银屑病患者皮肤鳞屑真菌的分离及流式细胞计数分析
作者：李艳佳 高顺强 林元珠 康彦考 邓秋敏 陈秀鉴
单位：李艳佳 康彦考 邓秋敏 050011 石家庄市第一医院皮肤科；高顺强 林元珠(指导者) 河北医科大学附属第四医院皮肤科；陈秀鉴(指导者) 河北医科大学病理教研室
关键词：银屑病；真菌；马拉色霉菌属
中华皮肤科杂志990213 【摘 要】 目的 了解真菌特别是糠秕孢子菌与银屑病的关系。方法 对82例银屑病患者和40例正常人的头皮、指甲、背部、上肢或下肢4个部位的皮肤鳞屑在3种不同培养基上进行了真菌培养分离，并应用流式细胞计数检测了8株银屑病皮损处糠秕孢子菌和4株正常人的糠秕孢子菌的DNA总含量及周期变化。结果 1发现银屑病患者的真菌带菌率明显高于对照组(P<0.05)，银屑病患者皮损处真菌阳性率与非皮损处的阳性率有非常显著性差异(P<0.01)。2在银屑病组培养出59株糠秕孢子菌，而对照组仅有9株，有显著性差异。3S期的细胞比率和PI值银屑病组低于对照组。结论 真菌特别是糠秕孢子菌在银屑病患者的皮损处和正常皮肤上都较正常人高，对银屑病的发病有一定影响。
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Isolation and Flow Cytometry Analysis of Fungi in the Skin Scale
of Psoriatic Patients
LI Yanjia, GAO Shunqiang, LIN Yuanzhu, et al.
Department of Dermatology, First Hospital of Shijiazhuang, Shijiazhuang 050011
【Abstract】 Objective To investigate the relationship between fungi, especially Malassezia furfur and psoriasis. Methods The skin scale from scalps, nails, backs and extremities of 82 psoriatic patients and 40 healthy controls were collected and cultured on three media for isolation. Eight strains of M.furfur from psoriatic lesions and four strains from controls were analysed by flow cytometry. Results (1)It was found that the isolation rates of fungi were significantly higher in psoriatic group than those in controls (P<0.05). The isolation rates of the lesions were significantly higher than those of the uninvolved skin in psoriatic patients (P<0.01).(2)Fifty nine strains of M.furfur in psoriatic group and 9 strains in controls were cultured and the difference of isolation rate was significant. (3)The ratio of cells in S stage and proliferative index of isolated M.furfur were significantly lower in psoriatic group than those in controls. Conclusion The results indicate that fungi, especially M.furfur, are more frequently isolated in the lesions and uninvolved skin of psoriatic patients than those in healthy controls. It is suggested that fungi might play a role in the pathogenesis of psoriasis.
