氨氯地平对四氧嘧啶诱发糖尿病大鼠外周神经病变的预防作用
作者：李剑波 陈家伟 冯振卿
单位：210029 南京医科大学第一附属医院内分泌科(李剑波、陈家伟)，病理教研室(冯振卿)
关键词：
中华内科杂志990114 我们通过分析糖尿病大鼠坐骨神经组织形态学变化，探讨氨氯地平这一钙拮抗剂对糖尿病外周神经病变的治疗价值。
一、材料和方法
1.动物模型：将雄性初重200～220 g(40～50天鼠龄)的正常Sprague-Dawley大鼠用四氧嘧啶腹腔注射诱发糖尿病，48小时后，尾静脉全血葡萄糖浓度超过15 mmol/L选为糖尿病鼠。
2.分组及治疗：将糖尿病大鼠随机分成氨氯地平治疗组(AD)和未治疗组(ND)；另将正常大鼠随机分成氨氯地平治疗组(AC)和未治疗组(NC)。治疗组以每日5 mg/kg体重剂量给予氨氯地平，混悬于生理盐水，由胃管灌入，共6个月。未治疗组由胃管给予等量的生理盐水。
, 百拇医药
3.糖代谢指标测定：定期监测大鼠体重、血糖。实验6个月末，取血测定糖化血红蛋白、红细胞山梨醇浓度。
4.形态学分析：6个月末，动物在戊巴比妥麻醉状态下取坐骨神经，分别进行如下分析：单神经形态频率分布、有髓纤维密度细径、神经内膜毛细血管密度、神经超微结构。
5.统计学处理：所有组的数值均由均数±标准差表示，数据比较用单析因方差分析、非参数t检验及χ2检验。
二、结果
1.实验结束时糖代谢指标(表1)：AD、ND组间血糖、糖化血红蛋白、红细胞山梨醇浓度差异无显著性，但糖尿病大鼠均显著高于非糖尿病对照大鼠，AD、AC组与ND、NC组间差异无显著性。
2.单神经形态频率分布：ND组髓鞘皱缩率(12.5±4.0)%，结旁脱髓鞘率(5.1±1.7)%，较NC组(6.2±2.0)%及(2.3±1.0)%高；AD组(6.4±2.1)%，(2.5±0.8)%与NC组差异无显著性。
, 百拇医药
3.有髓纤维定量分析：表2显示，AD组平均纤维面积、轴突/纤维比降低程度较ND组轻，AD组纤维密度与NC组差异无显著性，ND组显著低于NC组和AC组。
4.神经内膜毛细血管密度：AD组毛细血管密度显著高于其他组。
5.神经纤维超微结构观察：电镜显示，髓鞘板层样分离、变性融合，轴突内神经丝减少，在ND组中程度较重，AD组中程度较轻。
表1 实验结束时各组大鼠糖代谢指标 分组
只数
体重(g)
血糖(mmol/L)
糖化血红蛋白(%)
红细胞山梨醇(nmol/gHb)
, 百拇医药
对照未治疗组
9
565±15
6.10±0.55
1.60±0.10
14.23±6.52
对照氨氯地平治疗组
10
559±14
5.89±0.48
1.61±0.21
13.87±7.14
, http://www.100md.com
糖尿病未治疗组
6
328±14*
21.50±2.20*
3.12±0.18*
57.64±8.23*
糖尿病氨氯地平治疗组
8
332±13*
20.20±3.11*
, 百拇医药 3.10±0.26*
56.34±9.70*
注：分别与对照未治疗组、对照氨氯地平治疗组比较，*P<0.01表2 对各组定量分析有髓纤维及毛细血管密度结果比较 分组
只数
平均纤维面积(μm2)
轴突/纤维比(%)
纤维密度
(×103/mm2)
毛细血管密度(mm-2)
, http://www.100md.com
对照未治疗组
9
49.8±4.7
0.38±0.01
11.0±1.7
543.9±15.3
对照氨氯地平治疗组
10
50.2±5.0
0.39±0.03
11.2±2.0
562.3±18.2
, http://www.100md.com
糖尿病未治疗组
6
36.7±3.0*
0.30±0.02*
8.0±1.3*
559.7±17.5
糖尿病氨氯地平治疗组
8
44.6±2.3*△
0.35±0.01*△
, http://www.100md.com
10.8±2.1△
640.8±20.0▲
注：分别与对照未治疗组、对照氨氯地平治疗组比较，*P<0.01；与糖尿病未治疗组比较，△P<0.01；与其他3组比较，▲P<0.01 讨论 近年来，文献报道钙离子拮抗剂尼莫地平显著改善糖尿病大鼠外周神经传导速
度[1,2]。我们成功建立糖尿病大鼠神经病变模型，与人类糖尿病神经病变类似[3，4]。应用氨氯地平可显著延缓神经纤维轴突萎缩、髓鞘变性及超微结构改变。表明氨氯地平对糖尿病外周神经病变有预防作用。Kappelle等[2]研究发现，钙离子通道阻滞剂对于实验性糖尿病鼠神经病变的作用机制可能包括4个方面：特异性阻滞钙离子向神经元内流；阻断钙离子进入血管平滑肌；长期作用促进微血管生长；改善神经突触前水平肾上腺素的反应性。我们的研究表明，氨氯地平至少通过促进神经内膜毛细血管生长，增加神经血供，改善缺血、缺氧，防治神经病变。氨氯地平对糖代谢(包括山梨醇旁路)未见影响，但未完全阻止神经病变的发生，这提示糖尿病外周神经病变的多因性。有关氨氯地平等钙离子通道阻剂对人类糖尿病外周神经并发症的确切疗效有待进一步研究。
