HLA-DPB1等位基因与中国人重症肌无力相关性研究
作者：季碧霞 李 霞 范玉新 蒋建明 朱定良 庚镇城
单位：复旦大学遗传所，上海200433
关键词：重症肌无力；人类白细胞抗原II类基因；遗传异质性；PCR-RFLP
中国免疫学杂志990408 中国图书分类号 R746.1
摘 要 目的：探讨在中国汉族人群中重症肌无力(MG)与HLA II类基因的关联性。方法：随机抽取了59例重症肌无力患者的外周血DNA，用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法，分析了其HLA-DPB1座位的基因型，并与正常对照进行比较。结果：发现HLA-DPB1*0402与MG呈负相关(11.86% vs. 26.92%; rr=0.184 3, Pc=0.028 9, PF=0.220 3)；*1901与MG则呈正相关(15.25% vs. 0.96%; rr=6.208 1, Pc<0.01, EF=0.069 0)。结论：HLA-DPB1座位在MG的发病过程中具有重要作用。
, 百拇医药
HLA-DPB1 alleles associated with Myasthenia Gravis in Chinese patients
JI Bi-Xia，LI Xia，FAN Yu-Xin et al.Institute of Genetics, Fudan University, Shanghai 200433
Abstract Objective:To investigate the association between Myasthenia Gravis (MG) and HLA class II genes in the Chinese Han population.Methods：HLA genotyping was done using polymerase chain reaction combined with restriction fragment length polymorphism( PCR-PFLP).Results：Thirteen DPB1 alleles were detected in the 59 MG patients. The DPB1 allele, DPB1*1901 was positively associated with MG(15.25% vs. 0.96%; rr=6.208 1, Pc<0.01, EF=0.069 0); and a negative association was found for DPB1*0402(11.86% vs. 26.92%; rr=0.184 3, Pc=0.028 9, PF=0.220 3). Conclusion：HLA-DPB1 locus was included in the progress of MG.
, 百拇医药
Key words Myasthenia Gravis HLA class II genes Genetic heterogeneity PCR-RFLP
重症肌无力是一种自身免疫性疾病(Autoimmune disease,AID),与人类主要组织相容性复合物(MHC)即人类白细胞抗原(HLA)的II类抗原型别相关。这种关联性在不同人种和民族中存在差异，显示MG的遗传异质性。比较不同人群对同一疾病呈现关联的HLA等位基因的结构，从中找出共有的表位序列，对于确定致病基因，明确致病机理都是至关重要的。从80年代末开始，国内、外先后建立了以PCR为基础的HLA的DNA分型方法，如PCR-RFLP、PCR-SSO、PCR-SSP、PCR-SSCP和序列测定等[1]。本文应用PCR-RFLP方法分析了中国汉族人群MG与HLA II类分子的关联性，以期为探讨MG的发病机制及遗传易感性提供线索。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 基因组DNA的制备及PCR-RFLP分型 59例MG患者由上海长海医院神经内科诊断，取静脉血6 ml，依照Inoko教授提供的方法抽提基因组DNA。正常对照采用Wang F Q等的结果[2]。PCR-RFLP
分型参照Ota等的方法[3]。
1.2 统计分析 MG与HLA-DPB1各等位基因的关联可通过相对危险率(relative risk, rr)和Pc值来确定，rr值依照Haldane公式计算，Pc值用Fisher’s exact test计算(Halbau software, 1988)，当Pc<0.05时表示具有显著差异。在rr的显著性确定后，为进一步明确表示相关等位基因对MG的作用,计算病因分数EF(rr>1时)和预防分数PF(rr<1时)。
2 结果
, 百拇医药 PCR扩增的目的基因长度为299 bp，在59例MG患者中共鉴定出了13个HLA-DPB1的等位基因，见表1；DPB1*0801、*1001、*1101、*1501、*1601及*1801未被检出(在正常对照中也未被检出，因此在表中省略)。
表1 中国汉族人群MG患者HLA-DPB1等位基因的分布及与正常人的比较
Tab.1 Comparison of gene frequencies of HLA-DPB1 alleles in MG patients with normal Han Chinese DPB1 alleles
Allele Frequency(AF)
rr
Pc
EF/PF
, 百拇医药
Patients(n=59)
Normal(n=104)
*0101
0.017 0
0.000 0
2.753 0
1.000 0
*0201
0.271 2
0.326 9
0.337 1
0.485 2
, http://www.100md.com
*0202
0.017 0
0.086 5
0.132 4
0.095 7
*0301
0.067 8
0.144 2
0.233 1
0.204 5
*0401
0.050 9
, http://www.100md.com
