尖锐湿疣患者肿瘤坏死因子α、白介素6和白介素8水平的研究
作者：王岚 陈映玲 周礼义
单位：430030 武汉，同济医科大学附属同济医院皮肤科
关键词：尖锐湿疣；肿瘤坏死因子α；白介素6；白介素8
中华皮肤科杂志/980411
【摘要】 目的 研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)和白介素8(IL-8)在尖锐湿疣发病机理中的作用。方法 采用ELISA双抗体夹心法，测定了21例尖锐湿疣患者血浆、内毒素刺激的外周血单一核细胞培养上清液和17例患者疣体组织TNF-α、IL-6、IL-8含量。结果 尖锐湿疣患者组的血浆刺激的外周血单一核细胞分泌的TNF-α、IL-6、IL-8水平显著低于正常人组；疣体组织的IL-6、IL-8水平显著低于正常人组；两组组织中TNF-α均未能检出。结论 尖锐湿疣患者全身和皮损局部存在着单核-巨噬细胞功能下降，而这种功能下降可能是导致尖锐湿疣患者淋巴细胞功能缺陷的重要原因。提高单核-巨噬细胞功能，对尖锐湿疣的防治，可能具有一定意义。
, 百拇医药
Study of the Levels of TNF-α,IL-6,IL-8 in Patients with Condyloma Acuminatum Wang Lan, Chen Yingling,Zhou Liyi.Department of Dermatology,Tongji Hospital,Tongji Medical University,Wuhan 430030
【Abstract】 Objective To study the role of tumor necrosis factor alpha(TNF-α), interleukin(IL) 6 and IL-8 in the pathogenesis of condyloma acuminatum(CA). Methods Double-antibody sandwich ELISA was used to study the levels of TNF-α,IL-6 and IL-8 in 21 cases of CA. Results The results showed that the levels of TNF-α,IL-6 and IL-8 of the plasma in the patients were significantly lower than those of normal controls. The levels of TNF-α,IL-6 and IL-8 produced by peripheral blood mononuclear cells in response to LPS mitogen in vitro significantlydecreased in comparison with those of normal controls. The levels of IL-6 and IL-8 of the wart tissues excised from 17 patients were significantly lower than those of normal tissue. No TNF-α wasdetected in the tissues of both patient and normal groups. Conclusion These findings suggest thatthe monocyte-macrophage function of CA patients might be decreased systemicallyand locally which may contribute to thedisorder of lymphocyte function. Improvement of the monocyte-macrocyte function might have some significant effect on the prevention and treatment of CA.
, 百拇医药
【Key words】 Condyloma acuminatum Tumor necrosis factor-α Interleukin 6 Interleukin 8
近年来的研究表明，尖锐湿疣(CA)的发生、消退、复发及癌变都与机体的免疫功能密切关联[1]。肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)是人体内的重要细胞因子，参与一系列的病理生理过程，与机体的免疫状况密切相关。为了解其与发病的关系，探讨CA发病的机理，我们对21例CA患者血浆、外周血单一核细胞培养上清液及瘤体组织匀浆中TNF-α、IL-6、IL-8水平进行了研究，现报道如下。
资料与方法
一、病例资料
就诊于本院皮肤科门诊CA患者21例，男13例，女8例，年龄20～48岁，病期1天至1年余。其中3个月以内5例，3～5个月5例，半年以上11例，切取疣体组织17例。根据我国卫生部防疫司1991年制订的CA诊断标准确诊，所有受试者均为3个月内未接受免疫治疗，且排除有自身免疫性及其他感染性疾病者。对照组为健康献血者和成人包皮环切术者。
, 百拇医药
二、方法
