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编号:10275816
凋亡调控蛋白在银屑病患者外周血淋巴细胞中的表达
http://www.100md.com 《中华皮肤科杂志》 1999年第2期
     作者:王继文 刘华昌 尹格平 孙晓明

    单位:王继文 刘华昌 250031 济南,济南军区总医院皮肤科;尹格平 孙晓明 流式细胞室

    关键词:

    中华皮肤科杂志990225 有资料表明,淋巴细胞凋亡发生异常是导致免疫紊乱和一些疾病发生的重要原因[1]。我们应用流式细胞计数分析了凋亡调控蛋白Apo-1、Apo-2.7和Bcl-2在银屑病患者外周血淋巴细胞(PBLC)中的表达,旨在从凋亡的角度探讨银屑病的免疫发病机制。

    一、病例和方法

    (一)病例:寻常型银屑病患者30例,男26例,女4例;年龄21~56岁,平均33.3岁;病程1个月至15年,平均3年。所有患者均于治疗前后即进行期和缓解期各抽血1次,抽血前均以PASI给患者的病情程度计分[2]。健康对照20例,男17例,女3例;年龄20~52岁,平均35岁。
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    (二)实验方法:

    1.试剂及来源:异硫氰酸荧光素标记的Apo-1和Bcl-2单克隆抗体(Apo-1-FITC、Bcl-2-FITC)及藻红蛋白标记的Apo-2.7单克隆抗体(Apo-2.7-PE)均由法国国际免疫公司生产;淋巴细胞分离液由中国医学科学院血液学研究所生产。

    2.样品处理:晨取肘静脉血2mL,2% EDTA抗凝并悬浮于淋巴细胞分离液上,1500r/min离心15min,提取其中的淋巴细胞,加PBS 2mL漂洗,同速离心弃上清液,备用。

    3.免疫反应:反应前调整细胞数至109/mL,分别取100μL样品放入3支试验管和3支对照管,试验管分别加20μL Apo-1-FITC、Bcl-2-FITC和Apo-2.7-PE。对照管分别加20μL IgG1-FITC、IgG1-FITC和IgG1-PE,室温避光反应30min,上机。
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    4.流式细胞检测:仪器为FACScan型,美国Becton-Dickinson公司产品。上机前先用标准荧光微球调整仪器变异系数在2.0%以内,上机后收集10000个细胞,荧光强度以对数放大,测定光散射数据,结果采用Macintosh650型计算机及Cell Quest Plot软件进行数据分析。

    (三)统计学处理:两样本均数U检验,Spearman等级相关分析。

    二、结果

    1.银屑病患者治疗前后即进行期和缓解期Apo-1、Apo-2.7、Bcl-2在淋巴细胞上的表达水平:见表1。

    表1 不同阶段银屑病患者外周血淋巴细胞Apo-1、Apo-2.7和Bcl-2的表达水平(±s,%) 组 别
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    例 数

    Apo-1

    Apo-2.7

    Bcl-2

    健康对照组

    20

    0.53±0.24

    0.90±0.62

    35.87±5.35

    银屑病组

    进行期

    30

    5.59±2.86**△
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    9.37±4.54**△

    2.98±2.19**△△

    缓解期

    30

    2.74±1.91*

    4.70±3.01*

    13.33±4.72**

    注:与健康对照比较*P<0.05,**P<0.01;进行期与缓解期比较△P<0.05,△△P<0.01

    2.相关分析显示:银屑病患者PBLC对Bcl-2的表达水平与PASI呈明显负相关(rs=-0.614,P<0.01),与病程无关;Bcl-2与Apo-1、Apo-2.7亦呈负相关(rs值分别为-0.414、-0.443,P<0.05);Apo-1与Apo-2.7呈正相关(rs=0.434,P<0.05),二者在PBLC上的表达均与PASI呈正相关(rs=0.435、0.412,P<0.05),而与病程不相关。
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    三、讨论

    Fas系统和Bcl-2家族是调节淋巴细胞凋亡最重要的两类基因[3],其表达产物Apo-1、Apo-2.7和Bcl-2蛋白分布于淋巴细胞线粒体膜、内质网及细胞膜上,对淋巴细胞发育、分化、活化和清除有重要调节作用,是维护机体免疫自稳机制的基础[4,5]。其中Apo-1和Apo-2.7是促使淋巴细胞凋亡的蛋白,Bcl-2则是凋亡抑制蛋白[5,6]。实验结果显示银屑病患者PBLC表达Bcl-2的水平明显低于对照组,经中药及UVN光等治疗后病情缓解,Bcl-2水平也随之提高,但仍较对照组明显偏低,说明银屑病患者PBLC的抗凋亡水平下降。同时,银屑病患者PBLC的Apo-1、Apo-2.7水平均高于对照组,说明银屑病患者PBLC凋亡基因的表达水平上调。PBLC的凋亡基因过表达与抗凋亡基因失表达,两方面都使PBLC对凋亡的易感性增加。

    相关分析显示PBLC表达Bcl-2的水平与PASI计分呈显著负相关,Apo-1和Apo-2.7则与PASI呈正相关,提示银屑病患者病情越重,淋巴细胞的凋亡调控失衡越明显,PBLC凋亡发生率越高。国内倪晓等[7]曾报道银屑病皮损中呈现大量角质形成细胞的凋亡形态,基底细胞表达Bcl-2的水平亦明显低于正常,可见银屑病角质形成细胞的凋亡亦存在调控失衡现象。细胞的凋亡及其调节是一个十分复杂的过程,银屑病患者PBLC和角质形成细胞凋亡之间的联系有待进一步研究。
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    参考文献

    1 Thompson CB. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease. Science, 1995,267:1456-1462.

    2 Fredriksson T, Petterson U. Severe psoriasis-oral theraphy with a new retinoid. Dermatologica, 1978,157:238-244.

    3 Mountz JD, Talal N. Retroviruses, apoptosis and autogenes. Immunol Today, 1993,14:532-536.

    4 Schwartz LM, Osborne BA. Programed cell death apoptosis and killer genes. Immunol Today, 1993,14:582-590.
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    5 Zhang C, Ao Z, Seth A, et al. A mitochondrial membrane protein defined by a novel monoclonal antibody is preferentially detected in apopototic cells. J Immunol, 1996,157:3980-3987.

    6 Kabelitz D, Pohl T, Pechhold K. Activation-induced cell death (apoptosis) of mature perepheral T lymphocytes. Immunol Today, 1993,14:338-339.

    7 倪晓,孙建方,杨海平,等. 银屑病皮损中细胞凋亡的原位标记检测与bcl-2的表达. 中华皮肤科杂志, 1998,31:95-96.

    (收稿:1998-04-06 修回:1998-08-13), http://www.100md.com