0.153 9
0.167 2
0.073 2
*0402
0.118 6
0.269 2
0.184 3
0.028 9
0.220 31)
*0501
0.542 4
0.576 9
, http://www.100md.com
0.277 0
0.743 0
*0601
0.017 0
0.000 0
2.753 0
1.000 0
*0901
0.033 9
0.009 6
1.528 2
0.554 0
, http://www.100md.com
*1301
0.050 8
0.076 9
0.354 2
0.747 5
*1401
0.050 8
0.048 1
0.565 4
1.000 0
*1701
0.118 6
, 百拇医药
0.105 8
0.564 2
1.000 0
*1901
0.152 5
0.009 6
6.208 1
0.009 9
0.069 0
Note: n.number of samples; Pc. Fisher’s exact test; rr: relative risk; EF: etiological factor; PF: preventive factor;1) PF value
, http://www.100md.com
3 讨论
有关与MG的关联性，在HLA I类基因和II类的HLA-DQ，-DR座位上已进行了很多研究，而HLA-DP位点上的研究相对较少。因DP与其它位点之间的距离相对较远，Baisch等认为研究HLA-DP位点与自身免疫性疾病的关联性对于HLA单倍型的疾病遗传易感性研究意义不大[4]。因HLA-DPB1与Hodgkin病，Graves病，类风湿性关节炎，多发性硬化症等至少50多种自身免疫性疾病相关联；HLA-DPB1的多态性仅次于最富多态性的-DRB1，它在抗原呈递过程中起着重要作用；且-DP与-DR以及其它重要基因之间的连锁不平衡也曾有报道[5，6]，因此，不能轻视DPB1与MG关联性的研究意义。
本实验结果说明在中国汉族人群中HLA-DPB1*0402与MG呈显著负相关；*1901与MG则呈显著正相关。而Inoko等发现日本人的DPB1*0201与MG密切相关[7]。HLA-B8--HLA-DPB1*0402则可能与英国白人MG正相关[8]。这种不同民族间差异的存在可能与MG的发生是由MHC区域的几个相关基因引起的，不同群体，相关基因可能有所不同有关；另一方面，HLA等位基因在健康群体中的分布也因人种或地理位置不同而存在极大的差异，这也为不同易感基因的存在提供了可能性。HLA与MG关联的机制尚未完全清楚，通过比较这种差异，可望能为进一步地揭示MG与HLA的关联机制提供依据。
, 百拇医药
作者简介：季碧霞，女，23岁，遗传学专业硕士生；
指导教师，庚镇城，男，教授，博士生导师，主要研究医学免疫及进化遗传学
4 参考文献
[1] 周光炎，范丽安. HLA：新的进展和新的起点. 上海免疫学杂志, 1996; 16(6):321
[2] Wang F Q,Al-Daccak R,Ju L Y et al. HLA-DP distribution in Shanghai Chinese -A study by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism. Hum Immunol,1992；33:129
[3] Ota M, Seki T, Nomura N et al. Modified PCR-RFLP method for HLA-DPB1 and -DQA1 genotyping. Tissue Antigens, 1991；38:60
, 百拇医药
[4] Baisch J M, Capra J D. Linkage disequilibrium within the HLA complex does not extend into HLA-DP. Scand J Immunol, 1993;37(4):499
[5] Djilali-Saiah I, Benini V, Daniel S et al.Linkage disequilibrium between HLA class II (DR, DQ, DP) and antigen processing (LMP, TAP, DM) genes of the major histocompatibility complex.Tissue Antigens, 1996;48(2):87
[6] Gilchrist F C, Bunce M, Lympany P A et al. Comprehensive HLA-DP typing using polymerase chain reaction with sequence-specific primers and 95 sequence-specific primer mixes. Tissue Antigens, 1998;51(1):51
, 百拇医药
[7] Horiki T, Inoko H. Combinations of HLA-DPB1 and HLA-DQB1 alleles determine susceptibility to early-onset MG in Japan. Autoimmunity, 1994；19(1):49
[8] Ratanachaiyavong S,Fleming D,Janer M et al. HLA-DPB1 polymorphisms in patients with hyperthyroid Graves′ disease and early onset myasthenia gravis. Autoimmunity,1994；17(2):9
〔收稿1998-05-25 修回1998-10-24〕, http://www.100md.com
单位：复旦大学遗传所，上海200433
关键词：重症肌无力；人类白细胞抗原II类基因；遗传异质性；PCR-RFLP
