内皮细胞与三叉神经脱髓鞘的关系探讨
作者：叶廷军 刘会敏 陈泳莲 姜晓钟
单位：第二军医大学长征医院病理科 (叶廷军 刘会敏 陈泳莲 200003)；第二军医大学长征医院口腔科 (姜晓钟)
关键词：神经组织；脱髓鞘疾病；血管内皮；免疫组织化学
实用口腔医学杂志990511 〔摘要〕 目的：探讨血管内皮细胞与三叉神经脱髓鞘病变的关系，为临床解释脱髓鞘病因发生提供依据。方法：分别选用描写、轻度、中度、脱髓鞘组进行免疫组化表达，对内皮细胞、淋巴细胞在病变处分布变化进行定量分析。结果：CD31、F8的表达证实病变处血管内皮细胞突起和塌陷。CD3、CD45RA表达病变均有淋巴细胞参与。描写、轻度组与中度、脱髓鞘组的血管内皮细胞与淋巴细胞计数相比较，差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论：血管内皮细胞在脱髓鞘病变中，可激活淋巴细胞，也可输送淋巴细胞参与免疫应答。因此，阻止内皮细胞的病变具有重要意义。
, http://www.100md.com
The relationship between vascular endothelial cells and trigeminal demyelination
Ye Tingjun,Liu Huimin,Chen Yonglian,et al.Department of Pathology,Changzheng Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200003
〔Abstract〕Objection:To study the reason of trigeminal demyelination.Methods:The lesion were divided into four groups including describing, light,moderate and demyelination group.The changes of lymphocytes and vascular endothelium in local area of demyelination were observed with quantitative analysis.Results:Protrusion or sink of vascular endothelium with CD31and F8 expression were observed.Lymphocytes with CD3 and CD45RAexpression were also found in the lesions. There was significant difference of the findings between the group of describing and light lesion (P<0.05),and the group of moderate and demyelination (P<0.01).Conclusion:Vascular endothelium in demyelination may activate lymphocytes and transfer lymphocytes to the area of lesion involving immune reaction.
, 百拇医药
Key words Nerve tissue;Demyelinating diseases;Vascular endothelium;Immunohistochemistry
内皮细胞(endothelial cells,EC)具有多种功能，它可分泌多种细胞因子并参与免疫应答。近几年来，对于它在三叉神经脱髓鞘中的免疫功用，已越来越引起人们的关注〔1，2〕，对于EC释放细胞因子破坏髓鞘的过程目前还没有明确结论。EC在脱髓鞘的免疫反应中的作用是肯定的。本文就EC在脱髓过程中的一些免疫病理现象作一探讨，并对其它变化加以讨论。
1 材料和方法
1.1 材料
50例三叉神经脱髓鞘标本，为本院1997年入院治疗的三叉神经痛切除术病例，其中男性32例，女性18例。年龄45～65岁，平均54.5岁。标本经体积分数为10%福尔马林固定24 h。取材沿神经纵轴方向，长度为1 cm的神经组织2～3条，取横切面4～6个。
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1.2 病理资料
50例三叉神经脱髓鞘病变病例均经常规石蜡切片，HE染色。以病理诊断为依据(其中不能明确结论，以描写形式诊断组11例，轻度水肿伴轻度脱髓鞘病变组14例；轻度炎症伴中度脱髓鞘病变组12例，脱髓鞘病变组13例)。
1.3 试剂和染色
试剂CD31、CD45RA、CD3、第八因子(factor Ⅷ related antigen,F8)、生物素化兔抗鼠、ABC复合物(均为Dako公司产品)。染色采用免疫酶标ABC法。分别用淋巴结作为阳性对照和阴性对照。
1.4 判断与分析
在40倍显微镜下观察被染色细胞及血管着色的阳性程度，细胞浆着色呈浅棕色者为(+)；棕色者阳性(++)；深棕色者(+++)；与背景不能分辨者(—)。对每例病例的病变处随机观察20个视野，血管壁的内皮细胞及淋巴细胞浸润情况分别计数，累计积分(计数标准如下：以血管内皮细胞突起或塌陷，CD31、F8两者染色均为阳性为准；淋巴细胞浸润血管壁或镶嵌在内皮细胞CD3、CD45RA染色阳性为准)。
