银屑病患者外周血淋巴细胞分析
作者：刘华昌 李冠勇 尹格平 姜磊
单位：250031 济南，济南军区总医院皮肤科(刘华昌 李冠勇)，流式细胞研究室(尹格平)，免疫科(姜磊)
关键词：
中华皮肤科杂志980227.htm 我们对银屑病患者外周血T细胞活化、T细胞亚群、B细胞及免疫球蛋白(Ig)进行了研究，旨在进一步了解免疫机理在银屑病发病中的作用。
一、资料和方法
1.观察对象：56例寻常型银屑病患者，均为我院门诊及住院患者，男30例，女26例；年龄16～65岁，平均36岁；病程10天至40年；其中进行期33例，静止期23例；泛发性32例，局限性24例。另选健康对照者51例，男28例，女23例；年龄17～64岁，平
, 百拇医药 附表 银屑病患者外周血T细胞亚群、HLA-DR+细胞及B细胞检测结果(
±s，%) 组 别
例数
CD3+
CD4+
CD8+
CD3+/HLA-DR+
CD19+
健康对照组
51
, 百拇医药
64.35±4.74
41.42±4.93
23.88±2.52
1.53±0.57
16.31±1.81
银屑病组
56
65.65±5.32
40.85±5.63
26.52±3.05
12.14±1.75
15.83±1.96
, http://www.100md.com
t值
-
1.3294
0.5548
4.8537**
42.9381**
1.3122
进行期
33
65.82±4.63
39.51±5.03
27.33±2.98
, 百拇医药
14.36±1.49
15.89±1.84
静止期
23
65.48±4.89
41.19±4.91
25.71±2.67
9.92±1.38
15.77±1.67
t值
-
0.2642
, http://www.100md.com
1.2416
2.0870*
11.3035**
0.2492
泛发性
32
66.05±5.01
39.87±4.83
27.38±2.81
15.52±1.41
15.91±1.69
, http://www.100md.com 局限性
24
65.28±4.78
40.83±5.01
25.66±2.92
8.76±1.43
15.75±1.86
t值
-
0.5803
0.7244
2.2291*
, http://www.100md.com
17.6455**
0.3358
*P<0.05，**P<0.01均35岁。两组均排除系统性疾病史。抽血前2个月内均无应用皮质类固醇、免疫抑制剂及细胞毒性药物史。
2.实验方法：
(1)样本采集：晨起采集静脉血5ml，3ml用于流式细胞仪检测，2ml用于免疫球蛋白检测。
(2)流式细胞仪检测T细胞活化(HLA-DR表达)、T细胞亚群及B细胞：试剂：①T细胞亚群：异硫氰酸荧光素(FITC)、R-藻红蛋白(PE)和R-藻红蛋白-花青苷5(PE-Cy5)三色标记的鼠抗人单抗：CD4(抗辅助/诱导性T细胞)-FITC/CD8(抑制/细胞毒性T细胞)-PE/CD3(全T细胞)-PE-Cy5及上述三种荧光标记阴性对照羊抗鼠IgG1。②HLA-DR+T细胞：CD3-FITC/HLA-DR-PE以及双色标记的阴性对照羊抗鼠IgG1。③B细胞：CD19-FITC及阴性对照羊抗鼠IgG1。流式细胞仪：美国Becton-Dickinson公司产FACScan型。上机后收集20 000个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在MacIntosh650计算机上用Cell Qutst plot软件(BD公司产)分析数据，由HP1200c/ps打印结果。
, http://www.100md.com
(3)免疫球蛋白检测：采用法国产Sanofei QM-300型特定蛋白测定仪，用激光速率免疫比浊法。
3.统计学处理：采用t检验、t′检验。
二、结果
1.银屑病患者T细胞亚群检测结果：患者外周血CD8+细胞百分率较对照组显著增高(P<0.01)；进行期患者CD8+细胞百分率显著高于静止期患者(P<0.05)；泛发性患者CD8+细胞百分率显著高于局限性患者(P<0.05)；患者CD3+、CD4+细胞百分率与对照组无显著性差异(P>0.05)；进行期与静止期、泛发性与局限性患者CD3+、CD4+细胞百分率亦无显著性差异(P均>0.05)。
2.银屑病患者CD3+/HLA-DR+细胞百分率较对照组显著增高(P<0.01)；进行期患者CD3+/HLA-DR+细胞百分率明显高于静止期患者(P<0.01)；泛发性患者CD3+/HLA-DR+细胞百分率明显高于局限性患者(P<0.01)。
, http://www.100md.com
3.银屑病患者B细胞检测结果：患者CD19+细胞百分率与对照组无显著性差异(P>0.05)；进行期与静止期、泛发性与局限性患者CD19+细胞百分率亦无显著性差异(P>0.05)。详细结果见附表。
4.银屑病患者IgG、IgA、IgM水平与对照组无显著性差异(P>0.05，具体数值略)；进行期与静止期、泛发性与局限性患者IgG、IgA、IgM水平亦无显著性差异(P>0.05)。
三、讨论
银屑病患者外周血T淋巴细胞亚群的研究结果尚存争论。已有研究报道银屑病患者外周血CD3+、CD4+及CD8+细胞均减少[1]，Horrocks[2]等报道银屑病患者外周血CD3+、CD4+细胞数量或百分率均无显著异常。我们的结果显示银屑病患者外周血CD3+、CD4+细胞百分率无明显变化，但CD8+细胞却明显增多，且与病情有关，与Jeffes[3]等的研究结果一致。淋巴细胞粘附于血管内皮是其通过微血管到达炎性部位的重要步骤。已有研究发现CD4+细胞粘附于银屑病真皮微血管内皮的能力是CD8+细胞的4倍[4]。
