维生素E-β-环糊精包合物的制备研究
作者：陈 亮 何凤慈 蓝永烨
单位：(第三军医大学大坪医院野战外科研究所药剂科，重庆 400042)
关键词：维生素E；β-环糊精；包合物；正交设计
维生素E 摘要 目的：制备维生素E-β-环糊精包合物并考察其稳定性。方法：采用正交设计法制备。结果：经DSC鉴定，表明维生素E-β-环糊精确已形成包合物，包合物主、客分子比为1∶6，包合时间为15 min。结论：维生素E-β-环糊精包合物可明显提高维生素E的稳定性。
THE PREPARATION OF INCLUSION COMPOUND OF VITAMIN E
Chen Liang，He Fengci,Lan Yongye
(Department of Pharmacy,Institute of Surgery Research，Daping Hospital,The
, 百拇医药
Third Military Medical University,Chongqing 400042)
ABSTRACT OBJECTIVE：Studies on the preparation of inclusion compound of vitamin E and its stability.METHODS:Vitamin E inclusion compound was prepared by the orthogonal design.RESULTS:By DSC(differential scanning calorimetry),the prepared inclusion compound was identified as vitamin E inclusion compound with a vitamin E/β-CD ratio of 1∶6 and an inclusion time of 15 minutes.CONCLUSION:The stability of vitamin E in inclusion compound was significantly improved in comparison with the non-included one.
, 百拇医药
KEY WORDS Vitamine E;β-cyclodextrin;Inclusion compound;Orthogonal design
维生素E(VE)既用于治疗不育、习惯性流产及先兆性流产，又属于抗氧化剂，防止过氧化酶的不饱和键结合在细胞膜上，对割伤、烧伤、老年斑、色素沉着、皮肤干燥、防止紫外线损伤有重要的功效[1，2]。由于维生素E性质活跃，其制剂稳定性较差，为此，我们制备了维生素E-β-环糊精(β-CD)包合物，通过包合物收率、含量的比较，筛选出最佳工艺。
材料与方法
1 材料β-CD(上海化学试剂站，纯度95%)；VE(西南合成制药厂)；VE标准品(中国药品生物制品检定所)。JIM-50AB型立体胶体磨(沈阳国营新光机械厂)；DU-650紫外分光光度计(美国贝克曼公司)；DELTA差热分析仪(美国)。
, http://www.100md.com
2 包合工艺条件的考察
2.1 包合物的制备 取一定量的β-CD，加入5倍量水，置胶体磨中，并加入VE醇溶液，充分碾磨混合，机器内部残留部分用水少量多次清洗，洗液并入糊状物，减压抽滤并用无水乙醚洗涤3次，低温干燥，得白色粉体。
2.2 筛选指标 选择包合物的VE利用率为筛选包合工艺条件的指标，其计算公式如下：
2.3 标准曲线的制备 精密称取VE标准品45.3 mg,用无水乙醇溶解后定容于50 ml棕色容量瓶中，精密吸取1，2，3，4，5 ml分别置于25 ml棕色容量瓶中，用60%乙醇定容，以60%乙醇为空白，在284 nm处测定吸收度，浓度(C)与吸光度(A)之间线性关系良好：A=4.38×10-3C+0.0117，r=0.9999。由标准曲线计算包合物中VE含量。
, 百拇医药
2.4 回收率实验 精密称取VE标准品53.8 mg，用无水乙醇溶解并加入等量β-CD后用60%乙醇定容于50 ml棕色容量瓶中，待溶解后测定吸收度，算得回收率为(100.2±0.68)%(n=4)。
2.5 考察因素水平的选择 根据预实验，包合溶媒的量为β-CD量的5倍左右时，包合物料易于在胶体磨中循环，包合易于进行，胶体磨磨面间隙为5 μm，将电流强度调至1.5A处，选择包合工艺的考察因素和水平，见表1。
表1 包合工艺的考察因素和水平
水平
因素
时间(min)
溶媒含醇量(%)
, 百拇医药 VE∶β-CD
1
10
10
1∶6
2
15
15
1∶10
3
20
20
1∶14
