神健胶囊对D-半乳糖致衰模型小鼠的作用
作者：刘汇波 李斌 丰艳 何士大 李林
单位：首都医科大学宣武医院脑老化重点实验室，北京 100053
关键词：神健胶囊；D-半乳糖；动物模型；学习记忆；自由基
中国新药杂志000409 摘要 目的：研究神健胶囊对D-半乳糖致衰模型小鼠 学 习记忆能力和脂质过氧化的作用。方法：背部皮下注射D-半乳糖， 造成早衰模型，采用避暗反应测行为学指标，用生化法测MDA。结果：模型组与对照组相比，潜伏期显著缩短(P<0.05)，错误积分显著增加(P<0.05 )，脑MDA 含量显著增高(P<0.01)。结论：神健胶囊各剂量组均能改善D-半乳糖致衰小鼠的学习记忆功 能，其机制可能与降低脑组织中脂质过氧化物的含量有关。
EFFECT OF SHENJIAN CAPSULE ON AGING MICE
, 百拇医药
INDUCED BY D-GALACTOSE
Liu Huibo Li Bin Feng Yan He et al.
(Beijing Brain Aging Key Laboratory, Department of Pharmacology,Xuanwu H ospital
of Capital University of Medical Sciences,Beijing 100053)
ABSTRACT OBJECTIVE:The effect of Shenjian capsule on learning and memory function and lipid oxygen was investigated in aging mice induced by D-galactose.METHODS: Injection of D-galactose mimic a g ing model. The learning and memory test were realized with step through test,lip id peroxide was evaluated by measuring MDA in brain.RESULTS: Compare to the control group, aging model latent period an d passive avoidance response errors were significantly reduced and increased res pectively (P<0.05), MDA level in brain was signicantly increased (P<0.01 ). CONCLUSION:Shenjian capsule could improve the ability of learni ng and memory through reducing the MDA level in brain of aging mice.
, 百拇医药
KEY WORDS Shenjian capsule; D-galactose; Animal model;Learning and memory;Free radical
神健胶囊由制首乌等6味中药组成，具有补肾填精、养心安神、活血化瘀之功效[1 ， 2]。以往的实验证明，它能改善老年大鼠、血管性痴呆大鼠和基底前脑受损 大鼠学习记忆障碍。本研究观察了它对D-半乳糖致衰模型小鼠学习记忆能力和脂质过 氧化的影响。现将结果报告如下。
材料与方法
1 实验材料
1.1 动物 昆明种小鼠168只，雌雄各半，体重(25±2) g。
1.2 药品与试剂 维生素E及抗脑衰胶囊 (Sigma公司)，D-半 乳糖、硫代巴比妥钠(TBA)、四乙氧基丙烷、浓盐酸、磷钨酸和硫酸(北京化学试剂公司)。
, http://www.100md.com
1.3 主要仪器 小鼠避暗反应箱(中国医 学科学院药物研究所)。
2 实验方法
2.1 模型制作[3] 小鼠 背部皮下注射D-半乳糖50mg/(kg.d)，连续2个月，假手术组以生理盐水代替D-半乳糖。
2.2 分组与给药 分为7组,每组雌雄各 为12只。 造模的同时给药，ig,qd,连续2个月，进行行为学实验和生化实验。其中假手术组和模型组 均给水，抗脑衰组给予抗脑衰胶囊1.2g/kg，维生素E组给予维生素E 100mg/kg,神健胶囊小 、中、大3剂量组分别给予神健胶囊0.4，1.2，2.4g/kg。
2.3 指标测定
2.3.1 避暗反应[4] 利用小鼠喜好钻洞的习性，设计明暗 相 连的两箱，两箱间隔板底部留一孔洞。小鼠放入明箱后，会通过孔洞钻入暗箱。暗箱底部铺 设带电铜网，小鼠钻入暗箱立即受到电击，而返回明箱，从而获得记忆。10d 后再次实验， 采用分级记分法记录动物进入暗室的情况。单纯头进入暗箱(超过两耳)记1分，两前肢进记2 分，四肢全部进入记3分。同时以四肢全部进入暗室的时间为潜伏期，如未进入按300s记录 。
, http://www.100md.com
2.3.2 脑组织MDA的测定[3] 脑组织称 重，按1∶8加0.2mol/L pH7.4磷酸缓冲液匀浆，3 000r/min,10min,取上清液0.5ml 。加1/24 mol/L H2 SO4 4ml,10%磷钨酸0.5ml，搅拌，室温放置5min,3 000r/min离心10min,弃上清 液，倒控1min。 加1/24 mol/L H2SO4 2ml,10% 磷钨酸0.3ml ，搅拌，室温放置5min，3 000 r/m离心10min,弃上清液，倒控1min，按表1加试剂。
表1 添加试剂情况 试 剂
