银屑病患者淋巴细胞对葡萄球菌和链球菌超抗原刺激的增殖反应
作者：张峻岭 陈学荣 殷金珠
单位：张峻岭 陈学荣 100083 北京医科大学第三临床医学院皮肤科；殷金珠 北京医科大学免疫系
关键词：
中华皮肤科杂志990227 银屑病与细菌性超抗原的相关性日益引起医学界关注，大量资料表明细菌感染可诱发银屑病，50%银屑病患者皮肤寄居金黄色葡萄球菌，上呼吸道β-溶血性链球菌感染与点滴状银屑病发病及斑块状银屑病症状加重有关[1]。但具体发病机理不甚明确，国内外研究甚少。因为葡萄球菌和β-溶血性链球菌产生的毒素具有超抗原特性，而超抗原能选择性激活大量T淋巴细胞，因此，我们采用3H-TdR掺入法观察比较银屑病和正常人外周血淋巴细胞(PBLC)对葡萄球菌肠毒素B(SEB)和链球菌裂解悬液(SP)刺激的增殖反应，以普通抗原破伤风类毒素(TT)作对照。
一、实验对象
, 百拇医药
银屑病患者共40例，均来自北京医科大学第三附属医院皮肤科门诊和病房，其中点滴状20例，男12例，女8例，年龄22～40岁，平均31岁，未用任何药物治疗，病程7～30天；斑块状20例，男13例，女7例；年龄24～50岁，平均37岁；至少1个月未用药物治疗，病程1～18年。正常对照组15例，选自学生和职工；男10例，女5例；年龄28～40岁，平均34岁；无银屑病家族史。
二、实验方法
1.主要试剂：SEB购自北京邦定公司，SP由北京医科大学微生物研究室惠赠，3H-TdR购自中国科学院上海原子核研究所，TT购自北京生物制品研究所。
2.分离外周血单一核细胞(PBMC)：取外周血8mL，肝素抗凝，用等量Hanks液(pH7.4)稀释后，加入含有等量淋巴细胞分层液的离心管中，离心2500r/min，20min，吸出单一核细胞层放入另一含Hanks液的离心管中，离心1000r/min，10min，2次，计数。
, 百拇医药
3.3H-TdR掺入法检测PBLC对SEB、SP刺激的增殖反应：将分离的PBMC配成2×106/mL，加入96孔板中，200μL/孔，分空白、SP、SEB、TT 4组，每组3复孔，分别加入完全RPMI-1640、SP(106细菌数/mL)、SEB(10μg/mL)、TT(10μg/mL)各20μL，37℃，5% CO2条件下培养48h，于培养结束前7h每孔加入3H-TdR(10μCi/mL)20μL，培养结束后用多头细胞收集器收获细胞于49型玻璃纤维纸上，干燥后入闪烁液中，用液体闪烁计数器测量放射性，用c/min表示。
三、统计学处理
实验数据采用方差分析进行组间显著性检验，用SPSS软件作统计学分析。
四、结果
40例银屑病患者的PBLC对SP、SEB均有明显的增殖反应，且实验组反应明显高于对照组(P<0.05)，其中点滴状银屑病组对于SP的反应更为明显(P<0.05)，点滴状与斑块状两组对于SEB反应比较无显著性差异(P>0.05)；对普通抗原TT，实验组和对照组均只发生轻度增殖反应，且两组间无显著性差异(P>0.05)，见表1。
, 百拇医药
表1 外周血淋细胞SP,SEB,TT刺激的增殖反应(
±s) 组 别
例 数
SP
SEB
TT
对照组
15
8.85±2.05
46.93±8.23
1.69±0.15
斑块状银屑病组
, 百拇医药
20
13.39±2.25*
58.43±7.14*
1.59±0.15
点滴状银屑病组
20
16.40±3.17**
60.72±7.32*
1.64±0.10
*与对照组比较P<0.05,**斑块状与斑块状比较P<0.05
, 百拇医药
五、讨论
结果发现银屑病组对SP、SEB刺激的增殖反应明显高于正常对照组(P<0.05)，由此提示银屑病患者体内可能存在对细菌性超抗原敏感的淋巴细胞，从而为超抗原活化淋巴细胞诱发银屑病提供了先决条件。1993年Baker等[2]首先从点滴状银屑病患者皮损中分离出对链球菌A群抗原特异的T细胞，1995年Bour等[3]报道银屑病患者皮损内富含对SEB敏感的T细胞。国外有报道点滴状或斑块状银屑病患者的PBLC对链球菌的增殖反应高于正常人；对SEB的反应尚未见报道，本研究显示点滴状和斑块状患者的PBLC对SEB、SP的反应均高于正常人，且点滴状对SP的反应高于斑块状组。表明不同的细菌性超抗原活化不同TCR Vβ片段的T细胞而诱发银屑病，其中，点滴状银屑病发病与链球菌感染关系更为密切。
