心绞痛患者α-颗粒膜蛋白及D-二聚体的变化
作者：张静 张菲斐 沈玉祥 翟亚萍 商保军
单位：张静、张菲斐、沈玉祥 450003 郑州，河南省人民医院心内科，翟亚萍、商保军 血液病研究所
关键词：心绞痛，不稳定型；α-；颗粒膜蛋白；D-二聚体
中华内科杂志990807 【摘 要】 目的 探讨血小板活化、凝血激活与不稳定性心绞痛(UA)的关系及其临床意义。方法 用酶联免疫双抗体夹心法分别测定22例UA患者急性期和缓解期血浆α-颗粒膜蛋白(GMP-140)、D-二聚体浓度；并用相同方法测定18例稳定劳累型心绞痛(SA)患者和20例健康对照者上述指标，对其结果进行统计学分析。结果 UA患者急性期血浆GMP-140、D-二聚体浓度显著高于SA组(P<0.01)和对照组(P<0.01)，后两组之间差异无显著性(P>0.05)；UA患者缓解期血浆GMP-140、D-二聚体水平较其急性期有所下降但差异无显著性(P>0.05)，并仍显著高于SA组(P<0.05)。结论 结果提示血小板活化、凝血激活系统及内皮细胞损伤在UA的发生发展中起重要作用。
, 百拇医药
The clinical significance of changes in plasma levels of α-granule
membrane protein and D-dimer in patients with unstable angina
ZHANG Jing, ZHANG Feifei, SHEN Yuxiang, et al.
Department of Cardiology, Henan Provincial People's Hospital, Zhengzhou 450003
【Abstract】 Objective To explore the relationship between platelet activation and enhanced coagulability and the occurrence unstable angina. Methods Plasma levels of a-granule membrane protein (GMP-140) and fibrin D-dimer were measured in 22 patients with unstable angina during the acute phase and after relief. The same procedure were compared with those in 20 control subjects and 18 patients with stable angina. Results Plasma levels of GMP-140 and D-dimer were significantly higher in patients with unstable angina both during the acute phase(P<0.01) and after the relief (P<0.05) as compared with those in control subjects and patients with stable angina, but there was no significant difference between the latter two groups (P>0.05). There was also no significant difference between the patients with unstable angina during the acute phase and after the relief (P>0.05). Conclusion It is shown that activation of platelet and coagulation system combined with endothelial injury may play an important role in the development of unstable angina.
, 百拇医药
【Key words】 Angina, unstable Alpha-granule membrane protein D-dimer
不稳定性心绞痛(UA)患者在冠心病住院人数中所占的比例呈上升趋势。新近研究证实，冠状动脉(冠脉)内斑块破裂继发血栓形成是UA的主要病理基础[1]。笔者测定UA 患者在心绞痛发作期和缓解期血浆可溶性α-颗粒膜蛋白(GMP-140)、D-二聚体浓度的改变，旨在探讨血小板活化及凝血系统激活在UA发生发展中的作用及其临床意义。
对象与方法
1.研究对象：(1)UA组：22例UA患者均为住院病人，男19例,女3例，年龄(56.2±10.3)岁。按照1979年WHO的心绞痛分型标准，其中初发劳累型心绞痛8例、恶化劳累型心绞痛7例、自发性心绞痛7例(2例为变异型心绞痛)。全部患者均有反复的心绞痛发作，入院后给予内科强化治疗(根据心绞痛类型分别选用硝酸酯类、钙拮抗剂、β-受体阻滞剂等，常规应用阿司匹林，急性期应用肝素3～5天)，所有病例均在5～10天内心绞痛症状得到完全控制。(2)稳定劳累型心绞痛(SA)组：18例SA患者选自住院及部分门诊病人，男16例，女2例，年龄(57.7±9.7)岁。均有典型的临床表现及心电图依据，其中8例经冠脉造影证实至少有一支冠脉狭窄超过75%。两组间在年龄、性别、高血压分期、抽烟比例及血脂血糖水平间差异无显著性。(3)正常对照组20例，男15例、女5例，年龄(54.3±11.0)岁，为门诊健康体检者及部分本院职工，经检查均无高血压、糖尿病、高血脂及心、肝、肾疾病。所有受试者在实验前两周均无应用肝素及其他抗凝药史。
