厌食康颗粒的质量控制
作者：谢东 冯枫 陆敏仪
单位：广西壮族自治区药品检验所 南宁 530021
关键词：颗粒，厌食康；广山楂；小槐花；橙皮苷；HPLC
中国药师000419
摘 要 目的：建立厌食康颗粒的质量检测方法。 方法： 用薄层色谱法对该颗粒剂中的广山楂、 陈皮、 小槐花进行了鉴别； 用高效液相色谱法测定该颗粒剂中的橙皮苷(Hesperidin)含量。 结果： 薄层色谱中斑点清晰， 易于识别； 橙皮苷进样量在0.409 6～2.048 0μg内呈线性关系， r=0.999， 平均加样回收率为99.2?%， RSD为0.7?%。 结论： 本方法可有效地控制厌食康颗粒的质量。
Studies on the Quality Control of Yanshikang granules
, http://www.100md.com
Xie Dong, Feng Feng, Lu Minyi
(Guangxi Province Institute for Drug Control, 530021, P.R.China)
ABSTRACT Objective To establish a method for quality control of Yanshikang guanules. Method：The Fructus Mali，Pericarpium Citri reticulatae and Herba Desmodii caudati were identified by TLC. The content of hesperidin in this guanules was determined by HPLC. Result: The spots in the TLC were clear and to be distinguished well. The linear range was 0.4096-2.0480μg(r=0.999). the average recovery was 99.2%, and the RSD was 0.75%. Conclusion: These method can be used for quality control of Yanshikang guanules.
, 百拇医药
KEY WORDS Yanshikang granules; Fructus Mali; Pericarpium Citri reticulatae; Herba Desmodii caudati HPLC
厌食康颗粒系由广山楂、 陈皮、 小槐花、 白术等6味中药经适宜的加工、 炮制、 提取而制成的复方制剂， 具有和脾助运， 开胃消食之功效， 治疗小儿厌食症。 本文采用薄层色谱法对其中的广山楂、 陈皮、 小槐花进行了鉴别， 用高效液相色谱法测定了陈皮的主要成分橙皮苷(Hesperidin)的含量， 为厌食康颗粒提供了质量控制的检验方法。
1 仪器、 试药与样品
939薄层制板器(四川省中药研究所重庆贝尔德仪器技术公司)； sp8800高效液相色谱仪， SP4290检测器， SPectra 200处理器(美国SP公司)； Milli-Q Ⅱ制水器(Milipore 公司)； 半微量电子分析天平(Sartorius R200D型)。
, http://www.100md.com
硅胶G (青岛海洋化工厂)， 羧甲基纤维素钠(即CMC-Na， 上海化学试剂采购供应站)， 所用试剂均为分析纯。
广山楂( Fructus Mali)、 陈皮(Pericarpium Citri reticulatae)和小槐花[Herba Desmodii caudati)对照药材(广西壮族自治区药品检验所)； 橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所)， 纯度检查符合定量用对照品的有关要求， 含量为98.3?%； 厌食康颗粒及不含被测药材的阴性对照品(柳州生化制药厂)。
2 鉴别
2.1 广山楂的鉴别 供试品溶液的制备： 取本品14 g， 研细， 加醋酸乙酯40 ml， 加热回流1 h， 滤过， 滤液蒸干， 残渣加甲醇1 ml使溶解， 作为供试品溶液。 另取不含广山楂的阴性对照品14 g， 同法制成阴性对照溶液。
, 百拇医药 对照药材溶液的制备： 取广山楂对照药材5 g， 加水煎煮1 h， 滤过， 滤液蒸干， 残渣加甲醇1 ml使溶解， 作为对照药材溶液。
