寻常型银屑病患者HLA-DQB1等位基因多态性分析
作者：翟宁 张庆瑞 宋芳吉 李波
单位：翟宁 宋芳吉 李波 110001 沈阳，中国医科大学第一临床学院；张庆瑞 解放军第二零二医院
关键词：
中华皮肤科杂志990228 寻常型银屑病病因和发病机理迄今尚不清楚。遗传因素在寻常型银屑病的发病过程中具有重要作用。有关寻常型银屑病与HLA相关性研究，1981年宋芳吉等曾有报道，以后又逐步发现中国人寻常型银屑病与A1、B13、B17、Cw6和DR7相关。我们通过检测寻常型银屑病患者HLA-DQB1等位基因的多态性分布情况，分析寻常型银屑病与DQB1等位基因的关联，其结果可为探讨遗传因素在寻常型银屑病发病机制中的作用及为寻常型银屑病疾病易感基因的定位提供进一步线索。
一、病例和方法
(一)病例：病例组：中国汉族寻常型银屑病患者32例，均为汉族，由本院门诊提供，具有典型的临床表现，其中男17例，女15例，无血缘关系，年龄16～65岁。正常人对照组：选择与患者同一地区无血缘关系的健康汉族人群254例，其中男161例，女93例，年龄22～48岁，且均无银屑病病史和其家族史。
, 百拇医药
(二)方法：用改进的盐析法从外周血淋巴细胞中提取基因组DNA。采用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR/SSP)技术检测每个受检者的HLA-DQB1等位基因。PCR扩增参数如下：预变性94℃，5min；变性94℃，30s；退火65℃，1min；延伸72℃，1min，共30个循环。PCR扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳，判断DQB1等位基因型别[1]。
(三)主要试剂：HLA-DQB1等位基因特异性引物(SSP)共19对，购于德国ESSEN大学。针对DQB1第二外显子多态性设计SSP，其扩增的产物具有等位基因特异性，分型结果与血清学方法测得的HLA-DQ表现具有对应关系。
(四)数据处理：寻常型银屑病患者组与对照组之间逐个进行等位基因比较，通过χ2检验进行关联分析。
二、结果
寻常型银屑病患者组与对照组HLA-DQB1等位基因频率比较分析结果见表1。从表1中可以看出，32例寻常型银屑病患者组中DQB1*0602等位基因频率比对照组明显增高(P< 0.05,RR=2.43)，而DQB1*0303和DQB1*0601等位基因频率均低于对照组，但无显著性差异。
, 百拇医药
表1 寻常型银屑病组和正常人对照组HLA-DQBI等位基因频率比较 基 因
正常对照组(254例)
PV组(32例)
X2
P
阳性例数
基因频率
阳性例数
基因频率
DQB1*0201
61
0.120
, 百拇医药
8
0.125
0.02
>0.05
DQB1*0301
91
0.179
14
0.219
0.77
>0.05
DQB1*0302
34
, http://www.100md.com
0.067
2
0.031
0.75
>0.05
DQB1*0303
85
0.167
6
0.094
2.85
>0.05
DQB1*0304
, 百拇医药
1
0.002
0
0.000
1.68
>0.05
DQB1*0401
24
0.047
1
0.016
0.74
>0.05
, 百拇医药
DQB1*0402
7
0.014
1
0.016
0.20
>0.05
DQB1*0501
31
0.061
1
0.016
1.53
, 百拇医药
>0.05
DQB1*0502
31
0.061
5
0.078
0.95
>0.05
DQB1*0503
15
0.030
1
0.016
, 百拇医药
0.56
>0.05
DQB1*0504
2
0.004
1
0.016
0.09
>0.05
DQB1*0601
39
0.077
1
, http://www.100md.com
0.016
3.46
>0.05
DQB1*0602
45
0.088
11
0.172
5.01
<0.05
DQB1*0603
5
0.010
, http://www.100md.com
1
0.016
0.05
>0.05
DQB1*0604
24
0.047
2
0.031
0.71
>0.05
三、讨论
HLA-DQB1等位基因具有高度的多态性，我们采用PCR-SSP技术检测中国汉族寻常型银屑病患者DQB1等位基因的分布特点，发现寻常型银屑病患者的DQB1*0602基因频率比对照组明显增高。与寻常型银屑病关联的HLA抗原有HLA-A1、B13、B16、B17、Cw6、Cw7和DR7等[1，2]；Ozawa[2]提出在某些高加索人(白种人)家系中，寻常型银屑病可能是一种遗传性疾病。Asahina[3]认为寻常型银屑病与Cw6、Cw7、Cw11具有特殊的强相关性，其余的相关抗原只是与之连锁不平衡。目前，人们可利用分子生物学技术在30亿个bp的人类基因组中进行基因定位，查找疾病基因。对有家族聚集倾向的寻常型银屑病分析比遗传模式清楚的其它疾病更加复杂。Henseler发现Ⅰ型寻常型银屑病患者(有家族史、发病年龄小)100% DR7阳性，Ⅱ型(无家族史、发病年龄 >40岁)寻常型银屑病患者33% DR7阳性。Schmitt-Egenolf 等[4]观察到Ⅰ型寻常型银屑病患者DRB1*0701.2阳性率为60%，并在Ⅰ型寻常型银屑病患者中发现扩展单倍型HLA-DRB1*0701.2-DQA1*0201-DQB1 *0303明显增高。