测定管
标准管
空白管
, 百拇医药 匀浆沉淀物
有
-
-
四乙氧基丙烷(5 nmol/ml )
-
0.5
-
生理盐水
0.5
-
0..5
0.05 mol/L HCl
, http://www.100md.com
1
1
1
TBA溶液6.7(mg/ml)
1
1
1
加塞混匀，置沸水浴1h后冷却，离心2 000r/min,5min,取上清液，532n m测A值
MDA浓度=f/F×5 nmol/ml(F:标准溶液A值，f:样品A值)。
结果
1 神健胶囊对小鼠避暗潜伏 时间和错误积分的影响
, http://www.100md.com
见表2。模型组雌、雄小鼠潜伏期均显著缩短( P<0.05)，错误积分显著增加(P<0.05)，说明D-半乳糖致衰模型小鼠学习记忆功 能下降，而维生素E、抗脑衰胶囊及各剂量神健胶囊均能显著改善D-半乳糖致衰模型小 鼠的学习记忆功能。
表2 神健胶囊对小鼠避暗潜伏时间和错误
积分的影响(
±s，n=12) 组 别
雄性
雌 性
潜伏时间(s)
错误积分
潜伏时间(s)
, http://www.100md.com
错误积分
假手术组
231.0±72.3a
1.60±1.8a
272.9±45.7a
0.42±0.67a
模型组
93.5±100.9
2.92±2.0
101.6±64.5
3.75±2.0
, 百拇医药
维生素E组
209.9±110.6a
0.78±1.3a
212.9±113.5
0.83±1.2a
抗脑衰组
265.0±82.7b
0.58±1.4a
224.2±99.5a
0.83±1.3a
, http://www.100md.com
神健胶囊(小)
215.1±94.3a
0.60±0.52a
255.0±89.5a
0.67±1 .3b
神健胶囊(中)
217.0±90.2a
0.60±0.70a
186.0±118.4
1.25±1.3 a
, 百拇医药
神健胶囊(大)
248.3±76.0a
0.67±0.98a
196.8±117.2
1.50± 2.1a
与模型组比，a:P<0.05,b:P<0.012 神健胶囊对小鼠脑MDA含量 的影响
见表3。模型组雌、雄小鼠脑MDA均显著升高(P=0.001)，而维生素E 、抗脑衰胶囊及各剂量神健胶囊均能显著减少D-半乳糖致衰模型小鼠脑中MDA的含量。
表3 神健胶囊对小鼠脑MDA含量的影响 (±s，n=8) 组 别
, 百拇医药
雄性
雌 性
MDA(nmol/ml)
P值
MDA(nmol/ml)
P值
假手术组
0.54±0.13
0.001
0 .12±0.06
<0.001
模型组
, http://www.100md.com 1.740±0.85
-
2.220±0.86
-
维生素E组
0.55±40.18
0.002
0.57±0.21
<0.001
抗脑衰组
0.58±0.19
0.005
, 百拇医药 1.40±0.69
0.267
神健胶囊(小)
0.72±0.25
0.01
0.99±0.41
0.007
神健胶囊(中)
0.60±0.24
0.006
0.65±0.44
0.001
, 百拇医药
神健胶囊(大)
0.37±0.15
<0.001
0.20±0.13
<0.001
讨论 老年性痴呆是以进行性认知功能障碍为主要临床表现的大脑变性疾病，其病因尚不清楚 ，目前认为脑的衰老是本病发生的基础。其中氧自由基能导致核酸、蛋白质、脂质膜的损伤 ，是导致脑老化的重要因素。长期注射D-半乳糖可使小鼠活性氧水平升高，脂质过氧化亢 进，脑功能减退[5],因此其模型是一种从自由基致病角度反映老年痴呆的动物模 型。
避暗实验表明，神健胶囊小、中、大剂量均能改善D-半乳糖致衰模型小鼠的学习 记忆功能 ，显著减少其脑组织MDA含量， 且这些功效可能是通过抗氧化作用实现的。
, 百拇医药
参考文献
1，李斌，李林，李宗信，等.补肾键脑1号合剂对小 鼠学习记忆及抗疲劳能力的影响.中国中药杂志，1999，24(2)∶10
2，刘汇波，李林，李斌，等.正交值法在中药方剂961的主药分析中的应用.中国临 床药理与治疗学杂志，1998，3(2)∶89
3，陈勤主编.抗衰老研究实验方法.北京：中国医药科技出版社，1996.111～113
4，钮心懿.行为药理实验方法.见：徐淑云，卞如濂，陈修主编.药理实验方法学. 第2版.北京：人民卫生出版社，1994.641～650
5，李文彬.D-半乳糖衰老模型与脑老化的研究.见：周金黄主编.中药免疫药理学 .北京：人民军医出版社，1994.63～74
收稿：1999-11-20
修回：2000-01-24, http://www.100md.com
单位：首都医科大学宣武医院脑老化重点实验室，北京 100053
关键词：神健胶囊；D-半乳糖；动物模型；学习记忆；自由基
中国新药杂志000409 摘要 目的：研究神健胶囊对D-半乳糖致衰模型小鼠 学 习记忆能力和脂质过氧化的作用。方法：背部皮下注射D-半乳糖， 造成早衰模型，采用避暗反应测行为学指标，用生化法测MDA。结果：模型组与对照组相比，潜伏期显著缩短(P<0.05)，错误积分显著增加(P<0.05 )，脑MDA 含量显著增高(P<0.01)。结论：神健胶囊各剂量组均能改善D-半乳糖致衰小鼠的学习记忆功 能，其机制可能与降低脑组织中脂质过氧化物的含量有关。
EFFECT OF SHENJIAN CAPSULE ON AGING MICE
, 百拇医药
INDUCED BY D-GALACTOSE
Liu Huibo Li Bin Feng Yan He et al.
