间接ELISA和ABC-ELISA法对天疱疮抗体检测的研究
作者：杨卫兵 刁庆春 叶庆佾
单位：541002 广西桂林，解放军第一八一医院皮肤科(杨卫兵)；重庆第三军医大学西南医院皮肤科(刁庆春 叶庆佾)
关键词：天疱疮；抗体；抗独特型；酶联免疫吸附测定
中华皮肤科杂志/980404 【摘要】 目的 建立一种新的血清中的天疱疮抗体(PAb)检测方法。方法 利用PI1天疱疮抗独特型单抗，用亲和层析法纯化患者血清中的PAb；通过间接ELISA法和ABC-ELISA法建立一种PAb的ELISA检测体系。结果 纯化的PAb为IgG4亚类，间接ELISA和ABC-ELISA法检测患者血清中PAb的敏感性和特异性较高，与间接免疫荧光法比较无显著性差异，并初步得到了检测纯化PAb浓度的标准曲线。结论 本研究建立的ELISA法是一种较好的PAb定性分析法，对天疱疮的诊断具有较好的临床应用前景，并为进一步对患者血清中PAb进行定量分析打下了基础；本检测体系针对于PAb的IgG4亚类，为进一步研究IgG4在天疱疮发病机理中的意义提供了一种较好的方法。
, 百拇医药
Detection of Pemphigus Antibodies with Indirect-ELISA and ABC-ELISA Yang Weibing, Diao Qingchun, Ye Qingyi.*Department of Dermatology, 181 Hospital, Guilin, Guangxi, 541002
【Abstract】 Objective To establish a new method for detecting pemphigus antibody (PAb). Methods PI1 anti-idiotype monoclonal antibodies against pemphigus and purified PAb from the serum of a patient with active pemphigus were used to establish an ELISA system for detecting the PAb. Results The result showed the purified PAb was IgG4 subclass, the sensitivity and specificity for the detection of PAb were high in the ELISA system, the sensitivity and specificity were not significantly different among the IIF, indirect ELISA and ABC-ELISA. The standard curve for detecting the concentration of the purified PAb was primarily obtained in the study. Conclusion The ELISA system for the detection of PAb in the sera of patients is a good qualitative method, it might be of value in the clinical diagnosis of pemphigus. It is expected to quantitatively detect PAb of pemphigus patients in the future with the ELISA system established, which isdirected to the IgG4 subclass of PAb, so it may be of value in the study of IgG4subclass in the pathogenesis of pemphigus.
, 百拇医药
【Key Words】 Pemphigus Antibodies, anti-idiotypic Enzyme-linked immunosorbent assay
天疱疮抗体(PAb)是天疱疮发病的关键因素。目前常用的PAb检测法为免疫荧光法和免疫印迹法等，都需要一定的实验条件，难以在临床推广使用。抗独特型抗体已广泛地应用于多种自身免疫性疾病的诊断和实验性治疗[1]，但在天疱疮方面国内外尚未见有关文献报道。本研究期望利用我科建立的PI1天疱疮抗独特型单抗[2]，建立一种新的PAb的检测方法。
材料和方法
一、材料
1.天疱疮患者血清：1例经临床、病理和直接免疫荧光(DIF)、间接免疫荧光(IIF)确诊为活动期寻常型天疱疮(PV)的患者，女，16岁，经血浆置换疗法置换出血浆1000ml，于-20℃冻存备用；20例临床、病理和DIF、IIF确诊的天疱疮患者，收集其血清各1ml备用。
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2.PI1天疱疮抗独特型单抗[2]：本科研制，产于BALB/c小鼠腹水，间接ELISA法测定其效价为1∶16 000。