, 百拇医药
1.5 统计学处理
采用多组秩t检验和方差分析。
2 结 果
2.1 CD45RA、CD3和CD31、F8在病变的三叉神经组织中分布
CD45RA、CD3所标记的淋巴细胞可广泛分布在病变的神经组织内，其特点为：(1)沿血管壁分布及浸润(图 1)；(2) 神经纤维束间分布；(3)神经外膜分布。CD31、F8所标记血管EC均为棕色，可见病变的血管EC呈肿胀，部分EC突起、塌陷及淋巴细胞浸润(图2)，炎症区域的淋巴细胞计数增加，EC的表达增强。
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图1 淋巴细胞沿血管壁分布、浸润。CD3表达淋巴细胞呈阳性 ×40 ABC法
图2 淋巴细胞镶嵌在塌陷的内皮细胞间隙。F8表达内皮
细胞呈阳性 ×40 ABC法
2.2 各组间血管EC病变和淋巴细胞计数
各组间的变化不一(表1)。统计结果表明，描写组、轻度组与中度组、脱髓鞘组的病变EC和淋巴细胞计数相比较，差异显著(P<0.05或P<0.01)。轻度组的病变EC与描写组相比较，有显著差异(P<0.05或P<0.01)。描写组与轻度组的淋巴细胞计数相比，有显著差异(P<0.05或P<0.01)。
表1 各病变组的EC和淋巴细胞计数(%，
±s) 分组
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例数
EC数
淋巴细胞数
描写
11
2.8±0.3*
4.8±0.8*
轻度
14
3.4±0.7*
4.0±0.5*
中度
, 百拇医药
12
2.2±0.3
3.1±0.2
脱髓鞘
13
2.3±0.7
3.2±0.5
注：*与中度组、脱髓鞘组比较，3 讨 论
EC具有多种特性，正常情况下的EC与毛细血管形成一种不间断的封闭带，可阻止半径大于2.5 nm的分子通过。炎症发生时，EC与毛细血管形成的间隙扩大，较大颗粒(如白细胞等)即可通过。在脱髓鞘病变的过程中，当EC受到淋巴细胞刺激时，EC激活突起，增生肿胀并分泌一系列细胞因子，如白介素、细胞趋化因子等。活跃的EC其CD31、F8表达增强，细胞间隙扩大，引诱或粘附淋巴细胞穿越毛细血管基底膜进入组织间隙〔3，4〕，引发神经组织的一系列变化及免疫应答。在本实验中，炎症水肿区的EC常常是CD31和F8表达增强并伴有淋巴细胞浸润，浸润的淋巴细胞是以T、B细胞为主的，其CD3、CD45RA的表达的阳性结果均证实这一点。EC的突起或塌陷、淋巴细胞粘附使免疫反应增强，加重和加速脱髓鞘病变。在已形成病变区域，淋巴细胞较少，EC的突起数量明显少于病变初期。而在早期病变时，淋巴细胞往往多于病变中期，EC的突起或塌陷则在病变即将形成时出现。结果表明，炎症的形成和加重与EC的起动有直接关系，而病变形成后，EC的减少可能是处于“休止”状态，一旦有新的刺激，就可出现反应，这种反复的刺激，使得病变不断加深，引发脱髓鞘发生、发展〔5，6〕。在脱髓鞘过程中，EC和淋巴细胞具有双重身分，淋巴细胞可激活EC，EC也可粘附淋巴细胞参与免疫反应，使病变加重。
, 百拇医药
本实验还证实：描写、轻度组的EC和淋巴细胞计数均高于中度、脱髓鞘组，统计结果相比较，有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结果表明，病变早期EC和淋巴细胞均呈增高趋势，而病变中期及脱髓鞘形成后，EC和淋巴细胞就出现相对稳定，此时的临床症状表现出疼痛是加重的，这是由于神经传导受阻，使局部电位升高而致〔3〕。
4 结 论
EC具有多种功能。EC在脱髓鞘病变过程中既可起激活淋巴细胞的作用，又能起传递作用。EC激活淋巴细胞参与免疫反应，是病变发生发展过程中的重要因素。因此，阻止EC的激活和血管的病变可缓解脱髓鞘病变的发展。
参考文献
1秦新月.细胞因子在MS发病机制中的作用.国外医学内科学分册,1997,24(10):245
, 百拇医药 2 Duchini A.The role of central nervous system endothelial cells activation in the pathogenesis of hepatic encephalopathy.Med Hypotheses,1996,46(3):239
3 孙树岩,邱林莉.三叉神经痛病因病理机制研究进展.国外医学耳鼻咽喉科学分册，1993,17(2)：85
4 Ford AL,Goodsall AL,Hickey WF,et al.Normal adult ramified mieroglia separated from other central nervous system macrophages by flow cytometric sorting,phenotypic diferences defined and direct ex vivo antigen presention to myelin basic protein reactive CD4+T cells compared.J Immunol,1995,154(9):4309
5 沈雪莉.格林-巴利综合征与髓鞘抗体.国外医学神经外科分册,1994，21(3)：141
6 李光勤.脑缺血后白细胞浸润的研究进展.国外医学内科分册,1997,24(10):421