中国免疫学杂志990408 中国图书分类号 R746.1
摘 要 目的：探讨在中国汉族人群中重症肌无力(MG)与HLA II类基因的关联性。方法：随机抽取了59例重症肌无力患者的外周血DNA，用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法，分析了其HLA-DPB1座位的基因型，并与正常对照进行比较。结果：发现HLA-DPB1*0402与MG呈负相关(11.86% vs. 26.92%; rr=0.184 3, Pc=0.028 9, PF=0.220 3)；*1901与MG则呈正相关(15.25% vs. 0.96%; rr=6.208 1, Pc<0.01, EF=0.069 0)。结论：HLA-DPB1座位在MG的发病过程中具有重要作用。
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HLA-DPB1 alleles associated with Myasthenia Gravis in Chinese patients
JI Bi-Xia，LI Xia，FAN Yu-Xin et al.Institute of Genetics, Fudan University, Shanghai 200433
Abstract Objective:To investigate the association between Myasthenia Gravis (MG) and HLA class II genes in the Chinese Han population.Methods：HLA genotyping was done using polymerase chain reaction combined with restriction fragment length polymorphism( PCR-PFLP).Results：Thirteen DPB1 alleles were detected in the 59 MG patients. The DPB1 allele, DPB1*1901 was positively associated with MG(15.25% vs. 0.96%; rr=6.208 1, Pc<0.01, EF=0.069 0); and a negative association was found for DPB1*0402(11.86% vs. 26.92%; rr=0.184 3, Pc=0.028 9, PF=0.220 3). Conclusion：HLA-DPB1 locus was included in the progress of MG.
, 百拇医药
Key words Myasthenia Gravis HLA class II genes Genetic heterogeneity PCR-RFLP
重症肌无力是一种自身免疫性疾病(Autoimmune disease,AID),与人类主要组织相容性复合物(MHC)即人类白细胞抗原(HLA)的II类抗原型别相关。这种关联性在不同人种和民族中存在差异，显示MG的遗传异质性。比较不同人群对同一疾病呈现关联的HLA等位基因的结构，从中找出共有的表位序列，对于确定致病基因，明确致病机理都是至关重要的。从80年代末开始，国内、外先后建立了以PCR为基础的HLA的DNA分型方法，如PCR-RFLP、PCR-SSO、PCR-SSP、PCR-SSCP和序列测定等[1]。本文应用PCR-RFLP方法分析了中国汉族人群MG与HLA II类分子的关联性，以期为探讨MG的发病机制及遗传易感性提供线索。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 基因组DNA的制备及PCR-RFLP分型 59例MG患者由上海长海医院神经内科诊断，取静脉血6 ml，依照Inoko教授提供的方法抽提基因组DNA。正常对照采用Wang F Q等的结果[2]。PCR-RFLP
分型参照Ota等的方法[3]。
1.2 统计分析 MG与HLA-DPB1各等位基因的关联可通过相对危险率(relative risk, rr)和Pc值来确定，rr值依照Haldane公式计算，Pc值用Fisher’s exact test计算(Halbau software, 1988)，当Pc<0.05时表示具有显著差异。在rr的显著性确定后，为进一步明确表示相关等位基因对MG的作用,计算病因分数EF(rr>1时)和预防分数PF(rr<1时)。
2 结果
, 百拇医药 PCR扩增的目的基因长度为299 bp，在59例MG患者中共鉴定出了13个HLA-DPB1的等位基因，见表1；DPB1*0801、*1001、*1101、*1501、*1601及*1801未被检出(在正常对照中也未被检出，因此在表中省略)。
表1 中国汉族人群MG患者HLA-DPB1等位基因的分布及与正常人的比较
Tab.1 Comparison of gene frequencies of HLA-DPB1 alleles in MG patients with normal Han Chinese DPB1 alleles
Allele Frequency(AF)
rr
Pc
EF/PF
, 百拇医药
Patients(n=59)
Normal(n=104)
*0101
0.017 0
0.000 0
2.753 0
1.000 0
*0201
0.271 2
0.326 9
0.337 1
0.485 2
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*0202
0.017 0
0.086 5
0.132 4
0.095 7
*0301
0.067 8
0.144 2
0.233 1
0.204 5
*0401
0.050 9
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0.153 9
