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编号:10275239
贝那普利对糖尿病肾病的防治作用
http://www.100md.com 《中国新药杂志》 2000年第5期
     作者:陈晖 邵凤民 程银桢 刘章锁 张明轩

    单位:陈晖 邵凤民 程银桢(河南省人民医院肾内科,郑州 450003);刘章锁 张明轩(河南医科大学第一附属医院肾内科,郑州 450052)

    关键词:贝那普利;糖尿病肾病;血管紧张素-Ⅱ;内皮素-1;转化生长因子-β1

    中国新药杂志000508 摘要 目的:探讨贝那普利对糖尿病肾病的防治作用。方法:采用放免法和免疫组化法观察贝那普利对糖尿病大鼠血管紧张素Ⅱ(AT-Ⅱ)、内皮素(ET)、转化生长因子(TGF)的影响。结果:糖尿病大鼠AT-Ⅱ,ET-1明显升高,TGF-β1表达增强,贝那普利治疗后AT-Ⅱ,ET-1显著下降,TGF-β1表达减弱,肾脏肥大减轻,尿蛋白减少。结论:AT-Ⅱ、ET-1和TGF-β1可能参与糖尿病肾小球硬化的发生,贝那普利有保护肾脏延缓糖尿病肾病发生的作用。
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    PRELIMINARY STUDY OF THE PREVENTIVE EFFECT OF BENAZEPRIL

    ON DIABETIC NEPHROPATHY

    Chen Hui Shao Fengmin Cheng Yinzhen

    (Department of Nephrology,The People's Hospital of Henan

    Province, Zhengzhou 450003)

    ABSTRACT OBJECTIVE:To study the preventive effect of benazepril on diabetic nephropathy.METHODS:The effects of benazepril on renin-angiotensinⅡ(AT-Ⅱ),endothelin(ET),and transforming growth factor-β1(TGF-β1)in rats models were studied by radioimmunoassy and immunohistochemistry.RESULTS:In rats' model of diabetic,the pre-treatment plasma and renal level of AT-Ⅱ and ET-Ⅰ were significantly increased and the expression of renal TGF-β1 was obviously strengthened in comparison with nomal rats (P<0.05) and after treatment with benazepril,the level of AT-Ⅱ, ET significantly deceased and the expression of TGF-β1 was weakened. CONCLUSION:AT-Ⅱ , ET-Ⅰ, and TGF-β1 may be involved in glomerular sclerosis of diabetic mellitus. The post-treatment decrease in these parameters mean that benazepril shows preventive effect on diabetic nephropathy.
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    KEY WORDS Benazepril; Diabetic neprophathy; Angiotensin-Ⅱ;Endothelin-1; Transforming growth factor-β1

    糖尿病肾病早期表现为肾小球滤过率升高,微量蛋白尿和肾脏肥大,病理上以细胞外基质(ECM)增多为特点,但其机制尚不清楚。血管紧张素转换酶抑制剂(ACEⅠ)能延缓糖尿病肾病的发生,因此本实验利用链脲霉素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型,通过检测血管紧张素Ⅱ(AT-Ⅱ)、内皮素1(ET-1)及转化生长因子(TGF-β1)的变化,初步探讨糖尿病肾病的发病机制及贝那普利对其的防治。

    材料和方法

    1 实验动物

    纯系Wistar大鼠,雄性,体重180~280g
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    2 药品和试剂

    STZ为美国Sigma公司产品,使用时用0.1mol/L枸橼酸缓冲液(pH=4.0)临时配成2%的溶液。贝那普利为汽巴-嘉基公司产品。AT-Ⅱ和ET放免试剂盒分别为北京海科锐生物技术中心和东亚免疫研究所产品。ABC试剂盒为Vector公司产品,兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗体为Santa Cruz产品。

    3 实验方法

    3.1 糖尿病动物模型的建立[1] Wistar大鼠常规饲养1周后,称重,然后给大鼠单次腹腔注射STZ,剂量为60mg/kg,48~72h后剪断尾尖用血糖仪测血糖,凡血糖>16.65mmol/L的为糖尿病大鼠。实验期间动物自由饮水、饮食,不使用胰岛素及其他降糖药物。

    3.2 动物分组 实验共分3组:A为治疗组,n=12,糖尿病模型形成后即给予贝那普利治疗,剂量按10mg/kg计算,灌胃qd,持续6周;B为糖尿病组,n=12;C为正常对照组,n=12,腹腔注射等量的枸橼酸缓冲液。
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    4 观察指标

    在实验的第6周末时,将大鼠分别置于代谢笼中,收集24h尿液,然后称重,经心脏穿刺取血。大鼠处死后,迅速取出双肾,滤纸吸干称重,一侧肾脏放入10%福尔马林固定液中,留做组织学检查,另一侧肾脏去除包膜后制备成肾匀浆。血糖用葡萄糖氧化酶法测定;24h尿蛋白采用磺基水杨酸法测定;ET-1和AT-Ⅱ均用放免法测定,肾组织匀浆以每毫克蛋白中AT-Ⅱ含量表示;TGF-β1在肾组织中的表达采用免疫组化技术ABC法。

    5 统计学处理

    各数据用均数土标准差(±s)表示,免疫组化指标用秩和检验,其余各数据经SDAS统计软件处理,采用方差分析和q检验,以P<0.05作为差别有显著意义的检验标准。

    结 果
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    1 大鼠血糖、肾重/体重比值、尿蛋白的变化

