PCNA、CK13、HPV在子宫颈癌的表达
作者：周惠珍 魏志英 段国兰 周斌 马宁
单位：周惠珍 周斌：甘肃省医学科学研究院，兰州 730050；魏志英 段国兰 马宁：兰州医学院第二附属医院，兰州 730030
关键词：子宫颈癌；多聚酶链反应；增殖细胞核抗原；细胞角蛋白13
PCNA 摘要：目的：了解乳头瘤病毒(HPV)、细胞角蛋白13(CK13)、增殖细胞核抗原(PCNA)在子宫颈癌的表达及对子宫颈癌的发生、发展、预后的影响及其相关性。方法：采用免疫组化SP法和多聚酶链反应PCR法，对30例子宫颈癌组织标本石蜡切片中HPV、PCNA、DK13的表达进了观察研究。结果：①感染乳头瘤病毒HPV18型是子宫颈癌的原因之一；②子宫颈鳞癌细胞核中PCNA含量与鳞癌分级呈正相关；③CK13在子宫颈鳞癌细胞中的表达率可作为判断肿瘤恶性度、预测预后的指标。结论：子宫颈癌的发生与乳头瘤病毒HPV18型感染相关；PCNA、CK13在子宫颈癌的表达可作为判断宫颈癌恶性程度及预后的指标。三者之间尚无明确相关性。
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中图分类号：R 737.33 文献标识码：A 文章编号：1007-8622(1999)04-0282-02
Expressions of PCNA,CK13 and HPV in carcinomas of uterine cervix
ZHOU Hui-zhen,WEI Zhi-ying,DUAN Guo-lan,et al
(Gansu Academy of Medical Science,730050)
Abstract:Purpose:To understand the expressions of PCNA,CK13 and HPV in uterine cervix carcinomas and their correlationships with the occurence,development and prognosis of this tumour.Methods:Expressions of PCNA,CK13 and HPV of surgical or biopsy specimens taken from 30 uterine cervix carcinomas were determined by immunohistochemical SP method and PCR method.Results:The infective papilloma virus HPV18 was one of the causes of uterine cervix carcinoma.Content of PCNA in squamous cell carcinoma of uterine cervix was positively correlated with the grading(degree of cell differentiation) of this tumour.The expression rate of CK13 in squamous cell carcinoma of uterine cervix can be regarded as an index for judging the malignancy and prognosis of this tumour.Conclusion:Occurence of uterine cervix carcinoma is correlated with infective papilloma virus HPV18.Expressions of PCNA,CK13 in this tumour can be regarded as indexes to judge its malignancy and prognosis.There are no definite relations demonstrated among the expressions of PCNA,CK13 and HPV in carcinoma of uterine cervix.
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Key words:Carcinoma Uterine cervix;PCR;PCNA;CK13
国内外曾有关于增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞角蛋白13(CK13)和人乳头瘤病毒(HPV)在子宫颈癌的表达情况的研究，也有关于不同分子量角蛋白在前列腺癌组织中的表达，但尚少见有关三者在子宫颈癌表达的报道。为此，我们采用免疫组化SP法、多聚酶链反应(PCR)法，分别对30例确诊的子宫颈癌组织石蜡切片中PCNA、CK13和HPV的含量进行了观察分析。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料：选取30例确诊为子宫颈癌的手术或活检标本进行综合实验研究与观察。对照组为正常子宫颈活检标本5例。应用福州迈新生物技术开发公司生产的第一抗体PCNA、CK13与即用型免疫组织化学SP试剂盒。使用厦门泰伦生物工程有限公司生产的人乳头瘤病毒(HPV)DNAPCR试剂盒，军事医学科学院生产JK-232B基因扩增仪。阳、阴性对照每次检测各设一份。
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1.2 方法：HPV PCR扩增：石蜡切片10张，两次入二甲苯、无水乙醇脱蜡、加蛋白醇K消化过夜；相继加裂解液、洗涤液、上基因扩增仪；电泳走带，于紫外透射仪观察结果；与HE染色切片比较。免疫组化SP法：按说明书进行。
