创新药研究早期阶段的口服特性筛选
作者：曾衍霖
单位：(中国科学院上海药物研究所，上海 200031)
关键词：
中国新药杂志990401 口服是常用的给药途径，为治疗慢性病需长期服药时，传统的口服剂型一般价格便宜，很受患者欢迎。但口服剂型有其必不可少的前提，就是药物必须是口服吸收良好的。
有人建议创新药的筛选(包括口服药物)应明确规定每个阶段的具体要求和筛选目标，采取流程作业法，即定期召开总结鉴定会，只有符合要求的候选化合物，才允许进入下一阶段的研究[1]。根据他们的经验和要求，如果口服吸收不良，就要被及时淘汰。自从组合化学问世以来，候选化合物的合成速度大大加快，如何在早期阶段就对候选化合物进行高通量的转运、代谢、毒性等包括口服特性的体外筛选，并结合体外疗效筛选结果，尽早作出综合评价，已成为目前创新药研究的主导趋势。1998年10月国际药物代谢学会(ISSX)第五届国际大会上，特别组织了专题研讨会[2]，11月在美国Berkeley还召开了相关专题的国际会议[3]。就口服吸收的体外筛选模型来说，Caco-2细胞系模型经过二十多年的探索，现已被大多数人认可为口服吸收的体外筛选模型，现对该模型作简单介绍，希望引起国内医药界的注意。
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1 Caco-2细胞系体外模型
Caco-2细胞来源于人体结肠腺癌细胞，能在培养过程中进行肠细胞分化，其单细胞层可作研究小肠表皮细胞转运和代谢的体外模型。Caco-2细胞接种到碳酸聚酯多孔膜等基质上，经过培养可形成单细胞层。
药物经Caco-2单细胞层的转运包括以下过程：从面对肠腔一侧AP(apical)的摄入，再穿过表皮细胞或经过细胞间隙，到达面对肠壁一侧BL，然后从细胞中排放。
1.1 Caco-2细胞的培养[4，5] 细胞种植在直径为3 cm的Snapwell小井上(也可种植在75 cm2T瓶中或直径为100 mm的塑料培养皿中)，Snapwell小井放置在六穴组合培养皿中，种植密度为每个Snapwell小井10万个细胞。培养液是含有小牛血清、非必需氨基酸、抗生素的DMEM缓冲液，在37℃的CO2培养箱中培养数周后待用。种植后第1周，每天换一次培养液，1周后可隔天更换一次。Caco-2细胞可向美国American Type Culture Collection(Rockville,Md.)订购。
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1.2 Caco-2单细胞层的形成和活性[5]
判断单细胞层是否良好形成及其活性，可采用以下一些手段和方法：① 用电子显微镜或光学倒置显微镜进行形态学上的检查，细胞层的分化程度可观察微绒毛的特征表现和细胞接点的紧密性。② 可在单细胞层培养的不同阶段，测碱性磷酸酶的活性，该酶是小肠表皮刷细胞的标志性酶。③ 测量单细胞层的电阻(TEER)。④ 用Lucifer yellow CH、菊糖、葡聚糖等测定其转运功能。⑤ 用辣根过氧化物酶测胞饮功能。
1.3 筛选实验过程[4] 可参考如下步骤：取Caco-2细胞生长良好的Snapwell小井，用Hank’s缓冲液(HBSS)小心冲洗，以去除附在表面的代谢物，在细胞层AP端的培养液中加入待试药物，置培养箱中进行细胞培养实验，定时从单细胞层的BL侧培养液中，取样测定被转运的药物量。除了Caco-2细胞系的维护、活性验证等常规工作的必要设备外，实验室还应有现代化的药物分析技术(现国外主要为LC-MS)、数据库等。
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1.4 体外-体内的相关性 Artursson P等[6]用Caco-2模型研究了属被动扩散的20种不同结构的药物机制，通过小肠表皮细胞的吸收，首次测定了这些药物的表观通透系数(apparent permeability coefficient)，发现Caco-2模型所得结果与人体口服吸收程度相关性良好，因此认为Caco-2模型可作为研究药物经肠吸收的体外模型。Kim DC等[7]研究了Caco-2模型与大鼠在位空肠灌注模型对多种肽类化合物转运的相关性，认为Caco-2模型所得的通透性数据有很好的预测值。Conradi RA等[8]比较了Caco-2模型转运可抗高血压的多肽类化合物和大鼠体内肠转运，发现相关性很好，认为Caco-2模型可用作筛选模型。
