高效液相色谱法测定盐酸阿扑吗啡舌下片的含量
作者：陈世凤 江燕 艾玉锁
单位：湖北省药品检验所，武汉 430064
关键词：盐酸阿扑吗啡；舌下片；高效液相色谱法
中国新药杂志001112 [摘要]目的：研究HPLC法测定盐酸阿扑吗啡的方法及条件。方法：色谱柱InertsilODS-3 C18(4.6mm×150mm,5μm)流动相为乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸(16∶84∶0.4)，检测波长273nm。结果：盐酸阿扑吗啡在4.0～32.0 μg/ml范围内线性关系良好，其回归方程为A=1 956.8W+268.0，r=0.9998，平均回收率(n=9)为99.8%。结论：本法快速、准确、重现性高。
[中图分类号]R927.2 [文献标识码]B
, 百拇医药 [中图分类号]1003-3734(2000)11-0768-02
Determination of apomorphine HCl in sublingual tablets by HPLC
CHEN Shi-feng,JIANG Yan,AI Yu-suo
(Hubei Institute for Drug Control,Wuhan 430064，China)
[Abstract]Objective:To develop a HPLC method for determination of apomorphine HCl in sublingual tablets.Methods:The chromatographic conditions used were:a InertsilODS-3 C18 column(4.6 mm×150 mm,5μm);a mobile phase consisting of acetonitrile∶0.1 mol/L sodium dihydrogen phosphate solution∶phosphoric acid(16∶84∶0.4)and a UV detector at 273 nm.Results:Apomorphine has a linear range of 4.0～32.0μg/ml(r=0.9998),an average recoveries(n=9) of 99.8% and a RSD of 0.9%.Conclusion:A rapid,accurate,and reproducible HPLC method for determination of apomorphine was established.
, 百拇医药
[Key words]apomorphine hydrochloride;sublingual tablets;HPLC
盐酸阿扑吗啡(apomorphine hydrochloride)为吗啡的衍生物，系中枢多巴胺D2受体激动剂，为非管制药品，无依赖性，其舌下片制剂是目前用于治疗男性勃起机能障碍的新药[1] 。中国药典1995版收载的注射液和美国药典24版收载的片剂含量测定为提取-酸碱滴定法。本实验用HPLC法测定盐酸阿扑吗啡舌下片的含量及含量均匀度。
材料与方法
1 仪器与试药
日本岛津LC-10A型高效液相色谱仪，SPD-10A型检测器，C-R6A型色谱数据处理仪；盐酸阿扑吗啡对照品(湖北省医药工业研究所)，乙腈(色谱纯)，磷酸二氢钠和磷酸及盐酸(分析纯)，盐酸阿扑吗啡舌下片(湖北省医药工业研究所，批号20000301,20000302,20000303)。
, 百拇医药
2 实验方法
2.1 色谱条件 色谱柱： InertsilODS-3 C18(4.6mm×150mm,5μm) ；流动相为乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸(16∶84∶0.4)，流速1.0ml/min；检测波长273nm；进样量20μl。
在上述色谱条件下，盐酸阿扑吗啡峰的保留时间为6.5min，色谱图见图1，按盐酸阿扑吗啡峰计算理论塔板数为7 500。
A对照品色谱图；B舌下片色谱图；C?空白辅料色谱图
图1 盐酸阿扑吗啡色谱图
2.2 线性关系 取经105℃干燥至恒重的盐酸阿扑吗啡对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸液(pH=1)制成0.4mg/ml的溶液，分别吸取0.5，1，2，3，4ml，用0.1mol/L盐酸液稀释至50ml。精密量取20μl注入液相色谱仪，色谱峰面积(A)与重量(W)在4.0～32.0μg/ml范围内线性关系良好，回归方程为A=1 956.8W+268.0，r=0.9998。
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2.3 回收率测定 取经105℃干燥至恒重的盐酸阿扑吗啡对照品约20mg，精密称定，用0.1mol/L盐酸液溶解并稀释至50ml。精密量取10.0ml，置已按处方加入空白辅料的250ml量瓶中，用0.1mol/L盐酸液稀释至刻度，照含量测定项下的方法测定，计算平均回收率和RSD。
2.4 精密度试验 取对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积，计算RSD。
2.5 稳定性试验 取供试品溶液，分别于0，3，6，12，24h进样，记录峰面积，计算RSD。
2.6 含量测定 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸阿扑吗啡4mg)，置250ml量瓶中，用0.1mol/L盐酸液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取105℃干燥至恒重的盐酸阿扑吗啡对照品适量，加0.1mol/L盐酸液溶解并定量稀释成16μg/ml的溶液，作为对照品溶液。分别量取供试品溶液和对照品溶液各20μl进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。
, 百拇医药