3.主要试剂：CNBr-Activated Sepharose 4B, Pharmacia公司；HRP-羊抗人IgG，第三军医大学微生物教研室(工作浓度1∶1000)；生物素化的羊抗人IgG(工作浓度1∶500)，ABC复合物(工作浓度1∶2000)，均为军事医学科学院产品。
二、方法
(一)亲和层析法纯化PAb：将PI1单抗与CNBr-Activated Sepharose 4B偶联于层析柱中，纯化患者(活动期PV患者，女，16岁)血清中的PAb。
(二)纯化PAb的鉴定：①SDS-PAGE：浓缩胶、分离胶分别为5%和12%凝胶，垂直板电泳槽进行电泳，用银盐进行染色；②IIF检测：以正常人包皮为底物，以纯化PAb作为一抗；③免疫琼脂双向扩散试验：用1.5%的琼脂制板，鉴定纯化PAb的IgG亚类。
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(三)间接ELISA和ABC-ELISA法检测纯化PAb的标准曲线：
1.间接ELISA法：以PI1单抗(1∶100稀释)包被酶联板孔，一抗为不同浓度的纯化PAb(10～120ng/ml)。阴性对照及阳性对照分别为正常人和天疱疮患者血清(均以1∶1000稀释)。阳性判别标准为高于阴性孔A492值(曾称OD值)2.1倍以上且其值≥0.2者为阳性。
2.ABC-ELISA法：参照有关资料进行[3]。PI1单抗1∶100稀释包被酶联板孔，纯化PAb浓度为0.1～50ng/ml。阳性和阴性对照的血清同间接ELISA法，其稀释度为1∶10 000。阳性判别标准同间接ELISA法。
(四)间接ELISA和ABC-ELISA、IIF法对天疱疮患者血清中PAb检测的敏感性和特异性分析：本科收集的20例天疱疮患者血清，其中PV 14例、落叶型天疱疮(PF)4例、红斑型天疱疮(PE)2例，IIF检测均为阳性，以此作为阳性样本；20例其他自身免疫性疾病患者血清(其中类风湿性关节炎1例、SLE 15例、类天疱疮4例)，均来自我科临床标本，IIF法检测均为阴性，以此作为阴性样本。按前述间接ELISA和ABC-ELISA法进行检测。阳性对照一抗为纯化PAb(其浓度分别为50ng/ml、10ng/ml)；阴性对照、阳性对照及阳性判别标准设计同前。
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(五)IIF法、间接ELISA法、ABC-ELISA法的比较：
1.灵敏度的比较：每间隔10天后，重复5次检测纯化PAb分别在IIF、间接ELISA、ABC-ELISA法中的最低阳性浓度，并比较三者之间的差异。
2.IIF滴度与间接ELISA法A值的关系。从以上20例阳性样本中，选择10例间接ELISA法检测亦为阳性的天疱疮患者血清，测定其IIF效价后，再检测其相应的间接ELISA法A值，比较二者之间的关系。
结 果
一、PAb的纯化与鉴定
亲和层析法纯化的天疱疮患者血清中的抗体经Lowry法测定其浓度后调节为0.5mg/ml。纯化的PAb经SDS-PAGE，与分子量蛋白电泳标准品对照，在分子量约为50 000和27000处各得到一清晰的染色带；经免疫琼脂双向扩散试验鉴定其为IgG4亚类(图1)；其IIF图像为表皮细胞间均一亮绿的线状荧光(图2)。
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二、间接ELISA法和ABC-ELISA法检测纯化PAb的标准曲线
当纯化PAb浓度分别为50～100ng/ml、10～30ng/ml范围内时，其浓度分别与相应的间接ELISA和ABC-ELISA法的A492值呈非常显著的线性相关关系，P<0.01(用华西医科大学的main统计程序包进行统计学分析，以下的统计学处理均用此程序包)。其线性回归方程分别为Y=0.7157+0.00506X，Y=0.6180+0.0458X，其中X表示纯化PAb的浓度(分别为50～100和10～30ng/ml)，Y表示相应的间接ELISA和ABC-ELISA法A值。
三、敏感性和特异性分析
20例天疱疮患者血清在间接ELISA法中有16例为阳性(A值为0.78～1.74)，4例为阴性(其中PV 3例，PF 1例，其IIF滴度为1∶10～80)；在ABC-ELISA法中有18例为阳性(A值为0.89～1.45)，其中2例阴性血清间接ELISA法测定亦为阴性(PV和PF各1例，其IIF滴度分别为1∶10和1∶40)。20例其他自身免疫性疾病的患者血清均为阴性(其A值分别为0.04～0.08和0.04～0.11)。间接ELISA和ABC-ELISA法检测PAb的敏感性分别为80%和90%，特异性均为100%。而IIF法对这20例天疱疮和20例其他自身免疫性疾病患者血清检测的敏感性和特异性均为100%。三者的敏感性和特异性之间无显著性差异(P0.05)。
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图1 纯化天疱疮抗体的IgG亚类鉴定
图2 纯化天疱疮抗体的IIF检测
附表 IIF、间接ELISA和ABC-ELISA法
检测天疱疮抗体的灵敏度比较(ng/ml) 方 法
灵 敏 度
第1次
第2次
