男性无症状性病高危人群尿沉渣检测沙眼衣原体
作者：谢礼豪 程文海 黄澍杰 周康涛 卢和琨 吴志周 戴丽华
单位：529000 广东省江门市皮肤病性病防治研究所
关键词：沙眼衣原体；聚合酶链反应；酶联免疫反应
中华皮肤科杂志980511 【摘要】 目的 研究能否用尿沉渣代替尿道拭子检 测沙眼衣原体(Ct)。方法 分别用Wellcozyme chlamydia法和PCR 法对352例男性无症状的性病高危人群首段尿沉渣进行Ct检测，两法经尿沉渣、尿道拭子配 对研究。结果 以尿道拭子Ct培养为金标准，两种方法的敏感性 和特异性分别为50.98%(P<0.05)和100%(P>0.05)，9 8.04%(P>0.05)和96.68%(P>0.05)。结论 对Ct的检测，用Wellcozyme chlamydia法时，不宜用尿沉渣代替尿道拭子 作标本；而用PCR法时，可用尿沉渣代替尿道拭子作标本。
, http://www.100md.com
Detection of Chlamydia Trachomatis in Urine from Asym ptomatic Males of STD High Risk Population Xie Lihao, Cheng Wenhai, H uang Shujie, et al. Jiangmen Institiute of Dermatology, Center for STD Preventi on and Treatment, Jiangmen, Guangdong 529000
【Abstract】 Objective To study whether Chlam ydia trach omatis (Ct) can be detected in urine specimens. Methods The fi rst void urine sediments from 352 asymptomatic males of STD high risk populati on were measured by Wellcozyme chlamydia and PCR. Results Using the urethral swab culture as gold standard, the sensitivity and specificity of Wellcozyme chlamydia were 5 0.98% (P<0.05) and 100% (P>0.05), and those o f PCR were 98.04% (P>0.05) and 96.68% (P>0.05), respectively. Conclusion It is suggested that urine sediments can not be used as the sp ecimens for the detection of Ct by Wellcozyme chlamydia, and urine se diments can be used if Ct is detected by PCR.
, http://www.100md.com
【Key words】 Chlamydia trachomatis Polymerase chain reaction Enzyme immunoassay
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, Ct)是引起非淋菌性 尿道炎的常见病原体之一。临床上Ct实验室诊断一般采取尿道/宫颈拭子作标本。近十余年 来，国内外学者用尿液作标本对男性有尿道炎症状患者进行Ct检测取得了较好效果 [1，2]，但对男性无症状感染者进行Ct检测，结果报道不一 [3，4]。我们用尿道拭子Ct培养作金标准，分别对用Wellcozyme chlamydia( WC) 法和PCR法检测352例男性无症状的性病高危人群尿道拭子和尿沉渣，并对其敏感性和特异性 进行比较，现将结果报道如下。
资料和方法
(一)病例：352例男性患者均符合下列条件，即：①有非婚性接触史或性伴 有性病史；②无尿道炎症状和体征；③就诊前2周内未用过抗生素。
, http://www.100md.com
(二)取材方法：随机选择部分患者，先取尿道拭子3支，分别插入尿道2cm、3cm、4cm深处。 接着取尿液20ml(晨起或隔3小时以上的首段尿)。另一部分患者则为先采取尿标本，后取尿道拭子。
(三)尿标本处理：将尿液分装于2支离心管，以3000r/min离心20分钟，弃掉上清液，将尿沉 渣置于4℃冰箱保存(不超过7天)。实验时2支离心管各加入pH7.4磷酸缓冲液或由试剂盒 厂家提供的缓冲液，摇匀使之形成悬浮液，随机分配用WC和PCR法测定 。