    见表1。

    表1 各组大鼠血糖、肾重/体重比值和24h尿蛋白的比较 组别

    例数

    (只)

    血糖

    (mmol/L)

    肾重/体重

    (mg/g)

    尿蛋白

    (mg/24h尿)

    A
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    12

    30.50±5.09a

    8.09±0.61ab

    9.99±1.19ab

    B

    12

    29.18±5.36a

    11.71±1.29a

    36.43±9.07a

    C

    12
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    5.12±0.56

    6.86±0.39

    3.73±1.13

    与C组比较a:P<0.01;与B组比较b:P<0.01

    糖尿病组大鼠在整个实验期间血糖均维持在高水平,并出现消瘦、多饮、多尿等症状,说明模型是成功的,在体重下降的同时,肾脏体积明显增大,肾重/体重比显著高于对照组,同时尿蛋白排出增多。贝那普利治疗组血糖变化不大,但肾重/体重比及尿蛋白均明显低于糖尿病组。

    2 血、尿中ET-1和血浆、肾组织匀浆中AT-Ⅱ的变化

    见表2。

    表2 各组大鼠ET-1及AT-Ⅱ含量的变化 组别
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    例数(只)

    ET-1

    AT-Ⅱ

    血(pg/ml)

    尿(pg/24h尿)

    血(pg/ml)

    肾组织(pg/mg蛋白)

    A

    12

    139.12±21.07ab

    6246.60±1105.46ab

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    300.80±39.29ab

    B

    12

    316.39±48.04a

    13166.60±2330.10a

    569.35±13.58

    643.27±67.71a

    C

    12

    183.74±23.90
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    1071.62±133.84

    377.42±38.92

    346.04±41.54

    与C组比a:P<0.01;与B组比较b:P<0.01

    糖尿病组大鼠血、尿中ET-1的含量较正常组高,二者有显著差异(P<0.01),贝那普利治疗组则明显下降(P<0.01)。6周时血浆和肾组织匀浆中AT-Ⅱ的含量在糖尿病组大鼠明显升高,经贝那普利治疗后显著下降(P<0.01)。

    3 TGF-β1在肾组织中的表达

    TGF-β1的阳性表达为胞浆着色,正常大鼠肾小管有弱表达,肾小球未见表达。糖尿病大鼠同样在肾小管表达,表达程度较正常大鼠强烈,有明显统计学差异(P<0.01)。贝那普利治疗后,TGF-β1表达减弱,二者有统计学意义(P<0.01)。
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    讨 论

    近年来,分子生物学技术已经证实了肾脏具有独立的肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAS)[2]。AT-Ⅱ是RAS的主要效应分子,它不但参与肾小球血流动力学的调节,而且参与肾小球的生长和硬化。本实验中糖尿病大鼠血浆、肾组织匀浆中AT-Ⅱ含量均明显升高,与文献报道[3]一致,提示糖尿病时血浆和肾组织RAS活性升高,AT-Ⅱ在早期糖尿病肾病的发生中可能起重要作用。

    Fukui等[4]对糖尿病大鼠动物模型的观察发现,肾小球ET-1的mRNA表达增多,并随时间的延长、尿蛋白排泄增加和肾功能的降低而增高。本实验采用放免法测定糖尿病大鼠血、尿中ET-1的水平,发现均较正常明显升高,证实了ET-1参与早期糖尿病肾病的形成。在自发性糖尿病BB鼠中发现,3d肾小球内TGF-β1的mRNA水平即开始升高[5]。本实验在6周时观察到糖尿病大鼠肾小管上TGF-β1的强表达,早期持续TGF-β1表达升高,不但说明TGF-β1与肾脏肥大有关,而且提示这种因子参与糖尿病肾病晚期基质的积聚和组织硬化。
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    贝那普利是新一代非硫含羟基的ACEI,它通过抑制血管紧张素转换酶,使循环和组织中AT-Ⅱ水平下降。同时可降低肾脏ET-1的mRNA和TGF-β1的表达,抑制其介导的促细胞生长和增殖作用,减轻肾脏肥大,减少尿蛋白的排出。提示贝那普利有延缓糖尿病肾小球硬化发生的作用。

    参考文献

    1,于德民,吴锐,尹潍,等.实验性链脲佐菌素糖尿病动物模型的研究.中国糖尿病杂志,1995,3(2)∶105

    2,Cocmpbell DJ. Circulating and tissue angiotensin systems.J Clin Invest,1987,79(1)∶1

    3,Kikkawa R, Kitamura E, Fujiwara Y ,et al. Biphasic alteration of renin-angiotensin-aldosterone system in streptozotocin-diabetic rats.Renal Physiol,1986,9(2)∶187
, 百拇医药
    4,Fukui M, Nakamura T, Ebihara I,et al. Effects of enalapril on endothelin-1 and growth factor gene expression in diabetic rat glomeruli.J Lab Clin Med,1994,123(6)∶763

    5,Osterby R. Early phases in the development of diabetes glomerulopathy:a quantitative electron microscopic study. Acta Med Scand,1974,574(Suppl)∶S3

    收稿:1999-05-07

    修回:1999-12-21, 百拇医药