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【Key words】 Psoriasis Fungi Malassezia
研究证明糠秕孢子菌与银屑病有一定关系[1]。我们于1997年3～4月对82例银屑病患者和40例正常人的皮肤鳞屑进行了真菌学调查研究，并应用流式细胞计数 (flow cytometry,FCM)检测了两组糠秕孢子菌的DNA含量及周期变化，以了解银屑病皮损处鳞屑与正常皮肤鳞屑中的糠秕孢子菌DNA含量及周期变化是否有差别，现将结果报道如下。
材料和方法
(一)临床资料：82例银屑病患者均经皮肤科确诊，其中男54例，女28例；年龄8～66岁，平均39岁；病程1个月至50年，平均10.18年；寻常型80例， 其中钱币状15例、斑块状32例、点滴状33例；红皮病型2例；进行期64例、消退期5例、静止期13例；正常人对照来自皮肤科门诊患者家属及本院健康人40例，其中男21例，女19例；年龄7～60岁，平均34.65岁。
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(二)方法：
1.标本采集：常规75%酒精消毒后，刮取银屑病患者和正常人头皮、指甲、背部、上肢或下肢4个部位的皮肤鳞屑，直接接种于培养基。
2.培养基：1含氯霉素的沙堡培养基。2含氯霉素、放线菌酮、4%麻油的沙堡培养基。3琼脂20g/L、蛋白胨10g/L、葡萄糖40g/L、胆固醇10g/L、单硬脂酸甘油酯10g/L、酵母浸膏1.0g/L、吐温80 20mL/L、麻油40mL/L、氯霉素0.125g/L。
3.培养方法：将刮取的鳞屑分别接种于上述3种培养基上，将1号培养基置25℃恒温箱中培养；将2号和3号培养基置37℃恒温箱中培养。2周后观察结果。
4.真菌学鉴定：培养2周后，进行肉眼观察、镜下观察，确定酵母样菌和霉菌。然后再通过玉米吐温小培养、血清芽管试验和糖发酵和同化试验确定念珠菌属和糠秕孢子菌。
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5.流式细胞计数方法：
(1)菌种来源：检测了12株糠秕孢子菌，其中银屑病组8株，正常对照组4株，均来自我们对82例银屑病患者和40例健康人的皮肤鳞屑进行培养、分离所得的糠秕孢子菌中。这些菌种都是我们通过肉眼观察菌落形态、显微镜下观察、血清芽管试验、糖同化试验和糖发酵试验后确定为糠秕孢子菌的菌种。均为分离后转种的第2代菌种。
(2)单细胞的制备:1将12株菌接种到含4%麻油、氯霉素、放线菌酮的沙堡培养基上，37℃恒温箱培养6d。2取同样大小的菌落置1mL无菌生理盐水中制成混悬液，然后加入10%福尔马林液1mL固定。3送入细胞分析室后，用无菌生理盐水冲洗，用300目筛网过滤，洗去培养基残渣。4离心后弃上清液，单细胞制备完成。
(3)DNA染色：用溴化乙啶(EB)一步插入法对DNA进行染色，然后置4℃冰箱30min后即可上机测定。
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(4)流式细胞仪分析：我们使用的是FACS420型流式细胞仪，每份标本至少检测104个细胞。检测前我们用鸡红细胞作为内参标准，使仪器的CV值在5%以内。测得的结果以DNA含量分布直方图显示，其数据和图形均经过HP-300 Consort 30计算机进行处理分析，计算出细胞周期中的G0/G1期、S期、G2M期占整个细胞周期的百分比。同时我们还进行了FSC(前向角散射)和FL1(荧光强度)的双参数分析。
(5)DNA含量和PI值(增殖指数)的计算方法：
(6)统计学方法：上述结果采用χ2检验和t′检验进行统计学处理。
结 果
(一)鉴定结果：82例银屑病患者，每种培养基接种了328管，3种培养基共接种了984管，根据真菌学鉴定，阳性菌388株，其中酵母菌253株和霉菌135株；对照组共40例，3种培养基共接种480管，结果阳性菌108株，包括酵母菌58株和霉菌50株，见表1。
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表1 银屑病患者与正常人对照组皮肤鳞屑真菌培养结果 组别
菌株数
糠秕孢子菌
白念珠菌
近平滑念珠菌
高里念珠菌
类星形念珠菌
克柔念珠菌
其他酵母菌
交链孢霉
青霉
黑曲霉
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米曲霉
