强直性脊柱炎与HLA-DPB1等位基因关联的研究
作者：蒋黎华 范丽安 杨珏琴 姚芳娟 周嘉陵 许荣 钟丽民
单位：200025 上海第二医科大学、上海市免疫学研究所(蒋黎华、范丽安、杨珏琴、姚芳娟)；上海光华医院(周嘉陵、许荣、钟丽民)
关键词：
中华内科杂志980422 强直性脊柱炎(AS)发病机制中有一个重要发现是其与人类白细胞抗原(HLA)B27之间的强相关，但其关联机制迄今不明。近年来有人认为，与某些肠道菌抗原具有“分子模拟”的B27抗原可被其他HLA分子递呈给T细胞而致自身免疫[1]。我们采用聚合酶链反应-序列特异的寡核苷酸探针(PCR-SSOP)方法，对69例AS病人和48例正常对照进行HLA-DPB1等位基因检测，以探索HLA-DP与AS发病的关系。
一、对象与方法
, 百拇医药
1.研究对象：AS患者69例，临床符合纽约诊断标准，均经血清学方法确定为B27(+)。48名正常对照为本校与患者无血缘关系的健康汉族职工。7例B27(+)正常标本取自本室经反复HLA定型而建立的随机正常配组。
附表 AS病人和正常对照组及B27(+)正常个体中HLA-DPB1等位基因分布的百分率 DPB1*
AS组(n=69)
正常对照组(n=48)
B*2704 AS组(n=53)
B*2705 AS组(n=14)
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注：AS：强直性脊柱炎；AF：等位基因频率 与正常对照组比，*P=0.013，RR=0.28；与正常对照组比，**P=0.0054，RR=0.18 2.研究方法：均取外周静脉血，盐析法抽提基因组DNA。HLA-DPB1等位基因检测参照第12届国际组织相容性试验专题讨论会推荐方案，用一对引物2DPBAMP-A和2DPBAMP-B扩增DPB1基因第二外显子的靶DNA，扩增产物长327 bp。对48名正常对照采用了25个探针检测19个DPB1等位基因，对69例AS病人和7名正常B27个体采用了14个探针检测存在于中国人群中的11个DPB1等位基因。探针的标记和检测采用地高辛-抗地高辛系统。
, 百拇医药
3.统计学处理：等位基因检出率用直接计数法，基因频率按Hardy-Weinberg定理用公式P=1-1-f计算(f为等位基因检出率)，各组间等位基因分布的差异用四格表Fisher确切概率P值检验，相对风险率(RR)按Woolf公式计算，P值校正用P乘以所比较的等位基因数。
二、结果
1.AS病人及正常对照组HLA-DPB1等位基因分布频率见附表，其中DPB1*0401在正常对照组是常见的等位基因，检出率25%，等位基因频率(AF)为0.13，而AS病人组检出率只有8.7%，AF为0.04，两组比较差异有显著性(P=0.013)，P值经乘以比较的等位基因数10校正后>0.05，其他等位基因的频率两组间比较差异无显著性。
2.AS病人中有68例已进行B27等位基因检测，显示AS病人中的B27亚型主要为B*2704和B*2705两种[2]，如依此将AS病人分成2个组，则显示53例B*2704的AS病人中DPB1*0401只有3例，AF为0.03，与正常对照比较差异有非常显著性(P=0.0054)，P值经校正后>0.05；14例B*2705组中DPB1*0401有2例，AF为0.07，与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05)。
, 百拇医药
3.7名B27(+)正常个体和5名B*2704正常个体中DPB1*0401的检出率分别为14.3%和20.0%，与正常人群差异均无显著性。
讨论 从遗传学分析、B27转基因鼠等各方面进行的研究均表明HLA-B27是直接参与AS发病的，近年来国外研究还发现，除B27外，HLA-B60、DR1及DR8在某些人群中也可能与AS关联[1]。由于抗原需通过HLA分子的递呈才能被T淋巴细胞识别而产生免疫应答，因此有观点认为上述HLA分子可能对自身B27抗原进行特异性递呈形成抗自身的免疫应答而与AS关联。HLA-DP属于HLA Ⅱ类抗原，起着将抗原递呈给CD+4 T细胞而启动免疫应答的作用，DP抗原由α和β两条多肽链所构成，分别由DPB1和DPA1基因所编码，其中DPB1存在多个等位基因而决定了DP抗原的高度多态性。我们的研究结果显示，DPB1*0401等位基因在AS病人中的分布频率明显降低，RR值为0.28，提示DPB1*0401可能是AS的疾病抵抗基因。而进一步将AS病人中具有B*2704或是B*2705的个体分别进行分析，则显示具有B*2704的病人中DPB1*0401频率很低，B*2705的病人则与正常对照组无显著差异，提示可能DPB1*0401只在B*2704的个体中具有降低AS易感性的作用，而在B*2705个体则不具有这种作用。本结果国内外尚未见报道，进一步探索DPB1与AS及B27之间的内在关系，可为AS的发病机制和治疗研究提供有用的帮助。
, http://www.100md.com
本课题受国家自然科学基金(39400122)和卫生部基金资助
参考文献
1 Sieper J, Braun J. Pathogenesis of spondylarthropathies. Ann Rheum, 1995,38：1547-1554.
2 蒋黎华，范丽安，杨珏琴，等.强直性脊椎炎与HLA-B27等位基因研究.中国免疫学杂志，1997，13：345-348.
