糖皮质激素受体对肾小球系膜细胞表达细胞间黏附分子-1的影响
作者：郭志勇 崔若兰
单位：200433 上海，第二军医大学附属长海医院肾内科
关键词：
中华内科杂志991020 近年来免疫病理学研究已经证实细胞间黏附分子-1(ICAM-1)作为细胞黏附分子中免疫球蛋白超家族成员之一，通过与炎性细胞表面同族型配体之间相互作用形成黏附，在免疫监督、炎症反应、吞噬过程、动脉粥样硬化等过程中起着重要的作用[1，2]。目前证实，肾小球系膜细胞(MC)表面低表达ICAM-1，而细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)等刺激并上调系膜细胞表达ICAM-1。本研究目的是进一步探讨糖皮质激素(GC)，如氟美松(Dex)对TNF-α诱导后MC表达ICAM-1增加的抑制作用，以及糖皮质激素受体(GR)阻断剂RU38486对Dex抑制作用有何影响及两者间量效关系，以期进一步确定GC对MC表达ICAM-1的抑制作用是否经GR介导，从而探讨GC抑制炎症过程中MC黏附的作用机制。
, 百拇医药
一、材料与方法
1.实验动物及主要试剂
雄性SD大鼠25只，250～350 g，本校实验动物中心提供。肿瘤坏死因子-α(TNF-α):美国Immurex公司产品；RU38486由法国Russel-Ucalf公司惠赠。
2.大鼠肾小球分离、MC培养与鉴定：按文献[3]方法进行。取第4代培养细胞经免疫组化(抗desmin抗体、抗胸腺细胞抗体)及位相镜、扫描电镜、透射电镜鉴定，证实为MC后用于实验。
3.分组：(1)对照组：MC用生理盐水处理24小时。(2)TNF-α组：MC用TNF-α(终浓度为100 U/ml)处理24小时。(3)TNF-α+Dex组：MC用TNF-α(终浓度同上)和Dex(终浓度为10-8 mol)同时处理24小时。(4)TNF-α+RU38486组：MC用TNF-α(终浓度同上)和RU38486(终浓度为10-6 mol)同时处理24小时。(5)TNF-α+Dex+RU38486组：MC用TNF-α、Dex和RU38486(终浓度均同上)同时处理24小时。
, 百拇医药
4.MC表达ICAM-1的检测：采用酶联法分别测定MC表面ICAM-1的表达，即多聚甲醛固定后，依次加入抗ICAM-1单克隆抗体及辣根过氧化物酶标记的二抗，经Karnovsky液显色，酶联法(490 nm)测吸光度A值。
5.统计学处理：测定结果以
±s表示，组间比较用F检验。
二、结果
1.GC和GR阻断对TNF-α刺激MC表达ICAM-1的作用：见表1。
从表1可看出，经TNF-α作用后，MC表达ICAM-1的A值高于对照组(P<0.01)；TNF-α+Dex组较TNF-α组降低(P<0.01)，说明Dex能抑制TNF-α诱导ICAM-1的表达增加；TNF-α+RU38486组MC表达ICAM-1的A值与TNF-α组相比，差异无显著性，说明10-6 mol的RU38486对MC表达ICAM-1无作用；TNF-α+Dex+RU38486组与TNF-α+Dex组相比，差异有显著性(P<0.01)，说明RU38486阻断GR可以逆转Dex的抑制作用。
, 百拇医药
表1 各组肾小球系膜细胞表面ICAM-1表达A值(±s) 组别
例数
肾小球系膜细胞表面
ICAM-1吸光度值
对照组
5
0.007±0.001
TNF-α组
5
0.342±0.017*
, 百拇医药
TNF-α+Dex组
5
0.204±0.015**
TNF-α+RU38486组
5
0.344±0.021△
TNF-α+Dex+RU38486组
5
0.339±0.018▲
注：TNF：肿瘤坏死因子；ICAM：细胞间黏附分子；Dex：氟美松 与对照组比，*P<0.01;与TNF-α组比，P<0.01；与TNF-α组比，△P>0.05；与TNF-α+Dex组比，▲P<0.01 讨论 目前有报道[4]认为，肾小球系膜区炎症发生过程中，系膜细胞在细胞因子作用下，其表面ICAM-1的表达增强，与表达于所有白细胞表面的相关配体淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)结合，导致白细胞聚集、渗入和迁移，从而发生炎症反应。故ICAM-1与LFA-1被认为在肾小球早期炎症的激发中起着重要的介导作用。
, 百拇医药