(Beijing Brain Aging Key Laboratory, Department of Pharmacology,Xuanwu H ospital
of Capital University of Medical Sciences,Beijing 100053)
ABSTRACT OBJECTIVE:The effect of Shenjian capsule on learning and memory function and lipid oxygen was investigated in aging mice induced by D-galactose.METHODS: Injection of D-galactose mimic a g ing model. The learning and memory test were realized with step through test,lip id peroxide was evaluated by measuring MDA in brain.RESULTS: Compare to the control group, aging model latent period an d passive avoidance response errors were significantly reduced and increased res pectively (P<0.05), MDA level in brain was signicantly increased (P<0.01 ). CONCLUSION:Shenjian capsule could improve the ability of learni ng and memory through reducing the MDA level in brain of aging mice.
, 百拇医药
KEY WORDS Shenjian capsule; D-galactose; Animal model;Learning and memory;Free radical
神健胶囊由制首乌等6味中药组成，具有补肾填精、养心安神、活血化瘀之功效[1 ， 2]。以往的实验证明，它能改善老年大鼠、血管性痴呆大鼠和基底前脑受损 大鼠学习记忆障碍。本研究观察了它对D-半乳糖致衰模型小鼠学习记忆能力和脂质过 氧化的影响。现将结果报告如下。
材料与方法
1 实验材料
1.1 动物 昆明种小鼠168只，雌雄各半，体重(25±2) g。
1.2 药品与试剂 维生素E及抗脑衰胶囊 (Sigma公司)，D-半 乳糖、硫代巴比妥钠(TBA)、四乙氧基丙烷、浓盐酸、磷钨酸和硫酸(北京化学试剂公司)。
, http://www.100md.com
1.3 主要仪器 小鼠避暗反应箱(中国医 学科学院药物研究所)。
2 实验方法
2.1 模型制作[3] 小鼠 背部皮下注射D-半乳糖50mg/(kg.d)，连续2个月，假手术组以生理盐水代替D-半乳糖。
2.2 分组与给药 分为7组,每组雌雄各 为12只。 造模的同时给药，ig,qd,连续2个月，进行行为学实验和生化实验。其中假手术组和模型组 均给水，抗脑衰组给予抗脑衰胶囊1.2g/kg，维生素E组给予维生素E 100mg/kg,神健胶囊小 、中、大3剂量组分别给予神健胶囊0.4，1.2，2.4g/kg。
2.3 指标测定
2.3.1 避暗反应[4] 利用小鼠喜好钻洞的习性，设计明暗 相 连的两箱，两箱间隔板底部留一孔洞。小鼠放入明箱后，会通过孔洞钻入暗箱。暗箱底部铺 设带电铜网，小鼠钻入暗箱立即受到电击，而返回明箱，从而获得记忆。10d 后再次实验， 采用分级记分法记录动物进入暗室的情况。单纯头进入暗箱(超过两耳)记1分，两前肢进记2 分，四肢全部进入记3分。同时以四肢全部进入暗室的时间为潜伏期，如未进入按300s记录 。
, http://www.100md.com
2.3.2 脑组织MDA的测定[3] 脑组织称 重，按1∶8加0.2mol/L pH7.4磷酸缓冲液匀浆，3 000r/min,10min,取上清液0.5ml 。加1/24 mol/L H2 SO4 4ml,10%磷钨酸0.5ml，搅拌，室温放置5min,3 000r/min离心10min,弃上清 液，倒控1min。 加1/24 mol/L H2SO4 2ml,10% 磷钨酸0.3ml ，搅拌，室温放置5min，3 000 r/m离心10min,弃上清液，倒控1min，按表1加试剂。
表1 添加试剂情况 试 剂
测定管
标准管
空白管