(收稿：1997-09-08 修回：1998-01-20), http://www.100md.com
单位：200025 上海第二医科大学、上海市免疫学研究所(蒋黎华、范丽安、杨珏琴、姚芳娟)；上海光华医院(周嘉陵、许荣、钟丽民)
关键词：
中华内科杂志980422 强直性脊柱炎(AS)发病机制中有一个重要发现是其与人类白细胞抗原(HLA)B27之间的强相关，但其关联机制迄今不明。近年来有人认为，与某些肠道菌抗原具有“分子模拟”的B27抗原可被其他HLA分子递呈给T细胞而致自身免疫[1]。我们采用聚合酶链反应-序列特异的寡核苷酸探针(PCR-SSOP)方法，对69例AS病人和48例正常对照进行HLA-DPB1等位基因检测，以探索HLA-DP与AS发病的关系。
一、对象与方法
, 百拇医药
1.研究对象：AS患者69例，临床符合纽约诊断标准，均经血清学方法确定为B27(+)。48名正常对照为本校与患者无血缘关系的健康汉族职工。7例B27(+)正常标本取自本室经反复HLA定型而建立的随机正常配组。
附表 AS病人和正常对照组及B27(+)正常个体中HLA-DPB1等位基因分布的百分率 DPB1*
AS组(n=69)
正常对照组(n=48)
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注：AS：强直性脊柱炎；AF：等位基因频率 与正常对照组比，*P=0.013，RR=0.28；与正常对照组比，**P=0.0054，RR=0.18 2.研究方法：均取外周静脉血，盐析法抽提基因组DNA。HLA-DPB1等位基因检测参照第12届国际组织相容性试验专题讨论会推荐方案，用一对引物2DPBAMP-A和2DPBAMP-B扩增DPB1基因第二外显子的靶DNA，扩增产物长327 bp。对48名正常对照采用了25个探针检测19个DPB1等位基因，对69例AS病人和7名正常B27个体采用了14个探针检测存在于中国人群中的11个DPB1等位基因。探针的标记和检测采用地高辛-抗地高辛系统。
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3.统计学处理：等位基因检出率用直接计数法，基因频率按Hardy-Weinberg定理用公式P=1-1-f计算(f为等位基因检出率)，各组间等位基因分布的差异用四格表Fisher确切概率P值检验，相对风险率(RR)按Woolf公式计算，P值校正用P乘以所比较的等位基因数。
二、结果
1.AS病人及正常对照组HLA-DPB1等位基因分布频率见附表，其中DPB1*0401在正常对照组是常见的等位基因，检出率25%，等位基因频率(AF)为0.13，而AS病人组检出率只有8.7%，AF为0.04，两组比较差异有显著性(P=0.013)，P值经乘以比较的等位基因数10校正后>0.05，其他等位基因的频率两组间比较差异无显著性。
2.AS病人中有68例已进行B27等位基因检测，显示AS病人中的B27亚型主要为B*2704和B*2705两种[2]，如依此将AS病人分成2个组，则显示53例B*2704的AS病人中DPB1*0401只有3例，AF为0.03，与正常对照比较差异有非常显著性(P=0.0054)，P值经校正后>0.05；14例B*2705组中DPB1*0401有2例，AF为0.07，与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05)。
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3.7名B27(+)正常个体和5名B*2704正常个体中DPB1*0401的检出率分别为14.3%和20.0%，与正常人群差异均无显著性。
讨论 从遗传学分析、B27转基因鼠等各方面进行的研究均表明HLA-B27是直接参与AS发病的，近年来国外研究还发现，除B27外，HLA-B60、DR1及DR8在某些人群中也可能与AS关联[1]。由于抗原需通过HLA分子的递呈才能被T淋巴细胞识别而产生免疫应答，因此有观点认为上述HLA分子可能对自身B27抗原进行特异性递呈形成抗自身的免疫应答而与AS关联。HLA-DP属于HLA Ⅱ类抗原，起着将抗原递呈给CD+4 T细胞而启动免疫应答的作用，DP抗原由α和β两条多肽链所构成，分别由DPB1和DPA1基因所编码，其中DPB1存在多个等位基因而决定了DP抗原的高度多态性。我们的研究结果显示，DPB1*0401等位基因在AS病人中的分布频率明显降低，RR值为0.28，提示DPB1*0401可能是AS的疾病抵抗基因。而进一步将AS病人中具有B*2704或是B*2705的个体分别进行分析，则显示具有B*2704的病人中DPB1*0401频率很低，B*2705的病人则与正常对照组无显著差异，提示可能DPB1*0401只在B*2704的个体中具有降低AS易感性的作用，而在B*2705个体则不具有这种作用。本结果国内外尚未见报道，进一步探索DPB1与AS及B27之间的内在关系，可为AS的发病机制和治疗研究提供有用的帮助。
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1 Sieper J, Braun J. Pathogenesis of spondylarthropathies. Ann Rheum, 1995,38：1547-1554.
2 蒋黎华，范丽安，杨珏琴，等.强直性脊椎炎与HLA-B27等位基因研究.中国免疫学杂志，1997，13：345-348.
(收稿：1997-09-08 修回：1998-01-20), http://www.100md.com