, http://www.100md.com
众多资料显示，银屑病皮损内浸润的淋巴细胞主要是HLA-DR+细胞，提示这些细胞处于活化状态[3]。但这些细胞是进入皮损之前就已活化，还是进入皮损之后才开始活化尚不清楚[3]。我们的研究结果显示，银屑病患者外周血HLA-DR+T细胞明显增多，与Kasteler[5]等的结果一致，提示淋巴细胞在进入皮损前已经活化。
参 考 文 献
1 Borroni G, Brazzelli V, Fietta A, et al. Effects of medium-term PUVA therapy on peripheral T-lymphocyte subsets in psoriatic patients. Acta Dermatol Venereol(Stockh), 1989,Suppl 146∶125-129.
, 百拇医药
2 Horrocks C, Duncan JI, Swell HF, et al. Differential effects of cyclosporine A on Langerhans cells and regulatory T-cell populations in severe psoriasis: an immunohistochemical and flow cytometric analysis. J Autoimmun, 1990,3∶559-563.
3 Jeffes ⅢEWB, Lee GC, Said S, et al. Elevated numbers of proliferating mononuclear cells in the peripheral blood of psoriatic patient correlate with disease severity. J Invest Dermatol, 1995,105∶733-738.
, 百拇医药
4 Chin YH, Falanga V, Taylor JR, et al. Adherence of human helper/memory T-cell subsets to psoriatic dermal endothelium. J Invest Dermatol, 1990,94∶413-417.
5 Kasteler JS, Petersen MJ, Vance JE, et al. Circulating activated T lymphocytes in autoeczematization. Arch Dermatol, 1992,128∶795-798.
(收稿：1997-01-06 修回：1997-06-17), http://www.100md.com
单位：250031 济南，济南军区总医院皮肤科(刘华昌 李冠勇)，流式细胞研究室(尹格平)，免疫科(姜磊)
关键词：
中华皮肤科杂志980227.htm 我们对银屑病患者外周血T细胞活化、T细胞亚群、B细胞及免疫球蛋白(Ig)进行了研究，旨在进一步了解免疫机理在银屑病发病中的作用。
一、资料和方法
1.观察对象：56例寻常型银屑病患者，均为我院门诊及住院患者，男30例，女26例；年龄16～65岁，平均36岁；病程10天至40年；其中进行期33例，静止期23例；泛发性32例，局限性24例。另选健康对照者51例，男28例，女23例；年龄17～64岁，平
, 百拇医药 附表 银屑病患者外周血T细胞亚群、HLA-DR+细胞及B细胞检测结果(
±s，%) 组 别例数
CD3+
CD4+
CD8+
CD3+/HLA-DR+
CD19+
健康对照组
51
, 百拇医药
64.35±4.74
41.42±4.93
23.88±2.52
1.53±0.57
16.31±1.81
银屑病组
56
65.65±5.32
40.85±5.63
26.52±3.05
12.14±1.75
15.83±1.96
, http://www.100md.com
t值
-
1.3294
0.5548
4.8537**
42.9381**
1.3122
进行期
33
65.82±4.63
39.51±5.03
27.33±2.98
, 百拇医药
14.36±1.49
15.89±1.84
静止期
23
65.48±4.89
41.19±4.91
25.71±2.67
9.92±1.38
15.77±1.67
t值
-
0.2642
, http://www.100md.com
1.2416
2.0870*
11.3035**
0.2492
泛发性
32
66.05±5.01
39.87±4.83
27.38±2.81
15.52±1.41
15.91±1.69
, http://www.100md.com 局限性
24
65.28±4.78
40.83±5.01
25.66±2.92
8.76±1.43
15.75±1.86
t值
-
0.5803
0.7244
2.2291*
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17.6455**
0.3358
*P<0.05，**P<0.01均35岁。两组均排除系统性疾病史。抽血前2个月内均无应用皮质类固醇、免疫抑制剂及细胞毒性药物史。
2.实验方法：
(1)样本采集：晨起采集静脉血5ml，3ml用于流式细胞仪检测，2ml用于免疫球蛋白检测。