(四)Ct的Mc Coy细胞培养：参照叶顺章等[5]方法进行。Mc Coy细 胞由广州中山医科大学微生物教研室提供。
(五)WC法检测Ct抗原：采用英国Murex公司生产的检测Ct抗原试剂盒。 操作按试剂盒说明进行。
(六)PCR检测Ct DNA：采用中国军事医学科学院生产的检测Ct试剂盒。引物为CT-A：5′G GA CAAATCGTATCTCGG3′，CT-B：5′GAAACCAACTCTACGCTG3′，操作按试剂盒说明书进行。
, 百拇医药
结 果
一、无症状的性病高危人群不同标本和方法检测Ct的结果详见表1。
表1 352例无症状性病高危人群不同标本和方法检测沙眼衣原体的结果 细胞培养
Wellcozyme chlamydia
PCR 法
合计
尿道拭子
尿道拭子
尿沉渣
尿道拭子
尿沉渣
, http://www.100md.com
例数
+
+
+
+
+
22
+
+
-
+
+
20
+
, http://www.100md.com
-
+
+
+
2
+
+
-
+
-
1
+
-
+
, http://www.100md.com
-
+
2
+
-
-
+
+
4
-
-
-
+
+
, 百拇医药
8
-
-
-
+
-
1
-
-
-
-
+
2
-
, http://www.100md.com
-
-
-
-
290
(二)无症状的性病高危人群尿道拭子/尿沉渣WC法 检测Ct结果：用WC法检测尿道拭子、尿沉渣中Ct抗原，两种标本检测结 果均阳性22例，均阴性305例。尿道拭子阳性、尿沉渣阴性21例。尿道拭子阴性、尿沉渣阳 性4例。经配对计数资料χ2检验，χ2=10.29，P<0.01，差异有 显著性。
(三)无症状的性病高危人群尿道拭子/尿沉渣PCR检测Ct结果：用PCR法检测尿道拭子/尿沉渣 Ct DNA，两种标本检测结果均阳性有56例，均阴性有290例。尿道拭子阳性、尿沉渣阴性2例 。尿道拭子阴性、尿沉渣阳性4例。经配对计数资料χ2检验，χ2=0.17，P >0.05，差异无显著性。
, 百拇医药
(四)以尿道拭子Ct培养作金标准，用WC法和PCR法检测尿道拭子/尿沉渣 中Ct敏感性和特异性见表2。 表2 Wellcozyme chlamydia法和PCR检测尿道拭子/尿沉渣中
沙眼衣原体敏感性和特异性比较 方 法
敏感性(%)
P值
特异性(%)
P值
Wellcozyme chlamydia
尿道拭子
84.31(43/51)
>0.05
, http://www.100md.com
100(301/301)
>0.05
尿沉渣
50.98(26/51)
<0.05
100(301/301)
>0.05
PCR
尿道拭子
96.08(49/51)
>0.05
97(292/301)
, http://www.100md.com
>0.05
尿沉渣
98.04(50/51)
>0.05
96.68(291/301)
>0.05
讨 论
在泌尿生殖道Ct感染中无临床症状的病例占相当比例，国外报道约占1/3[6]，国内廖明敏等[7]报道约占1/2，成为 沙眼衣原体的主要传染源。目前临床上检测Ct的方法很多，一般都是采用尿道/宫颈拭子作标本。取男性患者尿道 拭子常引起局部疼痛不适，容易损伤尿道粘膜，部分患者难以接受。长期以来，人们一直希 望能用尿液检测Ct。早期研究表明用尿标本进行Ct培养的阳性率很低。直到Ct非细胞培养法 应用以后，证实能够用尿液作标本检测男性有症状非淋菌性尿道炎Ct抗原或DNA [1，2]。但对是否能同样用于检测男性无症状的性病高危人群，目前尚有争 论[3，4]。
, 百拇医药
本组352例男性无症状的性病高危人群，以尿道拭子Ct细胞培养作金标准，用WC法检测尿 沉渣Ct的敏感性和特异性分别为50.98%和100%；用PCR法检测尿沉渣Ct的敏 感性和特异性分别为98.04%和96.68%。表明用PCR法检测男性无症状的性病高危人群的Ct 感染，用尿沉渣作标本具有较高的敏感性和特异性，可以替代尿道拭子，这对大规模人群感 染调查具有一定意义。而WC法检测男性无症状性病高危人群尿沉渣Ct的 敏感性较低，其原因可能是，此法是一种酶联免疫法，少量的Ct包涵体往往不足以产生抗原 抗体反应。对这个问题的解决，是否可以增加尿液标本量或提高离心速度，尚有待进一步研 究。
志谢 第一军医大学南方医院谭仲楷教授审阅
参考文献 1 Quinn TC, Welsh L, Lentz A, et al. Diagnosis by AMPLICOR PCR of Chlamydia trachomatis infection in urine samples from w o men and men attending sexually transmitted disease clinics. J Clin Microbiol, 19 96,34∶1401-1406.