, http://www.100md.com
结 果
1 正交试验
根据表1，选用L349正交表，按前固定的及正交表设计条件进行VE包合物的制备，所得包合物分别进行包合物VE利用率的测定，其结果见表2。
表2 L349正交表及实验结果
实验号
A
B
C
D
油利用率(%)
, http://www.100md.com
1
1
1
1
1
6.2
2
1
2
2
2
3.4
3
1
, http://www.100md.com
3
3
3
5.6
4
2
1
2
3
6.3
5
2
2
3
, http://www.100md.com
1
4.4
6
2
3
1
2
7.6
7
3
1
3
2
4.2
, 百拇医药
8
3
2
1
3
9.1
9
3
3
2
1
5.9
2 方差分析
以VE利用率作指标，对正交实验结果进行直观分析，由各因素极差R，确定因素主次及最佳水平，再以方差分析求得各因素的F值，最后确定A1B2C1为最佳包合工艺，即VE与β-CD配比为1∶6，包合时间为15 min，溶媒含醇量为15%，见表3。 表3 方差分析表
, http://www.100md.com
因素
S
自由度
方差
F比
P
A
32.93
2
16.46
15.1
>0.05
B
, 百拇医药 11.18
2
5.59
5.12
>0.05
C
44.55
3
22.28
20.44
>0.05
误差
2.18
, 百拇医药
2
1.09
总计
90.84
8
3 质量考察
3.1 外观 微黄色油状的VE用β-CD包合后，成白色粉状包合物。
3.2 薄层层析 化合物及VE分别配制成一定浓度的样品液及对照液，于经活化的硅胶GF254薄层板上点样，以苯-甲醇(20∶1)展开，于20℃展开，凉干后，于254 nm紫外光下检查，Rf均为0.8，说明VE包合后化学结构并无变化。
3.3 差热分析法 本实验对VE、β-CD、混合物及包合物4种物质进行差热分析，VE在280℃有一个吸热峰；β-CD在155℃，280℃和310℃各有一个吸热峰；混合物则为两组差热分析曲线图形的叠加，在135℃，280℃，320℃有一个吸收峰，表明混合物为机械混合；包合物完全形成一个新的热分析图，160℃有一个吸热峰，这表明VE与β-CD已形成包合物，从而构成新的物相。
, 百拇医药
3.4 稳定性考察 从温度、湿度和光线3因素对包合物及混合物进行稳定性考察，将包合物及混合物适量置80℃水浴锅内，以及2 000～4 000 lx的光照条件下，至规定时间，分别观察其外观并测定含量。结果见表4，说明VE制成包合物后稳定性明显改善。 表4 VE包合物及混合物稳定性考察的结果
样品
测定项目
(80℃)/(24h 48h 72h)
(光照(10d))/(2 000～4 000lx)
混合物
外观
白色
, http://www.100md.com
白色
白色
淡黄色
含量(%)
95.3
90.7
86.2
89.6
包合物
外观
白色
白色
白色
, 百拇医药
白色
含量(%)
100.0
99.2
98.5
99.3
讨论
以固体混合法制备VE与β-CD环糊精包合物，对比共沉淀法，具有操作时间短，回收率高等特点，对工业化大量制备包合物具有一定指导意义。
β-CD与VE的比例为制备包合物成功的关键，同时碾磨时间的长短也起了重要作用，我们以β-CD∶VE为6∶1，包合时间为15 min作为我们的最佳制备条件。
, 百拇医药
为获得较高的包合率，应在密闭系统中进行包合，防止乙醇散失。VE可先用适量乙醇稀释，使其在β-CD形成包合物后显示新的图形，说明包合物为一种新的物相，从而断定包合成功。
参考文献
[1] 孙伟张，曾仁杰，景利，等.维生素E-β-CD包合物的制备及对酪氨酸抑制率的测定.华西药学杂志，1994，9(1)∶30
[2] 王霖隐，陈冠芬，刘杰，等.高效液相色谱法测定维生素E胶丸含量.中国医院药学杂志，1994，14(11)∶503
(收稿：1997-11-07 修回：1998-10-21), 百拇医药
单位：(第三军医大学大坪医院野战外科研究所药剂科，重庆 400042)
关键词：维生素E；β-环糊精；包合物；正交设计
维生素E 摘要 目的：制备维生素E-β-环糊精包合物并考察其稳定性。方法：采用正交设计法制备。结果：经DSC鉴定，表明维生素E-β-环糊精确已形成包合物，包合物主、客分子比为1∶6，包合时间为15 min。结论：维生素E-β-环糊精包合物可明显提高维生素E的稳定性。
THE PREPARATION OF INCLUSION COMPOUND OF VITAMIN E
Chen Liang，He Fengci,Lan Yongye
