不同透析膜对白细胞表面黏附分子表达影响的比较
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中华内科杂志 2000年第9期第39卷
作者：孙倩美 刘惠兰 彭立人 张新
单位：孙倩美 彭立人 张新(100020 北京红十字朝阳医院肾内科)；刘惠兰(北京复兴医院肾内科)
关键词：
中华内科杂志000920 慢性肾功能衰竭血透患者存在免疫功能紊乱。以往的研究表明，血透患者的免疫功能紊乱主要表现为T细胞介导的特异性细胞免疫功能低下。近年来国外一些专家提出血透患者的白细胞功能也受到损害，特别是血透过程对白细胞表面黏附分子的表达有一定影响，且这种影响与透析膜的生物相容性有关[1]。我们通过观察在使用不同透析膜过程中白细胞表面黏附分子CD11a、CD11b、CD11c的变化规律，探讨它们对机体免疫功能的影响。
一、对象与方法
1.对象: 选择20例维持性血透患者(男11例,女9例)，平均年龄(52±13.5)岁(36～78岁)，并将患者随机分为两组，分别应用铜仿膜(10例)和聚砜膜(10例)透析，透析膜面积均为1.3 m2。每组患者应用指定透析膜4周以上， 留取血标本时透析器均首次使用。另选10例慢性肾功能衰竭未透析患者(男5例，女5例)，平均年龄(50.6±11.8)岁(38～74岁)，平均血肌酐[(646.2±227.6) μmol/L]为未透析对照组。再选10例性别、年龄相当的健康志愿者(男5例，女5例)为正常对照组，平均年龄(51.4±8.42)岁(28～68岁)。
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2.方法: 两组血透患者均于透前、透析15 min、透后各取静脉血2 ml(EDTA抗凝)；慢型肾衰未透析组、正常对照组于清晨空腹取肘静脉血2 ml(EDTA抗凝)。
采用流式细胞分析技术分析黏附分子CD11a、CD11b、 CD11c的表达水平。取100 μl抗凝血，分别加入FITC标记的鼠抗人CD11a、CD11b及PE标记的鼠抗人CD11c单克隆抗体(美国Pharmingen公司产品)各20 μl，室温孵育30～45 min，加入2 ml溶血素，离心去上清，加PBS 4 ml(pH 7.4)混匀，离心，6 h内上机检测。检测时每个样本分析10 000个细胞。使用FITC标记的同型IgG1a、PE标记的同型IgG1a为阴性对照。CD11a、CD11b、CD11 c表达水平用平均荧光强度表示。
3.统计方法: 所有数据均以均数±标准差表示，采用单因素方差分析，Q检验进行数据处理，数据处理应用SPSS 统计软件包进行。
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二、结果
1.CD11a在血透中的变化: 透析前、透析过程中粒细胞、单核细胞表面CD11a 的表达与非透析组和正常对照组间差异无显著性(P>0.05)。
2.CD11b在血透中的变化: 透析前粒细胞、单核细胞表面CD11b 的基础值与非透析组和正常对照组间差异无显著性(P>0.05)。两种膜透析开始 15 min后，粒细胞表面CD11b较透前上升，差异有显著性 (P<0.05)，铜仿膜组上调幅度明显大于聚砜膜组。铜仿膜组透析开始 15 min后，单核细胞表面CD11b较透前上升，差异有显著性 (P<0.05)。以上改变在透析结束时基本恢复到透前水平。聚砜膜组透析过程中单核细胞表面CD11b无显著变化(P>0.05)。
3.CD11c在血透中的变化: 透析前粒细胞、单核细胞表面CD11c 的基础值与非透析组和正常对照组差异无显著性(P>0.05) 。铜仿膜组透析开始 15 min后，两种细胞表面CD11c较透前上升，差异有显著性 (P<0.05)，透析结束时基本恢复到透前水平。聚砜膜组透析过程中，两种细胞表面CD11c 表达与透前相比差异无显著性 (P>0.05)。