薄层色谱法： 吸取上述3种溶液各5 μl， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上， 以甲苯—醋酸乙酯—冰醋酸(7∶2∶1)为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以硫酸乙醇溶液(1→10)， 在105 ℃加热至斑点显色清晰。 供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上， 显一个相同颜色的斑点， 阴性对照无干扰，见图1-A。
2.2 陈皮的鉴别 供试品溶液的制备： 同2.1项下。 另取不含陈皮的阴性对照样品14 g， 同法制成阴性对照溶液。
对照品溶液的制备： 取橙皮苷对照品， 加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液， 作为对照品溶液。
薄层色谱法： 吸取2.1项下的供试品溶液及上述对照品溶液、 阴性对照溶液各3 μl，分别点于同一用0.5?%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上， 以醋酸乙酯—甲醇—水(100∶17∶13)为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365 nm)下检视。 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点， 阴性对照无干扰， 见图1-B。
, http://www.100md.com
2.3 小槐花的鉴别 供试品溶液的制备： 取本品14 g， 研细， 加水30 ml溶解， 滤过， 滤液用氨试液调pH至9， 加氯仿提取两次， 每次15 ml， 合并氯仿液， 蒸干， 残渣加甲醇1 ml使溶解， 作为供试品溶液。 另取不含小槐花的阴性对照品14 g, 同法制成阴性对照溶液。
对照药材溶液的制备： 取小槐花对照药材4 g， 加水煎煮30 min， 滤过， 滤液浓缩至30 ml， 同法制成对照药材溶液。
薄层色谱法： 吸取上述3种溶液各10 μl, 分别点于同一硅胶G薄层板上， 以氯仿—丙酮—二乙胺(6∶4∶0.5)为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷稀碘化铋钾试液。 供品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上， 显一个相同颜色的斑点， 阴性对照无干扰， 见图1-C。
1. 供试品 2.阴性对照(不含广山楂) 3.广山楂对照药材 4.阴性对照(不含陈皮) 5.橙皮苷 6.阴性对照(不含小槐花) 7.小槐花对照药材
, http://www.100md.com
图1 薄层色谱图
3 含量测定
3.1 色谱分离条件及结果 Inertsil ODS-3 柱(Φ 4.6 mm×250 mm， 5 μm) (GL Sciences INS.)； 检测波长为286 nm； 流动相为甲醇-水(41∶59)； 流速1.0 ml.min-1。在上述色谱条件下， 橙皮苷峰保留时间约为15 min， 见图2。
3.2 供试品溶液及对照品溶液制备 取本品约5 g， 精密称定， 加水40 ml使溶解， 置分液漏斗中， 加用水饱和的正丁醇提取3次(40，40, 30 ml)， 合并正丁醇提取液， 加用正丁醇饱和的水50 ml洗涤， 分取正丁醇液， 置水浴上蒸干， 残渣加甲酰胺使溶解， 转移至25 ml量瓶中，加甲酰胺稀释至刻度，摇匀，以0.45 μm微孔滤膜滤过， 即得供试品溶液。 另取不含陈皮的阴性对照品14 g， 同法制成阴性对照溶液。
, 百拇医药
对照品溶液制备 精密称取105 ℃干燥至恒重的橙皮苷对照品适量， 加甲酰胺使溶解成0.152 mg.ml-1， 即得。
A.对照品 B.样品 1.甲酰胺峰 2.橙皮苷峰
图2 色谱图
3.3 线性关系考察 分别精密量取对照品溶液1， 2， 3， 4， 5 ml置25 ml量瓶中， 加甲酰胺稀释至刻度， 摇匀， 分别进样20 μl， 记录色谱图， 以橙皮苷浓度为横坐标(X)， 橙皮苷峰面积为纵坐标(Y)， 绘制标准曲线。
回归方程为Y=5.295×107X-6.12×104 r=0.999
, 百拇医药
结果表明橙皮苷进样量在0.409 6～2.048 0 μg范围内具有良好的线性关系。
3.4 精密度试验 取同一供试品溶液重复进样6次， 测定峰面积值， 结果RSD=1.9?%。
3.5 稳定性试验 精密吸取新配制的供试品溶液， 每隔2 h进样20 μl， 依法分离测定橙皮苷峰面积值， 结果RSD=1.1?%(n=5)， 表明橙皮苷在8 h内测定结果稳定。
3.6 重现性试验 取同一批样品， 称取6份， 按供试品溶液制备方法制备、 进样、 分离、 测定， 结果X=0.28 mg.g-1， RSD=3.2?%。
