丝裂霉素C-右旋糖酐的稳定性及抗瘤细胞活性的研究
作者：张荣河 齐春莲
单位：中国医科大学第一临床学院肿瘤科， 沈阳 110001
关键词：丝裂霉素C-右旋糖酐(MMC-D)；高效液相色谱法；抗 肿瘤活性；胃癌
中国新药杂志000411
摘要 目的：检测丝裂霉素C-右旋糖酐(MMC-D)的稳定性及抗瘤细胞活性。方法：采用高效液相色谱法检测MMC-D合成后及保存1年时的交联情况及稳定性，并以台盼 蓝染色方法测定MMC-D对胃癌细胞系MGC-803的抗肿瘤细胞活性。结果：MMC-D合成及保存1年后的交联率均为90%，其抗肿瘤活性与MMC相近。结论：MMC-D不降低MMC的抗肿瘤活性，稳定性好，为进入临床实验提供了良好的条件。
THE STABILITY AND ANTITUMOR ACTIVITY OF MITOMYCIN C-DEXTRA N CONJUGATE
, http://www.100md.com
Zhang Ronghe Qi Chunlian
(Department of Oncology, The First Affiliated Hospital of China Medical Uni versity, Shenyang 110001)
ABSTRACT OBJECTIVE:To test the stability and antitumor activity of mitomyc in C-dextran (MMC-D).METHODS:HPLC was adopted in determining the cross linkage and sta bility of mitomycin C-dextran conjugate post-synthesis and after 1 year of sto rage and its antitumor activity was tested on MGC-803 gastric cancer cells. RESULTS:The post-synthesis cross linkage of MMC-D with a value of 90% didn't changed after 1 year storage at 4℃ and no decomposition was obser ved. The antitumor activity of MMC-D was as effective as MMC. CONCLUSIONS:The MMC-D is stable under storage condition of 4℃ a nd has an antitumor activity similar to that of MMC.
, 百拇医药
KEY WORDS Mitomycin C-dextran (MMC-D); HPLC; Antitumor activi ty; Gastric cancer
恶性肿瘤的淋巴转移与患者预后有很大关系,预防和治疗恶性肿瘤淋巴结转移将改善患者 的预后和生存质量[1]。作者采用大分子右旋糖酐作为载体，6-氨基己酸为连接 剂，将丝裂霉素C交联于右旋糖酐，使其共价结合，合成了丝裂霉素C-右旋糖酐(MMC-D) ，已获得国家发明专利，并通过MMC浓度检测，证实MMC-D于淋巴组织中的分布有明显的增 多， 较长期滞留于局部用药部位，适合于肿瘤的局部化疗及淋巴化疗[2]。
本实验采用高效液相色谱法检测MMC-D保存1年时的交联情况及稳定性，并测定MMC-D 对胃癌细胞系MGC-803的抗肿瘤细胞活性。
材料和方法
, http://www.100md.com
1 高效液相色谱法检测MMC-D 交联情况
采用美国Waters液相色谱系统。分析柱：TSR-GEL3000W，流动相：pH 7.0,磷酸缓冲 液，流速：0.8ml/min，检测波长：365nm，灵敏度：0.2AUFS。
2 抗肿瘤细胞活性测定
2.1 胃癌细胞系MGC-803由山东师范大学建株，中国医大肿瘤研究所提供。
2.2 将MMC-D及MMC配制成4，3，2，1，0.5，0.l，0.025μg/ml的1640培养液为 溶剂的溶液，加入MGC-803细胞，以105个细胞/m1/孔加入24孔细胞培养板中，每个样 本 加3个孔。另外，将细胞直接加入1640培养液中为对照组。5%CO2，37℃下培养3d，台盼 蓝染色，计数，算出抑制率。
, 百拇医药
抑制率=(l-T/C)×100%
T为药物作用后的瘤细胞数，C为对照组的瘤细胞数。
结果
1 高效液相色谱法检测MMC-D交联情况
见图1。
图1 HPLC分析MMC-D的色谱图
MMC-D合成及保存1年后的交联率均为90%，于4℃冰箱内保存1年无裂解情况发生。
2 MMC-D及MMC对胃癌细胞系MGC-803的抑瘤细胞活性
见图2。
, http://www.100md.com
图2 MMC-D及MMC对胃癌细胞系MGC-803的
抑瘤细胞活性实验的对比
结果表明，对MMC-D及MMC对胃癌细胞系MGC-803的抑制率进行t检验，P>0.05, 所以MMC-D的抗肿瘤活性与MMC相近。
讨论
丝裂霉素C为乙撑亚胺类抗生素混合物中的一种成分，相对分子质量为33,434，是一个小分 子物质。组织中的MMC主要通过被动扩散和滤过作用经血液吸收并清除，而不经过淋巴管道 ，故治疗肿瘤的淋巴转移是困难的。本实验采用淋巴组织趋向性较好的T70大分子右旋糖酐 ，与MMC通过6-氨基己酸相连接，合成的MMC-D经证实是一种亲淋巴性的药 物[2]。