Stewart BH等[9]比较了多种体外和在位模型同人体吸收的关系，认为Caco-2模型与大鼠单程肠灌注模型相结合，在他们所研究过的模型中相关性是最好的。Yamashita S等[10]比较了Caco-2模型和大鼠游离空肠及结肠模型对多种药物的被动扩散过程，以及同体内过程的关系，结果也认为Caco-2模型较好。Yee SY[11]利用Caco-2模型研究了在人体具有不同吸收程度的35种各类化合物，并分别测定了它们的表观通透系数，发现该系数与人体吸收程度相关良好，并规定该系数在1×10-6，(1～10)×10-6和>10×10-6 cm/s时，分别相当于人小肠吸收不良(0～20%)、中等吸收(20%～70%)和吸收良好(70%～100%)。
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1.5 Caco-2模型的生物转化特性 Abid A等[12]研究了Caco-2细胞微粒体的葡萄糖醛酸结合过程，提示存在多种UGT1*6同功酶。Prueksaritanont T等[13]比较了狗、猴、人小肠和Caco-2细胞中的生物转化酶，第Ⅰ相酶中Caco-2细胞只发现羧酸酯酶，第Ⅱ相酶中发现N-乙酰化酶(NAT)，其中NAT1酶的活性比NAT2酶强得多。
2 Caco-2细胞系模型的应用
2.1 筛选口服药物的吸收特性 此为该模型的主要应用。Ranaldi G等[14]研究了抗菌药oxazolidin-2-one及其10种衍生物从AP到BL和BL到AP的转运。Hovgaard L等[15]研究了O-cyclopropane carboxylic acid ester前药的转运，发现增加亲脂性，可使前药的通透性较母药提高17倍。Hovgaard L等[16]研究一些环糊精对吸收的促进作用，发现二甲基环糊精能使PEG-4000的吸收提高10倍，而所用浓度对细胞的毒性很低，认为值得作进一步研究。众所周知，了解化学结构对小肠吸收的影响，可大大促进有效口服药物的发现。Stewart BH等[17]研究了内皮素拮抗剂，找到了一些作用较强的多肽类化合物，因为是多肽，所以口服吸收是一难题，故用Caco-2模型进行筛选其在肠液中稳定并经小肠表皮转运良好的候选化合物。Obermeier MT等[18]利用Caco-2模型研究了BMS-183920前药的代谢和转运，找到了血管紧张肽Ⅱ受体拮抗剂BMS-183920，但其在大鼠的生物利用度只有11%左右；大鼠引流胆汁实验证明该化合物经肝生物转化不多，故推测生物利用度低是由于其口服吸收不良。于是他们合成了5种酰-酯类前药，结果筛选找到tetrazole-酯的前药，生物利用度可提高到37%。 Taylor EW等[19]利用二“肽”和三“肽”(peptoids)各3类共24个化合物，研究了化学结构和吸收的关系，认为所得结果对将来工作有指导意义。Annaert P[20]利用Caco-2模型研究了抗病毒药物PMEA的酯类前药，结果初步找到几种SATE酯，其转运特性、稳定性、酯解后变回DMEA的能力都较佳，正拟进行毒性和体内实验。
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2.2 口服药物吸收机制研究 Hu M等[21]用Caco-2模型研究苯丙氨酸在AP到BL方向的摄入和排出，结果发现AP及BL端的摄入与BL端的排出机制显然不同，提示相应的转运载体有所不同。他们还认为BL端的排出是限速因素。Thwaites BT等[22]利用Caco-2模型研究了ACE抑制剂的转运，发现二肽Gly-Sar在AP到BL方向的转运，以及进入细胞后的蓄积，都可因酸性环境而提高。Gly-Sar的转运能力被依那普利和卡托普利所抑制，但里西普利(lisinopril)的此种抑制作用则较小，因前2种抑制剂能使细胞内pH值降低，而里西普利则无此影响，据此他们认为前2种抑制剂与Gly-Sar的转运过程似共享H+-偶联机制，也可说明前2种抑制剂吸收较佳的原因。Chan OH等[23]用Caco-2等体外、在位模型和体内实验研究了神经激肽受体拮抗剂Cam-2445为何吸收不良的机制。Cam-2445在Caco-2模型及大鼠单程肠灌注模型中都转运良好，但口服生物利用度仅1.4%。研究结果认为主要是因为它在肠道内沉淀析出，并非其在肠内不稳定，也不是膜转运过程中存在障碍。众所周知，环孢素A(CyA)的人体吸收个体差异甚大(<5%～89%)，Fricker G等[24]用Caco-2模型与健康志愿者研究了其机制，CyA被肠细胞摄取时并不存在饱和机制，且对温度也不敏感，提示其转运机制属被动扩散；但通过Caco-2模型发现，从AP到BL方向转运则存在饱和机制，且在与长春碱、柔毛霉素等合用时提高，这些合用药物都能抑制p-糖蛋白介导的转运过程。对单克隆抗体C219研究证实所试细胞系中存在p-糖蛋白。在健康志愿者试验中发现，如在不同肠段用肠导管给药，则血浆CyA的AUC将随不同肠段而降低，其次序是胃>空/回肠>结肠，而这一排序则与不同肠段mRNA对糖蛋白的不同表达明显相关。这些事实都可作为依据，提示CyA是胃肠道中p-糖蛋白的底物。