3.7 加样回收率试验 精密称取已知含量的供试品， 加入一定量橙皮苷对照品， 按上述供试液制备方法制备、 分离、 测定、 计算回收率， 结果平均回收率为99.2?%， RSD为0.7?%。
, 百拇医药
3.8 样品测定 取供试品， 依法提取， 进样20 μl， 分离， 测定， 计算含量， 结果见表1。
表1 样品中橙皮苷的含量(n=3) 批 号
含 量(mg.g-1)
RSD(%)
980216
0.29
2.1
980217
0.28
1.1
980218
, 百拇医药
0.31
1.3
980427
0.33
1.0
980428
0.29
1.0
980430
0.30
0.9
4 小结与讨论
4.1 以广山楂、 小槐花对照药材为对照， 厌食康颗粒均各有一个较为明量的相应斑点， 不含广山楂、 小槐花的阴性对照均无干扰， 可用于对广山楂、 小槐花的鉴别； 以橙皮苷对照品为对照， 可鉴别该颗粒剂中的陈皮， 不含陈皮的阴性对照无干扰。 本法重复性好， 可作为该颗粒剂质量控制指标。
, 百拇医药
4.2 含量测定中， 为了简化操作， 曾采用将样品直接以甲酰胺溶解后进样， 结果有干扰； 经多种提取纯化试验， 结果以本文所列方法的提取纯化效果较好。 阴性对照试验表明， 不含陈皮的阴性对照溶液对橙皮苷测定无干扰。
4.3 橙皮苷的测定方法有紫外分光光度法[1]， 薄层扫描法[2]， HPLC法[3～4]等。 本文采用HPLC法， 并对多种流动相以及同种流动相不同比例进行了摸索， 最后确定采用本文流动相， 橙皮苷峰与杂质峰分离较好。 文献中， 多以甲醇为溶剂， 但甲醇溶解缓慢， 且不易溶解完全， 经试验， 橙皮苷在甲酰胺或二甲基甲酰胺溶解性较好， 故本文以甲酰胺作为溶剂。 测定结果表明， 溶剂对测定结果无干扰。 参 考 文 献
1，周添浓， 陈佃， 刘权， 等. 蛇胆陈皮末工艺质量研究——紫外分光光度法测定橙皮苷含量， 中成药， 1993， 15(4)：8
2，常珉， 蒋敏， 李安娟. 枳实及其三种中成药中橙皮苷的荧光薄层扫描定量法， 药物分析杂志， 1990， 10(2)：94
3，崔铉玖， 迟彦春， 董伟林， 等. HPLC测定芎芷香苏散流浸膏中橙皮苷的含量， 药物分析杂志， 1996，16(5)：321
4，龙新华， 万福根， 邓小安， 等. 高效液相色谱法测定金果含片中橙皮苷的含量， 中成药， 1998， 20(2)：42
1999-12-24 收稿 2000-06-12 修回, 百拇医药
单位：广西壮族自治区药品检验所 南宁 530021
关键词：颗粒，厌食康；广山楂；小槐花；橙皮苷；HPLC
中国药师000419
摘 要 目的：建立厌食康颗粒的质量检测方法。 方法： 用薄层色谱法对该颗粒剂中的广山楂、 陈皮、 小槐花进行了鉴别； 用高效液相色谱法测定该颗粒剂中的橙皮苷(Hesperidin)含量。 结果： 薄层色谱中斑点清晰， 易于识别； 橙皮苷进样量在0.409 6～2.048 0μg内呈线性关系， r=0.999， 平均加样回收率为99.2?%， RSD为0.7?%。 结论： 本方法可有效地控制厌食康颗粒的质量。
Studies on the Quality Control of Yanshikang granules
, http://www.100md.com
Xie Dong, Feng Feng, Lu Minyi
(Guangxi Province Institute for Drug Control, 530021, P.R.China)
ABSTRACT Objective To establish a method for quality control of Yanshikang guanules. Method：The Fructus Mali，Pericarpium Citri reticulatae and Herba Desmodii caudati were identified by TLC. The content of hesperidin in this guanules was determined by HPLC. Result: The spots in the TLC were clear and to be distinguished well. The linear range was 0.4096-2.0480μg(r=0.999). the average recovery was 99.2%, and the RSD was 0.75%. Conclusion: These method can be used for quality control of Yanshikang guanules.