综合文献报道和本实验结果推测，细菌感染诱发和加重银屑病的机理之一是它们产生的超抗原刺激T细胞活化，引起表达对超抗原敏感的特异TCR Vβ基因片段的T细胞增殖，使之释放大量细胞因子，主要是Th1释放的IFN-γ、IL-2等[4]，这些细胞因子协同作用使角质形成细胞活化增殖而诱发银屑病，形成银屑病的一系列临床和病理特征。而银屑病患者体内含有特异TCR Vβ片段的T细胞占优势可能与遗传有关。
, 百拇医药
参考文献
1 Lenug DM, Travers JB, Norris DA, et al. The role of superantigens in skin disease. J Invest Dermatol, 1995,105:37s-42s.
2 Baker BS, Bokth S, Powles A, et al. Group A streptococcal antigen-specific T lymphocytes in guttate psoriatic lesions. Br J Dermatol, 1993,128:493-499.
3 Bour H, Demidem A, Garrigue J-L, et al. In vitro T cell response to staphylococcal enterotoxin B superantigen in chronic plaque type psoriasis. Acta Derm Venereol (Stockh), 1995,75:218-221.
4 Schlaak JF, Buslau M, Jochum W, et al. T involved in psoriasis vulgaris belong to the Th1 subset. J Invest Dermatol, 1994,102:145-149.
(收稿：1998-02-12 修回：1998-07-23), 百拇医药
单位：张峻岭 陈学荣 100083 北京医科大学第三临床医学院皮肤科；殷金珠 北京医科大学免疫系
关键词：
中华皮肤科杂志990227 银屑病与细菌性超抗原的相关性日益引起医学界关注，大量资料表明细菌感染可诱发银屑病，50%银屑病患者皮肤寄居金黄色葡萄球菌，上呼吸道β-溶血性链球菌感染与点滴状银屑病发病及斑块状银屑病症状加重有关[1]。但具体发病机理不甚明确，国内外研究甚少。因为葡萄球菌和β-溶血性链球菌产生的毒素具有超抗原特性，而超抗原能选择性激活大量T淋巴细胞，因此，我们采用3H-TdR掺入法观察比较银屑病和正常人外周血淋巴细胞(PBLC)对葡萄球菌肠毒素B(SEB)和链球菌裂解悬液(SP)刺激的增殖反应，以普通抗原破伤风类毒素(TT)作对照。
一、实验对象
, 百拇医药
银屑病患者共40例，均来自北京医科大学第三附属医院皮肤科门诊和病房，其中点滴状20例，男12例，女8例，年龄22～40岁，平均31岁，未用任何药物治疗，病程7～30天；斑块状20例，男13例，女7例；年龄24～50岁，平均37岁；至少1个月未用药物治疗，病程1～18年。正常对照组15例，选自学生和职工；男10例，女5例；年龄28～40岁，平均34岁；无银屑病家族史。
二、实验方法
1.主要试剂：SEB购自北京邦定公司，SP由北京医科大学微生物研究室惠赠，3H-TdR购自中国科学院上海原子核研究所，TT购自北京生物制品研究所。
2.分离外周血单一核细胞(PBMC)：取外周血8mL，肝素抗凝，用等量Hanks液(pH7.4)稀释后，加入含有等量淋巴细胞分层液的离心管中，离心2500r/min，20min，吸出单一核细胞层放入另一含Hanks液的离心管中，离心1000r/min，10min，2次，计数。
, 百拇医药