(2)流式细胞仪检测T细胞活化(HLA-DR表达)、T细胞亚群及B细胞：试剂：①T细胞亚群：异硫氰酸荧光素(FITC)、R-藻红蛋白(PE)和R-藻红蛋白-花青苷5(PE-Cy5)三色标记的鼠抗人单抗：CD4(抗辅助/诱导性T细胞)-FITC/CD8(抑制/细胞毒性T细胞)-PE/CD3(全T细胞)-PE-Cy5及上述三种荧光标记阴性对照羊抗鼠IgG1。②HLA-DR+T细胞：CD3-FITC/HLA-DR-PE以及双色标记的阴性对照羊抗鼠IgG1。③B细胞：CD19-FITC及阴性对照羊抗鼠IgG1。流式细胞仪：美国Becton-Dickinson公司产FACScan型。上机后收集20 000个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在MacIntosh650计算机上用Cell Qutst plot软件(BD公司产)分析数据，由HP1200c/ps打印结果。
, http://www.100md.com
(3)免疫球蛋白检测：采用法国产Sanofei QM-300型特定蛋白测定仪，用激光速率免疫比浊法。
3.统计学处理：采用t检验、t′检验。
二、结果
1.银屑病患者T细胞亚群检测结果：患者外周血CD8+细胞百分率较对照组显著增高(P<0.01)；进行期患者CD8+细胞百分率显著高于静止期患者(P<0.05)；泛发性患者CD8+细胞百分率显著高于局限性患者(P<0.05)；患者CD3+、CD4+细胞百分率与对照组无显著性差异(P>0.05)；进行期与静止期、泛发性与局限性患者CD3+、CD4+细胞百分率亦无显著性差异(P均>0.05)。
2.银屑病患者CD3+/HLA-DR+细胞百分率较对照组显著增高(P<0.01)；进行期患者CD3+/HLA-DR+细胞百分率明显高于静止期患者(P<0.01)；泛发性患者CD3+/HLA-DR+细胞百分率明显高于局限性患者(P<0.01)。
, http://www.100md.com
3.银屑病患者B细胞检测结果：患者CD19+细胞百分率与对照组无显著性差异(P>0.05)；进行期与静止期、泛发性与局限性患者CD19+细胞百分率亦无显著性差异(P>0.05)。详细结果见附表。
4.银屑病患者IgG、IgA、IgM水平与对照组无显著性差异(P>0.05，具体数值略)；进行期与静止期、泛发性与局限性患者IgG、IgA、IgM水平亦无显著性差异(P>0.05)。
三、讨论
银屑病患者外周血T淋巴细胞亚群的研究结果尚存争论。已有研究报道银屑病患者外周血CD3+、CD4+及CD8+细胞均减少[1]，Horrocks[2]等报道银屑病患者外周血CD3+、CD4+细胞数量或百分率均无显著异常。我们的结果显示银屑病患者外周血CD3+、CD4+细胞百分率无明显变化，但CD8+细胞却明显增多，且与病情有关，与Jeffes[3]等的研究结果一致。淋巴细胞粘附于血管内皮是其通过微血管到达炎性部位的重要步骤。已有研究发现CD4+细胞粘附于银屑病真皮微血管内皮的能力是CD8+细胞的4倍[4]。
, http://www.100md.com
众多资料显示，银屑病皮损内浸润的淋巴细胞主要是HLA-DR+细胞，提示这些细胞处于活化状态[3]。但这些细胞是进入皮损之前就已活化，还是进入皮损之后才开始活化尚不清楚[3]。我们的研究结果显示，银屑病患者外周血HLA-DR+T细胞明显增多，与Kasteler[5]等的结果一致，提示淋巴细胞在进入皮损前已经活化。
参 考 文 献
1 Borroni G, Brazzelli V, Fietta A, et al. Effects of medium-term PUVA therapy on peripheral T-lymphocyte subsets in psoriatic patients. Acta Dermatol Venereol(Stockh), 1989,Suppl 146∶125-129.
, 百拇医药
2 Horrocks C, Duncan JI, Swell HF, et al. Differential effects of cyclosporine A on Langerhans cells and regulatory T-cell populations in severe psoriasis: an immunohistochemical and flow cytometric analysis. J Autoimmun, 1990,3∶559-563.
3 Jeffes ⅢEWB, Lee GC, Said S, et al. Elevated numbers of proliferating mononuclear cells in the peripheral blood of psoriatic patient correlate with disease severity. J Invest Dermatol, 1995,105∶733-738.
, 百拇医药
4 Chin YH, Falanga V, Taylor JR, et al. Adherence of human helper/memory T-cell subsets to psoriatic dermal endothelium. J Invest Dermatol, 1990,94∶413-417.
5 Kasteler JS, Petersen MJ, Vance JE, et al. Circulating activated T lymphocytes in autoeczematization. Arch Dermatol, 1992,128∶795-798.
(收稿：1997-01-06 修回：1997-06-17), http://www.100md.com