黄曲霉
毛霉
根霉
木霉
弯孢霉
待定
银屑病组
388
59(15.2)
10(2.6)
8(2.1)
2(0.5)
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1(0.3)
0
173(44.6)
77(19.9)
26(6.7)
7(1.8)
5(1.3)
3(0.8)
4(1.0)
4(1.0)
3(0.8)
1(0.3)
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5(1.3)
对照组
108
9(8.3)
2(1.9)
3(2.8)
0
0
1(0.9)
43(39.8)
25(23.2)
13(12.0)
7(6.5)
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0
0
2(1.9)
1(0.9)
2(1.9)
0
0
(二)银屑病组与对照组真菌携带情况：82例银屑病患者鳞屑培养结果：阳性78例，带菌率为95.12%；对照组40例，阳性33例，带菌率为82.50%。两组带菌率比较，χ2=5.22，P<0.05，银屑病组真菌带菌率显著高于对照组。糠秕孢子菌的带菌率在两组之间比较，χ2=12.67,P<0.01。
(三)银屑病患者皮损处真菌阳性率与非皮损处及对照组的比较：82例银屑病患者共采集了219处皮损的鳞屑，培养结果是皮损处鳞屑阳性菌有149株，占全部阳性株的38.40%，皮损与非皮损处比较，χ2=96.51,P<0.01；皮损处与对照组比较，χ2=12.29,P<0.01；非皮损处与对照组比较，χ2=11.21,P<0.01，均有显著性差异。
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(四)银屑病分型、分期与菌种间的关系：根据鉴定结果，寻常型银屑病有糠秕孢子菌56株、念珠菌21株；红皮病型银屑病有3株糠秕孢子菌、6株霉菌；斑块状银屑病有糠秕孢子菌27株、念珠菌9株、酵母菌69株、霉菌52株；点滴状银屑病有糠秕孢子菌24株、念珠菌9株、酵母菌56株、霉菌47株；钱币状银屑病有糠秕孢子菌5株、念珠菌3株、酵母菌48株、霉菌30株；以上资料，经χ2检验，斑块状与钱币状银屑病糠秕孢子菌阳性率(χ2=6.29,P<0.05)、点滴状与钱币状银屑病糠秕孢子菌阳性率(χ2=6.39,P<0.05)有统计学意义，其余各型和菌种间均无显著性差异。进行期银屑病阳性菌有285株，其中糠秕孢子菌36株、念珠菌18株、酵母菌132株、霉菌99株；消退期银屑病阳性菌有26株，其中糠秕孢子菌10株、酵母菌5株、霉菌11株；静止期银屑病阳性菌77例，其中糠秕孢子菌13株、念珠菌3株、酵母菌36株、霉菌25株。以上资料，经χ2检验，在进行期与消退期(χ2=13.42,P<0.01)、消退期与静止期之间糠秕孢子菌阳性率有显著性差异(χ2=6.36,P< 0.05)。
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(五)流式细胞分析结果：
1.12株糠秕孢子菌细胞周期分布：12株糠秕孢子菌细胞大多数处在G0/G1期。银屑病组的G0/G1期细胞比率平均为76.73%，正常对照组的G0/G1期平均细胞比率为69.77%，经t′检验，银屑病组与对照组的糠秕孢子菌在S期的细胞比率有显著性差异(t′=3.014，P<0.05)，在G0/G1期和G2M期无显著性差异。
2.12株糠秕孢子菌细胞的DNA总含量：以鸡红细胞作为内参指标，测得的12株糠秕孢子菌的DNA总含量，银屑病组平均为7.27pg，对照组平均为6.69pg，经t′检验，t′=1.518，P >0.05，无显著性差异，通过PI值的计算，经t′检验，PI值有显著性差异，t′=3.449，P< 0.05。
3.双参数分析：我们还进行了双参数(FSC-FL1)分析，经HP-300 Consort 30计算机分析，用FSC-FL1二维等高图表示。计算机将坐标图分成4个区，每区内的黑点疏密表示细胞在该区出现的机率。两组的细胞大小及DNA含量大致分布相同，无明显差异。
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讨 论