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讨论 黏附分子表达增加是白细胞激活的标志之一。白细胞表面的黏附分子CD11a、CD11b 、CD11c参与了白细胞黏附、迁移、趋化和吞噬等作用。白细胞黏附分子表达增加可引起白细胞黏附于内皮细胞，聚集、沉积于肺毛细血管床引起一过性白细胞减少症。Kaplow等人报道了用铜仿膜透析15～30 min时白细胞数量下降达最低点。Arnaut证明了透析中白细胞下降与透析过程中补体水平增加及黏附分子表达增加密切相关。他们还发现透析60 min后白细胞恢复到透前水平。这说明白细胞对内皮细胞的黏附是短暂的，白细胞从肺血管床又回到了血循环中，也就是说白细胞黏附分子如CD11b、 CD11c等虽表达增加，但其黏附能力是下降的。 本研究也证实了透析开始15 min时白细胞黏附分子CD11b、CD11c表达上调。Himmerfarb等[2]用“高CD11b，低L-Selectin”白细胞进行黏附功能测定时，也发现它们与人脐内皮细胞黏附能力大大下降。本实验研究证实铜仿膜较聚砜膜对白细胞表面黏附分子影响大，这也从另一侧面反映了铜仿膜生物相容性差。
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白细胞表面黏附分子水平的改变影响了白细胞与内皮细胞的黏附能力，而白细胞与内皮细胞的黏附是机体发挥非特异性免疫机制过程中不可缺少的关键步骤。粒细胞、单核细胞表面黏附分子水平CD11b、 CD11c 的改变虽在单次透析过程结束时基本恢复到透前水平，但透析是一个反复循环的过程，因此透析患者的白细胞可能始终处于非正常状态，其黏附吞噬病原体的能力可能都低于正常白细胞，导致机体免疫能力下降，增加了感染的机会[3]，而生物相容性较差的铜仿膜的影响则更大些。
参考文献
1，Tielemans CL, Delville JP, Husson CP, et al. Adhesion molecules and leukocyte common antigen on monocytes and granulocytes during hemodialysis. Clin Nephrol, 1993, 39: 158-165.
2，Himmerfarb J, Zaoui P, Hakim R, et al. Modulation of granulocyte LAM-1 and MAC-1 during dialysis--a prospective,randomized controlled trail. Kidney Int, 1992, 41:388-395.
3，钱家麒，徐筱琪，石学耕,等. 血液透析对白细胞粘附分子表达调节的影响. 中华肾脏病杂志, 1999,15: 5-9.
(收稿日期：1999-12-06), http://www.100md.com
单位：孙倩美 彭立人 张新(100020 北京红十字朝阳医院肾内科)；刘惠兰(北京复兴医院肾内科)
关键词：
中华内科杂志000920 慢性肾功能衰竭血透患者存在免疫功能紊乱。以往的研究表明，血透患者的免疫功能紊乱主要表现为T细胞介导的特异性细胞免疫功能低下。近年来国外一些专家提出血透患者的白细胞功能也受到损害，特别是血透过程对白细胞表面黏附分子的表达有一定影响，且这种影响与透析膜的生物相容性有关[1]。我们通过观察在使用不同透析膜过程中白细胞表面黏附分子CD11a、CD11b、CD11c的变化规律，探讨它们对机体免疫功能的影响。
一、对象与方法
1.对象: 选择20例维持性血透患者(男11例,女9例)，平均年龄(52±13.5)岁(36～78岁)，并将患者随机分为两组，分别应用铜仿膜(10例)和聚砜膜(10例)透析，透析膜面积均为1.3 m2。每组患者应用指定透析膜4周以上， 留取血标本时透析器均首次使用。另选10例慢性肾功能衰竭未透析患者(男5例，女5例)，平均年龄(50.6±11.8)岁(38～74岁)，平均血肌酐[(646.2±227.6) μmol/L]为未透析对照组。再选10例性别、年龄相当的健康志愿者(男5例，女5例)为正常对照组，平均年龄(51.4±8.42)岁(28～68岁)。
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2.方法: 两组血透患者均于透前、透析15 min、透后各取静脉血2 ml(EDTA抗凝)；慢型肾衰未透析组、正常对照组于清晨空腹取肘静脉血2 ml(EDTA抗凝)。
采用流式细胞分析技术分析黏附分子CD11a、CD11b、 CD11c的表达水平。取100 μl抗凝血，分别加入FITC标记的鼠抗人CD11a、CD11b及PE标记的鼠抗人CD11c单克隆抗体(美国Pharmingen公司产品)各20 μl，室温孵育30～45 min，加入2 ml溶血素，离心去上清，加PBS 4 ml(pH 7.4)混匀，离心，6 h内上机检测。检测时每个样本分析10 000个细胞。使用FITC标记的同型IgG1a、PE标记的同型IgG1a为阴性对照。CD11a、CD11b、CD11 c表达水平用平均荧光强度表示。