近年来，新发现称为核因子(nuclear factor kappa B，NF-κB)是细胞中一个重要的转录因子，在细胞因子诱导的基因表达中起关键性的调控作用[5]。NF-κB位于ICAM-1基因的启动子内，其与GR一样，作为信使将基因诱导信号从细胞浆传递给细胞核，并快速介导TNFα诱导的ICAM-1基因的转录。NF-κB可被TNFα激活，同时其也是GC作用的靶目标。GC的抑制效应可能是通过GR抑制ICAM-1的NF-κB激活所致。由此可见，NF-κB这一转录因子和GR相互之间存在着拮抗作用，故TNFα诱导的ICAM-1基因的转录和GR介导的抑制效应可快速改变细胞表面ICAM-1蛋白的表达，从而影响炎症过程的变化。
参考文献
[1] Rothlein B, Wegner C. Role of ICAM-1 in the inflammatory responce. Kidney Int,1992,41:617-619.
, 百拇医药
[2] Ikeda M, Ikeda U, Shimada K, et al. Regulation of ICAM-1 expression by inflammatory cytokines in rat mesangial cells. Cytokine,1996,8:109-114.
[3] 谌贻璞,高进,邢宝才,等. 肾小球系膜细胞培养.北京医科大学学报,1989,21：335-336.
[4] Gauer S, Yao J, Schoecklmann HO, et al. Adhesion molecules in the glomerular mesangium. Kidney Int,1997,51:1447-1453.
[5] Caldenhoven E, Liden J, Wissink S, et al. Negative cross-talk between RelA and the glococorticoid receptor: a possible mechanism for the anti inflammatory action of glucocorticoids. Mol Endocrinol,1995,9:401-412.
(收稿：1998-12-08 修回：1999-04-16), 百拇医药
单位：200433 上海，第二军医大学附属长海医院肾内科
关键词：
中华内科杂志991020 近年来免疫病理学研究已经证实细胞间黏附分子-1(ICAM-1)作为细胞黏附分子中免疫球蛋白超家族成员之一，通过与炎性细胞表面同族型配体之间相互作用形成黏附，在免疫监督、炎症反应、吞噬过程、动脉粥样硬化等过程中起着重要的作用[1，2]。目前证实，肾小球系膜细胞(MC)表面低表达ICAM-1，而细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)等刺激并上调系膜细胞表达ICAM-1。本研究目的是进一步探讨糖皮质激素(GC)，如氟美松(Dex)对TNF-α诱导后MC表达ICAM-1增加的抑制作用，以及糖皮质激素受体(GR)阻断剂RU38486对Dex抑制作用有何影响及两者间量效关系，以期进一步确定GC对MC表达ICAM-1的抑制作用是否经GR介导，从而探讨GC抑制炎症过程中MC黏附的作用机制。
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一、材料与方法
1.实验动物及主要试剂
雄性SD大鼠25只，250～350 g，本校实验动物中心提供。肿瘤坏死因子-α(TNF-α):美国Immurex公司产品；RU38486由法国Russel-Ucalf公司惠赠。
2.大鼠肾小球分离、MC培养与鉴定：按文献[3]方法进行。取第4代培养细胞经免疫组化(抗desmin抗体、抗胸腺细胞抗体)及位相镜、扫描电镜、透射电镜鉴定，证实为MC后用于实验。
3.分组：(1)对照组：MC用生理盐水处理24小时。(2)TNF-α组：MC用TNF-α(终浓度为100 U/ml)处理24小时。(3)TNF-α+Dex组：MC用TNF-α(终浓度同上)和Dex(终浓度为10-8 mol)同时处理24小时。(4)TNF-α+RU38486组：MC用TNF-α(终浓度同上)和RU38486(终浓度为10-6 mol)同时处理24小时。(5)TNF-α+Dex+RU38486组：MC用TNF-α、Dex和RU38486(终浓度均同上)同时处理24小时。
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4.MC表达ICAM-1的检测：采用酶联法分别测定MC表面ICAM-1的表达，即多聚甲醛固定后，依次加入抗ICAM-1单克隆抗体及辣根过氧化物酶标记的二抗，经Karnovsky液显色，酶联法(490 nm)测吸光度A值。
