈正相关〔2〕。Porter等曾观察鼻咽癌患者血清ⅠgA/VCA滴度与其癌组织中p53表达的关系，认为两者无关〔3〕。本文以鼻咽癌高发区广东省的36例鼻咽癌患者为研究对象，观察了两种现象之间的关系，现报告如下。
1材料和方法
1.1对象和材料
随机收集36例就诊于中山医科大学肿瘤医院的鼻咽癌患者血清和鼻咽活检组织，鼻咽癌组织用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋。
, 百拇医药
1.2免疫组化方法
采用LSAB免疫组化方法，DAB显色，甲基绿衬染。鼠抗人单克隆抗体p53(Do-7；M7001)、PCNA(pc10；M0879)以及LSAB试剂盒均购自DAKO公司。抗p53抗体工作浓度为1∶100，组织经微波处理修复抗原10分钟。抗PCNA抗体工作浓度为1∶50，组织不经微波处理。
阳性结果判断：肿瘤细胞核中出现棕色颗粒为阳性。根据阳性细胞占肿瘤细胞数的比例进行半定量分级：1).p53：阳性细胞数≤10%为(+)，11%～70%为(++)，≥71%为(+++)，大于两个(+)者视为积聚。2).PCNA：阳性细胞≤25%为(+)，26%～50%为(++)，≥51%为(+++)。
1.3免疫酶标法
检测患者血清中ⅠgA/VCA滴度根据曾毅等报道的方法〔4〕，以B95-8细胞为靶细胞，采用AEC作为显色底物，故抗原抗体复合物呈红棕色。玻片上有大于10%的细胞呈红棕色为阳性。
, 百拇医药
1.4统计学处理：t检验，χ2检验和等级相关分析。
2结果
2.1 p53表达与患者血清ⅠgA/VCA滴度的关系
p53表达率(1+～3+)和p53积聚率(2+～3+)分别为944%(34/36)和667%(24/36)。鼻咽癌组织中p53表达与患者血清ⅠgA/VCA滴度呈正相关(P<0.05)(表1)
p53高积聚(3+)的患者ⅠgA/VCAGMT(519.88±2.53)明显高于无p53积聚患者(226±2.84)(P<0.05)。
表1 36例鼻咽癌组织中p53蛋白表达与患者血清ⅠgA/VCA滴度的关系
P53
, 百拇医药
n
IgA/VCA滴度
1/20
1/40
1/80
1/160
1/320
1/640
1/1280
-
2
1
0
, 百拇医药
0
0
1
0
0
1+
10
0
1
0
1
6
2
0
, 百拇医药
2+
14
0
1
1
1
3
5
3
3+
10
0
0
0
, 百拇医药
3
1
2
4
合计
36
1
2
1
5
11
9
7
2.2 p53表达与PCNA表达的关系
, 百拇医药
鼻咽癌组织中PCNA表达率100%(36/36)。p53与PCNA表达呈正相关(P〈0.001)(表2)
表2 36例鼻咽癌组织中p53蛋白与PCNA表达的关系
P53
n
PCNA
+
++
+++
-
2
1
1
, http://www.100md.com
0
+
10
3
5
2
++
14
0
10
4
+++
10
0
, http://www.100md.com
2
8
合计
36
4
18
14
2.3PCNA表达与患者ⅠgA/VCA滴度的关系
鼻咽癌组织中PCNA表达与ⅠgA/VCA滴度也呈正相关(P<0.05)(表3)
表3 鼻咽癌组织中PCNA表达与患者血清ⅠgA/VCA滴度的关系
PCNA
, 百拇医药
n
IgA/VCA滴度
1/20
1/40
1/80
1/160
1/320
1/640
1/1280
1+
4
0
1
, http://www.100md.com
0
0
3
0
0
2+
18
1
1
1
1
7
4
3
, 百拇医药
3+
14
0
0
0
4
1
5
4
合计
36
1
2
1
, 百拇医药
5
11
9
7
3讨论
鼻咽癌组织中p53积聚是常见现象〔2〕。大多数鼻咽癌患者血清ⅠgA/VCA滴度升高〔5〕。本文结果再次证实上述结论。两者在鼻咽癌发生发展过程中有无关系是一个令人感兴趣的问题。
野生型p53调节细胞生长的作用主要在于它能控制细胞从G1晚期进入S期〔6〕。鼻咽癌中虽有p53积聚，但其基因的5-8外显子突变率很低〔7〕，这种积聚的p53是否已丧失控制细胞进入S期的功能?本文结果显示鼻咽癌组织中p53蛋白表达与PCNA表达呈正相关，与本研究组以前用抗p53多抗CM-1检测249例鼻咽癌组织中p53蛋白和PCNA表达的结果一致〔2〕。PCNA表达于增殖周期细胞，在细胞周期的S期合成最多。但不见于G0期细胞。
, http://www.100md.com
