银屑病患者血小板表面α-颗粒膜蛋白的放射免疫测定
作者：刘秀丽 吴国新 苏玉华
单位：215004 苏州医学院附属第二医院皮肤科(刘秀丽 苏玉华)，血栓与止血研究室(吴国新)
关键词：
中华皮肤科杂志980213.htm 血小板从静止状态转变为具有功能的活化血小板时，内源性血小板蛋白被表达[1，2]。一般认为，血小板聚集导致的血液高凝和粘度增高在银屑病的发病中起一定作用[3]。为此，我们用活化血小板特异单克隆抗体(单抗)来定量测定银屑病患者体内血小板活化程度。
一、病例和方法
(一)研究对象：随机选择1992年8月至1996年10月来我院的寻常型银屑病患者31例，其中男18例，女13例；平均年龄37.2岁；病程1周至30年，平均8.3年。所有患者检测前1个月未经皮质类固醇、免疫抑制剂等治疗。对照组：健康正常人共50例，其中男25例，女25例；平均年龄35岁。
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(二)测定方法[4]：SZ-51为一株抗人活化血小板表面颗粒膜蛋白(GMP-140)单抗，由我院血栓与止血研究室提供。将加抗凝剂静脉血0.5ml与等量的5%戊二醛固定剂混合，室温下放置30分钟，即为固定的全血。取含2.5×106血小板数的固定全血，以苔氏血小板洗涤液(KCl 2.6mmol/L、MgCl2*6H2O 9mmol/L、NaCl 137mmol/L、NaHCO3 12mmol/L、葡萄糖 5.5mmol/L、EDTA 0.2mmol/L、白明胶0.25%)洗涤1次，加入125I-SZ-51抗体(0.1μg/管)，终体积为50μl，0.5% BSA-苔氏血小板洗涤液洗涤、离心。在γ-计数仪上测定待测物的c/min(cpm)，每份标本均测定复管，非特异吸附以100倍未标记的单抗同时加入反应管，将特异结合的c/min换算成每个血小板上GMP-140表达的分子数。
(三)统计学分析：用t检验对两组进行比较。
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二、结果
31例银屑病患者的血小板表面GMP-140的分子数为1146±322(分子数/血小板)，较50例健康正常人(780±490)明显升高，经t检验，t=3.6895，P<0.01。
三、讨论
本研究利用单抗SZ-51来测定血小板表面活化标记蛋白GMP-140的分子数。鉴于单抗SZ-51不与静止血小板、红细胞、白细胞及血浆蛋白等反应，它活化血小板是特异的，因此，可被用作直接测定血小板的活化程度。
一般认为，血小板从静止状态转变为具有功能的活化血小板时，其形态、生化代谢要发生改变，随颗粒内容物的释放，颗粒膜蛋白与开放管道系统膜融合而整合至活化血小板质膜内，因此，正常人血浆内GMP-140含量极少。α-颗粒是血小板中数量最多的细胞器，呈球形，直径300～500nm，是血小板中可分泌蛋白质的主要贮存部位。α-颗粒中含有许多炎症因子，包括血管通透性因子、化学趋化因子、杀菌因子等，表明血小板不仅在止血、血栓形成和动脉粥样硬化中起作用，亦可能与炎症、免疫反应相关。既往研究表明[3]，银屑病患者血液粘度增高，血小板功能亢进及其聚集性增高，与本研究结果一致。本研究表明银屑病患者血小板α-颗粒膜蛋白分子数显著升高，提示体内有较高程度的血小板活化，亦与上述研究结果一致。
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参 考 文 献
1 Stenberg PE, McEver PP, Shuman MA, et al. A platelet alpha-granule membrane protein(GMP-140) is exposed on the plasma membrane after activation. J Cell Biol, 1985,101∶880-886.
2 Wu G, Li F, Li P, et al. Detection of activated platelets using activation-dependent monoclonal antibody(SZ-51) in clinical disorders. Nouv Rev Hematol, 1992,34∶31-35.
3 刘承煌主编. 银屑病的临床和研究. 第1版. 上海: 上海科学技术文献出版社, 1994.81-84.
4 吴国新, 李建勇, 李佩霞, 等. 血小板表面及血浆内α-颗粒膜蛋白的放射免疫测定. 中华血液学杂志, 1992,13∶99-100.