又如HIV蛋白酶抑制剂Invirase的口服生物利用度较低，但与另一HIV蛋白酶抑制剂ritonavir合用后，Invirase的生物利用度可以显著提高。Alsenz J等[25]用Caco-2模型研究了这一促进吸收现象的机制，结果认为这2种药物都可进行BL到AP以及AP到BL的双向转运，但二种方向转运速率有差别，BL到AP方向较快，Invirase与ritonavir分别相差50～70及15～25倍。AP和BL方向的转运特性可受温度制约，存在饱和机制，且被维拉帕米及CyA所抑制。Invirase与ritonavir合用后，能相互抑制BL到AP方向的转运，从而提高了AP到BL方向的转运，即吸收途径的转运。
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参考文献
1 Fromson JM.A phased approach to drug development.J Pharmacokin Biopharm,1989,17(4)∶509
2 Workshop 2.High throughput disposition screening in drug discovery,Abstracts 7-10 in ISSX Proceedings,Volume 13,1998，4
3 Early ADME and toxicology in drug discovery.Proceedings ofIBC Conference,1998,Berkeley,USA
4 陈纪岳，胡明，朱彦平，等.药物从小肠上皮细胞模型排放的动力学模型.上海医科大学学报，1996，23(4)∶247
, 百拇医药
5 Hidalgo IJ,Raub TJ,Borchardt RT.Characterization of the hurnan colon carcinoma cell line (Caco-2)as a model system for intestinal epithelial permeability.Gastroenterology,1989,96(3)∶736
6 Artursson P,Karlsson J.Correlation between oral drug absorption in humans and apparent drug permeability coefficients in human intestinal epithelial(Caco-2)cells.Biochem Biophys Res Communications,1991,175(3)∶880
7 Kim DC,Burton PS,Borchardt RT.A correlation between the permeability characteristics of a series of peptides using an in vitro cell culture model(Caco-2)and those using an in situ perfused rat ileum model of the intestinal mucosa.Pharmaceut Res,1993,10(12)∶1710
, 百拇医药
8 Conradi RA,Wilkinson KF,Rush BD,et al.In ivtro/in vivo models for peptide oral absorption:comparison of Caco-2 cell permeability with rat intestinal absorption of renin inhibitory peptides.Pharmaceut Res,1993,10(12)∶1790
9 Stewart BH,Chan OH,Lu RH,et al.Comparison of intestinal permeabilities determined in multiple in vitro and in vivo models:Relationship to absorption in humans.Pharmaceut Res,1995,12(5)∶693
10 Yamashita S,Tanaka Y,Endoh Y,et al.Analysis of drug permeation across Caco-2 monolayer:implication for predicting in vivo drug absorption.Pharmaceut Res,1997,14(4)∶486
, 百拇医药