, 百拇医药
2.方法：(1)取血时间：UA组患者分别于心绞痛反复发作24小时内及症状完全消退后2周各取血1次，正常对照组为清晨空腹取血1次。(2)检测方法：顺利静脉取血4 ml，其中1 ml缓慢注入1/10体积2% EDTA-Na抗凝塑料试管中(测GMP-140)，余3 ml注入1/10体积3.8%枸橼酸钠抗凝塑料试管中(测D-二聚体)，分别小心混匀。采血后60分钟内离心(4℃，3 000 r/min，10 min),分别分离上层乏血小板血浆。GMP-140及D-二聚体测定均采用酶联免疫双抗体夹心法(ELISA)，试剂盒购于福建太阳生物技术公司。
3.统计学分析：数据均以
±s表示，采用t检验、方差分析及q检验，以P<0.05为差异具有显著意义。
结果
1.UA组患者心绞痛发作期血浆GMP-140及D-二聚体浓度显著高于SA组(P<0.01)，而后两组间差异不显著(P>0.05)，见表1。
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表1 三组血浆α-颗粒膜蛋白(GMP-140)和D-二聚体测值结果(±s) 序号
组别
例数
GMP-140
(μg/L)
D-二聚体
(μg/L)
1
不稳定性心绞痛组(发作期)
22
22.49±
, 百拇医药
5.02
423.18±
90.26
2
稳定劳累型心绞痛组
18
15.48±
4.75*
293.39±
111.66*
3
正常对照组
, 百拇医药
20
14.76±
4.79**
227.85±
81.46**
注：1与2比较，*P<0.01；1与3比较，**P<0.001；2与3比较，P>0.05
2.UA组患者经治疗进入缓解期后，血浆GMP-140、D-二聚体水平较其急性发作期有所下降但差异不显著(P>0.05)，并仍显著高于SA组(P<0.05)，见表2。
表2 不稳定性心绞痛缓解期血浆α-颗粒膜蛋白(GMP-140)和D-二聚体测值结果(±s) 序号
, 百拇医药
组别
例数
GMP-140
(μg/L)
D-二聚体
(μg/L)
1
不稳定性心绞痛组(缓解期)
22
22.49±
5.02**
423.18±
, 百拇医药
90.26**
2
稳定劳累型心绞痛组
18
19.81±
4.72*
374.81±
73.41*
3
正常对照组
20
15.48±
, 百拇医药
4.75
293.39±
111.66
注：1与3比较，**P<0.01；2与3比较，*P<0.05；1与2比较，P>0.05讨论
GMP-140又称P-选择素或PADGEM，位于血小板α-颗粒膜上和内皮细胞Weibel-Palade 小体中[2]，分子生物学研究方法已证实人体内存在跨膜及可溶性两种形式的GMP-140[3]，并可应用酶联免疫方法测定血浆可溶性GMP-140浓度[4]。当血小板活化及内皮细胞受损伤刺激时，跨膜型GMP-140在血小板及内皮细胞表面表达明显增多，同时血浆可溶性GMP-140浓度也升高[5]。因此，测定乏血小板血浆中的GMP-140浓度可同时反映内皮细胞受损及血小板在体内活化的情况。
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D-二聚体是纤溶酶作用于交联纤维蛋白的特异性产物，其含量升高表示血管内血栓形成与继发纤溶的出现，是机体处于高凝状态的标志[6]。
本组结果显示，UA患者心绞痛发作时血浆GMP-140、D-二聚体浓度显著高于SA患者心绞痛发作时，表明血小板高度激活、内皮细胞损伤及血液高凝状态在UA患者病情动态发展中起重要作用。由于斑块破裂或溃疡时有内皮细胞的损伤，同时斑块内成分暴露，释放促凝物质增多，凝血酶不仅使血栓形成还可刺激血小板的活化。因此UA患者血浆GMP-140、D-二聚体浓度升高可能预示其冠脉内斑块不稳定、血小板活化及反复的血栓形成与纤溶。
对急性冠脉综合征(不稳定心绞痛、急性心肌梗塞、猝死)患者的临床资料进行分析发现，半数以上患者在出现急性症状之前其冠脉造影只显示轻-中度狭窄，表明斑块的稳定性较之斑块的大小在决定急性冠脉综合征的发生发展中更为重要[7]。正是由于不稳定斑块的破裂引起凝血激活，继发血栓形成，加之活化血小板及受损伤刺激的内皮细胞释放缩血管物质增多，造成冠脉腔不完全或完全闭塞、猝死。因此，探讨引发斑块不稳定的机制以及斑块破裂后出现的血液成分改变，对于防治急性冠脉综合征具有重要意义。本组研究结果表明，测定UA患者血浆GMP-140、D-二聚体浓度的变化以了解血小板激活、内皮受损及血液高凝状态的情况，对于临床上进行危险性评估、判断预后、选择合理的治疗措施等均有一定的指导价值。
, 百拇医药
我们的结果还显示，UA患者经治疗心绞痛症状完全消失后2周，其血浆GMP-140、D-二聚体浓度虽然较急性期有所下降，但差异不显著，并仍然明显高于SA组，说明破裂斑块的愈合稳定可能需要更长的时间且与临床表现不同步。因此，是否应给予较长时间的抗凝以减少其恶性事件(急性心肌梗死、猝死)的发生，还须进一步研究。
