自身免疫性大疱病IgA型基底膜带抗体的分析
作者：张学军 王培光 翁孟武 王再兴 杨春俊 杨森
单位：张学军 王培光 王再兴 杨春俊 杨森 230022合肥，安徽医科大学第一附属医院皮肤科；翁孟武 上海华山医院皮肤科
关键词：
中华皮肤科杂志/990611
大疱性类天疱疮(BP)、线状IgA大疱病(LABD)、获得性大疱性表皮松解症(EBA)和大疱性系统性红斑狼疮(BSLE)等疾病是一组自身免疫性表皮下大疱病。目前普遍认为，IgA型抗体线状沉积于基底膜带(BMZ)是LABD的特征。近来研究发现BP、EBA和BSLE等亦存在IgA型基底膜带抗体(BMZ-Ab)[1]，因此我们应用免疫印迹法对这组疾病的IgA型和IgG型BMZ-Ab进行分析。
一、材料和方法
, 百拇医药
1.患者血清：BP63例，男37例，女26例，平均年龄为57岁(34～81岁)；LABD19例，其中成人型14例，男6例，女8例，平均年龄为36岁(17～69岁)，儿童型5例，男3例，女2例，平均年龄6岁(2～12岁)；EBA6例，均为男性，平均年龄为13.5岁(1～26岁);BSLE5例，男1例，女4例，平均年龄23.5岁(17～32岁)。以上病例均根据临床表现、组织病理、直接免疫荧光、盐裂皮肤直接免疫荧光、盐裂皮肤间接免疫荧光检查的结果诊断。正常人对照组16例，男8例，女8例，平均年龄35岁(19～55岁)。
2.热分离法制备表皮下大疱病抗原和免疫印迹：按前文方法[2]进行，简言之，外科手术切除下来的正常皮肤，56℃热分离为表皮和真皮,表皮充分匀浆并经液氮反复冻融3次，离心提取为表皮抗原提取液；真皮经8mol/L尿素浸泡后离心提取为真皮抗原液。表皮或真皮抗原液经SDS-PAGE和转移电泳，将抗原转印至硝酸纤维膜(NC)上。NC封闭后与患者或对照血清反应1h，反复洗涤，与辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG和IgA抗体反应1h，反复洗涤，加入DAB底物液显色。
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二、结果
1.BP血清：63例BP患者中49例(77.8%)血清中有IgG型BMZ-Ab，分别与表皮抗原液中230000、200000、180000、165000、130000、115000和97000抗原结合，其中15例(23.8%)BP血清中同时伴有IgA型BMZ-Ab，分别与230000、180000、165000、115000和97000表皮抗原相结合。
2.LABD血清：19例LABD患者中15例(78.9%)血清中有IgA型BMZ-Ab，结合表皮抗原液中115000和97000抗原，其中6例(40%)不仅有IgA型BMZ-Ab，同时伴有结合230000、165000、115000和97000表皮抗原的IgG型BMZ-Ab。
3.EBA血清：6例EBA患者中3例血清中同时出现结合真皮抗原液中290000抗原的IgG型和IgA型BMZ-Ab。
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4.BSLE血清：5例BSLE患者中3例血清中IgG型BMZ-Ab结合真皮抗原液中290000抗原，其中2例伴有结合290000真皮抗原的IgA型BMZ-Ab。
5.对照：正常人血清不与表皮抗原液和真皮抗原液发生反应。
三、讨论
本文结果显示，BP血清中不仅存在结合230000、200000、180000、165000、130000、115000和97000表皮抗原的IgG型BMZ-Ab，而且在23.8%的BP血清中也分别或同时存在结合230000、180000、115000和97000表皮抗原的IgA型BMZ-Ab。EBA和BSLE血清中不仅存在结合290000真皮抗原的IgG型BMZ-Ab，也有部分患者血清中存在结合290000真皮抗原的IgA型BMZ-Ab。反之，在LABD血清中，不仅存在结合115000、97000表皮抗原的IgA型BMZ-Ab，而且在40%的IgA型BMZ-Ab阳性的LABD血清中分别或同时检出结合230000、165000、115000和97000表皮抗原的IgG型BMZ-Ab。以上结果提示，在BP、LABD、EBA和BSLE中均可同时存在IgA型和IgG型BMZ-Ab。此外，BP和LABDIgA型BMZ-Ab结合的靶抗原有部分相同，如115000、97000表皮抗原。LABD中也存在结合230000、165000、115000和97000表皮抗原的IgG型BMZ-Ab，与BP部分相同。我们的研究结果证实了部分文献报道[3，4]。由于BP和LABD中IgG型和IgA型BMZ-Ab均结合97000表皮抗原。因此，97000表皮抗原并非是过去一直认为的LABD特异性靶抗原。因此我们认为本文这组LABD可能属于BP的一种临床类型——IgA型BP。
