正常及炎症牙髓组织中IL-6的表达
作者：岳 玲 肖明振 牛忠英 侯本祥
单位：西安第四军医大学口腔医学院 710032
关键词：IL-6；牙髓组织；牙髓炎；免疫组织化学
实用口腔医学杂志990206 〔摘要〕 目的：通过检测IL-6在人牙髓组织中的表达，探讨IL-6与正常及炎症牙髓组织的关系。方法：采用免疫组化(ABC)法，检测正常组8个牙及炎症牙髓组10个牙中IL-6的表达。结果：正常人牙髓组织IL-6染色为阴性，炎症牙髓组织中IL-6染色均呈阳性，主要表达细胞为单核-巨噬细胞，少量血管内皮细胞和成纤维细胞。结论：IL-6与牙髓组织的炎症反应密切相关，是重要的炎症介质之一。
Expression of IL-6 in normal and inflammatory pulpal tissue
, http://www.100md.com
Yue Ling,Xiao Mingzhen,Niu Zhongying.
Stomatological College,Fourth Military Medical University, Xi'an 710032
〔Abstract〕 Objective: To study the relationship between IL-6 expression and human pulpal tissue inflammation.Methods:IL-6 expression in 8 samples of normal and 10 of inflammatory pulpal tissue was examined using immunohistochemical techniques.Results:Negative staining of IL-6 was found in all the cases of normal pulpal tissue while positive in all inflammatory pulp.IL-6 expression was found mainly in monocytes-macrophage and in a few vascular endothelial cells and fibroblasts.Conclusion:IL-6 may be an important medium factor in pulpitis.
, 百拇医药
Key words Interleukin-6;Dental pulp;Pulpitis;Immunohistochemistry
IL-6与炎症反应有着密切关系，在牙周炎、牙龈炎中的作用已经肯定，但有关牙髓炎症中的IL-6表达和分布特征不明确。本组实验采用鼠抗人IL-6单克隆抗体，对人炎症牙髓中IL-6的表达和分布进行研究，探讨IL-6与牙髓炎性病变的关系。
1 材料和方法
1.1 主要试剂
鼠抗人IL-6单克隆抗体(第四军医大学免疫学教研室提供)
ABC试剂盒(Sigma Co, USA)
1.2 实验标本
, 百拇医药 研究对象为西安秦都口腔医院口腔颌面外科门诊就诊患者，年龄在18～35 岁之间。取因治疗需要而拔除的健康第三磨牙为正常组，临床诊断为慢性牙髓炎需拔除的第三磨牙归为炎症组，并通过组织学切片，HE染色作为分组的病理组织学依据。正常组8个牙，炎症组10个牙。
1.3 切片制作
新鲜离体牙牙髓置Bouin液中固定4 h，梯度乙醇脱水，石腊包埋，制作厚4 μm切片。
1.4 免疫组化染色
石蜡切片经乙醇下降至水，用体积分数为30%的H2 O2 甲醇溶液去除内源性过氧化物酶，再以正常血清封闭。经0.01 mol/L PBS漂洗后，滴加第一抗体(鼠抗人IL-6)，4 ℃下作用48 h后漂洗，第二抗体为生物素标记兔抗素IgG，37 ℃作用1 h，漂洗后滴加ABC复合物，室温下40 min，用含体积分数为0.01%H2O2的DAB溶液显色，常规脱水封片，光镜观察。阳性对照为正常SD大鼠肝组织切片与牙髓切片同步染色。阴性对照用正常血清稀释液替代一抗，其余与上述步骤相同。
, 百拇医药
2 结 果
8例正常牙髓组织IL-6染色阴性，10例炎症牙髓组织IL-6染色均为阳性，主要阳性表达细胞为单核—巨噬细胞、成纤维细胞和少量血管内皮细胞(见图)。
图1 ABC法染色，炎症人牙髓组织
图2 ABC法染色，正常人牙髓组织中IL-6染色呈阳性(40×10)
中IL-6组染色呈阴性(40×10)
3 讨 论
IL-6是多种细胞分泌，能调节细胞功能的小分子多肽。近年来的研究表明，IL-6是参与炎症反应和免疫应答的重要介质，在炎症病变中的作用已受到人们普遍关注。Matsuki〔1〕采用原位杂交的方法，对正常和炎症性牙龈组织进行IL-6 mRNA的检测，结果表明：IL-6 mRNA可在炎症牙龈组织中的T细胞、B细胞、内皮细胞、成纤维细胞等多种细胞表达，而正常牙龈组织较少。 Takahashi〔2〕 报道不仅炎症牙龈组织标本可见IL-6 mRNA表达，正常牙龈组织也有1/2表达，甚至更多。 在对IL-6蛋白质水平表达的免疫组化研究中，发现IL-6仅在炎症区域出现且主要定位于单核-巨噬细胞、 成纤维细胞、血管内皮细胞，而正常牙龈组织呈阴性。Bartold〔3〕 还对培养的人牙龈成纤维细胞进行免疫组化染色，发现IL-6定位在细胞膜表面和胞浆内。本组用鼠抗人IL-6单克隆抗体通过免疫组化的方法，检测炎症和正常牙髓组织中IL-6的表达，其结果与以上实验基本一致。正常牙髓组织中无IL-6表达，炎症牙髓组织的单核-巨噬细胞、 成纤维细胞和少量血管内皮细胞IL-6染色阳性。从组织学上证明了牙髓炎性渗出液中IL-6的来源。