3.统计方法: 所有数据均以均数±标准差表示，采用单因素方差分析，Q检验进行数据处理，数据处理应用SPSS 统计软件包进行。
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二、结果
1.CD11a在血透中的变化: 透析前、透析过程中粒细胞、单核细胞表面CD11a 的表达与非透析组和正常对照组间差异无显著性(P>0.05)。
2.CD11b在血透中的变化: 透析前粒细胞、单核细胞表面CD11b 的基础值与非透析组和正常对照组间差异无显著性(P>0.05)。两种膜透析开始 15 min后，粒细胞表面CD11b较透前上升，差异有显著性 (P<0.05)，铜仿膜组上调幅度明显大于聚砜膜组。铜仿膜组透析开始 15 min后，单核细胞表面CD11b较透前上升，差异有显著性 (P<0.05)。以上改变在透析结束时基本恢复到透前水平。聚砜膜组透析过程中单核细胞表面CD11b无显著变化(P>0.05)。
3.CD11c在血透中的变化: 透析前粒细胞、单核细胞表面CD11c 的基础值与非透析组和正常对照组差异无显著性(P>0.05) 。铜仿膜组透析开始 15 min后，两种细胞表面CD11c较透前上升，差异有显著性 (P<0.05)，透析结束时基本恢复到透前水平。聚砜膜组透析过程中，两种细胞表面CD11c 表达与透前相比差异无显著性 (P>0.05)。
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讨论 黏附分子表达增加是白细胞激活的标志之一。白细胞表面的黏附分子CD11a、CD11b 、CD11c参与了白细胞黏附、迁移、趋化和吞噬等作用。白细胞黏附分子表达增加可引起白细胞黏附于内皮细胞，聚集、沉积于肺毛细血管床引起一过性白细胞减少症。Kaplow等人报道了用铜仿膜透析15～30 min时白细胞数量下降达最低点。Arnaut证明了透析中白细胞下降与透析过程中补体水平增加及黏附分子表达增加密切相关。他们还发现透析60 min后白细胞恢复到透前水平。这说明白细胞对内皮细胞的黏附是短暂的，白细胞从肺血管床又回到了血循环中，也就是说白细胞黏附分子如CD11b、 CD11c等虽表达增加，但其黏附能力是下降的。 本研究也证实了透析开始15 min时白细胞黏附分子CD11b、CD11c表达上调。Himmerfarb等[2]用“高CD11b，低L-Selectin”白细胞进行黏附功能测定时，也发现它们与人脐内皮细胞黏附能力大大下降。本实验研究证实铜仿膜较聚砜膜对白细胞表面黏附分子影响大，这也从另一侧面反映了铜仿膜生物相容性差。
, 百拇医药
白细胞表面黏附分子水平的改变影响了白细胞与内皮细胞的黏附能力，而白细胞与内皮细胞的黏附是机体发挥非特异性免疫机制过程中不可缺少的关键步骤。粒细胞、单核细胞表面黏附分子水平CD11b、 CD11c 的改变虽在单次透析过程结束时基本恢复到透前水平，但透析是一个反复循环的过程，因此透析患者的白细胞可能始终处于非正常状态，其黏附吞噬病原体的能力可能都低于正常白细胞，导致机体免疫能力下降，增加了感染的机会[3]，而生物相容性较差的铜仿膜的影响则更大些。
参考文献
1，Tielemans CL, Delville JP, Husson CP, et al. Adhesion molecules and leukocyte common antigen on monocytes and granulocytes during hemodialysis. Clin Nephrol, 1993, 39: 158-165.
2，Himmerfarb J, Zaoui P, Hakim R, et al. Modulation of granulocyte LAM-1 and MAC-1 during dialysis--a prospective,randomized controlled trail. Kidney Int, 1992, 41:388-395.
3，钱家麒，徐筱琪，石学耕,等. 血液透析对白细胞粘附分子表达调节的影响. 中华肾脏病杂志, 1999,15: 5-9.
(收稿日期：1999-12-06), http://www.100md.com