bax基因在小细胞肺癌中的表达及意义
作者：刘亚丽 武棣节 王文勇 李玉松
单位：刘亚丽 武棣节 王文勇 李玉松(第四军医大学西京医院呼吸内科，西安710032)
关键词：凋亡；bax基因；肺癌；免疫组织化学
细胞与分子免疫学杂志990110
摘要 为了研究促凋亡基因bax在小细胞肺癌(SCLC)中的表达和意义，我们采用免疫细胞化学法检测了30例SCLC中的bax基因的表达情况。结果表明，阳性率达70%(21/30)，12例慢性支气管炎的阳性率为16.7%(2/12)，两组比较差异显著(P<0.01)。另外发现，bax基因的表达与组织亚型无关，提示bax基因在SCLC中的较高表达可能与SCLC细胞的凋亡有一定的关系。
中国图书资料分类号 Q78
, http://www.100md.com
Expression and significance of bax gene in small cell lung carcinoma
LiuYali,Wu Dijie,Wang Wenyong,LiYusong(Department of Respiration,Xijing Hospital，the Fourth Military Medical University, Xi ’an 710032)
Keywords apoptosis bax gene lung cancer immunohistochemistry
Abstract In order to study the expression and significance of bax gene in small cell lung cancer(SCLC), bax protein was detected in 30 cases of SCLC by immunohistochemistry. The result showed that 21 of 30 SCLC and 2 out of 12 chronic bronnchitis were stained positive. Bax protein expression in SCLC was higher than that in chronic bronchitis (P<0.01).There was no difference in expression of bax gene between tissue subtypes (P>0.05). The results suggested that bax gene may be involved in the modulation of apoptosis in SCLC.
, http://www.100md.com
肿瘤的发生和细胞的增殖与凋亡有关。二者平衡的改变与促凋亡基因和抑凋亡基因的转录水平失调有关。bax基因是在人前B细胞基因文库中发现的一种凋亡调节基因，其转录产物bax蛋白(bcl-2associated x protein)具有促进凋亡的作用〔1〕。关于bax基因在SCLC中表达的报道尚少。我们采用免疫组织化学法，检测了30例SCLC中促凋亡基因bax的表达，旨在探讨其在SCLC细胞凋亡调变中的作用。
1 材料和方法
1.1 标本来源 30例SCLC患者的纤维支气管镜活检标本，均来自本院病理科。其中燕麦细胞癌14例，中间细胞型癌10例，未分化癌6例(其中有2例神经特异性烯醇酶染色呈阳性)。同时取12例慢性支气管炎标本作为对照。切片标本均经10%福尔马林固定，石腊包埋和做5μm的连续切片。
1.2 方法 采用免疫组化SABC法。切片标本微波处理，按说明书操作。一抗为兔抗人bax多克隆抗体(Santacruz，N-20)的工作浓度为1∶500；二抗为羊抗兔IgG，为武汉博士德公司产品，工作浓度为1∶100；SABC复合物(武汉博士德公司产品)，工作浓度为1∶100。阳性对照为已知bax阳性的组织切片；阴性对照设PBS替代一抗的空白对照和正常兔血清(1∶50)替代一抗的替代对照。
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1.3 结果评定 阴性标本(-)：阳性细胞计数<5% ， 或背景同空白对照 ；阳性细胞数在5%～50%者为弱阳性(+);阳性细胞数>50%者为强阳性(++)。
1.4 统计学处理 率的比较采用卡方检验；不同亚型间bax基因表达的比较采用秩和检验。
2 结果
2.1 bax的分布 bax阳性物质呈棕黄色颗粒状，位于阳性标本的癌细胞胞浆中。阳性细胞在癌组织中呈弥漫性分布，少数呈局灶分布。
2.2 阳性率 30例SCLC中，bax基因表达的阳性率为70%(21/30);在12例慢性支气管炎组织中的表达率为16.7%(2/12)，两组间差异显著(P<0.01)。bax基因在不同组织亚型间的表达及表达强度无显著差异(P>0.05)。
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图1小细胞肺癌胞浆中的bax阳性物质(SABC×400)
Fig 1 Bax immunoreactive substances in cytoplasm of SCLC (SABC× 400)
表1 bax基因在SCLC中的表达
Tab 1 Expression of bax gene in SCLCS Type
No.of cases
No.of positive staining
Intensity of staining
-
+
, 百拇医药
++
OCC
14
10
4
7
3
MCC
10
7
3
5
2
UCC
, http://www.100md.com
6
4