, 百拇医药
《参考文献》
[1] Kappelle AC, Bravenboer B, Traber J, et al. The Ca2+ antagonist nimodipine counteracts the onset of
experimental neuropathy in streptozotocin-induced diabetic rats. Neurosci Res Commun, 1992, 10:95-
104.
[2] Kappelle AC, Biessls G, Bravenboer B, et al. Beneficial effect of the Ca2+ antagonist, nimodipine, on
existing diabetic neuropathy in the BB/W or rat. Br J Pharmacol, 1994,111:887-893.
, http://www.100md.com
[3] Jakobsen J. Early and preventable changes of peripheral nerve structure and function in insulin-deficient
diabetic rats. J Neurol Neurosurg Psychiatry, 1979, 42:509-518.
[4] Yagihashi S, Kamijo M, Watanbe K. Reduced myelinated fiber size correlates with loss of axonal
neurofilaments in peripheral nerve of chronically streptozotocin diabetic rats. Am J Pathol, 1990,136: 1365-1373.
(收稿：1997-11-06 修回：1998-04-27), http://www.100md.com
单位：210029 南京医科大学第一附属医院内分泌科(李剑波、陈家伟)，病理教研室(冯振卿)
关键词：
中华内科杂志990114 我们通过分析糖尿病大鼠坐骨神经组织形态学变化，探讨氨氯地平这一钙拮抗剂对糖尿病外周神经病变的治疗价值。
一、材料和方法
1.动物模型：将雄性初重200～220 g(40～50天鼠龄)的正常Sprague-Dawley大鼠用四氧嘧啶腹腔注射诱发糖尿病，48小时后，尾静脉全血葡萄糖浓度超过15 mmol/L选为糖尿病鼠。
2.分组及治疗：将糖尿病大鼠随机分成氨氯地平治疗组(AD)和未治疗组(ND)；另将正常大鼠随机分成氨氯地平治疗组(AC)和未治疗组(NC)。治疗组以每日5 mg/kg体重剂量给予氨氯地平，混悬于生理盐水，由胃管灌入，共6个月。未治疗组由胃管给予等量的生理盐水。
, 百拇医药
3.糖代谢指标测定：定期监测大鼠体重、血糖。实验6个月末，取血测定糖化血红蛋白、红细胞山梨醇浓度。
4.形态学分析：6个月末，动物在戊巴比妥麻醉状态下取坐骨神经，分别进行如下分析：单神经形态频率分布、有髓纤维密度细径、神经内膜毛细血管密度、神经超微结构。
5.统计学处理：所有组的数值均由均数±标准差表示，数据比较用单析因方差分析、非参数t检验及χ2检验。
二、结果
1.实验结束时糖代谢指标(表1)：AD、ND组间血糖、糖化血红蛋白、红细胞山梨醇浓度差异无显著性，但糖尿病大鼠均显著高于非糖尿病对照大鼠，AD、AC组与ND、NC组间差异无显著性。
2.单神经形态频率分布：ND组髓鞘皱缩率(12.5±4.0)%，结旁脱髓鞘率(5.1±1.7)%，较NC组(6.2±2.0)%及(2.3±1.0)%高；AD组(6.4±2.1)%，(2.5±0.8)%与NC组差异无显著性。
, 百拇医药
3.有髓纤维定量分析：表2显示，AD组平均纤维面积、轴突/纤维比降低程度较ND组轻，AD组纤维密度与NC组差异无显著性，ND组显著低于NC组和AC组。
4.神经内膜毛细血管密度：AD组毛细血管密度显著高于其他组。
5.神经纤维超微结构观察：电镜显示，髓鞘板层样分离、变性融合，轴突内神经丝减少，在ND组中程度较重，AD组中程度较轻。
表1 实验结束时各组大鼠糖代谢指标 分组
只数
体重(g)
血糖(mmol/L)
糖化血红蛋白(%)