1.血标本制备：取静脉血，肝素抗凝，经Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离出单一核细胞及血浆。血浆收集分装后，置于-20℃保存待测。单一核细胞用完全RPMI1640培养液(含10%小牛血清，青、链霉素各100U/ml)洗涤2次后，调浓度至1×106个/ml，加入内毒素使终浓度为1μg/ml，37℃ 5% CO2孵育20小时，收集上清液，-20℃保存待测。
2.组织浆制备：无菌消毒瘤周皮肤，切取瘤体称重，生理盐水冲洗2次后，以100mg/ml比例加入生理盐水，置于匀浆器磨成匀浆后离心，取上清液分装，-20℃保存待测。
3.TNF-α水平测定(双抗体夹心法)：在已用抗TNF单抗包被的PVC反应板上加入倍比稀释的标准品、阴性对照及待测标本、辣根过氧化物酶标记的兔抗TNF抗体及底物显色剂，中止反应后测A值(曾称OD值)，读数TNF-α浓度值，以毫微克/毫升(ng/ml)计。试剂盒由北京邦定生物医学公司提供。
, http://www.100md.com
4.IL-6、IL-8水平亦采用常规ELISA双抗体夹心法测定。试剂盒由西安第四军医大学免疫学教研室提供。
5.统计学处理：各均数用配对资料t检验法进行统计学处理。
结 果
结果表明，尖锐湿疣患者血浆、PBMNC培养上清液TNF-α含量显著低于正常人组(P<0.01)。尖锐湿疣患者瘤体组织及正常人组织TNF-α量均未检出。尖锐湿疣患者血浆、瘤体组织IL-6含量显著低于正常人组(P<0.05)，PBMNC培养上清液IL-6含量显著低于正常人组(P<0.01)。尖锐湿疣患者血浆和PBMNC培养上清液IL-8含量均显著低于正常人组(P<0.01)，组织IL-8含量显著低于正常人组(P<0.05)。详见附表。
讨 论
TNF、IL-6、IL-8均是机体内作用广泛的细胞因子，可由淋巴细胞、单核细胞及上皮细胞等产生，在LPS作用下主要由激活的单核-巨噬细胞产生。适量的TNF-α对病毒感染细胞具有直接细胞毒作用，它也可刺激皮肤成纤维细胞诱导IL-1、IL-6、INF-β的合成，增进白细胞的趋化性，发挥抗病毒介质作用。同时TNF-α具有免疫调节作用。IL-6具有调节B细胞增殖分化，辅助T细胞增生活化，抗病毒等生物学效应。IL-8是T细胞、中性粒细胞的强烈趋化因子。我们的观察发现，CA患者组血浆TNF-α、IL-8均极显著性地低于正常人组，IL-6的含量也显著低于正常人组，表明上述细胞因子分泌细胞，如淋巴细胞、单核细胞功能低下，不能对人乳头瘤病毒感染作出相应的反应。
, 百拇医药
分离外周血单一核细胞，以内毒素刺激进行培养，测定上清液中TNF-α、IL-6、IL-8的含量，发现CA组
附表 尖锐湿疣患者TNF-α、IL-6和IL-8含量的比较
(
±s,ng/ml) 组 别
例数
TNF-α
IL-6
IL-8
血 浆
正常人组
8
, http://www.100md.com
3.51±0.72
0.178±0.032
2.80±1.13
尖锐湿疣组
21
2.25±0.71
0.130±0.04
1.63±0.69
t值
-
4.256
3.033
, http://www.100md.com
3.406
P值
-
<0.01
<0.01
<0.01
PBMNC培养上清液
正常人组
8
4.90±0.76
0.263±0.047
4.43±0.84
尖锐湿疣组
, http://www.100md.com
21
3.82±0.56
0.187±0.038
2.02±0.75
t值
-
4.206
4.513
7.491
P值
-
<0.01
<0.01
, 百拇医药
<0.01
组 织
正常人组
8
-
0.109±0.039
1.33±0.84
尖锐湿疣组
17
-
0.068±0.041
0.62±0.52
t值
, http://www.100md.com
-
-
2.366
2.603
P值
-
-
<0.05
<0.05
注：t值为尖锐湿疣组与正常人组比较
上述细胞因子水平均显著低于正常人组，表明CA患者经LPS作用的单核-巨噬细胞本身就存在功能障碍，其活化、分泌能力低下是血浆TNF-α、IL-6、IL-8水平低下的另一重要原因。吴魏斌等[1]已证实，CA患者T、B淋巴细胞转化能力低下。因而当人感染HPV时不能有效地调动免疫系统。对CA患者局部皮损的研究表明，郎格罕细胞形态异常，密度降低，有数量不等的以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，皮损处OKT4亚群减少，OKT4/OKT8比例明显下降[2]。我们对瘤体组织IL-6、IL-8的测定表明，CA患者组水平显著低于正常人组，说明其局部淋巴细胞不仅比例失调，而且淋巴细胞和单核细胞功能受抑或降低，不能有效地杀伤靶细胞，从而使病毒得以生长繁殖。
, http://www.100md.com
宿主细胞免疫状态是影响CA发生、转归的重要因素之一。我们的结果表明CA患者存在着全身和局部的单核-巨噬细胞功能障碍。提示用外源性TNF-α、IL-6、IL-8或刺激体内细胞因子产生的药物，将有助于治疗和预防CA的发生和复发。
参 考 文 献
1 吴魏斌, 秦晓娟, 郑国泰, 等. 尖锐湿疣患者免疫功能的检测.中国皮肤性病学杂志, 1992,6∶30.
2 Mcardle JP, Muller HK. Quantitative assessment of Langerhans′ cells inhuman cervical intraepithelial neoplasia and wart virus infection. Am J Obstet Gynecol,1986,154∶509-515.
