罗红霉素颗粒剂、胶囊剂及片剂人体生物利用度测定
作者：栾连军 邵青 李士敏 王萍
单位：栾连军 邵青 李士敏 (浙江医科大学药学院，杭州 310006)；王萍 (浙江亚东制药公司)
关键词：罗红霉素；生物利用度；高效液相色谱法
中国新药杂志990809
摘要 目的：测定罗红霉素颗粒剂、胶囊剂及片剂的生物等效性。方法：采用反相高效液相色谱法，测定9名男性健康志愿受试者口服不同剂型罗红霉素后的血药浓度，并计算药代动力学参数。结果：经3P87药动学计算程序进行数据处理，得到罗红霉素片剂、胶囊剂及颗粒剂各种参数如下：Tmax分别为(2.78±0.26)，(2.22±0.51)及(2.67±0.83)h；Cmax分别为(9.51±1.01)，(9.31±1.79)及(9.33±1.42) μg/ml;AUC分别为(152.8±29.34)，(148.5±29.70)及(157.7±23.12) μg.h/ml。结论：以罗红霉素片剂为参比制剂，罗红霉素颗粒剂及胶囊剂的人体相对生物利用度分别为(98.34±16.57)%及(105.0±15.68)%，3种制剂生物等效。
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DETERMINATION OF THE BIOAVAILABILITY OF ROXITHROMYCIN GRANULE，CAPSULE AND TABLET
Luan Lianjun,Shao Qing,Li Shimin,et al.
(School of Pharmacy,Zhejiang Medical University,Hangzhou 310006)
ABSTRACT OBJECTIVE：To determine the bioequivailability of roxithromycin granule,capsule and tablet.METHODS:9 healthy volunteers were recruited in the randomized,crossover study.The plasma concentration of roxithromycin was determined by HPLC after 1 single dose of each preparation.RESULTS:The data listed below were arranged in the order of tablet ,capsule ,and granule:Tmax(2.78±0.26)，(2.22±0.51)and (2.67±0.83)h;Cmax (9.51±1.01),(9.31±1.79),and (9.33±1.42)μg/ml;AUC (152.8±29.34),(148.5±29.70),and (157.7±23.12)(μg.h/ml).The relative bioavailability of granule and capsule were (98.34±16.57)% and (105.0±15.68)%.CONCLUSION:The results obtained indicated that the 3 preparations of roxithromycin are bioequivalent.
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KEY WORDS Roxithromycin;Bioavailability;HPLC
我们对9名志愿者口服浙江亚东制药公司提供的罗红霉素颗粒剂、胶囊剂，以市售片剂为对照，评价其人体相对生物利用度及有关药代动力学参数。
材料与方法
1 受试者
选择9名健康男性志愿受试者，平均年龄21.2岁(21～22岁)，平均身高171.4cm(165～175 cm)，平均体重61.9 kg(55.0～66.0 kg)；经体检及血、尿常规和肝、肾功能等临床实验室检查，结果均正常，受试前2周内和受试期间均未服用过任何药物，受试期间禁烟酒。
2 仪器及材料
罗红霉素颗粒剂(简称颗粒剂)，150 mg/包，批号970326；罗红霉素胶囊剂(简称胶囊剂)，150 mg/包，批号970421；罗红霉素参比片剂(简称片剂)，150 mg/片，批号 96081095。罗红霉素标准品含量为95.30%，实验中所用甲醇、乙腈均为色谱纯，其余试剂均为国产分析纯。
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WH-90A型微型混合器，岛津LC-6A型高效液相色谱仪，SPD-6AV型紫外检测器，HPS色谱工作站，pHS-9V型酸度计。
3 色谱条件
色谱柱：Alltima C18柱(250 mm×4.6 mm)，流动相为乙腈-甲醇-20 mmol/L的磷酸二氢钠(40∶20∶40)，加0.15%三乙胺并用磷酸调pH为4.70，流速1 ml/min，柱温35℃，检测波长210 nm。