, 百拇医药
LABD最初定义一组仅有IgA型抗体线状沉积于BMZ的患者，但是随后报道，约30%LABD患者在非皮损部位出现IgG型抗体线状沉积，一些皮肤内同时出现IgA和IgG沉积的患者血清中亦存在与97000表皮抗原反应的IgA和IgG型BMZ-Ab。我们发现6例LABD患者血清中同时伴有与230000、165000、115000和97000表皮抗原结合的IgG型BMZ-Ab。LABD中不仅有IgA型BMZ-Ab，而且有IgG型BMZ-Ab，因此不应将有无IgG型BMZ-Ab作为LABD与其他疾病区别的标准。
国家自然科学基金资助课题(39570659)
参考文献
1 王培光综述.IgA型基底膜带抗体的研究近况.国外医学皮肤性病学分册，1999，25:223-226.
2 张学军，翁孟武，施守义.热分离法制备表皮下大疱病抗原.中华微生物学和免疫学杂志，1994，14：416.
, http://www.100md.com
3 Ishiko A, Shimizu H, Masunaga T, et al. 97kDa linear IgA bullous dermatosis antigen localizes in the lamina lucida between the NC16A and carboxyl terminal domains of the 180kDa bullous pemphigoid antigen. J Invest Dermatol,1998， 111:93- 96.
4 Zone JJ, Taylor TB, Meyer LJ, et al. The 97kDa linear IgA bullous disease antigen is identical to a portion of the extracellular domain of the 180kDa bullous pemphigoid antigen,BPAg2. J Invest Dermatol,1998， 110:207- 210.
(收稿：1999-03-02修回：1999-06-25), 百拇医药
单位：张学军 王培光 王再兴 杨春俊 杨森 230022合肥，安徽医科大学第一附属医院皮肤科；翁孟武 上海华山医院皮肤科
关键词：
中华皮肤科杂志/990611
大疱性类天疱疮(BP)、线状IgA大疱病(LABD)、获得性大疱性表皮松解症(EBA)和大疱性系统性红斑狼疮(BSLE)等疾病是一组自身免疫性表皮下大疱病。目前普遍认为，IgA型抗体线状沉积于基底膜带(BMZ)是LABD的特征。近来研究发现BP、EBA和BSLE等亦存在IgA型基底膜带抗体(BMZ-Ab)[1]，因此我们应用免疫印迹法对这组疾病的IgA型和IgG型BMZ-Ab进行分析。
一、材料和方法
, 百拇医药
1.患者血清：BP63例，男37例，女26例，平均年龄为57岁(34～81岁)；LABD19例，其中成人型14例，男6例，女8例，平均年龄为36岁(17～69岁)，儿童型5例，男3例，女2例，平均年龄6岁(2～12岁)；EBA6例，均为男性，平均年龄为13.5岁(1～26岁);BSLE5例，男1例，女4例，平均年龄23.5岁(17～32岁)。以上病例均根据临床表现、组织病理、直接免疫荧光、盐裂皮肤直接免疫荧光、盐裂皮肤间接免疫荧光检查的结果诊断。正常人对照组16例，男8例，女8例，平均年龄35岁(19～55岁)。
2.热分离法制备表皮下大疱病抗原和免疫印迹：按前文方法[2]进行，简言之，外科手术切除下来的正常皮肤，56℃热分离为表皮和真皮,表皮充分匀浆并经液氮反复冻融3次，离心提取为表皮抗原提取液；真皮经8mol/L尿素浸泡后离心提取为真皮抗原液。表皮或真皮抗原液经SDS-PAGE和转移电泳，将抗原转印至硝酸纤维膜(NC)上。NC封闭后与患者或对照血清反应1h，反复洗涤，与辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG和IgA抗体反应1h，反复洗涤，加入DAB底物液显色。
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二、结果
1.BP血清：63例BP患者中49例(77.8%)血清中有IgG型BMZ-Ab，分别与表皮抗原液中230000、200000、180000、165000、130000、115000和97000抗原结合，其中15例(23.8%)BP血清中同时伴有IgA型BMZ-Ab，分别与230000、180000、165000、115000和97000表皮抗原相结合。