Rosenberg等[2]提出银屑病是一种皮肤抵抗微生物的防御表现，认为某些类型的银屑病与微生物有一定关系。我们通过对82例银屑病患者不同部位进行真菌培养，与对照组比较，其带菌率明显升高。银屑病皮损鳞屑真菌带菌率与非皮损处、对照组相比也有显著性差异。银屑病组与对照组在菌种分布上大致相同，未发现特殊菌种。我们的调查与宋娇等[3]报道的皮肤真菌菌种分布是一致的。根据以上研究我们考虑原因可能有以下几点：1银屑病患者的自身免疫功能下降，使微生物易于侵犯，易于生存。2银屑病患者防御微生物的侵犯而出现一种防御性炎症反应。3银屑病的发病是由于其他因素引起，而其发病部位和皮损处松软的鳞屑均有利于真菌的存在和生长。4银屑病患者经常外用皮质类固醇，可能使皮肤的真菌带菌率增高。
Mittag[4]认为糠秕孢子菌在不同的生长阶段体积的大小不同，在指数生长阶段为圆柱形或卵形且细胞较小或中等，在稳定生长阶段为长卵圆形的大细胞，用常规检测DNA的方法，不能真实反映出糠秕孢子菌的含量。用FCM检测同一生长时期的糠秕孢子菌可以真实的反映其处于稳定生长期的DNA含量。根据我们的检测结果发现银屑病组与对照组的糠秕孢子菌在S期的细胞数有显著性差异。银屑病组的糠秕孢子菌在S期的细胞比率低于对照组，说明银屑病组的糠秕孢子菌进入DNA合成期的数量减少，DNA合成受到抑制，这些与银屑病患者皮损处糠秕孢子菌的数量较正常人多相矛盾，有待我们进一步研究。增殖指数(PI)反映细胞增殖活性的高低，我们的研究发现银屑病组的糠秕孢子菌PI值明显低于对照组，说明其增殖活性降低，这与进入S期的细胞数减少相符。 从两种方法分析结果看，12株糠秕孢子菌的DNA总含量没有明显差异，说明在银屑病和健康人所携带的糠秕孢子菌系相同种类的菌株，其DNA总含量和大小两种参数没有差别。
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参考文献
1 Bunse T,Mahrle G. Soluble Pityrosporum-derived chemoattractant for polymorphonuclear leucocytes of psoriasis patients. Acta Derm Venereol (Stockh), 1996,76:10-12.
2 Rosenberg EW, Nach PW.Psoriasis is a visible manifestation of the skin′s defense against microorganisms. J Dermatol, 1994,21:375-381.
3 宋娇， 颜永祥， 许汝枝. 湖北地区病人和健康人皮肤真菌率调查. 中国皮肤性病学杂志, 1994,8:163-164.
4 Mittag H. Fine structural investigation of Malassezia furfur: I. Size and shape of the yeast cells and a consideration of their ploidy. Mycoses, 1994,18:393-399.
(收稿：1998-02-19 修回：1998-07-17), 百拇医药
单位：李艳佳 康彦考 邓秋敏 050011 石家庄市第一医院皮肤科；高顺强 林元珠(指导者) 河北医科大学附属第四医院皮肤科；陈秀鉴(指导者) 河北医科大学病理教研室
关键词：银屑病；真菌；马拉色霉菌属
中华皮肤科杂志990213 【摘 要】 目的 了解真菌特别是糠秕孢子菌与银屑病的关系。方法 对82例银屑病患者和40例正常人的头皮、指甲、背部、上肢或下肢4个部位的皮肤鳞屑在3种不同培养基上进行了真菌培养分离，并应用流式细胞计数检测了8株银屑病皮损处糠秕孢子菌和4株正常人的糠秕孢子菌的DNA总含量及周期变化。结果 1发现银屑病患者的真菌带菌率明显高于对照组(P<0.05)，银屑病患者皮损处真菌阳性率与非皮损处的阳性率有非常显著性差异(P<0.01)。2在银屑病组培养出59株糠秕孢子菌，而对照组仅有9株，有显著性差异。3S期的细胞比率和PI值银屑病组低于对照组。结论 真菌特别是糠秕孢子菌在银屑病患者的皮损处和正常皮肤上都较正常人高，对银屑病的发病有一定影响。
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Isolation and Flow Cytometry Analysis of Fungi in the Skin Scale
of Psoriatic Patients
LI Yanjia, GAO Shunqiang, LIN Yuanzhu, et al.