(收稿：1998-03-31 修回：1999-03-02), 百拇医药
单位：第二军医大学长征医院病理科 (叶廷军 刘会敏 陈泳莲 200003)；第二军医大学长征医院口腔科 (姜晓钟)
关键词：神经组织；脱髓鞘疾病；血管内皮；免疫组织化学
实用口腔医学杂志990511 〔摘要〕 目的：探讨血管内皮细胞与三叉神经脱髓鞘病变的关系，为临床解释脱髓鞘病因发生提供依据。方法：分别选用描写、轻度、中度、脱髓鞘组进行免疫组化表达，对内皮细胞、淋巴细胞在病变处分布变化进行定量分析。结果：CD31、F8的表达证实病变处血管内皮细胞突起和塌陷。CD3、CD45RA表达病变均有淋巴细胞参与。描写、轻度组与中度、脱髓鞘组的血管内皮细胞与淋巴细胞计数相比较，差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论：血管内皮细胞在脱髓鞘病变中，可激活淋巴细胞，也可输送淋巴细胞参与免疫应答。因此，阻止内皮细胞的病变具有重要意义。
, http://www.100md.com
The relationship between vascular endothelial cells and trigeminal demyelination
Ye Tingjun,Liu Huimin,Chen Yonglian,et al.Department of Pathology,Changzheng Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200003
〔Abstract〕Objection:To study the reason of trigeminal demyelination.Methods:The lesion were divided into four groups including describing, light,moderate and demyelination group.The changes of lymphocytes and vascular endothelium in local area of demyelination were observed with quantitative analysis.Results:Protrusion or sink of vascular endothelium with CD31and F8 expression were observed.Lymphocytes with CD3 and CD45RAexpression were also found in the lesions. There was significant difference of the findings between the group of describing and light lesion (P<0.05),and the group of moderate and demyelination (P<0.01).Conclusion:Vascular endothelium in demyelination may activate lymphocytes and transfer lymphocytes to the area of lesion involving immune reaction.
, 百拇医药
Key words Nerve tissue;Demyelinating diseases;Vascular endothelium;Immunohistochemistry
内皮细胞(endothelial cells,EC)具有多种功能，它可分泌多种细胞因子并参与免疫应答。近几年来，对于它在三叉神经脱髓鞘中的免疫功用，已越来越引起人们的关注〔1，2〕，对于EC释放细胞因子破坏髓鞘的过程目前还没有明确结论。EC在脱髓鞘的免疫反应中的作用是肯定的。本文就EC在脱髓过程中的一些免疫病理现象作一探讨，并对其它变化加以讨论。
1 材料和方法
1.1 材料
50例三叉神经脱髓鞘标本，为本院1997年入院治疗的三叉神经痛切除术病例，其中男性32例，女性18例。年龄45～65岁，平均54.5岁。标本经体积分数为10%福尔马林固定24 h。取材沿神经纵轴方向，长度为1 cm的神经组织2～3条，取横切面4～6个。
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1.2 病理资料
50例三叉神经脱髓鞘病变病例均经常规石蜡切片，HE染色。以病理诊断为依据(其中不能明确结论，以描写形式诊断组11例，轻度水肿伴轻度脱髓鞘病变组14例；轻度炎症伴中度脱髓鞘病变组12例，脱髓鞘病变组13例)。
1.3 试剂和染色
试剂CD31、CD45RA、CD3、第八因子(factor Ⅷ related antigen,F8)、生物素化兔抗鼠、ABC复合物(均为Dako公司产品)。染色采用免疫酶标ABC法。分别用淋巴结作为阳性对照和阴性对照。
1.4 判断与分析
在40倍显微镜下观察被染色细胞及血管着色的阳性程度，细胞浆着色呈浅棕色者为(+)；棕色者阳性(++)；深棕色者(+++)；与背景不能分辨者(—)。对每例病例的病变处随机观察20个视野，血管壁的内皮细胞及淋巴细胞浸润情况分别计数，累计积分(计数标准如下：以血管内皮细胞突起或塌陷，CD31、F8两者染色均为阳性为准；淋巴细胞浸润血管壁或镶嵌在内皮细胞CD3、CD45RA染色阳性为准)。