(收稿：1997-03-17 修回：1998-01-05), 百拇医药
单位：430030 武汉，同济医科大学附属同济医院皮肤科
关键词：尖锐湿疣；肿瘤坏死因子α；白介素6；白介素8
中华皮肤科杂志/980411
【摘要】 目的 研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)和白介素8(IL-8)在尖锐湿疣发病机理中的作用。方法 采用ELISA双抗体夹心法，测定了21例尖锐湿疣患者血浆、内毒素刺激的外周血单一核细胞培养上清液和17例患者疣体组织TNF-α、IL-6、IL-8含量。结果 尖锐湿疣患者组的血浆刺激的外周血单一核细胞分泌的TNF-α、IL-6、IL-8水平显著低于正常人组；疣体组织的IL-6、IL-8水平显著低于正常人组；两组组织中TNF-α均未能检出。结论 尖锐湿疣患者全身和皮损局部存在着单核-巨噬细胞功能下降，而这种功能下降可能是导致尖锐湿疣患者淋巴细胞功能缺陷的重要原因。提高单核-巨噬细胞功能，对尖锐湿疣的防治，可能具有一定意义。
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Study of the Levels of TNF-α,IL-6,IL-8 in Patients with Condyloma Acuminatum Wang Lan, Chen Yingling,Zhou Liyi.Department of Dermatology,Tongji Hospital,Tongji Medical University,Wuhan 430030
【Abstract】 Objective To study the role of tumor necrosis factor alpha(TNF-α), interleukin(IL) 6 and IL-8 in the pathogenesis of condyloma acuminatum(CA). Methods Double-antibody sandwich ELISA was used to study the levels of TNF-α,IL-6 and IL-8 in 21 cases of CA. Results The results showed that the levels of TNF-α,IL-6 and IL-8 of the plasma in the patients were significantly lower than those of normal controls. The levels of TNF-α,IL-6 and IL-8 produced by peripheral blood mononuclear cells in response to LPS mitogen in vitro significantlydecreased in comparison with those of normal controls. The levels of IL-6 and IL-8 of the wart tissues excised from 17 patients were significantly lower than those of normal tissue. No TNF-α wasdetected in the tissues of both patient and normal groups. Conclusion These findings suggest thatthe monocyte-macrophage function of CA patients might be decreased systemicallyand locally which may contribute to thedisorder of lymphocyte function. Improvement of the monocyte-macrocyte function might have some significant effect on the prevention and treatment of CA.
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【Key words】 Condyloma acuminatum Tumor necrosis factor-α Interleukin 6 Interleukin 8
近年来的研究表明，尖锐湿疣(CA)的发生、消退、复发及癌变都与机体的免疫功能密切关联[1]。肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)是人体内的重要细胞因子，参与一系列的病理生理过程，与机体的免疫状况密切相关。为了解其与发病的关系，探讨CA发病的机理，我们对21例CA患者血浆、外周血单一核细胞培养上清液及瘤体组织匀浆中TNF-α、IL-6、IL-8水平进行了研究，现报道如下。
资料与方法
一、病例资料
就诊于本院皮肤科门诊CA患者21例，男13例，女8例，年龄20～48岁，病期1天至1年余。其中3个月以内5例，3～5个月5例，半年以上11例，切取疣体组织17例。根据我国卫生部防疫司1991年制订的CA诊断标准确诊，所有受试者均为3个月内未接受免疫治疗，且排除有自身免疫性及其他感染性疾病者。对照组为健康献血者和成人包皮环切术者。
, 百拇医药
二、方法
1.血标本制备：取静脉血，肝素抗凝，经Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离出单一核细胞及血浆。血浆收集分装后，置于-20℃保存待测。单一核细胞用完全RPMI1640培养液(含10%小牛血清，青、链霉素各100U/ml)洗涤2次后，调浓度至1×106个/ml，加入内毒素使终浓度为1μg/ml，37℃ 5% CO2孵育20小时，收集上清液，-20℃保存待测。