第3次
第4次
第5次
±s
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IIF
100
150
250
200
200
180±51
间接ELISA
15
30
25
35
50
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31±11.6
ABC-ELISA
1.5
1.0
4.5
3.5
0.5
2.2±1.5
四、IIF、间接ELISA、ABC-ELISA法检测纯化PAb灵敏度的比较
结果如附表所示，对结果进行统计学分析，P<0.01。说明三者灵敏度之间存在显著性差异。
五、PAb的IIF滴度与间接ELISA法A492值的关系
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IIF滴度在1∶10～1∶2560范围内的10例天疱疮患者血清，其相应的间接ELISA法A值为0.25～1.68，且随着IIF滴度的上升，其A492值亦相应上升。对二者进行相关性分析，其相关系数为0.25，P0.05，说明PAb的IIF滴度与相应的间接ELISA法A值之间无显著的线性相关。
讨 论
PI1天疱疮抗独特型单抗具有与PAb反应而与正常人血清不反应的特性[2]。本研究用亲和层析法纯化的抗体来自于活动期PV患者血清，其IIF图像为表皮细胞间清晰的线状荧光，说明纯化的抗体为PAb，SDS-PAGE证明其达到了电泳纯，该抗体为IgG4亚类。因此PI1单抗特异性地针对于PAb的IgG4亚类。
目前用于PAb测定的方法有免疫荧光法、免疫印迹法等[4]，因IIF法检测患者血清中PAb具有良好的敏感性和特异性(分别为80%～90%和100%)，被作为诊断天疱疮的标准而广泛应用，但这些方法都只能对PAb进行定性或半定量分析，且这些方法都需要一定的实验条件，难以在临床推广使用。本研究用间接ELISA和ABC-ELISA法建立了检测天疱疮患者血清中PAb的ELISA体系，与临床上常用的IIF法比较，其敏感性、特异性之间无显著性差异，且ELISA法操作简便，用于定性分析时，实验条件易于控制，可重复性好。因此本研究建立的ELISA体系是一种较好的PAb定性分析方法，对天疱疮的诊断具有较好的临床应用前景。
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间接ELISA、ABC-ELISA和IIF检测纯化PAb的灵敏度之间存在显著性差异，但20例天疱疮患者血清中有4例间接ELISA法检测为阴性，其中有2例在ABC-ELISA法检测时亦为阴性，这4例天疱疮患者血清PAb的IIF滴度均较低(1∶10～80)，出现此现象的原因可能与患者血清中PAb的IgG亚类有关。我们建立的ELISA检测体系特异性地针对于PAb的IgG4亚类，而患者在病情缓解期可能IgG4的滴度较低，以IgG1为主[5]，IIF能检测所有与表皮细胞表面结合的抗体(如IgG4、IgG1等)。因此我们推测这4例阴性血清可能为患者处于病情缓解期。
PAb与天疱疮抗原结合导致细胞间粘附功能的损伤，这是天疱疮的病理基础。IIF表明患者血清中PAb的滴度与其病情呈正相关，至于患者血清中到底含有多少“纯”的PAb，一直是临床及科研工作者感兴趣的问题，但这方面尚未见有关文献的报道。本研究初步得到了检测PAb的标准曲线，为进一步直接对患者血清中的PAb进行定量分析打下了基础。我们还发现随着天疱疮患者血清中PAb IIF滴度的升高，其相应的间接ELISA法A值亦相应上升，但二者之间无线性相关，其原因可能与PI1单抗只与天疱疮患者血清中的IgG4亚类反应有关，二者之间的关系有待进一步研究。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 邓军综述. 抗独特型抗体在自身免疫性疾病中的研究进展. 国外医学皮肤性病学分册, 1996,22∶213-215.
2 张春明, 刁庆春, 叶庆佾. 天疱疮抗独特型单克隆抗体的研制和鉴定. 中华皮肤科杂志, 1996,29∶229-231.
3 缪晓辉, 潘卫, 吴清璇, 等. ABC-ELISA检测人天然及重组γ-干扰素. 中华微生物学和免疫学杂志, 1994,14∶58-61.
4 Cozzani E, Kanitakis J, Nicolas JF, et al. Comparative study of indirect immunofluoresence and immunoblotting for diagnosis of pemphigus. Arch Dermatol Res, 1995,286∶259.
5 Bhol K, Natarajan K, Nagarwalla N, et al. Correlation of peptide specificity and IgG subclass with pathogenic and nonpathogenic autoantibodies in pemphigus: amodel for autoimmunity. Proc Natl Acad Sci USA, 1995,23;92∶5239.