参考文献
1 Falk E, Shah PK， Fuster V. Coronary plaque disruption. Circulation, 1995, 92:657-671.
2 McEver RP, Beckstead JA, Moore KL, et al. GMP-140, a platelet alpha-granule membrane protein, is also sysnthesized by vascular endothelial cells and is localized in Weibel-Palade bodies. J Clin Invest, 1989, 84: 92-99.
, http://www.100md.com
3 Ishiwata N, Takio K, Katayama M, et al. Alternatively spliced isoform of P-selectin is present in vivo as a soluble molecule. J Biol Chem, 1994, 269: 23708-23715.
4 Katayama M, Handa M, Ambo H, et al. A monoclonal antibody-based enzyme immunoassay for human GMP-140/P-selectin. J Immunol Methods, 1992,153:41-48.
5 Kaikita K, Ogawa H, Yasue H, et al. Soluble P-selectin is released into the coronary circulation after coronary spasm. Circulation, 1995, 92: 1726-1730.
6 Lip GY, Lowe GD. Fibrin D-dimer: a useful clinical marker of thrombogenesis? Clin Sci, 1995, 89:205-214.
7 Shah PK. Pathophysiology of plaque rupture and the concept of plaque stablization. Cardiol Clin, 1996,14:17-29.
(收稿：1998-10-09 修回：1999-03-11), 百拇医药
单位：张静、张菲斐、沈玉祥 450003 郑州，河南省人民医院心内科，翟亚萍、商保军 血液病研究所
关键词：心绞痛，不稳定型；α-；颗粒膜蛋白；D-二聚体
中华内科杂志990807 【摘 要】 目的 探讨血小板活化、凝血激活与不稳定性心绞痛(UA)的关系及其临床意义。方法 用酶联免疫双抗体夹心法分别测定22例UA患者急性期和缓解期血浆α-颗粒膜蛋白(GMP-140)、D-二聚体浓度；并用相同方法测定18例稳定劳累型心绞痛(SA)患者和20例健康对照者上述指标，对其结果进行统计学分析。结果 UA患者急性期血浆GMP-140、D-二聚体浓度显著高于SA组(P<0.01)和对照组(P<0.01)，后两组之间差异无显著性(P>0.05)；UA患者缓解期血浆GMP-140、D-二聚体水平较其急性期有所下降但差异无显著性(P>0.05)，并仍显著高于SA组(P<0.05)。结论 结果提示血小板活化、凝血激活系统及内皮细胞损伤在UA的发生发展中起重要作用。
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The clinical significance of changes in plasma levels of α-granule
membrane protein and D-dimer in patients with unstable angina
ZHANG Jing, ZHANG Feifei, SHEN Yuxiang, et al.
Department of Cardiology, Henan Provincial People's Hospital, Zhengzhou 450003
【Abstract】 Objective To explore the relationship between platelet activation and enhanced coagulability and the occurrence unstable angina. Methods Plasma levels of a-granule membrane protein (GMP-140) and fibrin D-dimer were measured in 22 patients with unstable angina during the acute phase and after relief. The same procedure were compared with those in 20 control subjects and 18 patients with stable angina. Results Plasma levels of GMP-140 and D-dimer were significantly higher in patients with unstable angina both during the acute phase(P<0.01) and after the relief (P<0.05) as compared with those in control subjects and patients with stable angina, but there was no significant difference between the latter two groups (P>0.05). There was also no significant difference between the patients with unstable angina during the acute phase and after the relief (P>0.05). Conclusion It is shown that activation of platelet and coagulation system combined with endothelial injury may play an important role in the development of unstable angina.