含量均匀度(盐酸阿扑吗啡舌下片的规格是4mg)：取本品10片，分别置250ml量瓶中，用0.1mol/L盐酸液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，照含量测定项下的方法测定。
结 果
盐酸阿扑吗啡舌下片的含量及含量均匀度见表1。
表1 含量及含量均匀度测定结果 (n=3) 批 号
含量结果(%)
含量均匀度范围(%)
(%)
A+1.80S[2]
20000301
, http://www.100md.com
102.7
99.0～107.4
102.6
7.5
20000302
102.5
97.3～104.7
102.3
6.6
20000303
102.1
99.4～106.9
, http://www.100md.com
102.9
6.6
盐酸阿扑吗啡的平均回收率为99.8%(n=9)，RSD为0.9%；精密度试验中的RSD为0.8%。稳定性试验中的RSD为0.5%，表明本实验稳定性和重现性均好。
讨 论
国内对盐酸阿扑吗啡治疗男性勃起机能障碍的研究开发尚无报道，故未见文献报道采用HPLC法测定盐酸阿扑吗啡舌下片的含量。本实验根据盐酸阿扑吗啡的物理特性[3，4]，通过采用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钠等不同的流动相进行比较，最终选择乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸为流动相，盐酸阿扑吗啡峰的保留时间适中，峰形好且无拖尾现象。又因以流动相为溶剂的盐酸阿扑吗啡对照品溶液，在200～400nm范围内进行紫外扫描，发现在273nm的波长处有最大吸收，故选择在273nm的波长处为测定波长。
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本品辅料成分较多，若参照盐酸阿扑吗啡注射液[5]和盐酸阿扑吗啡片[6]的含量测定方法，采用无过氧化物的乙醚提取再进行酸碱滴定，不仅操作繁琐，而且对回收率的测定也有干扰。采用HPLC法测定盐酸阿扑吗啡舌下片的含量及含量均匀度，不仅空白辅料无干扰(见图1)，而且操作简便、省时，专属性强，结果准确。
[作者简介]陈世凤(1950-)，女，副主任技师。从事生物制品和化学药品分析。
[参考文献]
[1]AVA，scrip[R].Amercian:Tap company publishing house,1999,(2437)∶22.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典.1995年版[S].北京：化学工业出版社，1995.附录78.
, 百拇医药
[3]安登魁.药物分析[M].济南：济南出版社，1992.1154-1163.
[4]Muhtadi FJ.Anglytical profiles of Drug Substance[M].New York:Academic Press,1991.121-166.
[5]ISBN7-5025-1527-5.中华人民共和国药典.1995年版[S].北京：化学工业出版社，1995.641.
[6]ISBN1-889788-03-01.USP.24版[S].US:The United States Pharmacopeial Convention Inc.1999,156-157.
收稿日期：2000-06-23
修回日期：2000-08-23, http://www.100md.com
单位：湖北省药品检验所，武汉 430064
关键词：盐酸阿扑吗啡；舌下片；高效液相色谱法
中国新药杂志001112 [摘要]目的：研究HPLC法测定盐酸阿扑吗啡的方法及条件。方法：色谱柱InertsilODS-3 C18(4.6mm×150mm,5μm)流动相为乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸(16∶84∶0.4)，检测波长273nm。结果：盐酸阿扑吗啡在4.0～32.0 μg/ml范围内线性关系良好，其回归方程为A=1 956.8W+268.0，r=0.9998，平均回收率(n=9)为99.8%。结论：本法快速、准确、重现性高。
[中图分类号]R927.2 [文献标识码]B
, 百拇医药 [中图分类号]1003-3734(2000)11-0768-02
Determination of apomorphine HCl in sublingual tablets by HPLC
CHEN Shi-feng,JIANG Yan,AI Yu-suo
(Hubei Institute for Drug Control,Wuhan 430064，China)
[Abstract]Objective:To develop a HPLC method for determination of apomorphine HCl in sublingual tablets.Methods:The chromatographic conditions used were:a InertsilODS-3 C18 column(4.6 mm×150 mm,5μm);a mobile phase consisting of acetonitrile∶0.1 mol/L sodium dihydrogen phosphate solution∶phosphoric acid(16∶84∶0.4)and a UV detector at 273 nm.Results:Apomorphine has a linear range of 4.0～32.0μg/ml(r=0.9998),an average recoveries(n=9) of 99.8% and a RSD of 0.9%.Conclusion:A rapid,accurate,and reproducible HPLC method for determination of apomorphine was established.