国外文献[3] 多采用凝胶色谱法检测MMC-D交联情况，需24h出结果，费力费时，而我们首先采用高效液相色谱法检测合成率及稳定性，30min出结果，快速、简 捷、准确。本实验合成后的交联率与国外报道[4]相近，而1年后的交联率尚 未见文献报道。
, http://www.100md.com
MMC-D带阳电荷，可吸附到带阴电荷的肿瘤细胞表面，不断释放完整的MMC,表 现出细胞毒性。MMC-D由化学水解酶水解，而不由细胞内的溶酶体酶降解，其分解速率是恒 定的，半衰期为30h。在72h培养中，大部分MMC-D均裂解为MMC，故MMC-D的抗肿瘤 活性与MMC相近[5]。
本实验提示，MMC-D不降低MMC的抗肿瘤活性，稳定性好，并根据已证实的淋巴结内浓 度高、缓释性等特点，可以认为MMC-D是治疗性肿瘤淋巴转移和腹膜转移的有效药物。
参考文献
1，张荣河，齐春莲.胃癌的淋巴化疗.国外医学肿瘤学分册,1993，20( 1)∶12
2，Takakura Y, Matsumoto S, Hashida M, et al. Enhanced lymphatic d elivery of mitomycin C conjugate with dextran. Cancer Res， 1984,44(6)∶25 05
, 百拇医药
3，Kato A, Takakura Y, Hashida M. et al. Physiochemical and ant itumor haracteristis of high molecular weight prodrug of mitomycin C. Chem Ph arm Bull, 1982,30(8)∶2951
4，Kojma T, Hashida M, Muranishi S, et al. Mitomycin dextran conjug ate:A high molecular weight pro-drug of mitomycin C. J Pharm, 1980,32(1) ∶30
5，Matsumoto S,Yamamoto A,Takakura Y,et al. Cellular interaction an d in vit ro antitumor activity of mitomycin C-dextran conjugate. Cancer Res， 1986,4 6(9)∶4463
收稿：1999-11-05
修回：1999-12-27, 百拇医药
单位：中国医科大学第一临床学院肿瘤科， 沈阳 110001
关键词：丝裂霉素C-右旋糖酐(MMC-D)；高效液相色谱法；抗 肿瘤活性；胃癌
中国新药杂志000411
摘要 目的：检测丝裂霉素C-右旋糖酐(MMC-D)的稳定性及抗瘤细胞活性。方法：采用高效液相色谱法检测MMC-D合成后及保存1年时的交联情况及稳定性，并以台盼 蓝染色方法测定MMC-D对胃癌细胞系MGC-803的抗肿瘤细胞活性。结果：MMC-D合成及保存1年后的交联率均为90%，其抗肿瘤活性与MMC相近。结论：MMC-D不降低MMC的抗肿瘤活性，稳定性好，为进入临床实验提供了良好的条件。
THE STABILITY AND ANTITUMOR ACTIVITY OF MITOMYCIN C-DEXTRA N CONJUGATE
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Zhang Ronghe Qi Chunlian
(Department of Oncology, The First Affiliated Hospital of China Medical Uni versity, Shenyang 110001)
ABSTRACT OBJECTIVE:To test the stability and antitumor activity of mitomyc in C-dextran (MMC-D).METHODS:HPLC was adopted in determining the cross linkage and sta bility of mitomycin C-dextran conjugate post-synthesis and after 1 year of sto rage and its antitumor activity was tested on MGC-803 gastric cancer cells. RESULTS:The post-synthesis cross linkage of MMC-D with a value of 90% didn't changed after 1 year storage at 4℃ and no decomposition was obser ved. The antitumor activity of MMC-D was as effective as MMC. CONCLUSIONS:The MMC-D is stable under storage condition of 4℃ a nd has an antitumor activity similar to that of MMC.
