中国北方汉族寻常型天疱疮患者与HLA－DQB1等位基因的相关性研究
作者：耿龙 翟宁 肖汀 王良明 宋芳吉 陈洪铎
单位：耿龙 翟宁 肖汀 宋芳吉 陈洪铎(110001沈阳，中国医科大学第一临床学院皮肤科)；王良明(沈阳军区总医院皮肤科)
关键词：
中华皮肤科杂志000425
寻常型天疱疮(pemphigusvulgaris,PV)是一种大疱性皮肤病，发病的原因还不清楚，人类最基 本遗传标志之一的主要组织相容性抗原,即人类白细胞抗原(HLA)认为可能在发病中起重 要作用。各国学者在对不同民族PV患者的研究中，相继发现一些与PV相关的HLA-Ⅱ类 抗原[1.2]。我们在27例东北汉族PV患者中,应用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR- SSP)分型技术对HLA-Ⅱ类抗原DQ的等位基因进行调查,探讨与PV相关的HLA-DQ等位基因 。
, http://www.100md.com
一、材料和方法
1.研究对象：患者组为中国医科大学附属第一临床学院皮肤科住院PV患者27例,彼此无 血缘关系。男11例、女16例，年龄19～69岁。所有病例均经临床、组织病理及免疫病理检 查证实为PV。对照组为中国东北地区无血缘关系汉族健康个体160例，性别、年龄分布与 患者组相当。
2.实验方法：①HLA-DQB1等位基因序列特异性引物，共22对，19个特异性，为德国 ESSEN大学合成，其扩增产物具有等位基因特异性，分型结果和血清学方法测得的HLA- DQ表型具有对应关系。②DNA提取，采用改良的盐析法。③DNA扩增，每个特异性总反 应体系为20μL，包括等位基因序列特异性引物、dNTP、Taq酶、模板DNA。PCR反应条件 为：预变性94℃5min;变性94℃45s;退火65℃1min;延伸72℃1min,共30个循环,后延伸72℃5 min。④结果判定：扩增产物于质量分数为2%琼脂糖凝胶中(含溴化乙锭1μg/mL)，在 电压为15V/cm条件下电泳30min后,在紫外透射灯下观察结果,在相应的DQB1等位基因泳道中 见到清晰的DNA条带即为阳性。
, 百拇医药
3.统计学分析：患者组与正常对照组之间进行逐个基因频率比较。以相对危险率(relative risk,RR)表示有相关基因的人群患病率为无关联基因的人群患病率的倍数。通过χ2检验进 行显著性分析。
表1 HLA-DQBI基因在寻常型天疱疮组及对照组中分布 DQBI
对照组(160例)
患者组(27例)
RR
χ2
P
PC
n
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Gf
n
Gf
0201
32
0.1000
11
0.2302
2.75
4.51
<0.05
>0.05
0301
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5
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>0.05
>0.05
0302
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5
0.0973
, 百拇医药
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>0.05
>0.05
0303
59
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4
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<0.05
>0.05
, 百拇医药
0303
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0
0
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1.02
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>0.05
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1
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0
0
0.51
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>0.05
, 百拇医药
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1.33
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>0.05
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22
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, http://www.100md.com
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>0.05
>0.05
0503
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, 百拇医药
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>0.05
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3
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>0.05
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, 百拇医药
17
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3
0.0572
1.05
0.07
>0.05
>0.05
二、结果
实验结果见表1，与对照组相比，PV组中HLA-DQB1*0503出现的频率显著增高，为 40.74%(11/27)，而对照组仅为3.75%，经校正P值后2组差异有显著性。另外PV组中DQB1* 0201的检出频率为40.74%(11/27),明显高于对照组(20%,32/160)，但校正P值后2组差异无显著 性。DQB1*0303出现的频率在PV组下降，为14.81%(4/27)，而对照组中则为36.88%(59/160)， 但校正P值后无意义。
, 百拇医药
三、讨论
在国外有关各民族的研究中，与PV相关的HLA-DQ基因主要有2个：HLA-DQB1*0302及 HLA-DQB1*0503。白种人PV患者中这2个等位基因频率均增高，印度人PV患者亦同时表 现出与这二个等位基因相关，而在巴基斯坦及日本的患者中，则仅表现出DQB1*0503频 率的增加[3,4]。从我们的研究中可以看出，27例PV患者有11例携带DQB1*0503，说明在中 国人PV患者中主要以DQB1*0503为遗传标记。另外我们还发现，在我国的PV患者中 DQB1*0201也有增加的倾向，DQB1*0303有下降的倾向，在国外研究中尚未提到。同是 黄种人的日本PV患者则还显现出DQ7频率的增加和DQB1*0601频率下降的倾向。说明在 不同国家、民族的PV患者之间，虽然存在着相似的遗传易感性，但还是不同程度地保持 一定的遗传距离。
参考文献
[1]Carcassi C, Cottoni F， Floris A, et al. HLA haplotypes and class Ⅱ molecular alleles in Sardinian and Italian patients with pemphigus vulgaris. Tissue Antigens, 1996,48:662- 667.
, 百拇医药
[2]Yaacov M, Henry A, Chaim B, et al. Identical HLA Class Ⅱ alleles predispose to drug triggered and idiopathic pemphigus vulgaris. Acta Derm Venereol (Stockh), 1995,75:12- 14.