, http://www.100md.com
正常和炎症牙龈组织中IL-6mRNA的表达表现在许多活化或非活化的细胞上，包括成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、T细胞、B细胞〔4～7〕 等，但只有在炎症状态下，炎症介质的存在才调节分泌IL-6蛋白〔8〕 。炎症组织和正常组织的区别主要在于炎症组织中含有大量的炎细胞和各种炎性介质，牙髓组织中IL-6mRNA的细胞表达与炎症状态下IL-6蛋白的分泌是否也有类似于牙龈的情况，有待进一步研究。但推测牙髓组织中的IL-6，主要是由炎细胞或组织细胞在各种炎性介质诱导下所产生，正常牙髓细胞中无炎细胞浸润，又缺乏炎性介质，因此，IL-6染色阴性。
综上所述，IL-6是牙髓、尖周组织参与炎症反应的主要细胞因子之一，通过单核-巨噬细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等分泌，IL-6在局部组织中参与体液免疫和细胞免疫，发挥其多种生物学效应。
本研究为国家自然科学基金(39470752)资助课题
, http://www.100md.com
参考文献
1 Matsuki Y, Yamamoto T, Hara k. Detection of inflammation cytokine messenger RNA (mRNA)-expressing cells in human inflamed gingiva by combined in situ hybridization and immunohistochemistry. Immunology, 1992,76:42
2 Takahashi K, Takashiba S, Nagai A, et al. Assessment of interleukin-6 in the pathogenesis of periodontal disease. J Periodontol, 1994,65:147
3 Bartold PM, Haynes DR.Interleukin-6 production by human gingival fibroblasts. J Periodont Res, 1991,26:339
, 百拇医药
4 Yamazaki K, Ikarashi F, Aoyagi T, et al.Direct and indirect effects of porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide on interleukin-6 production by human gingival fibroblasts. Oral Microbiol Immunol, 1992,7: 218
5 Kivnbauer R,Koch A,Schwartz T,et al.IFN-β,B cell differentiation factor 2, or hybridoma growth factor (IL-6)is expressed and released by human epidermal cells and epidermoid carcinoma cell lines. J Immunol, 1989,142:1922
, http://www.100md.com
6 Shalaby MR, Waage A, Espevik T. Cytokine regulation of interleukin 6 production by human endothelial cells. Cell Immunol, 1989,121:372
7 Wong GC, Clark SC. Multiple actions of interleukin 6 within a cytokine network. Immunol Today, 1988,9:137
8 Yamazaki K, Nakajima T, Gemmell E, et al. IL-4 and IL-6 producing cells in human periodontal disease tissue. J Oral Pathol Med,1994,23:347
(收稿：1997-11-13修回：1998-09-02), http://www.100md.com
单位：西安第四军医大学口腔医学院 710032
关键词：IL-6；牙髓组织；牙髓炎；免疫组织化学
实用口腔医学杂志990206 〔摘要〕 目的：通过检测IL-6在人牙髓组织中的表达，探讨IL-6与正常及炎症牙髓组织的关系。方法：采用免疫组化(ABC)法，检测正常组8个牙及炎症牙髓组10个牙中IL-6的表达。结果：正常人牙髓组织IL-6染色为阴性，炎症牙髓组织中IL-6染色均呈阳性，主要表达细胞为单核-巨噬细胞，少量血管内皮细胞和成纤维细胞。结论：IL-6与牙髓组织的炎症反应密切相关，是重要的炎症介质之一。
Expression of IL-6 in normal and inflammatory pulpal tissue
, http://www.100md.com
Yue Ling,Xiao Mingzhen,Niu Zhongying.