4 实验方法
受试前15h开始禁食至给药后3h。9人随机分为3组，每组3人。第1，2，3组分别口服罗红霉素片剂、颗粒剂和胶囊剂各300 mg，均用200 ml温开水吞服，给药3h后给予统一午餐。口服给药后于0.50，1.00，1.50，2.00，2.50，3.00，4.00，8.00，12.00，24.00，33.00和48.00h 自上肢静脉采取静脉血，血标本收集于枸橼酸钠抗凝试管内，离心分离出血浆，血浆样品保存于-20℃待测。实验间隔时间为7 d，受试者接受交叉给药(颗粒剂、胶囊剂及片剂)2次。
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4.1 血浆中药物浓度测定 精密吸取血浆样品0.5 ml，加0.01 mol/L氢氧化钠液调pH为8.2，再精密加入二氯甲烷7.0 ml，震荡提取3 min，冰箱放置4h以上。精密吸取下层二氯甲烷萃取液5.0 ml，置40℃水浴通氮气吹干， 冷却后精密加甲醇200 μl溶解，吸取20 μl进样。根据标准曲线回归方程计算血浆中罗红霉素浓度。
4.2 标准曲线制备 精密吸取不同浓度罗红霉素标准溶液各50 μl，加空白血浆0.5 ml，混匀，配成一系列浓度为0.26～20.28 μg/ml的标准样品液，按血浆中药物浓度测定方法，从“加0.01 mol/L氢氧化钠液调至pH为8.2”起同法测定，以峰面积为纵坐标，标准液浓度为横坐标绘制标准曲线。血浆标准曲线回归方程为：A=1 055.6C+144，r=0.9999， 线性范围为0.26～20.28 μg/ml。以所得色谱峰峰高为基线噪音的3倍为其最低检测限，血浆最低检测浓度为0.26μg/ml。
4.3 回收率试验 按标准曲线制备项下方法操作，分别制备高、中、低3种浓度的罗红霉素样品，将峰面积值代入标准曲线计算罗红霉素浓度，以测得值与加入值之比计算回收率。
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4.4 精密度试验 按标准曲线制备项下方法操作，分别制备高、中、低3种浓度的罗红霉素样品，1d内连续测定5次，计算日内相对标准差； 将制备的高、中、低浓度的血浆样品连续测定5d， 计算日间相对标准差。罗红霉素日内RSD小于5.05%，日间RSD小于5.65%。
结 果
1 血药浓度的测定
取空白血浆0.5 ml依法操作，结果表明空白血浆不干扰罗红霉素的测定。空白血浆加有罗红霉素的HPLC色谱图及实际样品HPLC色谱图见图1。9名受试者交叉口服3种制剂后，平均回收率为(99.87±0.80)%，平均血药浓度-时间曲线见图2。
图1 空白、标准及样品血浆HPLC色谱图
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图2 血药浓度-时间曲线
2 药代动力学参数及生物利用度
采用统计矩法计算AUC0→∞，3种罗红霉素制剂的药代动力学参数见表1。
表1 罗红霉素3种制剂主要药动学参数
片剂
颗粒剂
胶囊剂
AUC0→∝
152.82±29.33
148.00±30.06
, http://www.100md.com 157.68±23.12
(μg.h/ml)
Ka(1/h)
0.9535±0.5102
2.2974±1.3215
2.8745±3.7753
Ke(1/h)
0.0810±0.0139
0.0753±0.0297
0.0773±0.0269
Tmax(h)
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2.78±0.26
2.22±0.51
2.67±0.83
t1/2(ke)(h)
8.79±1.56
10.71±2.15
9.75±2.58
Cmax(μg/ml)
9.51±1.56
9.31±1.79
9.33±1.42
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以罗红霉素片剂为标准参比制剂，分别计算颗粒剂和胶囊剂的相对生物利用度，结果分别为(98.34±16.57)%和(105.0±15.68)%。
讨 论
将罗红霉素片剂、胶囊剂、颗粒剂的AUC0～∞作对数转换后，进行方差分析，结果表明3种制剂之间差异没有显著性，实验周期之间也无显著性差异，而个体之间有差异，表明罗红霉素颗粒剂、胶囊剂与片剂生物等效。
参考文献
1 蒋学华，赵语，陈得光，等.罗红霉素胶囊剂的药动学与相对生物利用度. 中国药学杂志， 1997，31(4)∶221
2 Demotes MF,Vincon G, Jarry C.Micro-method for the determination in human plasma and urine by high-performance liquid chromatograph using electrochemical detection.J Chromatogr,1989,490(1)∶115
(收稿：1999-03-01 修回：1999-06-07), 百拇医药