(收稿：1997-08-29 修回：1997-12-25), 百拇医药
单位：541002 广西桂林，解放军第一八一医院皮肤科(杨卫兵)；重庆第三军医大学西南医院皮肤科(刁庆春 叶庆佾)
关键词：天疱疮；抗体；抗独特型；酶联免疫吸附测定
中华皮肤科杂志/980404 【摘要】 目的 建立一种新的血清中的天疱疮抗体(PAb)检测方法。方法 利用PI1天疱疮抗独特型单抗，用亲和层析法纯化患者血清中的PAb；通过间接ELISA法和ABC-ELISA法建立一种PAb的ELISA检测体系。结果 纯化的PAb为IgG4亚类，间接ELISA和ABC-ELISA法检测患者血清中PAb的敏感性和特异性较高，与间接免疫荧光法比较无显著性差异，并初步得到了检测纯化PAb浓度的标准曲线。结论 本研究建立的ELISA法是一种较好的PAb定性分析法，对天疱疮的诊断具有较好的临床应用前景，并为进一步对患者血清中PAb进行定量分析打下了基础；本检测体系针对于PAb的IgG4亚类，为进一步研究IgG4在天疱疮发病机理中的意义提供了一种较好的方法。
, 百拇医药
Detection of Pemphigus Antibodies with Indirect-ELISA and ABC-ELISA Yang Weibing, Diao Qingchun, Ye Qingyi.*Department of Dermatology, 181 Hospital, Guilin, Guangxi, 541002
【Abstract】 Objective To establish a new method for detecting pemphigus antibody (PAb). Methods PI1 anti-idiotype monoclonal antibodies against pemphigus and purified PAb from the serum of a patient with active pemphigus were used to establish an ELISA system for detecting the PAb. Results The result showed the purified PAb was IgG4 subclass, the sensitivity and specificity for the detection of PAb were high in the ELISA system, the sensitivity and specificity were not significantly different among the IIF, indirect ELISA and ABC-ELISA. The standard curve for detecting the concentration of the purified PAb was primarily obtained in the study. Conclusion The ELISA system for the detection of PAb in the sera of patients is a good qualitative method, it might be of value in the clinical diagnosis of pemphigus. It is expected to quantitatively detect PAb of pemphigus patients in the future with the ELISA system established, which isdirected to the IgG4 subclass of PAb, so it may be of value in the study of IgG4subclass in the pathogenesis of pemphigus.
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【Key Words】 Pemphigus Antibodies, anti-idiotypic Enzyme-linked immunosorbent assay
天疱疮抗体(PAb)是天疱疮发病的关键因素。目前常用的PAb检测法为免疫荧光法和免疫印迹法等，都需要一定的实验条件，难以在临床推广使用。抗独特型抗体已广泛地应用于多种自身免疫性疾病的诊断和实验性治疗[1]，但在天疱疮方面国内外尚未见有关文献报道。本研究期望利用我科建立的PI1天疱疮抗独特型单抗[2]，建立一种新的PAb的检测方法。
材料和方法
一、材料
1.天疱疮患者血清：1例经临床、病理和直接免疫荧光(DIF)、间接免疫荧光(IIF)确诊为活动期寻常型天疱疮(PV)的患者，女，16岁，经血浆置换疗法置换出血浆1000ml，于-20℃冻存备用；20例临床、病理和DIF、IIF确诊的天疱疮患者，收集其血清各1ml备用。
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2.PI1天疱疮抗独特型单抗[2]：本科研制，产于BALB/c小鼠腹水，间接ELISA法测定其效价为1∶16 000。