(Department of Pharmacy,Institute of Surgery Research，Daping Hospital,The
, 百拇医药
Third Military Medical University,Chongqing 400042)
ABSTRACT OBJECTIVE：Studies on the preparation of inclusion compound of vitamin E and its stability.METHODS:Vitamin E inclusion compound was prepared by the orthogonal design.RESULTS:By DSC(differential scanning calorimetry),the prepared inclusion compound was identified as vitamin E inclusion compound with a vitamin E/β-CD ratio of 1∶6 and an inclusion time of 15 minutes.CONCLUSION:The stability of vitamin E in inclusion compound was significantly improved in comparison with the non-included one.
, 百拇医药
KEY WORDS Vitamine E;β-cyclodextrin;Inclusion compound;Orthogonal design
维生素E(VE)既用于治疗不育、习惯性流产及先兆性流产，又属于抗氧化剂，防止过氧化酶的不饱和键结合在细胞膜上，对割伤、烧伤、老年斑、色素沉着、皮肤干燥、防止紫外线损伤有重要的功效[1，2]。由于维生素E性质活跃，其制剂稳定性较差，为此，我们制备了维生素E-β-环糊精(β-CD)包合物，通过包合物收率、含量的比较，筛选出最佳工艺。
材料与方法
1 材料β-CD(上海化学试剂站，纯度95%)；VE(西南合成制药厂)；VE标准品(中国药品生物制品检定所)。JIM-50AB型立体胶体磨(沈阳国营新光机械厂)；DU-650紫外分光光度计(美国贝克曼公司)；DELTA差热分析仪(美国)。
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2 包合工艺条件的考察
2.1 包合物的制备 取一定量的β-CD，加入5倍量水，置胶体磨中，并加入VE醇溶液，充分碾磨混合，机器内部残留部分用水少量多次清洗，洗液并入糊状物，减压抽滤并用无水乙醚洗涤3次，低温干燥，得白色粉体。
2.2 筛选指标 选择包合物的VE利用率为筛选包合工艺条件的指标，其计算公式如下：
2.3 标准曲线的制备 精密称取VE标准品45.3 mg,用无水乙醇溶解后定容于50 ml棕色容量瓶中，精密吸取1，2，3，4，5 ml分别置于25 ml棕色容量瓶中，用60%乙醇定容，以60%乙醇为空白，在284 nm处测定吸收度，浓度(C)与吸光度(A)之间线性关系良好：A=4.38×10-3C+0.0117，r=0.9999。由标准曲线计算包合物中VE含量。
, 百拇医药
2.4 回收率实验 精密称取VE标准品53.8 mg，用无水乙醇溶解并加入等量β-CD后用60%乙醇定容于50 ml棕色容量瓶中，待溶解后测定吸收度，算得回收率为(100.2±0.68)%(n=4)。
2.5 考察因素水平的选择 根据预实验，包合溶媒的量为β-CD量的5倍左右时，包合物料易于在胶体磨中循环，包合易于进行，胶体磨磨面间隙为5 μm，将电流强度调至1.5A处，选择包合工艺的考察因素和水平，见表1。
表1 包合工艺的考察因素和水平
水平
因素
时间(min)
溶媒含醇量(%)
, 百拇医药 VE∶β-CD
1
10
10
1∶6
2
15
15
1∶10
3
20
20
1∶14
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结 果
1 正交试验
根据表1，选用L349正交表，按前固定的及正交表设计条件进行VE包合物的制备，所得包合物分别进行包合物VE利用率的测定，其结果见表2。
表2 L349正交表及实验结果
实验号
A
B
C
D
油利用率(%)
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1
1
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1
6.2
2