故是反映细胞增殖的指标。上述研究结果说明鼻咽癌组织中积聚的p53蛋白已丧失了抑制细胞生长的功能。p53可通过其下游基因p21WAF1调控PCNA的作用。失活的p53蛋白对一系列p53下游靶基因的调节作用丧失，最终可导致鼻咽癌细胞中PCNA升高〔8，9〕。本文p53蛋白和PCNA表达均与患者血清中ⅠgA/VCA滴度呈正相关的结果提示p53蛋白积聚增多与患者血清ⅠgA/VCA升高之间的正相关关系可能与p53失活后引起肿瘤细胞增殖加快有关。
众所周知，EB病毒DNA片段的复制是与肿瘤细胞DNA合成同时进行的，因此子细胞与母细胞拥有同等数量的EB病毒基因拷贝〔10〕。其机理可能是EB病毒的延迟促进子(Qp)在细胞增生时被激活，打开了EBNA-1mRNA的转录程序，而EBNA-1mRNA则启动了EB病毒DNA也就越多。这可为患者血清ⅠgA/VCAGMT与其癌组织中p53和PCNA的表达强度呈正相关提供理论上的依据。
综上所述，鼻咽癌组织中p53高积聚和血清ⅠgA/VCA高滴度这两个指标可能具有临床意义。
, 百拇医药
〔参考文献〕
钟建明，曾毅，廖建，等.EpsleinBarr病毒ⅠgA/VCA抗体变动规律和鼻咽癌发病的关系〔J〕.中华实验和临床病毒学杂志，1996；10(3)：225～228.
钱洪流，宗永生，张昌卿.鼻咽癌中p53蛋白积聚的生物学特征和临床意义〔J〕.临床与实验病理学杂志，1996，12(1)：15～18
李锦添，宗永生.鼻咽癌的病理改变与血清中EB病毒VCA/ⅠgA抗体滴度的关系〔J〕.中山医学院学报，1983，4(1)：17～26.
曾毅，刘育希，刘纯仁，等.应用免疫酶标法和放射自显影法普查鼻咽癌〔J〕.中华肿瘤
杂志，1992，69：3-7
Porter MJ,Field JK,Lee JCK,et al.Detection of the tumour suppressor gene p53 in nasopharyngeal carcinoma in Hong Kong Chinese〔 J〕 .Canccr Research,1994,14(B):1357～ 1360.
, http://www.100md.com
Mercer WE.Cell cycle regulation and the p53 tumor suppressor protein〔 J〕 .Cril Rev Eukaryol Gene Expr,1992,2(3):251～ 263.
Sun Y,Hcgamycr G,Cheng YJ,et al.Am infrequent point mutation of the p53 gene in human nasopharyngeal carcinoma〔 J〕 .Proc Natl Acad Sci USA,1992,89(14):6515- 6520.
Smith ML,Chen IT,Zhang Q,et al.Interaction of p53 regulated protein GADD45 with proliferation cell nuclear antigen〔 J〕 .Science,1994,266:1376.
, 百拇医药
Li R,WAga S,Hannon GJ,et al.Differential effect by the p21 CDK inhibitor on PCNA- dependent DNA replication and repair〔 J〕 .Nature,1994,371:534.
Liebowitz D,Kieff E.Epstein- Barr virus〔 A〕 .In The Human Herpesviruses〔 M〕 .Roizman B,Whitley RJ,Lopez C.eds.New York,New York:Raven Press,Ltd,1993:107.
Sung NS,Wilson J,Davenport M,et al.Reciprocal regulation of the Epstein- Barr virusBamHI- Fpromoter by EBNA- 1 and an E2F transeription factor〔 J〕 .Mol Cell Bio,1994,14:7144～ 7152.
〔 编 辑 ： 林 秀 健 ， 校 对 ： 周 玉 仁 〕
收稿日期：1998-07-09；修回日期：1998-09-17
基金项目：本课题获国家自然科学基金资助(39730200,39470295)
李群(现在海南医学院病理学教研室工作), http://www.100md.com