11 Yee S.In vitro permeability across Caco-2 cells(colonic)can predict in vivo(small intestinal)absorption in man-fact or myth.Pharmaceut Res,1997,14(6)∶763
12 Abid A,Bouchou I,Siest G,et al.Glucuronidation in the Caco-2 human intestinal cell line:induction of UDP-glucuronosyltransferase 1*6.Biochem Pharmacol,1995,50(4)∶557
13 Prueksaritanont T,Gorham LM,Hochman JH,et al.Comparative studies of drug-metabolizing enzymes in dog,monkey,and human small intestines,and in Caco-2 cells.Drug Metab Disp,1996,24∶634
, http://www.100md.com
14 Ranaldi G,Sencci P,Guba W,et al.Transport of the antibactcrial agent oxazolidin-2-onc and derivatives across intestinal(Caco-2)and renal (MDCK)epithelial cell lines.Antimicrob Agents Chemother,1996,40(3)∶652
15 Hovgaard L,BrΦndsted H,Buur A,et al.Drug delivery studies in Caco-2 monolayers,synthesis,hydrolysis,and transport of o-cycolpropane carboxylic acid ester prodrugs of various β-blocking agents.Pharmaceut Res,1995,12(3)∶387
, 百拇医药
16 Hovgaard L,BrΦndsted H.Drug delivery studies in Caco-2 monolayers.IV.Absorption enhancer effects of cyclodextrins.Pharmaceut Res,1995,12(9)∶1328
17 Stewart BH,Reyner EL,Tse E,et al.In vitro assessment of oral delivery for hexapeptide endothelin antagonists.Life Sci,1996,58(12)∶971
18 Obermeier MT,Chong S,Dando SA,et al.Prodrugs of BMS-183920：metabolism and permeability considerations.J Pharm Sci,1996,85(8)∶828
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19 Taylor EW,Gibbons JA,Braeckman RA.Intestinal absorption screening of mixtures form combinatorial libraries in the Caco-2 model.Pharmaceut Res,1997,14(5)∶572
20 Annaert P,Gosselin G,Pompon A,et al.Comparison of the disposition of ester prodrugs of the antiviral agent 9-(2-phosphonylmethoxyethyl)adenine[PMEA]in Caco-2 monolayers.Pharmaceut Res,1998,15(2)∶239
21 Hu M,Borchardt RT.Transport of a large neutral amino acid in a human intestinal epithelial cell line(Caco-2)：uptake and efflux of phenylalanine.Biochem Biophys Acta,1992,1135(3)∶233