单位：栾连军 邵青 李士敏 (浙江医科大学药学院，杭州 310006)；王萍 (浙江亚东制药公司)
关键词：罗红霉素；生物利用度；高效液相色谱法
中国新药杂志990809
摘要 目的：测定罗红霉素颗粒剂、胶囊剂及片剂的生物等效性。方法：采用反相高效液相色谱法，测定9名男性健康志愿受试者口服不同剂型罗红霉素后的血药浓度，并计算药代动力学参数。结果：经3P87药动学计算程序进行数据处理，得到罗红霉素片剂、胶囊剂及颗粒剂各种参数如下：Tmax分别为(2.78±0.26)，(2.22±0.51)及(2.67±0.83)h；Cmax分别为(9.51±1.01)，(9.31±1.79)及(9.33±1.42) μg/ml;AUC分别为(152.8±29.34)，(148.5±29.70)及(157.7±23.12) μg.h/ml。结论：以罗红霉素片剂为参比制剂，罗红霉素颗粒剂及胶囊剂的人体相对生物利用度分别为(98.34±16.57)%及(105.0±15.68)%，3种制剂生物等效。
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DETERMINATION OF THE BIOAVAILABILITY OF ROXITHROMYCIN GRANULE，CAPSULE AND TABLET
Luan Lianjun,Shao Qing,Li Shimin,et al.
(School of Pharmacy,Zhejiang Medical University,Hangzhou 310006)
ABSTRACT OBJECTIVE：To determine the bioequivailability of roxithromycin granule,capsule and tablet.METHODS:9 healthy volunteers were recruited in the randomized,crossover study.The plasma concentration of roxithromycin was determined by HPLC after 1 single dose of each preparation.RESULTS:The data listed below were arranged in the order of tablet ,capsule ,and granule:Tmax(2.78±0.26)，(2.22±0.51)and (2.67±0.83)h;Cmax (9.51±1.01),(9.31±1.79),and (9.33±1.42)μg/ml;AUC (152.8±29.34),(148.5±29.70),and (157.7±23.12)(μg.h/ml).The relative bioavailability of granule and capsule were (98.34±16.57)% and (105.0±15.68)%.CONCLUSION:The results obtained indicated that the 3 preparations of roxithromycin are bioequivalent.
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KEY WORDS Roxithromycin;Bioavailability;HPLC
我们对9名志愿者口服浙江亚东制药公司提供的罗红霉素颗粒剂、胶囊剂，以市售片剂为对照，评价其人体相对生物利用度及有关药代动力学参数。
材料与方法
1 受试者
选择9名健康男性志愿受试者，平均年龄21.2岁(21～22岁)，平均身高171.4cm(165～175 cm)，平均体重61.9 kg(55.0～66.0 kg)；经体检及血、尿常规和肝、肾功能等临床实验室检查，结果均正常，受试前2周内和受试期间均未服用过任何药物，受试期间禁烟酒。
2 仪器及材料
罗红霉素颗粒剂(简称颗粒剂)，150 mg/包，批号970326；罗红霉素胶囊剂(简称胶囊剂)，150 mg/包，批号970421；罗红霉素参比片剂(简称片剂)，150 mg/片，批号 96081095。罗红霉素标准品含量为95.30%，实验中所用甲醇、乙腈均为色谱纯，其余试剂均为国产分析纯。
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WH-90A型微型混合器，岛津LC-6A型高效液相色谱仪，SPD-6AV型紫外检测器，HPS色谱工作站，pHS-9V型酸度计。
3 色谱条件
色谱柱：Alltima C18柱(250 mm×4.6 mm)，流动相为乙腈-甲醇-20 mmol/L的磷酸二氢钠(40∶20∶40)，加0.15%三乙胺并用磷酸调pH为4.70，流速1 ml/min，柱温35℃，检测波长210 nm。
4 实验方法