, 百拇医药
2 程文海, 徐广坤. 利用男性非淋菌性尿道炎患者尿沉渣检测沙眼衣原体. 临床皮 肤科杂志, 1997,26∶9-11.
3 Furrell DJ, Haran MV, Park BW. Comparison of PCR/nucleic acid hybridiza tion and EIA for the detection of Chlamydia trachomatis in different pop ulations in a regional centre. Pathology, 1996,28∶74-78.
4 Leonardi GP, Seitz M, Edstrom R, et al. Evaluation of three immunoassay s for de tection of Chlamydia trachomatis in urine specimens from asympto matic males. J Clin Microbiol, 1992,30∶2793-2796.
, 百拇医药
5 叶顺章, 张木友主编. 性传播疾病实验室诊断手册. 广州: 广东科技出版社, 199 1.46-47.
6 Shafter MA, Prager V, Shalwitz J, et al. Prevalence of urethral Chlamyd ia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae among asymptoma tic sexually active adolescent boys. J Infect Dis, 1987,156∶223-225.
7 廖明敏, 顾伟鸣, 乐嘉豫, 等. 性病高危人群沙眼衣原体感染初步调查. 中华皮 肤科杂志, 1991,24∶253-254., 百拇医药
单位：529000 广东省江门市皮肤病性病防治研究所
关键词：沙眼衣原体；聚合酶链反应；酶联免疫反应
中华皮肤科杂志980511 【摘要】 目的 研究能否用尿沉渣代替尿道拭子检 测沙眼衣原体(Ct)。方法 分别用Wellcozyme chlamydia法和PCR 法对352例男性无症状的性病高危人群首段尿沉渣进行Ct检测，两法经尿沉渣、尿道拭子配 对研究。结果 以尿道拭子Ct培养为金标准，两种方法的敏感性 和特异性分别为50.98%(P<0.05)和100%(P>0.05)，9 8.04%(P>0.05)和96.68%(P>0.05)。结论 对Ct的检测，用Wellcozyme chlamydia法时，不宜用尿沉渣代替尿道拭子 作标本；而用PCR法时，可用尿沉渣代替尿道拭子作标本。
, http://www.100md.com
Detection of Chlamydia Trachomatis in Urine from Asym ptomatic Males of STD High Risk Population Xie Lihao, Cheng Wenhai, H uang Shujie, et al. Jiangmen Institiute of Dermatology, Center for STD Preventi on and Treatment, Jiangmen, Guangdong 529000
【Abstract】 Objective To study whether Chlam ydia trach omatis (Ct) can be detected in urine specimens. Methods The fi rst void urine sediments from 352 asymptomatic males of STD high risk populati on were measured by Wellcozyme chlamydia and PCR. Results Using the urethral swab culture as gold standard, the sensitivity and specificity of Wellcozyme chlamydia were 5 0.98% (P<0.05) and 100% (P>0.05), and those o f PCR were 98.04% (P>0.05) and 96.68% (P>0.05), respectively. Conclusion It is suggested that urine sediments can not be used as the sp ecimens for the detection of Ct by Wellcozyme chlamydia, and urine se diments can be used if Ct is detected by PCR.