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22 Thwaites DT,Cavet M,Hirst BH,et al.Angiotensin-converting enzyme(ACE)inhibitor transport in human epithelial(Caco-2)cells.Brit J Pharmacol,1995,114∶981
23 Chan OH,Schmid HL,Kuo BS,et al.Absorption of Cam-2445,an NK1 neurokinin receptor antagonist:in vivo,in situ,and in vitro evaluations.J Pharm Sci,1996,85(3)∶253
24 Fricker G,Drewe J,Huwyler J,et al.Relevance of p-glycoprotein for the enteral absorption of cyclosporin A:in vitro-in vivo correlation.Brit J Pharmacol,1996,118(7)∶1841
25 Alsenz J,Steffen H,Alex R.Active apical secretory efflux of the HIV protease inhibitors saquinavir and ritonavir in Caco-2 cell monolayers.Pharmaceut Res,1998,15(3)∶423
(收稿：1999-03-22), http://www.100md.com
单位：(中国科学院上海药物研究所，上海 200031)
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中国新药杂志990401 口服是常用的给药途径，为治疗慢性病需长期服药时，传统的口服剂型一般价格便宜，很受患者欢迎。但口服剂型有其必不可少的前提，就是药物必须是口服吸收良好的。
有人建议创新药的筛选(包括口服药物)应明确规定每个阶段的具体要求和筛选目标，采取流程作业法，即定期召开总结鉴定会，只有符合要求的候选化合物，才允许进入下一阶段的研究[1]。根据他们的经验和要求，如果口服吸收不良，就要被及时淘汰。自从组合化学问世以来，候选化合物的合成速度大大加快，如何在早期阶段就对候选化合物进行高通量的转运、代谢、毒性等包括口服特性的体外筛选，并结合体外疗效筛选结果，尽早作出综合评价，已成为目前创新药研究的主导趋势。1998年10月国际药物代谢学会(ISSX)第五届国际大会上，特别组织了专题研讨会[2]，11月在美国Berkeley还召开了相关专题的国际会议[3]。就口服吸收的体外筛选模型来说，Caco-2细胞系模型经过二十多年的探索，现已被大多数人认可为口服吸收的体外筛选模型，现对该模型作简单介绍，希望引起国内医药界的注意。
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1 Caco-2细胞系体外模型
Caco-2细胞来源于人体结肠腺癌细胞，能在培养过程中进行肠细胞分化，其单细胞层可作研究小肠表皮细胞转运和代谢的体外模型。Caco-2细胞接种到碳酸聚酯多孔膜等基质上，经过培养可形成单细胞层。
药物经Caco-2单细胞层的转运包括以下过程：从面对肠腔一侧AP(apical)的摄入，再穿过表皮细胞或经过细胞间隙，到达面对肠壁一侧BL，然后从细胞中排放。
1.1 Caco-2细胞的培养[4，5] 细胞种植在直径为3 cm的Snapwell小井上(也可种植在75 cm2T瓶中或直径为100 mm的塑料培养皿中)，Snapwell小井放置在六穴组合培养皿中，种植密度为每个Snapwell小井10万个细胞。培养液是含有小牛血清、非必需氨基酸、抗生素的DMEM缓冲液，在37℃的CO2培养箱中培养数周后待用。种植后第1周，每天换一次培养液，1周后可隔天更换一次。Caco-2细胞可向美国American Type Culture Collection(Rockville,Md.)订购。
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1.2 Caco-2单细胞层的形成和活性[5]
判断单细胞层是否良好形成及其活性，可采用以下一些手段和方法：① 用电子显微镜或光学倒置显微镜进行形态学上的检查，细胞层的分化程度可观察微绒毛的特征表现和细胞接点的紧密性。② 可在单细胞层培养的不同阶段，测碱性磷酸酶的活性，该酶是小肠表皮刷细胞的标志性酶。③ 测量单细胞层的电阻(TEER)。④ 用Lucifer yellow CH、菊糖、葡聚糖等测定其转运功能。⑤ 用辣根过氧化物酶测胞饮功能。