, 百拇医药
从本研究结果看出寻常型银屑病患者组的DQB1*0602等位基因频率较正常对照组的明显增高，提示寻常型银屑病与HLA-DQB1*0602等位基因相关，表明DQB1*0602等位基因可能是寻常型银屑病的易感基因或与易感基因相连锁，进一步说明特异性遗传背景可增加或降低易感人群患寻常型银屑病的危险性。
参考文献
1 宋芳吉， 徐沈育， 李惠刚， 等. HLA抗原与银屑病. 中华皮肤科杂志, 1987,20:288- 289.
2 Ozawa A, Ohkido M, Tsuji K, et al. Some recent advances in HLA and skin diseases. J Am Acad Dermatol, 1981,4:205-209.
3 Asahina A, Akazaki S, Nakagawa H, et al. Specific nucleotide sequence of HLA-C is strongly associated with psoriasis vulgaris. J Invest Dermatol, 1991,97:254-257.
4 Schmitt-Egenolf M, Eiermann TH, Boehncke W-H, et al. Familial juvenile onset psoriasis is associated with the human leukocyte antigen (HLA) class Ⅰ side of the extended haplotype Cw6-B57-DRB1*0701-DQA1*0201-DQB1*0303: a population-and family-based study. J Invest Dermatol, 1996,106:711-714.
(收稿：1998-06-17 修回：1998-11-23), http://www.100md.com
单位：翟宁 宋芳吉 李波 110001 沈阳，中国医科大学第一临床学院；张庆瑞 解放军第二零二医院
关键词：
中华皮肤科杂志990228 寻常型银屑病病因和发病机理迄今尚不清楚。遗传因素在寻常型银屑病的发病过程中具有重要作用。有关寻常型银屑病与HLA相关性研究，1981年宋芳吉等曾有报道，以后又逐步发现中国人寻常型银屑病与A1、B13、B17、Cw6和DR7相关。我们通过检测寻常型银屑病患者HLA-DQB1等位基因的多态性分布情况，分析寻常型银屑病与DQB1等位基因的关联，其结果可为探讨遗传因素在寻常型银屑病发病机制中的作用及为寻常型银屑病疾病易感基因的定位提供进一步线索。
一、病例和方法
(一)病例：病例组：中国汉族寻常型银屑病患者32例，均为汉族，由本院门诊提供，具有典型的临床表现，其中男17例，女15例，无血缘关系，年龄16～65岁。正常人对照组：选择与患者同一地区无血缘关系的健康汉族人群254例，其中男161例，女93例，年龄22～48岁，且均无银屑病病史和其家族史。
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(二)方法：用改进的盐析法从外周血淋巴细胞中提取基因组DNA。采用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR/SSP)技术检测每个受检者的HLA-DQB1等位基因。PCR扩增参数如下：预变性94℃，5min；变性94℃，30s；退火65℃，1min；延伸72℃，1min，共30个循环。PCR扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳，判断DQB1等位基因型别[1]。
(三)主要试剂：HLA-DQB1等位基因特异性引物(SSP)共19对，购于德国ESSEN大学。针对DQB1第二外显子多态性设计SSP，其扩增的产物具有等位基因特异性，分型结果与血清学方法测得的HLA-DQ表现具有对应关系。
(四)数据处理：寻常型银屑病患者组与对照组之间逐个进行等位基因比较，通过χ2检验进行关联分析。
二、结果
寻常型银屑病患者组与对照组HLA-DQB1等位基因频率比较分析结果见表1。从表1中可以看出，32例寻常型银屑病患者组中DQB1*0602等位基因频率比对照组明显增高(P< 0.05,RR=2.43)，而DQB1*0303和DQB1*0601等位基因频率均低于对照组，但无显著性差异。
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表1 寻常型银屑病组和正常人对照组HLA-DQBI等位基因频率比较 基 因
正常对照组(254例)
PV组(32例)
X2
P
阳性例数
基因频率
阳性例数
基因频率
DQB1*0201
61
0.120
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8
0.125
0.02
>0.05
DQB1*0301
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0.179