5.统计学处理：测定结果以
±s表示，组间比较用F检验。二、结果
1.GC和GR阻断对TNF-α刺激MC表达ICAM-1的作用：见表1。
从表1可看出，经TNF-α作用后，MC表达ICAM-1的A值高于对照组(P<0.01)；TNF-α+Dex组较TNF-α组降低(P<0.01)，说明Dex能抑制TNF-α诱导ICAM-1的表达增加；TNF-α+RU38486组MC表达ICAM-1的A值与TNF-α组相比，差异无显著性，说明10-6 mol的RU38486对MC表达ICAM-1无作用；TNF-α+Dex+RU38486组与TNF-α+Dex组相比，差异有显著性(P<0.01)，说明RU38486阻断GR可以逆转Dex的抑制作用。
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表1 各组肾小球系膜细胞表面ICAM-1表达A值(
±s) 组别例数
肾小球系膜细胞表面
ICAM-1吸光度值
对照组
5
0.007±0.001
TNF-α组
5
0.342±0.017*
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TNF-α+Dex组
5
0.204±0.015**
TNF-α+RU38486组
5
0.344±0.021△
TNF-α+Dex+RU38486组
5
0.339±0.018▲
注：TNF：肿瘤坏死因子；ICAM：细胞间黏附分子；Dex：氟美松 与对照组比，*P<0.01;与TNF-α组比，P<0.01；与TNF-α组比，△P>0.05；与TNF-α+Dex组比，▲P<0.01 讨论 目前有报道[4]认为，肾小球系膜区炎症发生过程中，系膜细胞在细胞因子作用下，其表面ICAM-1的表达增强，与表达于所有白细胞表面的相关配体淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)结合，导致白细胞聚集、渗入和迁移，从而发生炎症反应。故ICAM-1与LFA-1被认为在肾小球早期炎症的激发中起着重要的介导作用。
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近年来，新发现称为核因子(nuclear factor kappa B，NF-κB)是细胞中一个重要的转录因子，在细胞因子诱导的基因表达中起关键性的调控作用[5]。NF-κB位于ICAM-1基因的启动子内，其与GR一样，作为信使将基因诱导信号从细胞浆传递给细胞核，并快速介导TNFα诱导的ICAM-1基因的转录。NF-κB可被TNFα激活，同时其也是GC作用的靶目标。GC的抑制效应可能是通过GR抑制ICAM-1的NF-κB激活所致。由此可见，NF-κB这一转录因子和GR相互之间存在着拮抗作用，故TNFα诱导的ICAM-1基因的转录和GR介导的抑制效应可快速改变细胞表面ICAM-1蛋白的表达，从而影响炎症过程的变化。
参考文献
[1] Rothlein B, Wegner C. Role of ICAM-1 in the inflammatory responce. Kidney Int,1992,41:617-619.
, 百拇医药
[2] Ikeda M, Ikeda U, Shimada K, et al. Regulation of ICAM-1 expression by inflammatory cytokines in rat mesangial cells. Cytokine,1996,8:109-114.
[3] 谌贻璞,高进,邢宝才,等. 肾小球系膜细胞培养.北京医科大学学报,1989,21：335-336.
[4] Gauer S, Yao J, Schoecklmann HO, et al. Adhesion molecules in the glomerular mesangium. Kidney Int,1997,51:1447-1453.
[5] Caldenhoven E, Liden J, Wissink S, et al. Negative cross-talk between RelA and the glococorticoid receptor: a possible mechanism for the anti inflammatory action of glucocorticoids. Mol Endocrinol,1995,9:401-412.
(收稿：1998-12-08 修回：1999-04-16), 百拇医药