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【Key words】 Angina, unstable Alpha-granule membrane protein D-dimer
不稳定性心绞痛(UA)患者在冠心病住院人数中所占的比例呈上升趋势。新近研究证实，冠状动脉(冠脉)内斑块破裂继发血栓形成是UA的主要病理基础[1]。笔者测定UA 患者在心绞痛发作期和缓解期血浆可溶性α-颗粒膜蛋白(GMP-140)、D-二聚体浓度的改变，旨在探讨血小板活化及凝血系统激活在UA发生发展中的作用及其临床意义。
对象与方法
1.研究对象：(1)UA组：22例UA患者均为住院病人，男19例,女3例，年龄(56.2±10.3)岁。按照1979年WHO的心绞痛分型标准，其中初发劳累型心绞痛8例、恶化劳累型心绞痛7例、自发性心绞痛7例(2例为变异型心绞痛)。全部患者均有反复的心绞痛发作，入院后给予内科强化治疗(根据心绞痛类型分别选用硝酸酯类、钙拮抗剂、β-受体阻滞剂等，常规应用阿司匹林，急性期应用肝素3～5天)，所有病例均在5～10天内心绞痛症状得到完全控制。(2)稳定劳累型心绞痛(SA)组：18例SA患者选自住院及部分门诊病人，男16例，女2例，年龄(57.7±9.7)岁。均有典型的临床表现及心电图依据，其中8例经冠脉造影证实至少有一支冠脉狭窄超过75%。两组间在年龄、性别、高血压分期、抽烟比例及血脂血糖水平间差异无显著性。(3)正常对照组20例，男15例、女5例，年龄(54.3±11.0)岁，为门诊健康体检者及部分本院职工，经检查均无高血压、糖尿病、高血脂及心、肝、肾疾病。所有受试者在实验前两周均无应用肝素及其他抗凝药史。
, 百拇医药
2.方法：(1)取血时间：UA组患者分别于心绞痛反复发作24小时内及症状完全消退后2周各取血1次，正常对照组为清晨空腹取血1次。(2)检测方法：顺利静脉取血4 ml，其中1 ml缓慢注入1/10体积2% EDTA-Na抗凝塑料试管中(测GMP-140)，余3 ml注入1/10体积3.8%枸橼酸钠抗凝塑料试管中(测D-二聚体)，分别小心混匀。采血后60分钟内离心(4℃，3 000 r/min，10 min),分别分离上层乏血小板血浆。GMP-140及D-二聚体测定均采用酶联免疫双抗体夹心法(ELISA)，试剂盒购于福建太阳生物技术公司。
3.统计学分析：数据均以
±s表示，采用t检验、方差分析及q检验，以P<0.05为差异具有显著意义。结果
1.UA组患者心绞痛发作期血浆GMP-140及D-二聚体浓度显著高于SA组(P<0.01)，而后两组间差异不显著(P>0.05)，见表1。
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表1 三组血浆α-颗粒膜蛋白(GMP-140)和D-二聚体测值结果(
±s) 序号组别
例数
GMP-140
(μg/L)
D-二聚体
(μg/L)
1
不稳定性心绞痛组(发作期)
22
22.49±
, 百拇医药
5.02
423.18±
90.26
2
稳定劳累型心绞痛组
18
15.48±
4.75*
293.39±
111.66*
3
正常对照组
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20
14.76±
4.79**
227.85±
81.46**
注：1与2比较，*P<0.01；1与3比较，**P<0.001；2与3比较，P>0.05
2.UA组患者经治疗进入缓解期后，血浆GMP-140、D-二聚体水平较其急性发作期有所下降但差异不显著(P>0.05)，并仍显著高于SA组(P<0.05)，见表2。
表2 不稳定性心绞痛缓解期血浆α-颗粒膜蛋白(GMP-140)和D-二聚体测值结果(
±s) 序号, 百拇医药
组别
例数
GMP-140
(μg/L)
D-二聚体
(μg/L)
1
不稳定性心绞痛组(缓解期)
22
22.49±
5.02**
423.18±
, 百拇医药
90.26**
2
稳定劳累型心绞痛组
18
19.81±
4.72*
374.81±
73.41*
3
正常对照组
20
15.48±
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4.75
293.39±
111.66
注：1与3比较，**P<0.01；2与3比较，*P<0.05；1与2比较，P>0.05讨论
GMP-140又称P-选择素或PADGEM，位于血小板α-颗粒膜上和内皮细胞Weibel-Palade 小体中[2]，分子生物学研究方法已证实人体内存在跨膜及可溶性两种形式的GMP-140[3]，并可应用酶联免疫方法测定血浆可溶性GMP-140浓度[4]。当血小板活化及内皮细胞受损伤刺激时，跨膜型GMP-140在血小板及内皮细胞表面表达明显增多，同时血浆可溶性GMP-140浓度也升高[5]。因此，测定乏血小板血浆中的GMP-140浓度可同时反映内皮细胞受损及血小板在体内活化的情况。