2.组织浆制备：无菌消毒瘤周皮肤，切取瘤体称重，生理盐水冲洗2次后，以100mg/ml比例加入生理盐水，置于匀浆器磨成匀浆后离心，取上清液分装，-20℃保存待测。
3.TNF-α水平测定(双抗体夹心法)：在已用抗TNF单抗包被的PVC反应板上加入倍比稀释的标准品、阴性对照及待测标本、辣根过氧化物酶标记的兔抗TNF抗体及底物显色剂，中止反应后测A值(曾称OD值)，读数TNF-α浓度值，以毫微克/毫升(ng/ml)计。试剂盒由北京邦定生物医学公司提供。
, http://www.100md.com
4.IL-6、IL-8水平亦采用常规ELISA双抗体夹心法测定。试剂盒由西安第四军医大学免疫学教研室提供。
5.统计学处理：各均数用配对资料t检验法进行统计学处理。
结 果
结果表明，尖锐湿疣患者血浆、PBMNC培养上清液TNF-α含量显著低于正常人组(P<0.01)。尖锐湿疣患者瘤体组织及正常人组织TNF-α量均未检出。尖锐湿疣患者血浆、瘤体组织IL-6含量显著低于正常人组(P<0.05)，PBMNC培养上清液IL-6含量显著低于正常人组(P<0.01)。尖锐湿疣患者血浆和PBMNC培养上清液IL-8含量均显著低于正常人组(P<0.01)，组织IL-8含量显著低于正常人组(P<0.05)。详见附表。
讨 论
TNF、IL-6、IL-8均是机体内作用广泛的细胞因子，可由淋巴细胞、单核细胞及上皮细胞等产生，在LPS作用下主要由激活的单核-巨噬细胞产生。适量的TNF-α对病毒感染细胞具有直接细胞毒作用，它也可刺激皮肤成纤维细胞诱导IL-1、IL-6、INF-β的合成，增进白细胞的趋化性，发挥抗病毒介质作用。同时TNF-α具有免疫调节作用。IL-6具有调节B细胞增殖分化，辅助T细胞增生活化，抗病毒等生物学效应。IL-8是T细胞、中性粒细胞的强烈趋化因子。我们的观察发现，CA患者组血浆TNF-α、IL-8均极显著性地低于正常人组，IL-6的含量也显著低于正常人组，表明上述细胞因子分泌细胞，如淋巴细胞、单核细胞功能低下，不能对人乳头瘤病毒感染作出相应的反应。
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分离外周血单一核细胞，以内毒素刺激进行培养，测定上清液中TNF-α、IL-6、IL-8的含量，发现CA组
附表 尖锐湿疣患者TNF-α、IL-6和IL-8含量的比较
(
±s,ng/ml) 组 别例数
TNF-α
IL-6
IL-8
血 浆
正常人组
8
, http://www.100md.com
3.51±0.72
0.178±0.032
2.80±1.13
尖锐湿疣组
21
2.25±0.71
0.130±0.04
1.63±0.69
t值
-
4.256
3.033
, http://www.100md.com
3.406
P值
-
<0.01
<0.01
<0.01
PBMNC培养上清液
正常人组
8
4.90±0.76
0.263±0.047
4.43±0.84
尖锐湿疣组
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21
3.82±0.56
0.187±0.038
2.02±0.75
t值
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4.206
4.513
7.491
P值
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<0.01
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组 织
正常人组
8
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0.109±0.039
1.33±0.84
尖锐湿疣组
17
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0.068±0.041
0.62±0.52
t值
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2.366
2.603
P值
-
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<0.05
<0.05
注：t值为尖锐湿疣组与正常人组比较
上述细胞因子水平均显著低于正常人组，表明CA患者经LPS作用的单核-巨噬细胞本身就存在功能障碍，其活化、分泌能力低下是血浆TNF-α、IL-6、IL-8水平低下的另一重要原因。吴魏斌等[1]已证实，CA患者T、B淋巴细胞转化能力低下。因而当人感染HPV时不能有效地调动免疫系统。对CA患者局部皮损的研究表明，郎格罕细胞形态异常，密度降低，有数量不等的以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，皮损处OKT4亚群减少，OKT4/OKT8比例明显下降[2]。我们对瘤体组织IL-6、IL-8的测定表明，CA患者组水平显著低于正常人组，说明其局部淋巴细胞不仅比例失调，而且淋巴细胞和单核细胞功能受抑或降低，不能有效地杀伤靶细胞，从而使病毒得以生长繁殖。
, http://www.100md.com
宿主细胞免疫状态是影响CA发生、转归的重要因素之一。我们的结果表明CA患者存在着全身和局部的单核-巨噬细胞功能障碍。提示用外源性TNF-α、IL-6、IL-8或刺激体内细胞因子产生的药物，将有助于治疗和预防CA的发生和复发。
参 考 文 献
1 吴魏斌, 秦晓娟, 郑国泰, 等. 尖锐湿疣患者免疫功能的检测.中国皮肤性病学杂志, 1992,6∶30.
2 Mcardle JP, Muller HK. Quantitative assessment of Langerhans′ cells inhuman cervical intraepithelial neoplasia and wart virus infection. Am J Obstet Gynecol,1986,154∶509-515.
(收稿：1997-03-17 修回：1998-01-05), 百拇医药