, http://www.100md.com
【Key words】 Chlamydia trachomatis Polymerase chain reaction Enzyme immunoassay
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, Ct)是引起非淋菌性 尿道炎的常见病原体之一。临床上Ct实验室诊断一般采取尿道/宫颈拭子作标本。近十余年 来，国内外学者用尿液作标本对男性有尿道炎症状患者进行Ct检测取得了较好效果 [1，2]，但对男性无症状感染者进行Ct检测，结果报道不一 [3，4]。我们用尿道拭子Ct培养作金标准，分别对用Wellcozyme chlamydia( WC) 法和PCR法检测352例男性无症状的性病高危人群尿道拭子和尿沉渣，并对其敏感性和特异性 进行比较，现将结果报道如下。
资料和方法
(一)病例：352例男性患者均符合下列条件，即：①有非婚性接触史或性伴 有性病史；②无尿道炎症状和体征；③就诊前2周内未用过抗生素。
, http://www.100md.com
(二)取材方法：随机选择部分患者，先取尿道拭子3支，分别插入尿道2cm、3cm、4cm深处。 接着取尿液20ml(晨起或隔3小时以上的首段尿)。另一部分患者则为先采取尿标本，后取尿道拭子。
(三)尿标本处理：将尿液分装于2支离心管，以3000r/min离心20分钟，弃掉上清液，将尿沉 渣置于4℃冰箱保存(不超过7天)。实验时2支离心管各加入pH7.4磷酸缓冲液或由试剂盒 厂家提供的缓冲液，摇匀使之形成悬浮液，随机分配用WC和PCR法测定 。
(四)Ct的Mc Coy细胞培养：参照叶顺章等[5]方法进行。Mc Coy细 胞由广州中山医科大学微生物教研室提供。
(五)WC法检测Ct抗原：采用英国Murex公司生产的检测Ct抗原试剂盒。 操作按试剂盒说明进行。
(六)PCR检测Ct DNA：采用中国军事医学科学院生产的检测Ct试剂盒。引物为CT-A：5′G GA CAAATCGTATCTCGG3′，CT-B：5′GAAACCAACTCTACGCTG3′，操作按试剂盒说明书进行。
, 百拇医药
结 果
一、无症状的性病高危人群不同标本和方法检测Ct的结果详见表1。
表1 352例无症状性病高危人群不同标本和方法检测沙眼衣原体的结果 细胞培养
Wellcozyme chlamydia
PCR 法
合计
尿道拭子
尿道拭子
尿沉渣
尿道拭子
尿沉渣
, http://www.100md.com
例数
+
+
+
+
+
22
+
+
-
+
+
20
+
, http://www.100md.com
-
+
+
+
2
+
+
-
+
-
1
+
-
+
, http://www.100md.com
-
+
2
+
-
-
+
+
4
-
-
-
+
+
, 百拇医药
8
-
-
-
+
-
1
-
-
-
-
+
2
-
, http://www.100md.com
-
-
-
-
290
(二)无症状的性病高危人群尿道拭子/尿沉渣WC法 检测Ct结果：用WC法检测尿道拭子、尿沉渣中Ct抗原，两种标本检测结 果均阳性22例，均阴性305例。尿道拭子阳性、尿沉渣阴性21例。尿道拭子阴性、尿沉渣阳 性4例。经配对计数资料χ2检验，χ2=10.29，P<0.01，差异有 显著性。
(三)无症状的性病高危人群尿道拭子/尿沉渣PCR检测Ct结果：用PCR法检测尿道拭子/尿沉渣 Ct DNA，两种标本检测结果均阳性有56例，均阴性有290例。尿道拭子阳性、尿沉渣阴性2例 。尿道拭子阴性、尿沉渣阳性4例。经配对计数资料χ2检验，χ2=0.17，P >0.05，差异无显著性。
, 百拇医药
(四)以尿道拭子Ct培养作金标准，用WC法和PCR法检测尿道拭子/尿沉渣 中Ct敏感性和特异性见表2。 表2 Wellcozyme chlamydia法和PCR检测尿道拭子/尿沉渣中
沙眼衣原体敏感性和特异性比较 方 法
敏感性(%)
P值
特异性(%)
P值
Wellcozyme chlamydia
尿道拭子
84.31(43/51)
>0.05
, http://www.100md.com
100(301/301)
>0.05