, 百拇医药
KEY WORDS Yanshikang granules; Fructus Mali; Pericarpium Citri reticulatae; Herba Desmodii caudati HPLC
厌食康颗粒系由广山楂、 陈皮、 小槐花、 白术等6味中药经适宜的加工、 炮制、 提取而制成的复方制剂， 具有和脾助运， 开胃消食之功效， 治疗小儿厌食症。 本文采用薄层色谱法对其中的广山楂、 陈皮、 小槐花进行了鉴别， 用高效液相色谱法测定了陈皮的主要成分橙皮苷(Hesperidin)的含量， 为厌食康颗粒提供了质量控制的检验方法。
1 仪器、 试药与样品
939薄层制板器(四川省中药研究所重庆贝尔德仪器技术公司)； sp8800高效液相色谱仪， SP4290检测器， SPectra 200处理器(美国SP公司)； Milli-Q Ⅱ制水器(Milipore 公司)； 半微量电子分析天平(Sartorius R200D型)。
, http://www.100md.com
硅胶G (青岛海洋化工厂)， 羧甲基纤维素钠(即CMC-Na， 上海化学试剂采购供应站)， 所用试剂均为分析纯。
广山楂( Fructus Mali)、 陈皮(Pericarpium Citri reticulatae)和小槐花[Herba Desmodii caudati)对照药材(广西壮族自治区药品检验所)； 橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所)， 纯度检查符合定量用对照品的有关要求， 含量为98.3?%； 厌食康颗粒及不含被测药材的阴性对照品(柳州生化制药厂)。
2 鉴别
2.1 广山楂的鉴别 供试品溶液的制备： 取本品14 g， 研细， 加醋酸乙酯40 ml， 加热回流1 h， 滤过， 滤液蒸干， 残渣加甲醇1 ml使溶解， 作为供试品溶液。 另取不含广山楂的阴性对照品14 g， 同法制成阴性对照溶液。
, 百拇医药 对照药材溶液的制备： 取广山楂对照药材5 g， 加水煎煮1 h， 滤过， 滤液蒸干， 残渣加甲醇1 ml使溶解， 作为对照药材溶液。
薄层色谱法： 吸取上述3种溶液各5 μl， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上， 以甲苯—醋酸乙酯—冰醋酸(7∶2∶1)为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以硫酸乙醇溶液(1→10)， 在105 ℃加热至斑点显色清晰。 供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上， 显一个相同颜色的斑点， 阴性对照无干扰，见图1-A。
2.2 陈皮的鉴别 供试品溶液的制备： 同2.1项下。 另取不含陈皮的阴性对照样品14 g， 同法制成阴性对照溶液。
对照品溶液的制备： 取橙皮苷对照品， 加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液， 作为对照品溶液。
薄层色谱法： 吸取2.1项下的供试品溶液及上述对照品溶液、 阴性对照溶液各3 μl，分别点于同一用0.5?%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上， 以醋酸乙酯—甲醇—水(100∶17∶13)为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365 nm)下检视。 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点， 阴性对照无干扰， 见图1-B。
, http://www.100md.com
2.3 小槐花的鉴别 供试品溶液的制备： 取本品14 g， 研细， 加水30 ml溶解， 滤过， 滤液用氨试液调pH至9， 加氯仿提取两次， 每次15 ml， 合并氯仿液， 蒸干， 残渣加甲醇1 ml使溶解， 作为供试品溶液。 另取不含小槐花的阴性对照品14 g, 同法制成阴性对照溶液。
对照药材溶液的制备： 取小槐花对照药材4 g， 加水煎煮30 min， 滤过， 滤液浓缩至30 ml， 同法制成对照药材溶液。
薄层色谱法： 吸取上述3种溶液各10 μl, 分别点于同一硅胶G薄层板上， 以氯仿—丙酮—二乙胺(6∶4∶0.5)为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷稀碘化铋钾试液。 供品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上， 显一个相同颜色的斑点， 阴性对照无干扰， 见图1-C。