1.3 筛选实验过程[4] 可参考如下步骤：取Caco-2细胞生长良好的Snapwell小井，用Hank’s缓冲液(HBSS)小心冲洗，以去除附在表面的代谢物，在细胞层AP端的培养液中加入待试药物，置培养箱中进行细胞培养实验，定时从单细胞层的BL侧培养液中，取样测定被转运的药物量。除了Caco-2细胞系的维护、活性验证等常规工作的必要设备外，实验室还应有现代化的药物分析技术(现国外主要为LC-MS)、数据库等。
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1.4 体外-体内的相关性 Artursson P等[6]用Caco-2模型研究了属被动扩散的20种不同结构的药物机制，通过小肠表皮细胞的吸收，首次测定了这些药物的表观通透系数(apparent permeability coefficient)，发现Caco-2模型所得结果与人体口服吸收程度相关性良好，因此认为Caco-2模型可作为研究药物经肠吸收的体外模型。Kim DC等[7]研究了Caco-2模型与大鼠在位空肠灌注模型对多种肽类化合物转运的相关性，认为Caco-2模型所得的通透性数据有很好的预测值。Conradi RA等[8]比较了Caco-2模型转运可抗高血压的多肽类化合物和大鼠体内肠转运，发现相关性很好，认为Caco-2模型可用作筛选模型。
Stewart BH等[9]比较了多种体外和在位模型同人体吸收的关系，认为Caco-2模型与大鼠单程肠灌注模型相结合，在他们所研究过的模型中相关性是最好的。Yamashita S等[10]比较了Caco-2模型和大鼠游离空肠及结肠模型对多种药物的被动扩散过程，以及同体内过程的关系，结果也认为Caco-2模型较好。Yee SY[11]利用Caco-2模型研究了在人体具有不同吸收程度的35种各类化合物，并分别测定了它们的表观通透系数，发现该系数与人体吸收程度相关良好，并规定该系数在1×10-6，(1～10)×10-6和>10×10-6 cm/s时，分别相当于人小肠吸收不良(0～20%)、中等吸收(20%～70%)和吸收良好(70%～100%)。
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1.5 Caco-2模型的生物转化特性 Abid A等[12]研究了Caco-2细胞微粒体的葡萄糖醛酸结合过程，提示存在多种UGT1*6同功酶。Prueksaritanont T等[13]比较了狗、猴、人小肠和Caco-2细胞中的生物转化酶，第Ⅰ相酶中Caco-2细胞只发现羧酸酯酶，第Ⅱ相酶中发现N-乙酰化酶(NAT)，其中NAT1酶的活性比NAT2酶强得多。
2 Caco-2细胞系模型的应用
2.1 筛选口服药物的吸收特性 此为该模型的主要应用。Ranaldi G等[14]研究了抗菌药oxazolidin-2-one及其10种衍生物从AP到BL和BL到AP的转运。Hovgaard L等[15]研究了O-cyclopropane carboxylic acid ester前药的转运，发现增加亲脂性，可使前药的通透性较母药提高17倍。Hovgaard L等[16]研究一些环糊精对吸收的促进作用，发现二甲基环糊精能使PEG-4000的吸收提高10倍，而所用浓度对细胞的毒性很低，认为值得作进一步研究。众所周知，了解化学结构对小肠吸收的影响，可大大促进有效口服药物的发现。Stewart BH等[17]研究了内皮素拮抗剂，找到了一些作用较强的多肽类化合物，因为是多肽，所以口服吸收是一难题，故用Caco-2模型进行筛选其在肠液中稳定并经小肠表皮转运良好的候选化合物。Obermeier MT等[18]利用Caco-2模型研究了BMS-183920前药的代谢和转运，找到了血管紧张肽Ⅱ受体拮抗剂BMS-183920，但其在大鼠的生物利用度只有11%左右；大鼠引流胆汁实验证明该化合物经肝生物转化不多，故推测生物利用度低是由于其口服吸收不良。于是他们合成了5种酰-酯类前药，结果筛选找到tetrazole-酯的前药，生物利用度可提高到37%。 Taylor EW等[19]利用二“肽”和三“肽”(peptoids)各3类共24个化合物，研究了化学结构和吸收的关系，认为所得结果对将来工作有指导意义。Annaert P[20]利用Caco-2模型研究了抗病毒药物PMEA的酯类前药，结果初步找到几种SATE酯，其转运特性、稳定性、酯解后变回DMEA的能力都较佳，正拟进行毒性和体内实验。