, 百拇医药
[Key words]apomorphine hydrochloride;sublingual tablets;HPLC
盐酸阿扑吗啡(apomorphine hydrochloride)为吗啡的衍生物，系中枢多巴胺D2受体激动剂，为非管制药品，无依赖性，其舌下片制剂是目前用于治疗男性勃起机能障碍的新药[1] 。中国药典1995版收载的注射液和美国药典24版收载的片剂含量测定为提取-酸碱滴定法。本实验用HPLC法测定盐酸阿扑吗啡舌下片的含量及含量均匀度。
材料与方法
1 仪器与试药
日本岛津LC-10A型高效液相色谱仪，SPD-10A型检测器，C-R6A型色谱数据处理仪；盐酸阿扑吗啡对照品(湖北省医药工业研究所)，乙腈(色谱纯)，磷酸二氢钠和磷酸及盐酸(分析纯)，盐酸阿扑吗啡舌下片(湖北省医药工业研究所，批号20000301,20000302,20000303)。
, 百拇医药
2 实验方法
2.1 色谱条件 色谱柱： InertsilODS-3 C18(4.6mm×150mm,5μm) ；流动相为乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸(16∶84∶0.4)，流速1.0ml/min；检测波长273nm；进样量20μl。
在上述色谱条件下，盐酸阿扑吗啡峰的保留时间为6.5min，色谱图见图1，按盐酸阿扑吗啡峰计算理论塔板数为7 500。
A对照品色谱图；B舌下片色谱图；C?空白辅料色谱图
图1 盐酸阿扑吗啡色谱图
2.2 线性关系 取经105℃干燥至恒重的盐酸阿扑吗啡对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸液(pH=1)制成0.4mg/ml的溶液，分别吸取0.5，1，2，3，4ml，用0.1mol/L盐酸液稀释至50ml。精密量取20μl注入液相色谱仪，色谱峰面积(A)与重量(W)在4.0～32.0μg/ml范围内线性关系良好，回归方程为A=1 956.8W+268.0，r=0.9998。
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2.3 回收率测定 取经105℃干燥至恒重的盐酸阿扑吗啡对照品约20mg，精密称定，用0.1mol/L盐酸液溶解并稀释至50ml。精密量取10.0ml，置已按处方加入空白辅料的250ml量瓶中，用0.1mol/L盐酸液稀释至刻度，照含量测定项下的方法测定，计算平均回收率和RSD。
2.4 精密度试验 取对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积，计算RSD。
2.5 稳定性试验 取供试品溶液，分别于0，3，6，12，24h进样，记录峰面积，计算RSD。
2.6 含量测定 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸阿扑吗啡4mg)，置250ml量瓶中，用0.1mol/L盐酸液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取105℃干燥至恒重的盐酸阿扑吗啡对照品适量，加0.1mol/L盐酸液溶解并定量稀释成16μg/ml的溶液，作为对照品溶液。分别量取供试品溶液和对照品溶液各20μl进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。
, 百拇医药
含量均匀度(盐酸阿扑吗啡舌下片的规格是4mg)：取本品10片，分别置250ml量瓶中，用0.1mol/L盐酸液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，照含量测定项下的方法测定。
结 果
盐酸阿扑吗啡舌下片的含量及含量均匀度见表1。
表1 含量及含量均匀度测定结果 (n=3) 批 号
含量结果(%)
含量均匀度范围(%)
(%)A+1.80S[2]
20000301
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102.7
99.0～107.4
102.6
7.5
20000302
102.5
97.3～104.7
102.3
6.6
20000303
102.1
99.4～106.9
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102.9
6.6
盐酸阿扑吗啡的平均回收率为99.8%(n=9)，RSD为0.9%；精密度试验中的RSD为0.8%。稳定性试验中的RSD为0.5%，表明本实验稳定性和重现性均好。
讨 论
国内对盐酸阿扑吗啡治疗男性勃起机能障碍的研究开发尚无报道，故未见文献报道采用HPLC法测定盐酸阿扑吗啡舌下片的含量。本实验根据盐酸阿扑吗啡的物理特性[3，4]，通过采用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钠等不同的流动相进行比较，最终选择乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸为流动相，盐酸阿扑吗啡峰的保留时间适中，峰形好且无拖尾现象。又因以流动相为溶剂的盐酸阿扑吗啡对照品溶液，在200～400nm范围内进行紫外扫描，发现在273nm的波长处有最大吸收，故选择在273nm的波长处为测定波长。
, http://www.100md.com
本品辅料成分较多，若参照盐酸阿扑吗啡注射液[5]和盐酸阿扑吗啡片[6]的含量测定方法，采用无过氧化物的乙醚提取再进行酸碱滴定，不仅操作繁琐，而且对回收率的测定也有干扰。采用HPLC法测定盐酸阿扑吗啡舌下片的含量及含量均匀度，不仅空白辅料无干扰(见图1)，而且操作简便、省时，专属性强，结果准确。
[作者简介]陈世凤(1950-)，女，副主任技师。从事生物制品和化学药品分析。
[参考文献]
[1]AVA，scrip[R].Amercian:Tap company publishing house,1999,(2437)∶22.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典.1995年版[S].北京：化学工业出版社，1995.附录78.
, 百拇医药
[3]安登魁.药物分析[M].济南：济南出版社，1992.1154-1163.
[4]Muhtadi FJ.Anglytical profiles of Drug Substance[M].New York:Academic Press,1991.121-166.
[5]ISBN7-5025-1527-5.中华人民共和国药典.1995年版[S].北京：化学工业出版社，1995.641.
[6]ISBN1-889788-03-01.USP.24版[S].US:The United States Pharmacopeial Convention Inc.1999,156-157.
收稿日期：2000-06-23
修回日期：2000-08-23, http://www.100md.com