1. 供试品 2.阴性对照(不含广山楂) 3.广山楂对照药材 4.阴性对照(不含陈皮) 5.橙皮苷 6.阴性对照(不含小槐花) 7.小槐花对照药材
, http://www.100md.com
图1 薄层色谱图
3 含量测定
3.1 色谱分离条件及结果 Inertsil ODS-3 柱(Φ 4.6 mm×250 mm， 5 μm) (GL Sciences INS.)； 检测波长为286 nm； 流动相为甲醇-水(41∶59)； 流速1.0 ml.min-1。在上述色谱条件下， 橙皮苷峰保留时间约为15 min， 见图2。
3.2 供试品溶液及对照品溶液制备 取本品约5 g， 精密称定， 加水40 ml使溶解， 置分液漏斗中， 加用水饱和的正丁醇提取3次(40，40, 30 ml)， 合并正丁醇提取液， 加用正丁醇饱和的水50 ml洗涤， 分取正丁醇液， 置水浴上蒸干， 残渣加甲酰胺使溶解， 转移至25 ml量瓶中，加甲酰胺稀释至刻度，摇匀，以0.45 μm微孔滤膜滤过， 即得供试品溶液。 另取不含陈皮的阴性对照品14 g， 同法制成阴性对照溶液。
, 百拇医药
对照品溶液制备 精密称取105 ℃干燥至恒重的橙皮苷对照品适量， 加甲酰胺使溶解成0.152 mg.ml-1， 即得。
A.对照品 B.样品 1.甲酰胺峰 2.橙皮苷峰
图2 色谱图
3.3 线性关系考察 分别精密量取对照品溶液1， 2， 3， 4， 5 ml置25 ml量瓶中， 加甲酰胺稀释至刻度， 摇匀， 分别进样20 μl， 记录色谱图， 以橙皮苷浓度为横坐标(X)， 橙皮苷峰面积为纵坐标(Y)， 绘制标准曲线。
回归方程为Y=5.295×107X-6.12×104 r=0.999
, 百拇医药
结果表明橙皮苷进样量在0.409 6～2.048 0 μg范围内具有良好的线性关系。
3.4 精密度试验 取同一供试品溶液重复进样6次， 测定峰面积值， 结果RSD=1.9?%。
3.5 稳定性试验 精密吸取新配制的供试品溶液， 每隔2 h进样20 μl， 依法分离测定橙皮苷峰面积值， 结果RSD=1.1?%(n=5)， 表明橙皮苷在8 h内测定结果稳定。
3.6 重现性试验 取同一批样品， 称取6份， 按供试品溶液制备方法制备、 进样、 分离、 测定， 结果X=0.28 mg.g-1， RSD=3.2?%。
3.7 加样回收率试验 精密称取已知含量的供试品， 加入一定量橙皮苷对照品， 按上述供试液制备方法制备、 分离、 测定、 计算回收率， 结果平均回收率为99.2?%， RSD为0.7?%。
, 百拇医药
3.8 样品测定 取供试品， 依法提取， 进样20 μl， 分离， 测定， 计算含量， 结果见表1。
表1 样品中橙皮苷的含量(n=3) 批 号
含 量(mg.g-1)
RSD(%)
980216
0.29
2.1
980217
0.28
1.1
980218
, 百拇医药
0.31
1.3
980427
0.33
1.0
980428
0.29
1.0
980430
0.30
0.9
4 小结与讨论
4.1 以广山楂、 小槐花对照药材为对照， 厌食康颗粒均各有一个较为明量的相应斑点， 不含广山楂、 小槐花的阴性对照均无干扰， 可用于对广山楂、 小槐花的鉴别； 以橙皮苷对照品为对照， 可鉴别该颗粒剂中的陈皮， 不含陈皮的阴性对照无干扰。 本法重复性好， 可作为该颗粒剂质量控制指标。
, 百拇医药
4.2 含量测定中， 为了简化操作， 曾采用将样品直接以甲酰胺溶解后进样， 结果有干扰； 经多种提取纯化试验， 结果以本文所列方法的提取纯化效果较好。 阴性对照试验表明， 不含陈皮的阴性对照溶液对橙皮苷测定无干扰。
4.3 橙皮苷的测定方法有紫外分光光度法[1]， 薄层扫描法[2]， HPLC法[3～4]等。 本文采用HPLC法， 并对多种流动相以及同种流动相不同比例进行了摸索， 最后确定采用本文流动相， 橙皮苷峰与杂质峰分离较好。 文献中， 多以甲醇为溶剂， 但甲醇溶解缓慢， 且不易溶解完全， 经试验， 橙皮苷在甲酰胺或二甲基甲酰胺溶解性较好， 故本文以甲酰胺作为溶剂。 测定结果表明， 溶剂对测定结果无干扰。 参 考 文 献
1，周添浓， 陈佃， 刘权， 等. 蛇胆陈皮末工艺质量研究——紫外分光光度法测定橙皮苷含量， 中成药， 1993， 15(4)：8
2，常珉， 蒋敏， 李安娟. 枳实及其三种中成药中橙皮苷的荧光薄层扫描定量法， 药物分析杂志， 1990， 10(2)：94
3，崔铉玖， 迟彦春， 董伟林， 等. HPLC测定芎芷香苏散流浸膏中橙皮苷的含量， 药物分析杂志， 1996，16(5)：321
4，龙新华， 万福根， 邓小安， 等. 高效液相色谱法测定金果含片中橙皮苷的含量， 中成药， 1998， 20(2)：42
1999-12-24 收稿 2000-06-12 修回, 百拇医药