Department of Dermatology, First Hospital of Shijiazhuang, Shijiazhuang 050011
【Abstract】 Objective To investigate the relationship between fungi, especially Malassezia furfur and psoriasis. Methods The skin scale from scalps, nails, backs and extremities of 82 psoriatic patients and 40 healthy controls were collected and cultured on three media for isolation. Eight strains of M.furfur from psoriatic lesions and four strains from controls were analysed by flow cytometry. Results (1)It was found that the isolation rates of fungi were significantly higher in psoriatic group than those in controls (P<0.05). The isolation rates of the lesions were significantly higher than those of the uninvolved skin in psoriatic patients (P<0.01).(2)Fifty nine strains of M.furfur in psoriatic group and 9 strains in controls were cultured and the difference of isolation rate was significant. (3)The ratio of cells in S stage and proliferative index of isolated M.furfur were significantly lower in psoriatic group than those in controls. Conclusion The results indicate that fungi, especially M.furfur, are more frequently isolated in the lesions and uninvolved skin of psoriatic patients than those in healthy controls. It is suggested that fungi might play a role in the pathogenesis of psoriasis.
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【Key words】 Psoriasis Fungi Malassezia
研究证明糠秕孢子菌与银屑病有一定关系[1]。我们于1997年3～4月对82例银屑病患者和40例正常人的皮肤鳞屑进行了真菌学调查研究，并应用流式细胞计数 (flow cytometry,FCM)检测了两组糠秕孢子菌的DNA含量及周期变化，以了解银屑病皮损处鳞屑与正常皮肤鳞屑中的糠秕孢子菌DNA含量及周期变化是否有差别，现将结果报道如下。
材料和方法
(一)临床资料：82例银屑病患者均经皮肤科确诊，其中男54例，女28例；年龄8～66岁，平均39岁；病程1个月至50年，平均10.18年；寻常型80例， 其中钱币状15例、斑块状32例、点滴状33例；红皮病型2例；进行期64例、消退期5例、静止期13例；正常人对照来自皮肤科门诊患者家属及本院健康人40例，其中男21例，女19例；年龄7～60岁，平均34.65岁。
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(二)方法：
1.标本采集：常规75%酒精消毒后，刮取银屑病患者和正常人头皮、指甲、背部、上肢或下肢4个部位的皮肤鳞屑，直接接种于培养基。
2.培养基：1含氯霉素的沙堡培养基。2含氯霉素、放线菌酮、4%麻油的沙堡培养基。3琼脂20g/L、蛋白胨10g/L、葡萄糖40g/L、胆固醇10g/L、单硬脂酸甘油酯10g/L、酵母浸膏1.0g/L、吐温80 20mL/L、麻油40mL/L、氯霉素0.125g/L。
3.培养方法：将刮取的鳞屑分别接种于上述3种培养基上，将1号培养基置25℃恒温箱中培养；将2号和3号培养基置37℃恒温箱中培养。2周后观察结果。
4.真菌学鉴定：培养2周后，进行肉眼观察、镜下观察，确定酵母样菌和霉菌。然后再通过玉米吐温小培养、血清芽管试验和糖发酵和同化试验确定念珠菌属和糠秕孢子菌。