, 百拇医药
KEY WORDS Mitomycin C-dextran (MMC-D); HPLC; Antitumor activi ty; Gastric cancer
恶性肿瘤的淋巴转移与患者预后有很大关系,预防和治疗恶性肿瘤淋巴结转移将改善患者 的预后和生存质量[1]。作者采用大分子右旋糖酐作为载体，6-氨基己酸为连接 剂，将丝裂霉素C交联于右旋糖酐，使其共价结合，合成了丝裂霉素C-右旋糖酐(MMC-D) ，已获得国家发明专利，并通过MMC浓度检测，证实MMC-D于淋巴组织中的分布有明显的增 多， 较长期滞留于局部用药部位，适合于肿瘤的局部化疗及淋巴化疗[2]。
本实验采用高效液相色谱法检测MMC-D保存1年时的交联情况及稳定性，并测定MMC-D 对胃癌细胞系MGC-803的抗肿瘤细胞活性。
材料和方法
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1 高效液相色谱法检测MMC-D 交联情况
采用美国Waters液相色谱系统。分析柱：TSR-GEL3000W，流动相：pH 7.0,磷酸缓冲 液，流速：0.8ml/min，检测波长：365nm，灵敏度：0.2AUFS。
2 抗肿瘤细胞活性测定
2.1 胃癌细胞系MGC-803由山东师范大学建株，中国医大肿瘤研究所提供。
2.2 将MMC-D及MMC配制成4，3，2，1，0.5，0.l，0.025μg/ml的1640培养液为 溶剂的溶液，加入MGC-803细胞，以105个细胞/m1/孔加入24孔细胞培养板中，每个样 本 加3个孔。另外，将细胞直接加入1640培养液中为对照组。5%CO2，37℃下培养3d，台盼 蓝染色，计数，算出抑制率。
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抑制率=(l-T/C)×100%
T为药物作用后的瘤细胞数，C为对照组的瘤细胞数。
结果
1 高效液相色谱法检测MMC-D交联情况
见图1。
图1 HPLC分析MMC-D的色谱图
MMC-D合成及保存1年后的交联率均为90%，于4℃冰箱内保存1年无裂解情况发生。
2 MMC-D及MMC对胃癌细胞系MGC-803的抑瘤细胞活性
见图2。
, http://www.100md.com
图2 MMC-D及MMC对胃癌细胞系MGC-803的
抑瘤细胞活性实验的对比
结果表明，对MMC-D及MMC对胃癌细胞系MGC-803的抑制率进行t检验，P>0.05, 所以MMC-D的抗肿瘤活性与MMC相近。
讨论
丝裂霉素C为乙撑亚胺类抗生素混合物中的一种成分，相对分子质量为33,434，是一个小分 子物质。组织中的MMC主要通过被动扩散和滤过作用经血液吸收并清除，而不经过淋巴管道 ，故治疗肿瘤的淋巴转移是困难的。本实验采用淋巴组织趋向性较好的T70大分子右旋糖酐 ，与MMC通过6-氨基己酸相连接，合成的MMC-D经证实是一种亲淋巴性的药 物[2]。
国外文献[3] 多采用凝胶色谱法检测MMC-D交联情况，需24h出结果，费力费时，而我们首先采用高效液相色谱法检测合成率及稳定性，30min出结果，快速、简 捷、准确。本实验合成后的交联率与国外报道[4]相近，而1年后的交联率尚 未见文献报道。
, http://www.100md.com
MMC-D带阳电荷，可吸附到带阴电荷的肿瘤细胞表面，不断释放完整的MMC,表 现出细胞毒性。MMC-D由化学水解酶水解，而不由细胞内的溶酶体酶降解，其分解速率是恒 定的，半衰期为30h。在72h培养中，大部分MMC-D均裂解为MMC，故MMC-D的抗肿瘤 活性与MMC相近[5]。
本实验提示，MMC-D不降低MMC的抗肿瘤活性，稳定性好，并根据已证实的淋巴结内浓 度高、缓释性等特点，可以认为MMC-D是治疗性肿瘤淋巴转移和腹膜转移的有效药物。
参考文献
1，张荣河，齐春莲.胃癌的淋巴化疗.国外医学肿瘤学分册,1993，20( 1)∶12
2，Takakura Y, Matsumoto S, Hashida M, et al. Enhanced lymphatic d elivery of mitomycin C conjugate with dextran. Cancer Res， 1984,44(6)∶25 05
, 百拇医药
3，Kato A, Takakura Y, Hashida M. et al. Physiochemical and ant itumor haracteristis of high molecular weight prodrug of mitomycin C. Chem Ph arm Bull, 1982,30(8)∶2951
4，Kojma T, Hashida M, Muranishi S, et al. Mitomycin dextran conjug ate:A high molecular weight pro-drug of mitomycin C. J Pharm, 1980,32(1) ∶30
5，Matsumoto S,Yamamoto A,Takakura Y,et al. Cellular interaction an d in vit ro antitumor activity of mitomycin C-dextran conjugate. Cancer Res， 1986,4 6(9)∶4463
收稿：1999-11-05
修回：1999-12-27, 百拇医药