氟美松抑制急性肺损伤大鼠肺组织CINC mRNA表达
作者：张齐武 张进川
单位：张进川(北京，解放军总医院呼吸内科 100853)；张齐武(现在辽宁省大连市解放军第210医院内科，116021 )
关键词：
中华内科杂志000821 CINC(cytokine-induced neutrol chemoattractant)是一种大鼠中性粒细胞特异性趋化因子，近年国外一些研究发现，其与急性肺损伤(ALI)发生有关。本研究旨在观察内毒素致大鼠ALI过程中肺组织CINC基因表达水平的变化，并探讨氟美松的预防作用。
一、材料和方法
1.材料：雄性SD大鼠32只 ，体重200～300 g ，随机分为 4组，每组8只。(1)A组：正常对照组，腹腔注射生理盐水2 ml/kg体重；(2)B组：ALI组，腹腔注射脂多糖(LPS) 2 ml/kg体重；(3)C组：氟美松预防Ⅰ组，在注射LPS前半小时腹腔注射氟美松5 mg/kg体重；(4)D组：氟美松预防Ⅱ组，在注射LPS的同时腹腔注射氟美松5 mg/kg体重。2h后腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠，摘眼球放血后处死。行外周血白细胞计数。收集血清，保存于-20℃。行支气管肺泡灌洗，收集灌洗液，离心3 000 r/min，取上清冻存于-20℃。将肺组织冻存于-70℃，待测CINC基因表达。
, 百拇医药
2.方法：采用考马斯亮兰法检测肺泡灌洗液中蛋白的浓度。血清肿瘤坏死因子(TNF )α检测按TNFα放免检测试剂盒(北京东亚免疫生物技术公司)说明书进行。 采用逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)法检测肺组织CINC基因表达， 参照总RNA提取试剂盒和一步法RT-PCR试剂盒(均购自GIBRCO/BRL公司)说明书进行。PCR反应条件：94℃，15s；58℃，30s；72℃，18s。执行35个循环。最后延伸，72℃，10min。CINC和β-actin两对引物由北京赛百盛生物工程公司合成，最后扩增产物长度分别为207 bp和300 bp。电泳结束时对电泳带进行扫描，用LEICA计算机图像分析系统检测扩增产物灰度值，以β-actin为内参照，计算CINC mRNA的相对含量。
3.统计学方法：数据用
±s表示，各组间比较采用方差分析。
二、结果
, http://www.100md.com
各组大鼠外周血多形核白细胞(PMN)计数、肺泡灌洗液蛋白浓度、血清TNFα和肺组织CINC mRNA表达的比较：见表1。
表1 各组大鼠PMN计数、灌洗液蛋白浓度、NFα和CINC mRNA的比较(±s) 组别
鼠数
(只)
外周血
PMN计数
(×109/L)
灌洗液
蛋白浓度
, http://www.100md.com
(g/L)
血清TNFα
( μg/L)
肺组织
CINC mRNA
表达
A组
8
3.075 0±
1.197 6▲
0.153 0±
0.031 1△
, http://www.100md.com
0.125 1±
0.044 0△
0.034 9±
0.063 3△
B组
8
1.012 5±
0.313 7*
6.868 6±
2.741 8*
2.848 8±
, http://www.100md.com
1.163 3*
0.510 1±
0.160 4*
C组
8
2.468 8±
7.255 2**
1.563 9±
0.995 9△△
1.270 9±
0.479 6
, http://www.100md.com
0.344 5±
0.091 2▲▲
D组
8
2.743 8±
5.876 3
0.817 0±
0.440 3
0.872 8±
0.127 2
0.227 1±
0.072 4▲▲
, 百拇医药
注：与C、D组比较，*P<0.001；与B组比较，▲P<0.05，△P<0.001；与D组比较，**P<0.05；与A组比较，△△P<0.05，▲▲P<0.001
讨论 CINC是一种分子量为8 000的多肽，由单基因编码，首次在白细胞介素-1β刺激的正常大鼠肾脏细胞NPK-52E中纯化得到，是人黑素生长刺激活性相关蛋白的同源物，也是前炎症趋化因子超家族的成员。在大鼠体内，肺泡巨噬细胞也可产生CINC。Blackwell等[1]通过Northern斑点分析发现，在内毒素大鼠ALI发生过程中，肺组织CINC基因表达增强。本研究也观察到，内毒素损伤后2h大鼠肺组织CINC mRNA表达较A组显著增强。CINC是大鼠中性粒细胞特异性趋化因子，与中性粒细胞的趋化、游走和肺内募集等活动有关。据此推测，CINC表达增强可能与ALI发生过程中肺部中性粒细胞为主的炎症过程有关。
, 百拇医药
C、D组肺组织CINC mRNA表达显著低于B组，表明激素可有效抑制肺组织CINC基因的表达。本研究还观察到，C、D组同B组相比外周血PMN减少，肺组织炎症细胞浸润显著减少，说明氟美松可能通过抑制肺组织CINC基因表达而阻止肺部炎症细胞浸润。
本研究也比较了不同时间给予氟美松对内毒素ALI保护作用的差别。结果显示，C组肺组织CINC表达显著高于D组，而前者外周血PMN计数显著低于后者，表明在给内毒素同时注射氟美松对ALI具有更好的保护作用。
参考文献
1，Blackwell TS,Holden EP,Blackwell TR,et al. Cytokine-induced neutrophil chemoattractant mediates neutrophilic alveolitis in rats :association with nuclear factor kappaB activation. Am J Respir Cell Mol Biol， 1994，11:464-472.