, 百拇医药 匀浆沉淀物
有
-
-
四乙氧基丙烷(5 nmol/ml )
-
0.5
-
生理盐水
0.5
-
0..5
0.05 mol/L HCl
, http://www.100md.com
1
1
1
TBA溶液6.7(mg/ml)
1
1
1
加塞混匀，置沸水浴1h后冷却，离心2 000r/min,5min,取上清液，532n m测A值
MDA浓度=f/F×5 nmol/ml(F:标准溶液A值，f:样品A值)。
结果
1 神健胶囊对小鼠避暗潜伏 时间和错误积分的影响
, http://www.100md.com
见表2。模型组雌、雄小鼠潜伏期均显著缩短( P<0.05)，错误积分显著增加(P<0.05)，说明D-半乳糖致衰模型小鼠学习记忆功 能下降，而维生素E、抗脑衰胶囊及各剂量神健胶囊均能显著改善D-半乳糖致衰模型小 鼠的学习记忆功能。
表2 神健胶囊对小鼠避暗潜伏时间和错误
积分的影响(
±s，n=12) 组 别雄性
雌 性
潜伏时间(s)
错误积分
潜伏时间(s)
, http://www.100md.com
错误积分
假手术组
231.0±72.3a
1.60±1.8a
272.9±45.7a
0.42±0.67a
模型组
93.5±100.9
2.92±2.0
101.6±64.5
3.75±2.0
, 百拇医药
维生素E组
209.9±110.6a
0.78±1.3a
212.9±113.5
0.83±1.2a
抗脑衰组
265.0±82.7b
0.58±1.4a
224.2±99.5a
0.83±1.3a
, http://www.100md.com
神健胶囊(小)
215.1±94.3a
0.60±0.52a
255.0±89.5a
0.67±1 .3b
神健胶囊(中)
217.0±90.2a
0.60±0.70a
186.0±118.4
1.25±1.3 a
, 百拇医药
神健胶囊(大)
248.3±76.0a
0.67±0.98a
196.8±117.2
1.50± 2.1a
与模型组比，a:P<0.05,b:P<0.012 神健胶囊对小鼠脑MDA含量 的影响
见表3。模型组雌、雄小鼠脑MDA均显著升高(P=0.001)，而维生素E 、抗脑衰胶囊及各剂量神健胶囊均能显著减少D-半乳糖致衰模型小鼠脑中MDA的含量。
表3 神健胶囊对小鼠脑MDA含量的影响 (
±s，n=8) 组 别, 百拇医药
雄性
雌 性
MDA(nmol/ml)
P值
MDA(nmol/ml)
P值
假手术组
0.54±0.13
0.001
0 .12±0.06
<0.001
模型组
, http://www.100md.com 1.740±0.85
-
2.220±0.86
-
维生素E组
0.55±40.18
0.002
0.57±0.21
<0.001
抗脑衰组
0.58±0.19
0.005
, 百拇医药 1.40±0.69
0.267
神健胶囊(小)
0.72±0.25
0.01
0.99±0.41
0.007
神健胶囊(中)
0.60±0.24
0.006
0.65±0.44
0.001
, 百拇医药
神健胶囊(大)
0.37±0.15
<0.001
0.20±0.13
<0.001
讨论 老年性痴呆是以进行性认知功能障碍为主要临床表现的大脑变性疾病，其病因尚不清楚 ，目前认为脑的衰老是本病发生的基础。其中氧自由基能导致核酸、蛋白质、脂质膜的损伤 ，是导致脑老化的重要因素。长期注射D-半乳糖可使小鼠活性氧水平升高，脂质过氧化亢 进，脑功能减退[5],因此其模型是一种从自由基致病角度反映老年痴呆的动物模 型。
避暗实验表明，神健胶囊小、中、大剂量均能改善D-半乳糖致衰模型小鼠的学习 记忆功能 ，显著减少其脑组织MDA含量， 且这些功效可能是通过抗氧化作用实现的。
, 百拇医药
参考文献
1，李斌，李林，李宗信，等.补肾键脑1号合剂对小 鼠学习记忆及抗疲劳能力的影响.中国中药杂志，1999，24(2)∶10
2，刘汇波，李林，李斌，等.正交值法在中药方剂961的主药分析中的应用.中国临 床药理与治疗学杂志，1998，3(2)∶89
3，陈勤主编.抗衰老研究实验方法.北京：中国医药科技出版社，1996.111～113
4，钮心懿.行为药理实验方法.见：徐淑云，卞如濂，陈修主编.药理实验方法学. 第2版.北京：人民卫生出版社，1994.641～650
5，李文彬.D-半乳糖衰老模型与脑老化的研究.见：周金黄主编.中药免疫药理学 .北京：人民军医出版社，1994.63～74
收稿：1999-11-20
修回：2000-01-24, http://www.100md.com