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D-二聚体是纤溶酶作用于交联纤维蛋白的特异性产物，其含量升高表示血管内血栓形成与继发纤溶的出现，是机体处于高凝状态的标志[6]。
本组结果显示，UA患者心绞痛发作时血浆GMP-140、D-二聚体浓度显著高于SA患者心绞痛发作时，表明血小板高度激活、内皮细胞损伤及血液高凝状态在UA患者病情动态发展中起重要作用。由于斑块破裂或溃疡时有内皮细胞的损伤，同时斑块内成分暴露，释放促凝物质增多，凝血酶不仅使血栓形成还可刺激血小板的活化。因此UA患者血浆GMP-140、D-二聚体浓度升高可能预示其冠脉内斑块不稳定、血小板活化及反复的血栓形成与纤溶。
对急性冠脉综合征(不稳定心绞痛、急性心肌梗塞、猝死)患者的临床资料进行分析发现，半数以上患者在出现急性症状之前其冠脉造影只显示轻-中度狭窄，表明斑块的稳定性较之斑块的大小在决定急性冠脉综合征的发生发展中更为重要[7]。正是由于不稳定斑块的破裂引起凝血激活，继发血栓形成，加之活化血小板及受损伤刺激的内皮细胞释放缩血管物质增多，造成冠脉腔不完全或完全闭塞、猝死。因此，探讨引发斑块不稳定的机制以及斑块破裂后出现的血液成分改变，对于防治急性冠脉综合征具有重要意义。本组研究结果表明，测定UA患者血浆GMP-140、D-二聚体浓度的变化以了解血小板激活、内皮受损及血液高凝状态的情况，对于临床上进行危险性评估、判断预后、选择合理的治疗措施等均有一定的指导价值。
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我们的结果还显示，UA患者经治疗心绞痛症状完全消失后2周，其血浆GMP-140、D-二聚体浓度虽然较急性期有所下降，但差异不显著，并仍然明显高于SA组，说明破裂斑块的愈合稳定可能需要更长的时间且与临床表现不同步。因此，是否应给予较长时间的抗凝以减少其恶性事件(急性心肌梗死、猝死)的发生，还须进一步研究。
参考文献
1 Falk E, Shah PK， Fuster V. Coronary plaque disruption. Circulation, 1995, 92:657-671.
2 McEver RP, Beckstead JA, Moore KL, et al. GMP-140, a platelet alpha-granule membrane protein, is also sysnthesized by vascular endothelial cells and is localized in Weibel-Palade bodies. J Clin Invest, 1989, 84: 92-99.
, http://www.100md.com
3 Ishiwata N, Takio K, Katayama M, et al. Alternatively spliced isoform of P-selectin is present in vivo as a soluble molecule. J Biol Chem, 1994, 269: 23708-23715.
4 Katayama M, Handa M, Ambo H, et al. A monoclonal antibody-based enzyme immunoassay for human GMP-140/P-selectin. J Immunol Methods, 1992,153:41-48.
5 Kaikita K, Ogawa H, Yasue H, et al. Soluble P-selectin is released into the coronary circulation after coronary spasm. Circulation, 1995, 92: 1726-1730.
6 Lip GY, Lowe GD. Fibrin D-dimer: a useful clinical marker of thrombogenesis? Clin Sci, 1995, 89:205-214.
7 Shah PK. Pathophysiology of plaque rupture and the concept of plaque stablization. Cardiol Clin, 1996,14:17-29.
(收稿：1998-10-09 修回：1999-03-11), 百拇医药