Stomatological College,Fourth Military Medical University, Xi'an 710032
〔Abstract〕 Objective: To study the relationship between IL-6 expression and human pulpal tissue inflammation.Methods:IL-6 expression in 8 samples of normal and 10 of inflammatory pulpal tissue was examined using immunohistochemical techniques.Results:Negative staining of IL-6 was found in all the cases of normal pulpal tissue while positive in all inflammatory pulp.IL-6 expression was found mainly in monocytes-macrophage and in a few vascular endothelial cells and fibroblasts.Conclusion:IL-6 may be an important medium factor in pulpitis.
, 百拇医药
Key words Interleukin-6;Dental pulp;Pulpitis;Immunohistochemistry
IL-6与炎症反应有着密切关系，在牙周炎、牙龈炎中的作用已经肯定，但有关牙髓炎症中的IL-6表达和分布特征不明确。本组实验采用鼠抗人IL-6单克隆抗体，对人炎症牙髓中IL-6的表达和分布进行研究，探讨IL-6与牙髓炎性病变的关系。
1 材料和方法
1.1 主要试剂
鼠抗人IL-6单克隆抗体(第四军医大学免疫学教研室提供)
ABC试剂盒(Sigma Co, USA)
1.2 实验标本
, 百拇医药 研究对象为西安秦都口腔医院口腔颌面外科门诊就诊患者，年龄在18～35 岁之间。取因治疗需要而拔除的健康第三磨牙为正常组，临床诊断为慢性牙髓炎需拔除的第三磨牙归为炎症组，并通过组织学切片，HE染色作为分组的病理组织学依据。正常组8个牙，炎症组10个牙。
1.3 切片制作
新鲜离体牙牙髓置Bouin液中固定4 h，梯度乙醇脱水，石腊包埋，制作厚4 μm切片。
1.4 免疫组化染色
石蜡切片经乙醇下降至水，用体积分数为30%的H2 O2 甲醇溶液去除内源性过氧化物酶，再以正常血清封闭。经0.01 mol/L PBS漂洗后，滴加第一抗体(鼠抗人IL-6)，4 ℃下作用48 h后漂洗，第二抗体为生物素标记兔抗素IgG，37 ℃作用1 h，漂洗后滴加ABC复合物，室温下40 min，用含体积分数为0.01%H2O2的DAB溶液显色，常规脱水封片，光镜观察。阳性对照为正常SD大鼠肝组织切片与牙髓切片同步染色。阴性对照用正常血清稀释液替代一抗，其余与上述步骤相同。
, 百拇医药
2 结 果
8例正常牙髓组织IL-6染色阴性，10例炎症牙髓组织IL-6染色均为阳性，主要阳性表达细胞为单核—巨噬细胞、成纤维细胞和少量血管内皮细胞(见图)。
图1 ABC法染色，炎症人牙髓组织
图2 ABC法染色，正常人牙髓组织中IL-6染色呈阳性(40×10)
中IL-6组染色呈阴性(40×10)
3 讨 论
IL-6是多种细胞分泌，能调节细胞功能的小分子多肽。近年来的研究表明，IL-6是参与炎症反应和免疫应答的重要介质，在炎症病变中的作用已受到人们普遍关注。Matsuki〔1〕采用原位杂交的方法，对正常和炎症性牙龈组织进行IL-6 mRNA的检测，结果表明：IL-6 mRNA可在炎症牙龈组织中的T细胞、B细胞、内皮细胞、成纤维细胞等多种细胞表达，而正常牙龈组织较少。 Takahashi〔2〕 报道不仅炎症牙龈组织标本可见IL-6 mRNA表达，正常牙龈组织也有1/2表达，甚至更多。 在对IL-6蛋白质水平表达的免疫组化研究中，发现IL-6仅在炎症区域出现且主要定位于单核-巨噬细胞、 成纤维细胞、血管内皮细胞，而正常牙龈组织呈阴性。Bartold〔3〕 还对培养的人牙龈成纤维细胞进行免疫组化染色，发现IL-6定位在细胞膜表面和胞浆内。本组用鼠抗人IL-6单克隆抗体通过免疫组化的方法，检测炎症和正常牙髓组织中IL-6的表达，其结果与以上实验基本一致。正常牙髓组织中无IL-6表达，炎症牙髓组织的单核-巨噬细胞、 成纤维细胞和少量血管内皮细胞IL-6染色阳性。从组织学上证明了牙髓炎性渗出液中IL-6的来源。