1
1
0
OCC: Oat cell cancer; MCC: Middle cell cancer; UCC:Undifferentiated cell cancer
3 讨论
肿瘤细胞的凋亡和增殖是肿瘤发生、发展过程中出现的共同现象，受凋亡相关基因的调控。调控系统非常复杂，受到多种凋亡相关基因表达产物的水平和相互作用的控制。凋亡相关基因bax的编码产物的促凋亡作用，是通过与抑制凋亡基因bcl2的表达蛋白形成异源二聚体抑制bcl-2而发挥促凋亡作用的〔1〕。已发现bax基因参与乳腺癌和直肠癌等肿瘤的凋亡调变过程。我们应用免疫组化法，检测了bax基因在SCLC中的表达，发现其在SCLC组织中的表达明显高于慢性支气管炎组。说明在增殖活跃的癌细胞中凋亡也明显，与Hiho等〔2〕研究发现，在肝细胞癌中，肿瘤细胞的增殖指数与凋亡指数呈正相关(r=0.84，P<0.01)相一致。bax基因在癌组织中的表达高于在良性病变组织中的表达的原因是，癌细胞不仅较良性病变细胞增殖活跃,而且凋亡也明显。本研究中SCLC各亚型间bax基因的表达率及强度无明显差异，且其表达的阳性率与Apolinario等〔3〕报道的66例非小细胞肺癌中bax的阳性率(71%)相接近。另外，bax基因在SCLC中表达程度的不同，表明其参与了部分SCLC的凋亡调控，至于其促凋亡作用的具体途经尚需进一步研究。
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作者简介：刘亚丽，41岁，主治医师，学士，96基金班学员
原单位：呼和浩特市武警内蒙古总队医院内科，邮编：010030
Tel.(0471)59777992075
参考文献
[1]Oltvai ZN, Milliman CL, Korsmeyer SJ, et al. BCL-2 heterodimerizes in vivo with a conserved hemology bax, that accelerates programmed cell death. Cell, 1993；74(4):609～619
[2]Carriage MT, Henson DE. Liver, gallbladder extrohepatic bile ducts and pancreas. Cancer, 1995; 75:171～190
[3]Apolinario RM, Deville W, Dingemans AM, et al. Prognostic value of the expression of P53, bcl-2 and bax oncoproteins and neovascularization in patients with radically resected non small cell lung cancer. J Clin Oncol, 1997；15(6): 2456-2466
(收稿 1998-06-03 修回 1998-08-24), 百拇医药
单位：刘亚丽 武棣节 王文勇 李玉松(第四军医大学西京医院呼吸内科，西安710032)
关键词：凋亡；bax基因；肺癌；免疫组织化学
细胞与分子免疫学杂志990110
摘要 为了研究促凋亡基因bax在小细胞肺癌(SCLC)中的表达和意义，我们采用免疫细胞化学法检测了30例SCLC中的bax基因的表达情况。结果表明，阳性率达70%(21/30)，12例慢性支气管炎的阳性率为16.7%(2/12)，两组比较差异显著(P<0.01)。另外发现，bax基因的表达与组织亚型无关，提示bax基因在SCLC中的较高表达可能与SCLC细胞的凋亡有一定的关系。
中国图书资料分类号 Q78
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Expression and significance of bax gene in small cell lung carcinoma
LiuYali,Wu Dijie,Wang Wenyong,LiYusong(Department of Respiration,Xijing Hospital，the Fourth Military Medical University, Xi ’an 710032)
Keywords apoptosis bax gene lung cancer immunohistochemistry
Abstract In order to study the expression and significance of bax gene in small cell lung cancer(SCLC), bax protein was detected in 30 cases of SCLC by immunohistochemistry. The result showed that 21 of 30 SCLC and 2 out of 12 chronic bronnchitis were stained positive. Bax protein expression in SCLC was higher than that in chronic bronchitis (P<0.01).There was no difference in expression of bax gene between tissue subtypes (P>0.05). The results suggested that bax gene may be involved in the modulation of apoptosis in SCLC.