[3]Delgado JC, Yunis DE, Bozon MV, et al. MHC class Ⅱ alleles and haplotypes in patients with pemphigus vulgaris from India. Tissue Antigens, 1996,48:668- 672.
[4]Niizeki H, Inoko H, Mizuki N, et al. HLA- DQA1, DQB1 and - DRB1 genotyping in Japanese pemphigus vulgaris patients by the PCR- RFLP method. Tissue Antigens, 1994,44:248- 251.
(收稿日期：1999-07-22), 百拇医药
单位：耿龙 翟宁 肖汀 宋芳吉 陈洪铎(110001沈阳，中国医科大学第一临床学院皮肤科)；王良明(沈阳军区总医院皮肤科)
关键词：
中华皮肤科杂志000425
寻常型天疱疮(pemphigusvulgaris,PV)是一种大疱性皮肤病，发病的原因还不清楚，人类最基 本遗传标志之一的主要组织相容性抗原,即人类白细胞抗原(HLA)认为可能在发病中起重 要作用。各国学者在对不同民族PV患者的研究中，相继发现一些与PV相关的HLA-Ⅱ类 抗原[1.2]。我们在27例东北汉族PV患者中,应用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR- SSP)分型技术对HLA-Ⅱ类抗原DQ的等位基因进行调查,探讨与PV相关的HLA-DQ等位基因 。
, http://www.100md.com
一、材料和方法
1.研究对象：患者组为中国医科大学附属第一临床学院皮肤科住院PV患者27例,彼此无 血缘关系。男11例、女16例，年龄19～69岁。所有病例均经临床、组织病理及免疫病理检 查证实为PV。对照组为中国东北地区无血缘关系汉族健康个体160例，性别、年龄分布与 患者组相当。
2.实验方法：①HLA-DQB1等位基因序列特异性引物，共22对，19个特异性，为德国 ESSEN大学合成，其扩增产物具有等位基因特异性，分型结果和血清学方法测得的HLA- DQ表型具有对应关系。②DNA提取，采用改良的盐析法。③DNA扩增，每个特异性总反 应体系为20μL，包括等位基因序列特异性引物、dNTP、Taq酶、模板DNA。PCR反应条件 为：预变性94℃5min;变性94℃45s;退火65℃1min;延伸72℃1min,共30个循环,后延伸72℃5 min。④结果判定：扩增产物于质量分数为2%琼脂糖凝胶中(含溴化乙锭1μg/mL)，在 电压为15V/cm条件下电泳30min后,在紫外透射灯下观察结果,在相应的DQB1等位基因泳道中 见到清晰的DNA条带即为阳性。
, 百拇医药
3.统计学分析：患者组与正常对照组之间进行逐个基因频率比较。以相对危险率(relative risk,RR)表示有相关基因的人群患病率为无关联基因的人群患病率的倍数。通过χ2检验进 行显著性分析。
表1 HLA-DQBI基因在寻常型天疱疮组及对照组中分布 DQBI
对照组(160例)
患者组(27例)
RR
χ2
P
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二、结果
实验结果见表1，与对照组相比，PV组中HLA-DQB1*0503出现的频率显著增高，为 40.74%(11/27)，而对照组仅为3.75%，经校正P值后2组差异有显著性。另外PV组中DQB1* 0201的检出频率为40.74%(11/27),明显高于对照组(20%,32/160)，但校正P值后2组差异无显著 性。DQB1*0303出现的频率在PV组下降，为14.81%(4/27)，而对照组中则为36.88%(59/160)， 但校正P值后无意义。
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三、讨论
在国外有关各民族的研究中，与PV相关的HLA-DQ基因主要有2个：HLA-DQB1*0302及 HLA-DQB1*0503。白种人PV患者中这2个等位基因频率均增高，印度人PV患者亦同时表 现出与这二个等位基因相关，而在巴基斯坦及日本的患者中，则仅表现出DQB1*0503频 率的增加[3,4]。从我们的研究中可以看出，27例PV患者有11例携带DQB1*0503，说明在中 国人PV患者中主要以DQB1*0503为遗传标记。另外我们还发现，在我国的PV患者中 DQB1*0201也有增加的倾向，DQB1*0303有下降的倾向，在国外研究中尚未提到。同是 黄种人的日本PV患者则还显现出DQ7频率的增加和DQB1*0601频率下降的倾向。说明在 不同国家、民族的PV患者之间，虽然存在着相似的遗传易感性，但还是不同程度地保持 一定的遗传距离。
参考文献
[1]Carcassi C, Cottoni F， Floris A, et al. HLA haplotypes and class Ⅱ molecular alleles in Sardinian and Italian patients with pemphigus vulgaris. Tissue Antigens, 1996,48:662- 667.
, 百拇医药
[2]Yaacov M, Henry A, Chaim B, et al. Identical HLA Class Ⅱ alleles predispose to drug triggered and idiopathic pemphigus vulgaris. Acta Derm Venereol (Stockh), 1995,75:12- 14.
[3]Delgado JC, Yunis DE, Bozon MV, et al. MHC class Ⅱ alleles and haplotypes in patients with pemphigus vulgaris from India. Tissue Antigens, 1996,48:668- 672.
[4]Niizeki H, Inoko H, Mizuki N, et al. HLA- DQA1, DQB1 and - DRB1 genotyping in Japanese pemphigus vulgaris patients by the PCR- RFLP method. Tissue Antigens, 1994,44:248- 251.
(收稿日期：1999-07-22), 百拇医药