, 百拇医药
1.5 统计学处理
采用多组秩t检验和方差分析。
2 结 果
2.1 CD45RA、CD3和CD31、F8在病变的三叉神经组织中分布
CD45RA、CD3所标记的淋巴细胞可广泛分布在病变的神经组织内，其特点为：(1)沿血管壁分布及浸润(图 1)；(2) 神经纤维束间分布；(3)神经外膜分布。CD31、F8所标记血管EC均为棕色，可见病变的血管EC呈肿胀，部分EC突起、塌陷及淋巴细胞浸润(图2)，炎症区域的淋巴细胞计数增加，EC的表达增强。
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图1 淋巴细胞沿血管壁分布、浸润。CD3表达淋巴细胞呈阳性 ×40 ABC法
图2 淋巴细胞镶嵌在塌陷的内皮细胞间隙。F8表达内皮
细胞呈阳性 ×40 ABC法
2.2 各组间血管EC病变和淋巴细胞计数
各组间的变化不一(表1)。统计结果表明，描写组、轻度组与中度组、脱髓鞘组的病变EC和淋巴细胞计数相比较，差异显著(P<0.05或P<0.01)。轻度组的病变EC与描写组相比较，有显著差异(P<0.05或P<0.01)。描写组与轻度组的淋巴细胞计数相比，有显著差异(P<0.05或P<0.01)。
表1 各病变组的EC和淋巴细胞计数(%，
±s) 分组, http://www.100md.com
例数
EC数
淋巴细胞数
描写
11
2.8±0.3*
4.8±0.8*
轻度
14
3.4±0.7*
4.0±0.5*
中度
, 百拇医药
12
2.2±0.3
3.1±0.2
脱髓鞘
13
2.3±0.7
3.2±0.5
注：*与中度组、脱髓鞘组比较，3 讨 论
EC具有多种特性，正常情况下的EC与毛细血管形成一种不间断的封闭带，可阻止半径大于2.5 nm的分子通过。炎症发生时，EC与毛细血管形成的间隙扩大，较大颗粒(如白细胞等)即可通过。在脱髓鞘病变的过程中，当EC受到淋巴细胞刺激时，EC激活突起，增生肿胀并分泌一系列细胞因子，如白介素、细胞趋化因子等。活跃的EC其CD31、F8表达增强，细胞间隙扩大，引诱或粘附淋巴细胞穿越毛细血管基底膜进入组织间隙〔3，4〕，引发神经组织的一系列变化及免疫应答。在本实验中，炎症水肿区的EC常常是CD31和F8表达增强并伴有淋巴细胞浸润，浸润的淋巴细胞是以T、B细胞为主的，其CD3、CD45RA的表达的阳性结果均证实这一点。EC的突起或塌陷、淋巴细胞粘附使免疫反应增强，加重和加速脱髓鞘病变。在已形成病变区域，淋巴细胞较少，EC的突起数量明显少于病变初期。而在早期病变时，淋巴细胞往往多于病变中期，EC的突起或塌陷则在病变即将形成时出现。结果表明，炎症的形成和加重与EC的起动有直接关系，而病变形成后，EC的减少可能是处于“休止”状态，一旦有新的刺激，就可出现反应，这种反复的刺激，使得病变不断加深，引发脱髓鞘发生、发展〔5，6〕。在脱髓鞘过程中，EC和淋巴细胞具有双重身分，淋巴细胞可激活EC，EC也可粘附淋巴细胞参与免疫反应，使病变加重。
, 百拇医药
本实验还证实：描写、轻度组的EC和淋巴细胞计数均高于中度、脱髓鞘组，统计结果相比较，有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结果表明，病变早期EC和淋巴细胞均呈增高趋势，而病变中期及脱髓鞘形成后，EC和淋巴细胞就出现相对稳定，此时的临床症状表现出疼痛是加重的，这是由于神经传导受阻，使局部电位升高而致〔3〕。
4 结 论
EC具有多种功能。EC在脱髓鞘病变过程中既可起激活淋巴细胞的作用，又能起传递作用。EC激活淋巴细胞参与免疫反应，是病变发生发展过程中的重要因素。因此，阻止EC的激活和血管的病变可缓解脱髓鞘病变的发展。
参考文献
1秦新月.细胞因子在MS发病机制中的作用.国外医学内科学分册,1997,24(10):245
, 百拇医药 2 Duchini A.The role of central nervous system endothelial cells activation in the pathogenesis of hepatic encephalopathy.Med Hypotheses,1996,46(3):239
3 孙树岩,邱林莉.三叉神经痛病因病理机制研究进展.国外医学耳鼻咽喉科学分册，1993,17(2)：85
4 Ford AL,Goodsall AL,Hickey WF,et al.Normal adult ramified mieroglia separated from other central nervous system macrophages by flow cytometric sorting,phenotypic diferences defined and direct ex vivo antigen presention to myelin basic protein reactive CD4+T cells compared.J Immunol,1995,154(9):4309
5 沈雪莉.格林-巴利综合征与髓鞘抗体.国外医学神经外科分册,1994，21(3)：141
6 李光勤.脑缺血后白细胞浸润的研究进展.国外医学内科分册,1997,24(10):421
(收稿：1998-03-31 修回：1999-03-02), 百拇医药