3.主要试剂：CNBr-Activated Sepharose 4B, Pharmacia公司；HRP-羊抗人IgG，第三军医大学微生物教研室(工作浓度1∶1000)；生物素化的羊抗人IgG(工作浓度1∶500)，ABC复合物(工作浓度1∶2000)，均为军事医学科学院产品。
二、方法
(一)亲和层析法纯化PAb：将PI1单抗与CNBr-Activated Sepharose 4B偶联于层析柱中，纯化患者(活动期PV患者，女，16岁)血清中的PAb。
(二)纯化PAb的鉴定：①SDS-PAGE：浓缩胶、分离胶分别为5%和12%凝胶，垂直板电泳槽进行电泳，用银盐进行染色；②IIF检测：以正常人包皮为底物，以纯化PAb作为一抗；③免疫琼脂双向扩散试验：用1.5%的琼脂制板，鉴定纯化PAb的IgG亚类。
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(三)间接ELISA和ABC-ELISA法检测纯化PAb的标准曲线：
1.间接ELISA法：以PI1单抗(1∶100稀释)包被酶联板孔，一抗为不同浓度的纯化PAb(10～120ng/ml)。阴性对照及阳性对照分别为正常人和天疱疮患者血清(均以1∶1000稀释)。阳性判别标准为高于阴性孔A492值(曾称OD值)2.1倍以上且其值≥0.2者为阳性。
2.ABC-ELISA法：参照有关资料进行[3]。PI1单抗1∶100稀释包被酶联板孔，纯化PAb浓度为0.1～50ng/ml。阳性和阴性对照的血清同间接ELISA法，其稀释度为1∶10 000。阳性判别标准同间接ELISA法。
(四)间接ELISA和ABC-ELISA、IIF法对天疱疮患者血清中PAb检测的敏感性和特异性分析：本科收集的20例天疱疮患者血清，其中PV 14例、落叶型天疱疮(PF)4例、红斑型天疱疮(PE)2例，IIF检测均为阳性，以此作为阳性样本；20例其他自身免疫性疾病患者血清(其中类风湿性关节炎1例、SLE 15例、类天疱疮4例)，均来自我科临床标本，IIF法检测均为阴性，以此作为阴性样本。按前述间接ELISA和ABC-ELISA法进行检测。阳性对照一抗为纯化PAb(其浓度分别为50ng/ml、10ng/ml)；阴性对照、阳性对照及阳性判别标准设计同前。
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(五)IIF法、间接ELISA法、ABC-ELISA法的比较：
1.灵敏度的比较：每间隔10天后，重复5次检测纯化PAb分别在IIF、间接ELISA、ABC-ELISA法中的最低阳性浓度，并比较三者之间的差异。
2.IIF滴度与间接ELISA法A值的关系。从以上20例阳性样本中，选择10例间接ELISA法检测亦为阳性的天疱疮患者血清，测定其IIF效价后，再检测其相应的间接ELISA法A值，比较二者之间的关系。
结 果
一、PAb的纯化与鉴定
亲和层析法纯化的天疱疮患者血清中的抗体经Lowry法测定其浓度后调节为0.5mg/ml。纯化的PAb经SDS-PAGE，与分子量蛋白电泳标准品对照，在分子量约为50 000和27000处各得到一清晰的染色带；经免疫琼脂双向扩散试验鉴定其为IgG4亚类(图1)；其IIF图像为表皮细胞间均一亮绿的线状荧光(图2)。
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二、间接ELISA法和ABC-ELISA法检测纯化PAb的标准曲线
当纯化PAb浓度分别为50～100ng/ml、10～30ng/ml范围内时，其浓度分别与相应的间接ELISA和ABC-ELISA法的A492值呈非常显著的线性相关关系，P<0.01(用华西医科大学的main统计程序包进行统计学分析，以下的统计学处理均用此程序包)。其线性回归方程分别为Y=0.7157+0.00506X，Y=0.6180+0.0458X，其中X表示纯化PAb的浓度(分别为50～100和10～30ng/ml)，Y表示相应的间接ELISA和ABC-ELISA法A值。
三、敏感性和特异性分析
20例天疱疮患者血清在间接ELISA法中有16例为阳性(A值为0.78～1.74)，4例为阴性(其中PV 3例，PF 1例，其IIF滴度为1∶10～80)；在ABC-ELISA法中有18例为阳性(A值为0.89～1.45)，其中2例阴性血清间接ELISA法测定亦为阴性(PV和PF各1例，其IIF滴度分别为1∶10和1∶40)。20例其他自身免疫性疾病的患者血清均为阴性(其A值分别为0.04～0.08和0.04～0.11)。间接ELISA和ABC-ELISA法检测PAb的敏感性分别为80%和90%，特异性均为100%。而IIF法对这20例天疱疮和20例其他自身免疫性疾病患者血清检测的敏感性和特异性均为100%。三者的敏感性和特异性之间无显著性差异(P0.05)。
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图1 纯化天疱疮抗体的IgG亚类鉴定
图2 纯化天疱疮抗体的IIF检测
附表 IIF、间接ELISA和ABC-ELISA法
检测天疱疮抗体的灵敏度比较(ng/ml) 方 法