(收稿日期：1999-12-24), 百拇医药
单位：张进川(北京，解放军总医院呼吸内科 100853)；张齐武(现在辽宁省大连市解放军第210医院内科，116021 )
关键词：
中华内科杂志000821 CINC(cytokine-induced neutrol chemoattractant)是一种大鼠中性粒细胞特异性趋化因子，近年国外一些研究发现，其与急性肺损伤(ALI)发生有关。本研究旨在观察内毒素致大鼠ALI过程中肺组织CINC基因表达水平的变化，并探讨氟美松的预防作用。
一、材料和方法
1.材料：雄性SD大鼠32只 ，体重200～300 g ，随机分为 4组，每组8只。(1)A组：正常对照组，腹腔注射生理盐水2 ml/kg体重；(2)B组：ALI组，腹腔注射脂多糖(LPS) 2 ml/kg体重；(3)C组：氟美松预防Ⅰ组，在注射LPS前半小时腹腔注射氟美松5 mg/kg体重；(4)D组：氟美松预防Ⅱ组，在注射LPS的同时腹腔注射氟美松5 mg/kg体重。2h后腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠，摘眼球放血后处死。行外周血白细胞计数。收集血清，保存于-20℃。行支气管肺泡灌洗，收集灌洗液，离心3 000 r/min，取上清冻存于-20℃。将肺组织冻存于-70℃，待测CINC基因表达。
, 百拇医药
2.方法：采用考马斯亮兰法检测肺泡灌洗液中蛋白的浓度。血清肿瘤坏死因子(TNF )α检测按TNFα放免检测试剂盒(北京东亚免疫生物技术公司)说明书进行。 采用逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)法检测肺组织CINC基因表达， 参照总RNA提取试剂盒和一步法RT-PCR试剂盒(均购自GIBRCO/BRL公司)说明书进行。PCR反应条件：94℃，15s；58℃，30s；72℃，18s。执行35个循环。最后延伸，72℃，10min。CINC和β-actin两对引物由北京赛百盛生物工程公司合成，最后扩增产物长度分别为207 bp和300 bp。电泳结束时对电泳带进行扫描，用LEICA计算机图像分析系统检测扩增产物灰度值，以β-actin为内参照，计算CINC mRNA的相对含量。
3.统计学方法：数据用
±s表示，各组间比较采用方差分析。二、结果
, http://www.100md.com
各组大鼠外周血多形核白细胞(PMN)计数、肺泡灌洗液蛋白浓度、血清TNFα和肺组织CINC mRNA表达的比较：见表1。
表1 各组大鼠PMN计数、灌洗液蛋白浓度、NFα和CINC mRNA的比较(
±s) 组别鼠数
(只)
外周血
PMN计数
(×109/L)
灌洗液
蛋白浓度
, http://www.100md.com
(g/L)
血清TNFα
( μg/L)
肺组织
CINC mRNA
表达
A组
8
3.075 0±
1.197 6▲
0.153 0±
0.031 1△
, http://www.100md.com
0.125 1±
0.044 0△
0.034 9±
0.063 3△
B组
8
1.012 5±
0.313 7*
6.868 6±
2.741 8*
2.848 8±
, http://www.100md.com
1.163 3*
0.510 1±
0.160 4*
C组
8
2.468 8±
7.255 2**
1.563 9±
0.995 9△△
1.270 9±
0.479 6
, http://www.100md.com
0.344 5±
0.091 2▲▲
D组
8
2.743 8±
5.876 3
0.817 0±
0.440 3
0.872 8±
0.127 2
0.227 1±
0.072 4▲▲
, 百拇医药
注：与C、D组比较，*P<0.001；与B组比较，▲P<0.05，△P<0.001；与D组比较，**P<0.05；与A组比较，△△P<0.05，▲▲P<0.001
讨论 CINC是一种分子量为8 000的多肽，由单基因编码，首次在白细胞介素-1β刺激的正常大鼠肾脏细胞NPK-52E中纯化得到，是人黑素生长刺激活性相关蛋白的同源物，也是前炎症趋化因子超家族的成员。在大鼠体内，肺泡巨噬细胞也可产生CINC。Blackwell等[1]通过Northern斑点分析发现，在内毒素大鼠ALI发生过程中，肺组织CINC基因表达增强。本研究也观察到，内毒素损伤后2h大鼠肺组织CINC mRNA表达较A组显著增强。CINC是大鼠中性粒细胞特异性趋化因子，与中性粒细胞的趋化、游走和肺内募集等活动有关。据此推测，CINC表达增强可能与ALI发生过程中肺部中性粒细胞为主的炎症过程有关。
, 百拇医药
C、D组肺组织CINC mRNA表达显著低于B组，表明激素可有效抑制肺组织CINC基因的表达。本研究还观察到，C、D组同B组相比外周血PMN减少，肺组织炎症细胞浸润显著减少，说明氟美松可能通过抑制肺组织CINC基因表达而阻止肺部炎症细胞浸润。
本研究也比较了不同时间给予氟美松对内毒素ALI保护作用的差别。结果显示，C组肺组织CINC表达显著高于D组，而前者外周血PMN计数显著低于后者，表明在给内毒素同时注射氟美松对ALI具有更好的保护作用。
参考文献
1，Blackwell TS,Holden EP,Blackwell TR,et al. Cytokine-induced neutrophil chemoattractant mediates neutrophilic alveolitis in rats :association with nuclear factor kappaB activation. Am J Respir Cell Mol Biol， 1994，11:464-472.
(收稿日期：1999-12-24), 百拇医药