3.3H-TdR掺入法检测PBLC对SEB、SP刺激的增殖反应：将分离的PBMC配成2×106/mL，加入96孔板中，200μL/孔，分空白、SP、SEB、TT 4组，每组3复孔，分别加入完全RPMI-1640、SP(106细菌数/mL)、SEB(10μg/mL)、TT(10μg/mL)各20μL，37℃，5% CO2条件下培养48h，于培养结束前7h每孔加入3H-TdR(10μCi/mL)20μL，培养结束后用多头细胞收集器收获细胞于49型玻璃纤维纸上，干燥后入闪烁液中，用液体闪烁计数器测量放射性，用c/min表示。
三、统计学处理
实验数据采用方差分析进行组间显著性检验，用SPSS软件作统计学分析。
四、结果
40例银屑病患者的PBLC对SP、SEB均有明显的增殖反应，且实验组反应明显高于对照组(P<0.05)，其中点滴状银屑病组对于SP的反应更为明显(P<0.05)，点滴状与斑块状两组对于SEB反应比较无显著性差异(P>0.05)；对普通抗原TT，实验组和对照组均只发生轻度增殖反应，且两组间无显著性差异(P>0.05)，见表1。
, 百拇医药
表1 外周血淋细胞SP,SEB,TT刺激的增殖反应(
±s) 组 别例 数
SP
SEB
TT
对照组
15
8.85±2.05
46.93±8.23
1.69±0.15
斑块状银屑病组
, 百拇医药
20
13.39±2.25*
58.43±7.14*
1.59±0.15
点滴状银屑病组
20
16.40±3.17**
60.72±7.32*
1.64±0.10
*与对照组比较P<0.05,**斑块状与斑块状比较P<0.05
, 百拇医药
五、讨论
结果发现银屑病组对SP、SEB刺激的增殖反应明显高于正常对照组(P<0.05)，由此提示银屑病患者体内可能存在对细菌性超抗原敏感的淋巴细胞，从而为超抗原活化淋巴细胞诱发银屑病提供了先决条件。1993年Baker等[2]首先从点滴状银屑病患者皮损中分离出对链球菌A群抗原特异的T细胞，1995年Bour等[3]报道银屑病患者皮损内富含对SEB敏感的T细胞。国外有报道点滴状或斑块状银屑病患者的PBLC对链球菌的增殖反应高于正常人；对SEB的反应尚未见报道，本研究显示点滴状和斑块状患者的PBLC对SEB、SP的反应均高于正常人，且点滴状对SP的反应高于斑块状组。表明不同的细菌性超抗原活化不同TCR Vβ片段的T细胞而诱发银屑病，其中，点滴状银屑病发病与链球菌感染关系更为密切。
综合文献报道和本实验结果推测，细菌感染诱发和加重银屑病的机理之一是它们产生的超抗原刺激T细胞活化，引起表达对超抗原敏感的特异TCR Vβ基因片段的T细胞增殖，使之释放大量细胞因子，主要是Th1释放的IFN-γ、IL-2等[4]，这些细胞因子协同作用使角质形成细胞活化增殖而诱发银屑病，形成银屑病的一系列临床和病理特征。而银屑病患者体内含有特异TCR Vβ片段的T细胞占优势可能与遗传有关。
, 百拇医药
参考文献
1 Lenug DM, Travers JB, Norris DA, et al. The role of superantigens in skin disease. J Invest Dermatol, 1995,105:37s-42s.
2 Baker BS, Bokth S, Powles A, et al. Group A streptococcal antigen-specific T lymphocytes in guttate psoriatic lesions. Br J Dermatol, 1993,128:493-499.
3 Bour H, Demidem A, Garrigue J-L, et al. In vitro T cell response to staphylococcal enterotoxin B superantigen in chronic plaque type psoriasis. Acta Derm Venereol (Stockh), 1995,75:218-221.
4 Schlaak JF, Buslau M, Jochum W, et al. T involved in psoriasis vulgaris belong to the Th1 subset. J Invest Dermatol, 1994,102:145-149.
(收稿：1998-02-12 修回：1998-07-23), 百拇医药