(收稿：1997-04-25 修回：1997-11-25), 百拇医药
单位：215004 苏州医学院附属第二医院皮肤科(刘秀丽 苏玉华)，血栓与止血研究室(吴国新)
关键词：
中华皮肤科杂志980213.htm 血小板从静止状态转变为具有功能的活化血小板时，内源性血小板蛋白被表达[1，2]。一般认为，血小板聚集导致的血液高凝和粘度增高在银屑病的发病中起一定作用[3]。为此，我们用活化血小板特异单克隆抗体(单抗)来定量测定银屑病患者体内血小板活化程度。
一、病例和方法
(一)研究对象：随机选择1992年8月至1996年10月来我院的寻常型银屑病患者31例，其中男18例，女13例；平均年龄37.2岁；病程1周至30年，平均8.3年。所有患者检测前1个月未经皮质类固醇、免疫抑制剂等治疗。对照组：健康正常人共50例，其中男25例，女25例；平均年龄35岁。
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(二)测定方法[4]：SZ-51为一株抗人活化血小板表面颗粒膜蛋白(GMP-140)单抗，由我院血栓与止血研究室提供。将加抗凝剂静脉血0.5ml与等量的5%戊二醛固定剂混合，室温下放置30分钟，即为固定的全血。取含2.5×106血小板数的固定全血，以苔氏血小板洗涤液(KCl 2.6mmol/L、MgCl2*6H2O 9mmol/L、NaCl 137mmol/L、NaHCO3 12mmol/L、葡萄糖 5.5mmol/L、EDTA 0.2mmol/L、白明胶0.25%)洗涤1次，加入125I-SZ-51抗体(0.1μg/管)，终体积为50μl，0.5% BSA-苔氏血小板洗涤液洗涤、离心。在γ-计数仪上测定待测物的c/min(cpm)，每份标本均测定复管，非特异吸附以100倍未标记的单抗同时加入反应管，将特异结合的c/min换算成每个血小板上GMP-140表达的分子数。
(三)统计学分析：用t检验对两组进行比较。
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二、结果
31例银屑病患者的血小板表面GMP-140的分子数为1146±322(分子数/血小板)，较50例健康正常人(780±490)明显升高，经t检验，t=3.6895，P<0.01。
三、讨论
本研究利用单抗SZ-51来测定血小板表面活化标记蛋白GMP-140的分子数。鉴于单抗SZ-51不与静止血小板、红细胞、白细胞及血浆蛋白等反应，它活化血小板是特异的，因此，可被用作直接测定血小板的活化程度。
一般认为，血小板从静止状态转变为具有功能的活化血小板时，其形态、生化代谢要发生改变，随颗粒内容物的释放，颗粒膜蛋白与开放管道系统膜融合而整合至活化血小板质膜内，因此，正常人血浆内GMP-140含量极少。α-颗粒是血小板中数量最多的细胞器，呈球形，直径300～500nm，是血小板中可分泌蛋白质的主要贮存部位。α-颗粒中含有许多炎症因子，包括血管通透性因子、化学趋化因子、杀菌因子等，表明血小板不仅在止血、血栓形成和动脉粥样硬化中起作用，亦可能与炎症、免疫反应相关。既往研究表明[3]，银屑病患者血液粘度增高，血小板功能亢进及其聚集性增高，与本研究结果一致。本研究表明银屑病患者血小板α-颗粒膜蛋白分子数显著升高，提示体内有较高程度的血小板活化，亦与上述研究结果一致。
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参 考 文 献
1 Stenberg PE, McEver PP, Shuman MA, et al. A platelet alpha-granule membrane protein(GMP-140) is exposed on the plasma membrane after activation. J Cell Biol, 1985,101∶880-886.
2 Wu G, Li F, Li P, et al. Detection of activated platelets using activation-dependent monoclonal antibody(SZ-51) in clinical disorders. Nouv Rev Hematol, 1992,34∶31-35.
3 刘承煌主编. 银屑病的临床和研究. 第1版. 上海: 上海科学技术文献出版社, 1994.81-84.
4 吴国新, 李建勇, 李佩霞, 等. 血小板表面及血浆内α-颗粒膜蛋白的放射免疫测定. 中华血液学杂志, 1992,13∶99-100.
(收稿：1997-04-25 修回：1997-11-25), 百拇医药