1
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3
1
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3
3
3
5.6
4
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1
2
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5
2
2
3
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4.4
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7.6
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3
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8
3
2
1
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9.1
9
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1
5.9
2 方差分析
以VE利用率作指标，对正交实验结果进行直观分析，由各因素极差R，确定因素主次及最佳水平，再以方差分析求得各因素的F值，最后确定A1B2C1为最佳包合工艺，即VE与β-CD配比为1∶6，包合时间为15 min，溶媒含醇量为15%，见表3。 表3 方差分析表
, http://www.100md.com
因素
S
自由度
方差
F比
P
A
32.93
2
16.46
15.1
>0.05
B
, 百拇医药 11.18
2
5.59
5.12
>0.05
C
44.55
3
22.28
20.44
>0.05
误差
2.18
, 百拇医药
2
1.09
总计
90.84
8
3 质量考察
3.1 外观 微黄色油状的VE用β-CD包合后，成白色粉状包合物。
3.2 薄层层析 化合物及VE分别配制成一定浓度的样品液及对照液，于经活化的硅胶GF254薄层板上点样，以苯-甲醇(20∶1)展开，于20℃展开，凉干后，于254 nm紫外光下检查，Rf均为0.8，说明VE包合后化学结构并无变化。
3.3 差热分析法 本实验对VE、β-CD、混合物及包合物4种物质进行差热分析，VE在280℃有一个吸热峰；β-CD在155℃，280℃和310℃各有一个吸热峰；混合物则为两组差热分析曲线图形的叠加，在135℃，280℃，320℃有一个吸收峰，表明混合物为机械混合；包合物完全形成一个新的热分析图，160℃有一个吸热峰，这表明VE与β-CD已形成包合物，从而构成新的物相。
, 百拇医药
3.4 稳定性考察 从温度、湿度和光线3因素对包合物及混合物进行稳定性考察，将包合物及混合物适量置80℃水浴锅内，以及2 000～4 000 lx的光照条件下，至规定时间，分别观察其外观并测定含量。结果见表4，说明VE制成包合物后稳定性明显改善。 表4 VE包合物及混合物稳定性考察的结果
样品
测定项目
(80℃)/(24h 48h 72h)
(光照(10d))/(2 000～4 000lx)
混合物
外观
白色
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白色
白色
淡黄色
含量(%)
95.3
90.7
86.2
89.6
包合物
外观
白色
白色
白色
, 百拇医药
白色
含量(%)
100.0
99.2
98.5
99.3
讨论
以固体混合法制备VE与β-CD环糊精包合物，对比共沉淀法，具有操作时间短，回收率高等特点，对工业化大量制备包合物具有一定指导意义。
β-CD与VE的比例为制备包合物成功的关键，同时碾磨时间的长短也起了重要作用，我们以β-CD∶VE为6∶1，包合时间为15 min作为我们的最佳制备条件。
, 百拇医药
为获得较高的包合率，应在密闭系统中进行包合，防止乙醇散失。VE可先用适量乙醇稀释，使其在β-CD形成包合物后显示新的图形，说明包合物为一种新的物相，从而断定包合成功。
参考文献
[1] 孙伟张，曾仁杰，景利，等.维生素E-β-CD包合物的制备及对酪氨酸抑制率的测定.华西药学杂志，1994，9(1)∶30
[2] 王霖隐，陈冠芬，刘杰，等.高效液相色谱法测定维生素E胶丸含量.中国医院药学杂志，1994，14(11)∶503
(收稿：1997-11-07 修回：1998-10-21), 百拇医药