2.LABD血清：19例LABD患者中15例(78.9%)血清中有IgA型BMZ-Ab，结合表皮抗原液中115000和97000抗原，其中6例(40%)不仅有IgA型BMZ-Ab，同时伴有结合230000、165000、115000和97000表皮抗原的IgG型BMZ-Ab。
3.EBA血清：6例EBA患者中3例血清中同时出现结合真皮抗原液中290000抗原的IgG型和IgA型BMZ-Ab。
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4.BSLE血清：5例BSLE患者中3例血清中IgG型BMZ-Ab结合真皮抗原液中290000抗原，其中2例伴有结合290000真皮抗原的IgA型BMZ-Ab。
5.对照：正常人血清不与表皮抗原液和真皮抗原液发生反应。
三、讨论
本文结果显示，BP血清中不仅存在结合230000、200000、180000、165000、130000、115000和97000表皮抗原的IgG型BMZ-Ab，而且在23.8%的BP血清中也分别或同时存在结合230000、180000、115000和97000表皮抗原的IgA型BMZ-Ab。EBA和BSLE血清中不仅存在结合290000真皮抗原的IgG型BMZ-Ab，也有部分患者血清中存在结合290000真皮抗原的IgA型BMZ-Ab。反之，在LABD血清中，不仅存在结合115000、97000表皮抗原的IgA型BMZ-Ab，而且在40%的IgA型BMZ-Ab阳性的LABD血清中分别或同时检出结合230000、165000、115000和97000表皮抗原的IgG型BMZ-Ab。以上结果提示，在BP、LABD、EBA和BSLE中均可同时存在IgA型和IgG型BMZ-Ab。此外，BP和LABDIgA型BMZ-Ab结合的靶抗原有部分相同，如115000、97000表皮抗原。LABD中也存在结合230000、165000、115000和97000表皮抗原的IgG型BMZ-Ab，与BP部分相同。我们的研究结果证实了部分文献报道[3，4]。由于BP和LABD中IgG型和IgA型BMZ-Ab均结合97000表皮抗原。因此，97000表皮抗原并非是过去一直认为的LABD特异性靶抗原。因此我们认为本文这组LABD可能属于BP的一种临床类型——IgA型BP。
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LABD最初定义一组仅有IgA型抗体线状沉积于BMZ的患者，但是随后报道，约30%LABD患者在非皮损部位出现IgG型抗体线状沉积，一些皮肤内同时出现IgA和IgG沉积的患者血清中亦存在与97000表皮抗原反应的IgA和IgG型BMZ-Ab。我们发现6例LABD患者血清中同时伴有与230000、165000、115000和97000表皮抗原结合的IgG型BMZ-Ab。LABD中不仅有IgA型BMZ-Ab，而且有IgG型BMZ-Ab，因此不应将有无IgG型BMZ-Ab作为LABD与其他疾病区别的标准。
国家自然科学基金资助课题(39570659)
参考文献
1 王培光综述.IgA型基底膜带抗体的研究近况.国外医学皮肤性病学分册，1999，25:223-226.
2 张学军，翁孟武，施守义.热分离法制备表皮下大疱病抗原.中华微生物学和免疫学杂志，1994，14：416.
, http://www.100md.com
3 Ishiko A, Shimizu H, Masunaga T, et al. 97kDa linear IgA bullous dermatosis antigen localizes in the lamina lucida between the NC16A and carboxyl terminal domains of the 180kDa bullous pemphigoid antigen. J Invest Dermatol,1998， 111:93- 96.
4 Zone JJ, Taylor TB, Meyer LJ, et al. The 97kDa linear IgA bullous disease antigen is identical to a portion of the extracellular domain of the 180kDa bullous pemphigoid antigen,BPAg2. J Invest Dermatol,1998， 110:207- 210.
(收稿：1999-03-02修回：1999-06-25), 百拇医药