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肿瘤的发生和细胞的增殖与凋亡有关。二者平衡的改变与促凋亡基因和抑凋亡基因的转录水平失调有关。bax基因是在人前B细胞基因文库中发现的一种凋亡调节基因，其转录产物bax蛋白(bcl-2associated x protein)具有促进凋亡的作用〔1〕。关于bax基因在SCLC中表达的报道尚少。我们采用免疫组织化学法，检测了30例SCLC中促凋亡基因bax的表达，旨在探讨其在SCLC细胞凋亡调变中的作用。
1 材料和方法
1.1 标本来源 30例SCLC患者的纤维支气管镜活检标本，均来自本院病理科。其中燕麦细胞癌14例，中间细胞型癌10例，未分化癌6例(其中有2例神经特异性烯醇酶染色呈阳性)。同时取12例慢性支气管炎标本作为对照。切片标本均经10%福尔马林固定，石腊包埋和做5μm的连续切片。
1.2 方法 采用免疫组化SABC法。切片标本微波处理，按说明书操作。一抗为兔抗人bax多克隆抗体(Santacruz，N-20)的工作浓度为1∶500；二抗为羊抗兔IgG，为武汉博士德公司产品，工作浓度为1∶100；SABC复合物(武汉博士德公司产品)，工作浓度为1∶100。阳性对照为已知bax阳性的组织切片；阴性对照设PBS替代一抗的空白对照和正常兔血清(1∶50)替代一抗的替代对照。
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1.3 结果评定 阴性标本(-)：阳性细胞计数<5% ， 或背景同空白对照 ；阳性细胞数在5%～50%者为弱阳性(+);阳性细胞数>50%者为强阳性(++)。
1.4 统计学处理 率的比较采用卡方检验；不同亚型间bax基因表达的比较采用秩和检验。
2 结果
2.1 bax的分布 bax阳性物质呈棕黄色颗粒状，位于阳性标本的癌细胞胞浆中。阳性细胞在癌组织中呈弥漫性分布，少数呈局灶分布。
2.2 阳性率 30例SCLC中，bax基因表达的阳性率为70%(21/30);在12例慢性支气管炎组织中的表达率为16.7%(2/12)，两组间差异显著(P<0.01)。bax基因在不同组织亚型间的表达及表达强度无显著差异(P>0.05)。
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图1小细胞肺癌胞浆中的bax阳性物质(SABC×400)
Fig 1 Bax immunoreactive substances in cytoplasm of SCLC (SABC× 400)
表1 bax基因在SCLC中的表达
Tab 1 Expression of bax gene in SCLCS Type
No.of cases
No.of positive staining
Intensity of staining
-
+
, 百拇医药
++
OCC
14
10
4
7
3
MCC
10
7
3
5
2
UCC
, http://www.100md.com
6
4
1
1
0
OCC: Oat cell cancer; MCC: Middle cell cancer; UCC:Undifferentiated cell cancer
3 讨论
肿瘤细胞的凋亡和增殖是肿瘤发生、发展过程中出现的共同现象，受凋亡相关基因的调控。调控系统非常复杂，受到多种凋亡相关基因表达产物的水平和相互作用的控制。凋亡相关基因bax的编码产物的促凋亡作用，是通过与抑制凋亡基因bcl2的表达蛋白形成异源二聚体抑制bcl-2而发挥促凋亡作用的〔1〕。已发现bax基因参与乳腺癌和直肠癌等肿瘤的凋亡调变过程。我们应用免疫组化法，检测了bax基因在SCLC中的表达，发现其在SCLC组织中的表达明显高于慢性支气管炎组。说明在增殖活跃的癌细胞中凋亡也明显，与Hiho等〔2〕研究发现，在肝细胞癌中，肿瘤细胞的增殖指数与凋亡指数呈正相关(r=0.84，P<0.01)相一致。bax基因在癌组织中的表达高于在良性病变组织中的表达的原因是，癌细胞不仅较良性病变细胞增殖活跃,而且凋亡也明显。本研究中SCLC各亚型间bax基因的表达率及强度无明显差异，且其表达的阳性率与Apolinario等〔3〕报道的66例非小细胞肺癌中bax的阳性率(71%)相接近。另外，bax基因在SCLC中表达程度的不同，表明其参与了部分SCLC的凋亡调控，至于其促凋亡作用的具体途经尚需进一步研究。
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作者简介：刘亚丽，41岁，主治医师，学士，96基金班学员
原单位：呼和浩特市武警内蒙古总队医院内科，邮编：010030
Tel.(0471)59777992075
参考文献
[1]Oltvai ZN, Milliman CL, Korsmeyer SJ, et al. BCL-2 heterodimerizes in vivo with a conserved hemology bax, that accelerates programmed cell death. Cell, 1993；74(4):609～619
[2]Carriage MT, Henson DE. Liver, gallbladder extrohepatic bile ducts and pancreas. Cancer, 1995; 75:171～190
[3]Apolinario RM, Deville W, Dingemans AM, et al. Prognostic value of the expression of P53, bcl-2 and bax oncoproteins and neovascularization in patients with radically resected non small cell lung cancer. J Clin Oncol, 1997；15(6): 2456-2466
(收稿 1998-06-03 修回 1998-08-24), 百拇医药