红细胞山梨醇(nmol/gHb)
, 百拇医药
对照未治疗组
9
565±15
6.10±0.55
1.60±0.10
14.23±6.52
对照氨氯地平治疗组
10
559±14
5.89±0.48
1.61±0.21
13.87±7.14
, http://www.100md.com
糖尿病未治疗组
6
328±14*
21.50±2.20*
3.12±0.18*
57.64±8.23*
糖尿病氨氯地平治疗组
8
332±13*
20.20±3.11*
, 百拇医药 3.10±0.26*
56.34±9.70*
注：分别与对照未治疗组、对照氨氯地平治疗组比较，*P<0.01表2 对各组定量分析有髓纤维及毛细血管密度结果比较 分组
只数
平均纤维面积(μm2)
轴突/纤维比(%)
纤维密度
(×103/mm2)
毛细血管密度(mm-2)
, http://www.100md.com
对照未治疗组
9
49.8±4.7
0.38±0.01
11.0±1.7
543.9±15.3
对照氨氯地平治疗组
10
50.2±5.0
0.39±0.03
11.2±2.0
562.3±18.2
, http://www.100md.com
糖尿病未治疗组
6
36.7±3.0*
0.30±0.02*
8.0±1.3*
559.7±17.5
糖尿病氨氯地平治疗组
8
44.6±2.3*△
0.35±0.01*△
, http://www.100md.com
10.8±2.1△
640.8±20.0▲
注：分别与对照未治疗组、对照氨氯地平治疗组比较，*P<0.01；与糖尿病未治疗组比较，△P<0.01；与其他3组比较，▲P<0.01 讨论 近年来，文献报道钙离子拮抗剂尼莫地平显著改善糖尿病大鼠外周神经传导速
度[1,2]。我们成功建立糖尿病大鼠神经病变模型，与人类糖尿病神经病变类似[3，4]。应用氨氯地平可显著延缓神经纤维轴突萎缩、髓鞘变性及超微结构改变。表明氨氯地平对糖尿病外周神经病变有预防作用。Kappelle等[2]研究发现，钙离子通道阻滞剂对于实验性糖尿病鼠神经病变的作用机制可能包括4个方面：特异性阻滞钙离子向神经元内流；阻断钙离子进入血管平滑肌；长期作用促进微血管生长；改善神经突触前水平肾上腺素的反应性。我们的研究表明，氨氯地平至少通过促进神经内膜毛细血管生长，增加神经血供，改善缺血、缺氧，防治神经病变。氨氯地平对糖代谢(包括山梨醇旁路)未见影响，但未完全阻止神经病变的发生，这提示糖尿病外周神经病变的多因性。有关氨氯地平等钙离子通道阻剂对人类糖尿病外周神经并发症的确切疗效有待进一步研究。
, 百拇医药
《参考文献》
[1] Kappelle AC, Bravenboer B, Traber J, et al. The Ca2+ antagonist nimodipine counteracts the onset of
experimental neuropathy in streptozotocin-induced diabetic rats. Neurosci Res Commun, 1992, 10:95-
104.
[2] Kappelle AC, Biessls G, Bravenboer B, et al. Beneficial effect of the Ca2+ antagonist, nimodipine, on
existing diabetic neuropathy in the BB/W or rat. Br J Pharmacol, 1994,111:887-893.
, http://www.100md.com
[3] Jakobsen J. Early and preventable changes of peripheral nerve structure and function in insulin-deficient
diabetic rats. J Neurol Neurosurg Psychiatry, 1979, 42:509-518.
[4] Yagihashi S, Kamijo M, Watanbe K. Reduced myelinated fiber size correlates with loss of axonal
neurofilaments in peripheral nerve of chronically streptozotocin diabetic rats. Am J Pathol, 1990,136: 1365-1373.
(收稿：1997-11-06 修回：1998-04-27), http://www.100md.com