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2.2 口服药物吸收机制研究 Hu M等[21]用Caco-2模型研究苯丙氨酸在AP到BL方向的摄入和排出，结果发现AP及BL端的摄入与BL端的排出机制显然不同，提示相应的转运载体有所不同。他们还认为BL端的排出是限速因素。Thwaites BT等[22]利用Caco-2模型研究了ACE抑制剂的转运，发现二肽Gly-Sar在AP到BL方向的转运，以及进入细胞后的蓄积，都可因酸性环境而提高。Gly-Sar的转运能力被依那普利和卡托普利所抑制，但里西普利(lisinopril)的此种抑制作用则较小，因前2种抑制剂能使细胞内pH值降低，而里西普利则无此影响，据此他们认为前2种抑制剂与Gly-Sar的转运过程似共享H+-偶联机制，也可说明前2种抑制剂吸收较佳的原因。Chan OH等[23]用Caco-2等体外、在位模型和体内实验研究了神经激肽受体拮抗剂Cam-2445为何吸收不良的机制。Cam-2445在Caco-2模型及大鼠单程肠灌注模型中都转运良好，但口服生物利用度仅1.4%。研究结果认为主要是因为它在肠道内沉淀析出，并非其在肠内不稳定，也不是膜转运过程中存在障碍。众所周知，环孢素A(CyA)的人体吸收个体差异甚大(<5%～89%)，Fricker G等[24]用Caco-2模型与健康志愿者研究了其机制，CyA被肠细胞摄取时并不存在饱和机制，且对温度也不敏感，提示其转运机制属被动扩散；但通过Caco-2模型发现，从AP到BL方向转运则存在饱和机制，且在与长春碱、柔毛霉素等合用时提高，这些合用药物都能抑制p-糖蛋白介导的转运过程。对单克隆抗体C219研究证实所试细胞系中存在p-糖蛋白。在健康志愿者试验中发现，如在不同肠段用肠导管给药，则血浆CyA的AUC将随不同肠段而降低，其次序是胃>空/回肠>结肠，而这一排序则与不同肠段mRNA对糖蛋白的不同表达明显相关。这些事实都可作为依据，提示CyA是胃肠道中p-糖蛋白的底物。又如HIV蛋白酶抑制剂Invirase的口服生物利用度较低，但与另一HIV蛋白酶抑制剂ritonavir合用后，Invirase的生物利用度可以显著提高。Alsenz J等[25]用Caco-2模型研究了这一促进吸收现象的机制，结果认为这2种药物都可进行BL到AP以及AP到BL的双向转运，但二种方向转运速率有差别，BL到AP方向较快，Invirase与ritonavir分别相差50～70及15～25倍。AP和BL方向的转运特性可受温度制约，存在饱和机制，且被维拉帕米及CyA所抑制。Invirase与ritonavir合用后，能相互抑制BL到AP方向的转运，从而提高了AP到BL方向的转运，即吸收途径的转运。
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7 Kim DC,Burton PS,Borchardt RT.A correlation between the permeability characteristics of a series of peptides using an in vitro cell culture model(Caco-2)and those using an in situ perfused rat ileum model of the intestinal mucosa.Pharmaceut Res,1993,10(12)∶1710
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10 Yamashita S,Tanaka Y,Endoh Y,et al.Analysis of drug permeation across Caco-2 monolayer:implication for predicting in vivo drug absorption.Pharmaceut Res,1997,14(4)∶486
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11 Yee S.In vitro permeability across Caco-2 cells(colonic)can predict in vivo(small intestinal)absorption in man-fact or myth.Pharmaceut Res,1997,14(6)∶763
12 Abid A,Bouchou I,Siest G,et al.Glucuronidation in the Caco-2 human intestinal cell line:induction of UDP-glucuronosyltransferase 1*6.Biochem Pharmacol,1995,50(4)∶557
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(收稿：1999-03-22), http://www.100md.com