, http://www.100md.com
正常和炎症牙龈组织中IL-6mRNA的表达表现在许多活化或非活化的细胞上，包括成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、T细胞、B细胞〔4～7〕 等，但只有在炎症状态下，炎症介质的存在才调节分泌IL-6蛋白〔8〕 。炎症组织和正常组织的区别主要在于炎症组织中含有大量的炎细胞和各种炎性介质，牙髓组织中IL-6mRNA的细胞表达与炎症状态下IL-6蛋白的分泌是否也有类似于牙龈的情况，有待进一步研究。但推测牙髓组织中的IL-6，主要是由炎细胞或组织细胞在各种炎性介质诱导下所产生，正常牙髓细胞中无炎细胞浸润，又缺乏炎性介质，因此，IL-6染色阴性。
综上所述，IL-6是牙髓、尖周组织参与炎症反应的主要细胞因子之一，通过单核-巨噬细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等分泌，IL-6在局部组织中参与体液免疫和细胞免疫，发挥其多种生物学效应。
本研究为国家自然科学基金(39470752)资助课题
, http://www.100md.com
参考文献
1 Matsuki Y, Yamamoto T, Hara k. Detection of inflammation cytokine messenger RNA (mRNA)-expressing cells in human inflamed gingiva by combined in situ hybridization and immunohistochemistry. Immunology, 1992,76:42
2 Takahashi K, Takashiba S, Nagai A, et al. Assessment of interleukin-6 in the pathogenesis of periodontal disease. J Periodontol, 1994,65:147
3 Bartold PM, Haynes DR.Interleukin-6 production by human gingival fibroblasts. J Periodont Res, 1991,26:339
, 百拇医药
4 Yamazaki K, Ikarashi F, Aoyagi T, et al.Direct and indirect effects of porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide on interleukin-6 production by human gingival fibroblasts. Oral Microbiol Immunol, 1992,7: 218
5 Kivnbauer R,Koch A,Schwartz T,et al.IFN-β,B cell differentiation factor 2, or hybridoma growth factor (IL-6)is expressed and released by human epidermal cells and epidermoid carcinoma cell lines. J Immunol, 1989,142:1922
, http://www.100md.com
6 Shalaby MR, Waage A, Espevik T. Cytokine regulation of interleukin 6 production by human endothelial cells. Cell Immunol, 1989,121:372
7 Wong GC, Clark SC. Multiple actions of interleukin 6 within a cytokine network. Immunol Today, 1988,9:137
8 Yamazaki K, Nakajima T, Gemmell E, et al. IL-4 and IL-6 producing cells in human periodontal disease tissue. J Oral Pathol Med,1994,23:347
(收稿：1997-11-13修回：1998-09-02), http://www.100md.com