受试前15h开始禁食至给药后3h。9人随机分为3组，每组3人。第1，2，3组分别口服罗红霉素片剂、颗粒剂和胶囊剂各300 mg，均用200 ml温开水吞服，给药3h后给予统一午餐。口服给药后于0.50，1.00，1.50，2.00，2.50，3.00，4.00，8.00，12.00，24.00，33.00和48.00h 自上肢静脉采取静脉血，血标本收集于枸橼酸钠抗凝试管内，离心分离出血浆，血浆样品保存于-20℃待测。实验间隔时间为7 d，受试者接受交叉给药(颗粒剂、胶囊剂及片剂)2次。
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4.1 血浆中药物浓度测定 精密吸取血浆样品0.5 ml，加0.01 mol/L氢氧化钠液调pH为8.2，再精密加入二氯甲烷7.0 ml，震荡提取3 min，冰箱放置4h以上。精密吸取下层二氯甲烷萃取液5.0 ml，置40℃水浴通氮气吹干， 冷却后精密加甲醇200 μl溶解，吸取20 μl进样。根据标准曲线回归方程计算血浆中罗红霉素浓度。
4.2 标准曲线制备 精密吸取不同浓度罗红霉素标准溶液各50 μl，加空白血浆0.5 ml，混匀，配成一系列浓度为0.26～20.28 μg/ml的标准样品液，按血浆中药物浓度测定方法，从“加0.01 mol/L氢氧化钠液调至pH为8.2”起同法测定，以峰面积为纵坐标，标准液浓度为横坐标绘制标准曲线。血浆标准曲线回归方程为：A=1 055.6C+144，r=0.9999， 线性范围为0.26～20.28 μg/ml。以所得色谱峰峰高为基线噪音的3倍为其最低检测限，血浆最低检测浓度为0.26μg/ml。
4.3 回收率试验 按标准曲线制备项下方法操作，分别制备高、中、低3种浓度的罗红霉素样品，将峰面积值代入标准曲线计算罗红霉素浓度，以测得值与加入值之比计算回收率。
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4.4 精密度试验 按标准曲线制备项下方法操作，分别制备高、中、低3种浓度的罗红霉素样品，1d内连续测定5次，计算日内相对标准差； 将制备的高、中、低浓度的血浆样品连续测定5d， 计算日间相对标准差。罗红霉素日内RSD小于5.05%，日间RSD小于5.65%。
结 果
1 血药浓度的测定
取空白血浆0.5 ml依法操作，结果表明空白血浆不干扰罗红霉素的测定。空白血浆加有罗红霉素的HPLC色谱图及实际样品HPLC色谱图见图1。9名受试者交叉口服3种制剂后，平均回收率为(99.87±0.80)%，平均血药浓度-时间曲线见图2。
图1 空白、标准及样品血浆HPLC色谱图
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图2 血药浓度-时间曲线
2 药代动力学参数及生物利用度
采用统计矩法计算AUC0→∞，3种罗红霉素制剂的药代动力学参数见表1。
表1 罗红霉素3种制剂主要药动学参数
片剂
颗粒剂
胶囊剂
AUC0→∝
152.82±29.33
148.00±30.06
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(μg.h/ml)
Ka(1/h)
0.9535±0.5102
2.2974±1.3215
2.8745±3.7753
Ke(1/h)
0.0810±0.0139
0.0753±0.0297
0.0773±0.0269
Tmax(h)
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2.78±0.26
2.22±0.51
2.67±0.83
t1/2(ke)(h)
8.79±1.56
10.71±2.15
9.75±2.58
Cmax(μg/ml)
9.51±1.56
9.31±1.79
9.33±1.42
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以罗红霉素片剂为标准参比制剂，分别计算颗粒剂和胶囊剂的相对生物利用度，结果分别为(98.34±16.57)%和(105.0±15.68)%。
讨 论
将罗红霉素片剂、胶囊剂、颗粒剂的AUC0～∞作对数转换后，进行方差分析，结果表明3种制剂之间差异没有显著性，实验周期之间也无显著性差异，而个体之间有差异，表明罗红霉素颗粒剂、胶囊剂与片剂生物等效。
参考文献
1 蒋学华，赵语，陈得光，等.罗红霉素胶囊剂的药动学与相对生物利用度. 中国药学杂志， 1997，31(4)∶221
2 Demotes MF,Vincon G, Jarry C.Micro-method for the determination in human plasma and urine by high-performance liquid chromatograph using electrochemical detection.J Chromatogr,1989,490(1)∶115
(收稿：1999-03-01 修回：1999-06-07), 百拇医药