14
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DQB1*0303
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>0.05
DQB1*0304
, 百拇医药
1
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0
0.000
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>0.05
DQB1*0401
24
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0.74
>0.05
, 百拇医药
DQB1*0402
7
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1
0.016
0.20
>0.05
DQB1*0501
31
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>0.05
DQB1*0502
31
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DQB1*0504
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DQB1*0601
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DQB1*0603
5
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0.05
>0.05
DQB1*0604
24
0.047
2
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0.71
>0.05
三、讨论
HLA-DQB1等位基因具有高度的多态性，我们采用PCR-SSP技术检测中国汉族寻常型银屑病患者DQB1等位基因的分布特点，发现寻常型银屑病患者的DQB1*0602基因频率比对照组明显增高。与寻常型银屑病关联的HLA抗原有HLA-A1、B13、B16、B17、Cw6、Cw7和DR7等[1，2]；Ozawa[2]提出在某些高加索人(白种人)家系中，寻常型银屑病可能是一种遗传性疾病。Asahina[3]认为寻常型银屑病与Cw6、Cw7、Cw11具有特殊的强相关性，其余的相关抗原只是与之连锁不平衡。目前，人们可利用分子生物学技术在30亿个bp的人类基因组中进行基因定位，查找疾病基因。对有家族聚集倾向的寻常型银屑病分析比遗传模式清楚的其它疾病更加复杂。Henseler发现Ⅰ型寻常型银屑病患者(有家族史、发病年龄小)100% DR7阳性，Ⅱ型(无家族史、发病年龄 >40岁)寻常型银屑病患者33% DR7阳性。Schmitt-Egenolf 等[4]观察到Ⅰ型寻常型银屑病患者DRB1*0701.2阳性率为60%，并在Ⅰ型寻常型银屑病患者中发现扩展单倍型HLA-DRB1*0701.2-DQA1*0201-DQB1 *0303明显增高。
, 百拇医药
从本研究结果看出寻常型银屑病患者组的DQB1*0602等位基因频率较正常对照组的明显增高，提示寻常型银屑病与HLA-DQB1*0602等位基因相关，表明DQB1*0602等位基因可能是寻常型银屑病的易感基因或与易感基因相连锁，进一步说明特异性遗传背景可增加或降低易感人群患寻常型银屑病的危险性。
参考文献
1 宋芳吉， 徐沈育， 李惠刚， 等. HLA抗原与银屑病. 中华皮肤科杂志, 1987,20:288- 289.
2 Ozawa A, Ohkido M, Tsuji K, et al. Some recent advances in HLA and skin diseases. J Am Acad Dermatol, 1981,4:205-209.
3 Asahina A, Akazaki S, Nakagawa H, et al. Specific nucleotide sequence of HLA-C is strongly associated with psoriasis vulgaris. J Invest Dermatol, 1991,97:254-257.
4 Schmitt-Egenolf M, Eiermann TH, Boehncke W-H, et al. Familial juvenile onset psoriasis is associated with the human leukocyte antigen (HLA) class Ⅰ side of the extended haplotype Cw6-B57-DRB1*0701-DQA1*0201-DQB1*0303: a population-and family-based study. J Invest Dermatol, 1996,106:711-714.
(收稿：1998-06-17 修回：1998-11-23), http://www.100md.com