尿沉渣
50.98(26/51)
<0.05
100(301/301)
>0.05
PCR
尿道拭子
96.08(49/51)
>0.05
97(292/301)
, http://www.100md.com
>0.05
尿沉渣
98.04(50/51)
>0.05
96.68(291/301)
>0.05
讨 论
在泌尿生殖道Ct感染中无临床症状的病例占相当比例，国外报道约占1/3[6]，国内廖明敏等[7]报道约占1/2，成为 沙眼衣原体的主要传染源。目前临床上检测Ct的方法很多，一般都是采用尿道/宫颈拭子作标本。取男性患者尿道 拭子常引起局部疼痛不适，容易损伤尿道粘膜，部分患者难以接受。长期以来，人们一直希 望能用尿液检测Ct。早期研究表明用尿标本进行Ct培养的阳性率很低。直到Ct非细胞培养法 应用以后，证实能够用尿液作标本检测男性有症状非淋菌性尿道炎Ct抗原或DNA [1，2]。但对是否能同样用于检测男性无症状的性病高危人群，目前尚有争 论[3，4]。
, 百拇医药
本组352例男性无症状的性病高危人群，以尿道拭子Ct细胞培养作金标准，用WC法检测尿 沉渣Ct的敏感性和特异性分别为50.98%和100%；用PCR法检测尿沉渣Ct的敏 感性和特异性分别为98.04%和96.68%。表明用PCR法检测男性无症状的性病高危人群的Ct 感染，用尿沉渣作标本具有较高的敏感性和特异性，可以替代尿道拭子，这对大规模人群感 染调查具有一定意义。而WC法检测男性无症状性病高危人群尿沉渣Ct的 敏感性较低，其原因可能是，此法是一种酶联免疫法，少量的Ct包涵体往往不足以产生抗原 抗体反应。对这个问题的解决，是否可以增加尿液标本量或提高离心速度，尚有待进一步研 究。
志谢 第一军医大学南方医院谭仲楷教授审阅
参考文献 1 Quinn TC, Welsh L, Lentz A, et al. Diagnosis by AMPLICOR PCR of Chlamydia trachomatis infection in urine samples from w o men and men attending sexually transmitted disease clinics. J Clin Microbiol, 19 96,34∶1401-1406.
, 百拇医药
2 程文海, 徐广坤. 利用男性非淋菌性尿道炎患者尿沉渣检测沙眼衣原体. 临床皮 肤科杂志, 1997,26∶9-11.
3 Furrell DJ, Haran MV, Park BW. Comparison of PCR/nucleic acid hybridiza tion and EIA for the detection of Chlamydia trachomatis in different pop ulations in a regional centre. Pathology, 1996,28∶74-78.
4 Leonardi GP, Seitz M, Edstrom R, et al. Evaluation of three immunoassay s for de tection of Chlamydia trachomatis in urine specimens from asympto matic males. J Clin Microbiol, 1992,30∶2793-2796.
, 百拇医药
5 叶顺章, 张木友主编. 性传播疾病实验室诊断手册. 广州: 广东科技出版社, 199 1.46-47.
6 Shafter MA, Prager V, Shalwitz J, et al. Prevalence of urethral Chlamyd ia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae among asymptoma tic sexually active adolescent boys. J Infect Dis, 1987,156∶223-225.
7 廖明敏, 顾伟鸣, 乐嘉豫, 等. 性病高危人群沙眼衣原体感染初步调查. 中华皮 肤科杂志, 1991,24∶253-254., 百拇医药