0.167 2
0.073 2
*0402
0.118 6
0.269 2
0.184 3
0.028 9
0.220 31)
*0501
0.542 4
0.576 9
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0.277 0
0.743 0
*0601
0.017 0
0.000 0
2.753 0
1.000 0
*0901
0.033 9
0.009 6
1.528 2
0.554 0
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*1301
0.050 8
0.076 9
0.354 2
0.747 5
*1401
0.050 8
0.048 1
0.565 4
1.000 0
*1701
0.118 6
, 百拇医药
0.105 8
0.564 2
1.000 0
*1901
0.152 5
0.009 6
6.208 1
0.009 9
0.069 0
Note: n.number of samples; Pc. Fisher’s exact test; rr: relative risk; EF: etiological factor; PF: preventive factor;1) PF value
, http://www.100md.com
3 讨论
有关与MG的关联性，在HLA I类基因和II类的HLA-DQ，-DR座位上已进行了很多研究，而HLA-DP位点上的研究相对较少。因DP与其它位点之间的距离相对较远，Baisch等认为研究HLA-DP位点与自身免疫性疾病的关联性对于HLA单倍型的疾病遗传易感性研究意义不大[4]。因HLA-DPB1与Hodgkin病，Graves病，类风湿性关节炎，多发性硬化症等至少50多种自身免疫性疾病相关联；HLA-DPB1的多态性仅次于最富多态性的-DRB1，它在抗原呈递过程中起着重要作用；且-DP与-DR以及其它重要基因之间的连锁不平衡也曾有报道[5，6]，因此，不能轻视DPB1与MG关联性的研究意义。
本实验结果说明在中国汉族人群中HLA-DPB1*0402与MG呈显著负相关；*1901与MG则呈显著正相关。而Inoko等发现日本人的DPB1*0201与MG密切相关[7]。HLA-B8--HLA-DPB1*0402则可能与英国白人MG正相关[8]。这种不同民族间差异的存在可能与MG的发生是由MHC区域的几个相关基因引起的，不同群体，相关基因可能有所不同有关；另一方面，HLA等位基因在健康群体中的分布也因人种或地理位置不同而存在极大的差异，这也为不同易感基因的存在提供了可能性。HLA与MG关联的机制尚未完全清楚，通过比较这种差异，可望能为进一步地揭示MG与HLA的关联机制提供依据。
, 百拇医药
作者简介：季碧霞，女，23岁，遗传学专业硕士生；
指导教师，庚镇城，男，教授，博士生导师，主要研究医学免疫及进化遗传学
4 参考文献
[1] 周光炎，范丽安. HLA：新的进展和新的起点. 上海免疫学杂志, 1996; 16(6):321
[2] Wang F Q,Al-Daccak R,Ju L Y et al. HLA-DP distribution in Shanghai Chinese -A study by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism. Hum Immunol,1992；33:129
[3] Ota M, Seki T, Nomura N et al. Modified PCR-RFLP method for HLA-DPB1 and -DQA1 genotyping. Tissue Antigens, 1991；38:60
, 百拇医药
[4] Baisch J M, Capra J D. Linkage disequilibrium within the HLA complex does not extend into HLA-DP. Scand J Immunol, 1993;37(4):499
[5] Djilali-Saiah I, Benini V, Daniel S et al.Linkage disequilibrium between HLA class II (DR, DQ, DP) and antigen processing (LMP, TAP, DM) genes of the major histocompatibility complex.Tissue Antigens, 1996;48(2):87
[6] Gilchrist F C, Bunce M, Lympany P A et al. Comprehensive HLA-DP typing using polymerase chain reaction with sequence-specific primers and 95 sequence-specific primer mixes. Tissue Antigens, 1998;51(1):51
, 百拇医药
[7] Horiki T, Inoko H. Combinations of HLA-DPB1 and HLA-DQB1 alleles determine susceptibility to early-onset MG in Japan. Autoimmunity, 1994；19(1):49
[8] Ratanachaiyavong S,Fleming D,Janer M et al. HLA-DPB1 polymorphisms in patients with hyperthyroid Graves′ disease and early onset myasthenia gravis. Autoimmunity,1994；17(2):9
〔收稿1998-05-25 修回1998-10-24〕, http://www.100md.com