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5.流式细胞计数方法：
(1)菌种来源：检测了12株糠秕孢子菌，其中银屑病组8株，正常对照组4株，均来自我们对82例银屑病患者和40例健康人的皮肤鳞屑进行培养、分离所得的糠秕孢子菌中。这些菌种都是我们通过肉眼观察菌落形态、显微镜下观察、血清芽管试验、糖同化试验和糖发酵试验后确定为糠秕孢子菌的菌种。均为分离后转种的第2代菌种。
(2)单细胞的制备:1将12株菌接种到含4%麻油、氯霉素、放线菌酮的沙堡培养基上，37℃恒温箱培养6d。2取同样大小的菌落置1mL无菌生理盐水中制成混悬液，然后加入10%福尔马林液1mL固定。3送入细胞分析室后，用无菌生理盐水冲洗，用300目筛网过滤，洗去培养基残渣。4离心后弃上清液，单细胞制备完成。
(3)DNA染色：用溴化乙啶(EB)一步插入法对DNA进行染色，然后置4℃冰箱30min后即可上机测定。
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(4)流式细胞仪分析：我们使用的是FACS420型流式细胞仪，每份标本至少检测104个细胞。检测前我们用鸡红细胞作为内参标准，使仪器的CV值在5%以内。测得的结果以DNA含量分布直方图显示，其数据和图形均经过HP-300 Consort 30计算机进行处理分析，计算出细胞周期中的G0/G1期、S期、G2M期占整个细胞周期的百分比。同时我们还进行了FSC(前向角散射)和FL1(荧光强度)的双参数分析。
(5)DNA含量和PI值(增殖指数)的计算方法：
(6)统计学方法：上述结果采用χ2检验和t′检验进行统计学处理。
结 果
(一)鉴定结果：82例银屑病患者，每种培养基接种了328管，3种培养基共接种了984管，根据真菌学鉴定，阳性菌388株，其中酵母菌253株和霉菌135株；对照组共40例，3种培养基共接种480管，结果阳性菌108株，包括酵母菌58株和霉菌50株，见表1。
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表1 银屑病患者与正常人对照组皮肤鳞屑真菌培养结果 组别
菌株数
糠秕孢子菌
白念珠菌
近平滑念珠菌
高里念珠菌
类星形念珠菌
克柔念珠菌
其他酵母菌
交链孢霉
青霉
黑曲霉
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米曲霉
黄曲霉
毛霉
根霉
木霉
弯孢霉
待定
银屑病组
388
59(15.2)
10(2.6)
8(2.1)
2(0.5)
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1(0.3)
0
173(44.6)
77(19.9)
26(6.7)
7(1.8)
5(1.3)
3(0.8)
4(1.0)
4(1.0)
3(0.8)
1(0.3)
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对照组
108
9(8.3)
2(1.9)
3(2.8)
0
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1(0.9)
43(39.8)
25(23.2)
13(12.0)
7(6.5)
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1(0.9)
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(二)银屑病组与对照组真菌携带情况：82例银屑病患者鳞屑培养结果：阳性78例，带菌率为95.12%；对照组40例，阳性33例，带菌率为82.50%。两组带菌率比较，χ2=5.22，P<0.05，银屑病组真菌带菌率显著高于对照组。糠秕孢子菌的带菌率在两组之间比较，χ2=12.67,P<0.01。
(三)银屑病患者皮损处真菌阳性率与非皮损处及对照组的比较：82例银屑病患者共采集了219处皮损的鳞屑，培养结果是皮损处鳞屑阳性菌有149株，占全部阳性株的38.40%，皮损与非皮损处比较，χ2=96.51,P<0.01；皮损处与对照组比较，χ2=12.29,P<0.01；非皮损处与对照组比较，χ2=11.21,P<0.01，均有显著性差异。
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(四)银屑病分型、分期与菌种间的关系：根据鉴定结果，寻常型银屑病有糠秕孢子菌56株、念珠菌21株；红皮病型银屑病有3株糠秕孢子菌、6株霉菌；斑块状银屑病有糠秕孢子菌27株、念珠菌9株、酵母菌69株、霉菌52株；点滴状银屑病有糠秕孢子菌24株、念珠菌9株、酵母菌56株、霉菌47株；钱币状银屑病有糠秕孢子菌5株、念珠菌3株、酵母菌48株、霉菌30株；以上资料，经χ2检验，斑块状与钱币状银屑病糠秕孢子菌阳性率(χ2=6.29,P<0.05)、点滴状与钱币状银屑病糠秕孢子菌阳性率(χ2=6.39,P<0.05)有统计学意义，其余各型和菌种间均无显著性差异。进行期银屑病阳性菌有285株，其中糠秕孢子菌36株、念珠菌18株、酵母菌132株、霉菌99株；消退期银屑病阳性菌有26株，其中糠秕孢子菌10株、酵母菌5株、霉菌11株；静止期银屑病阳性菌77例，其中糠秕孢子菌13株、念珠菌3株、酵母菌36株、霉菌25株。以上资料，经χ2检验，在进行期与消退期(χ2=13.42,P<0.01)、消退期与静止期之间糠秕孢子菌阳性率有显著性差异(χ2=6.36,P< 0.05)。