灵 敏 度
第1次
第2次
第3次
第4次
第5次
±s, 百拇医药
IIF
100
150
250
200
200
180±51
间接ELISA
15
30
25
35
50
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31±11.6
ABC-ELISA
1.5
1.0
4.5
3.5
0.5
2.2±1.5
四、IIF、间接ELISA、ABC-ELISA法检测纯化PAb灵敏度的比较
结果如附表所示，对结果进行统计学分析，P<0.01。说明三者灵敏度之间存在显著性差异。
五、PAb的IIF滴度与间接ELISA法A492值的关系
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IIF滴度在1∶10～1∶2560范围内的10例天疱疮患者血清，其相应的间接ELISA法A值为0.25～1.68，且随着IIF滴度的上升，其A492值亦相应上升。对二者进行相关性分析，其相关系数为0.25，P0.05，说明PAb的IIF滴度与相应的间接ELISA法A值之间无显著的线性相关。
讨 论
PI1天疱疮抗独特型单抗具有与PAb反应而与正常人血清不反应的特性[2]。本研究用亲和层析法纯化的抗体来自于活动期PV患者血清，其IIF图像为表皮细胞间清晰的线状荧光，说明纯化的抗体为PAb，SDS-PAGE证明其达到了电泳纯，该抗体为IgG4亚类。因此PI1单抗特异性地针对于PAb的IgG4亚类。
目前用于PAb测定的方法有免疫荧光法、免疫印迹法等[4]，因IIF法检测患者血清中PAb具有良好的敏感性和特异性(分别为80%～90%和100%)，被作为诊断天疱疮的标准而广泛应用，但这些方法都只能对PAb进行定性或半定量分析，且这些方法都需要一定的实验条件，难以在临床推广使用。本研究用间接ELISA和ABC-ELISA法建立了检测天疱疮患者血清中PAb的ELISA体系，与临床上常用的IIF法比较，其敏感性、特异性之间无显著性差异，且ELISA法操作简便，用于定性分析时，实验条件易于控制，可重复性好。因此本研究建立的ELISA体系是一种较好的PAb定性分析方法，对天疱疮的诊断具有较好的临床应用前景。
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间接ELISA、ABC-ELISA和IIF检测纯化PAb的灵敏度之间存在显著性差异，但20例天疱疮患者血清中有4例间接ELISA法检测为阴性，其中有2例在ABC-ELISA法检测时亦为阴性，这4例天疱疮患者血清PAb的IIF滴度均较低(1∶10～80)，出现此现象的原因可能与患者血清中PAb的IgG亚类有关。我们建立的ELISA检测体系特异性地针对于PAb的IgG4亚类，而患者在病情缓解期可能IgG4的滴度较低，以IgG1为主[5]，IIF能检测所有与表皮细胞表面结合的抗体(如IgG4、IgG1等)。因此我们推测这4例阴性血清可能为患者处于病情缓解期。
PAb与天疱疮抗原结合导致细胞间粘附功能的损伤，这是天疱疮的病理基础。IIF表明患者血清中PAb的滴度与其病情呈正相关，至于患者血清中到底含有多少“纯”的PAb，一直是临床及科研工作者感兴趣的问题，但这方面尚未见有关文献的报道。本研究初步得到了检测PAb的标准曲线，为进一步直接对患者血清中的PAb进行定量分析打下了基础。我们还发现随着天疱疮患者血清中PAb IIF滴度的升高，其相应的间接ELISA法A值亦相应上升，但二者之间无线性相关，其原因可能与PI1单抗只与天疱疮患者血清中的IgG4亚类反应有关，二者之间的关系有待进一步研究。
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参 考 文 献
1 邓军综述. 抗独特型抗体在自身免疫性疾病中的研究进展. 国外医学皮肤性病学分册, 1996,22∶213-215.
2 张春明, 刁庆春, 叶庆佾. 天疱疮抗独特型单克隆抗体的研制和鉴定. 中华皮肤科杂志, 1996,29∶229-231.
3 缪晓辉, 潘卫, 吴清璇, 等. ABC-ELISA检测人天然及重组γ-干扰素. 中华微生物学和免疫学杂志, 1994,14∶58-61.
4 Cozzani E, Kanitakis J, Nicolas JF, et al. Comparative study of indirect immunofluoresence and immunoblotting for diagnosis of pemphigus. Arch Dermatol Res, 1995,286∶259.
5 Bhol K, Natarajan K, Nagarwalla N, et al. Correlation of peptide specificity and IgG subclass with pathogenic and nonpathogenic autoantibodies in pemphigus: amodel for autoimmunity. Proc Natl Acad Sci USA, 1995,23;92∶5239.
(收稿：1997-08-29 修回：1997-12-25), 百拇医药