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(五)流式细胞分析结果：
1.12株糠秕孢子菌细胞周期分布：12株糠秕孢子菌细胞大多数处在G0/G1期。银屑病组的G0/G1期细胞比率平均为76.73%，正常对照组的G0/G1期平均细胞比率为69.77%，经t′检验，银屑病组与对照组的糠秕孢子菌在S期的细胞比率有显著性差异(t′=3.014，P<0.05)，在G0/G1期和G2M期无显著性差异。
2.12株糠秕孢子菌细胞的DNA总含量：以鸡红细胞作为内参指标，测得的12株糠秕孢子菌的DNA总含量，银屑病组平均为7.27pg，对照组平均为6.69pg，经t′检验，t′=1.518，P >0.05，无显著性差异，通过PI值的计算，经t′检验，PI值有显著性差异，t′=3.449，P< 0.05。
3.双参数分析：我们还进行了双参数(FSC-FL1)分析，经HP-300 Consort 30计算机分析，用FSC-FL1二维等高图表示。计算机将坐标图分成4个区，每区内的黑点疏密表示细胞在该区出现的机率。两组的细胞大小及DNA含量大致分布相同，无明显差异。
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讨 论
Rosenberg等[2]提出银屑病是一种皮肤抵抗微生物的防御表现，认为某些类型的银屑病与微生物有一定关系。我们通过对82例银屑病患者不同部位进行真菌培养，与对照组比较，其带菌率明显升高。银屑病皮损鳞屑真菌带菌率与非皮损处、对照组相比也有显著性差异。银屑病组与对照组在菌种分布上大致相同，未发现特殊菌种。我们的调查与宋娇等[3]报道的皮肤真菌菌种分布是一致的。根据以上研究我们考虑原因可能有以下几点：1银屑病患者的自身免疫功能下降，使微生物易于侵犯，易于生存。2银屑病患者防御微生物的侵犯而出现一种防御性炎症反应。3银屑病的发病是由于其他因素引起，而其发病部位和皮损处松软的鳞屑均有利于真菌的存在和生长。4银屑病患者经常外用皮质类固醇，可能使皮肤的真菌带菌率增高。
Mittag[4]认为糠秕孢子菌在不同的生长阶段体积的大小不同，在指数生长阶段为圆柱形或卵形且细胞较小或中等，在稳定生长阶段为长卵圆形的大细胞，用常规检测DNA的方法，不能真实反映出糠秕孢子菌的含量。用FCM检测同一生长时期的糠秕孢子菌可以真实的反映其处于稳定生长期的DNA含量。根据我们的检测结果发现银屑病组与对照组的糠秕孢子菌在S期的细胞数有显著性差异。银屑病组的糠秕孢子菌在S期的细胞比率低于对照组，说明银屑病组的糠秕孢子菌进入DNA合成期的数量减少，DNA合成受到抑制，这些与银屑病患者皮损处糠秕孢子菌的数量较正常人多相矛盾，有待我们进一步研究。增殖指数(PI)反映细胞增殖活性的高低，我们的研究发现银屑病组的糠秕孢子菌PI值明显低于对照组，说明其增殖活性降低，这与进入S期的细胞数减少相符。 从两种方法分析结果看，12株糠秕孢子菌的DNA总含量没有明显差异，说明在银屑病和健康人所携带的糠秕孢子菌系相同种类的菌株，其DNA总含量和大小两种参数没有差别。
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参考文献
1 Bunse T,Mahrle G. Soluble Pityrosporum-derived chemoattractant for polymorphonuclear leucocytes of psoriasis patients. Acta Derm Venereol (Stockh), 1996,76:10-12.
2 Rosenberg EW, Nach PW.Psoriasis is a visible manifestation of the skin′s defense against microorganisms. J Dermatol, 1994,21:375-381.
3 宋娇， 颜永祥， 许汝枝. 湖北地区病人和健康人皮肤真菌率调查. 中国皮肤性病学杂志, 1994,8:163-164.
4 Mittag H. Fine structural investigation of Malassezia furfur: I. Size and shape of the yeast cells and a consideration of their ploidy. Mycoses, 1994,18:393-399.
(收稿：1998-02-19 修回：1998-07-17), 百拇医药