2 结果
观察组30例，HPV6、11检查15例，均阴性；HPV18检查15例，10例阳性，HPV18阳性66.6%。PCNA阳性表达22例(73.3%，Ⅰ级4例、Ⅱ级10例、Ⅲ级8例)。CK13阳性表达22例(73.3%，Ⅰ级13例、Ⅱ级4例、Ⅲ级2例、可疑3例)。对照组5例，HPV、PVNA，均阴性，CK133例阴性，2例阳性。
3 讨论
3.1 1949年Sttauss首先在电镜下于普通疣的浸出液中观察到HPV颗粒。截止目前，已知HTV有70个型，其中25个型与生殖道关系密切。HPV为一双链闭环DNA病毒，其基因组按功能分早、晚上游调节三个区。早期还能编码7种病毒蛋白，所含E6F7和病毒的细胞转移、致病功能有关。基于HPV对人体危害程度可分为高危型、低危型两类。低危型HPV6、11常见于尖锐湿疣、良性增生性病变，高危型HPV16、18、33。DNA常常以单拷贝、多拷贝形式被整合入宿主细胞基因组，使细胞生活周期紊乱、基因突变，导致癌发生。有学者应用聚合酶链反应检测宫颈癌组织中HPV16、HPV18检出率明显升高[1]。本文在子宫颈癌组织中HPV18型检出明显增加(66.6%)，与文献报告相符，我们认为HPV18型感染是宫颈癌发病的病因之一。
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3.2 近年来，由于对细胞周期的深入研究，各种细胞周期核抗原不断被发现，PCNA就是其中之一。PCNA系36 000蛋白质，它是从细胞核内分离纯化的一种多肽链，能与DNA多聚酶辅助蛋白结合，参与细胞DNA的复制。PCNA在细胞周期后期合成最高，其表达水平与瘤细胞增殖相关。故它是细胞增殖活性的一个主要观察指标。国外有学者采用免疫组化法观察了C-erbB-2、P53、PCNA在104例膀胱移行细胞癌5μ石蜡切片中的表达率[2]，结果阳性率C-erbB-2 44%、P5328%，PCNA则为85%。且PCNA在肿瘤分级中，乳头状结构的分级高，则表达高。国外还有人[3]采用单克隆抗体PC10、PAP及APAAP法分析了甲醛固定石蜡包埋宫颈癌组织切片中PCNA的活性，计观察156例，其中正常宫颈上皮32例，子宫颈鳞癌Ⅰ级33例，Ⅱ级36例，Ⅲ级55例。发现整个上皮和上皮的每一层内PCNA标记指数与异形变严重程度明显相关，相对来说，PCNA阳性细胞上皮厚度与异形性变程度亦密切相关。我们观察30例，PCNA阳性表达22例，高表达随子宫颈癌分级增高而增加，即与肿物分化程度呈正相关，与报道一致，不过表达阳性率低于膀胱移行细胞癌。
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3.3 有人研究高、低分子量角蛋白在前列腺癌及增生性病变中的表达[4]。结果表明，高分子量角蛋白34βE12在70例前列腺癌(PC)组织中表达均为阳性，而在其中45例癌周区腺体及20例前列腺非典型增生(PAH)腺体的基细胞区呈现断续的阳性或强阳性反应。低分子量角蛋白35βH11及其它指标对正常前列腺和癌均呈强阳性。本文应用免疫组化SP法观察CK13在30例子宫颈癌组织的表达，阳性6例，弱阳性16例，总阳性率73.2%。对照组5例中2例阳性，揭示它的含量是否与细胞分化程度亦呈负相关，此点有待进一步探讨。
综上所述，子宫颈癌的发生与乳头瘤病毒HPV18型感染相关；PCNA在子宫颈癌的表达率与其病理分级、临床分期、术后生存期相关；CK13在子宫颈癌的表达可作为判断宫颈癌恶性程度及预后的指标。三者之间尚无明确相关性。
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作者简介：，周惠珍(1943-)，女，副主任医师
参考文献
[1]陈涌芬，杨道理，王宝成，等.聚合酶链反应检测宫颈癌的前瞻性研究[J].现代诊断与治疗，1995，6(1)：11-13.
[2]Lipponen PE.Interreiationship between expression of P53，Proliferating cell nuclear antigen and C—erbB—2 in bladder cancer [J].pathobiology,1993,61(3～4)：178-182.
[3]Smela M,Chosia M,Domagala W.Proliferation cell nuelear antigen (PCNA pression in cerrica)intreapithelial neoplasia(CIN).An immunohistochemical study[J].Pol J pathol,1996,47(4):171-174.
[4]叶明福，谢 青，张哉根，等.高、低分子量角蛋白及前列腺特异性抗原在前列腺癌和前列腺增生性病变中的表达[J].中华病理学杂志，1997，26(4)：234-236.
收稿日期：1999-04-20 修回：1999-05-31, 百拇医药
单位：周惠珍 周斌：甘肃省医学科学研究院，兰州 730050；魏志英 段国兰 马宁：兰州医学院第二附属医院，兰州 730030
关键词：子宫颈癌；多聚酶链反应；增殖细胞核抗原；细胞角蛋白13
PCNA 摘要：目的：了解乳头瘤病毒(HPV)、细胞角蛋白13(CK13)、增殖细胞核抗原(PCNA)在子宫颈癌的表达及对子宫颈癌的发生、发展、预后的影响及其相关性。方法：采用免疫组化SP法和多聚酶链反应PCR法，对30例子宫颈癌组织标本石蜡切片中HPV、PCNA、DK13的表达进了观察研究。结果：①感染乳头瘤病毒HPV18型是子宫颈癌的原因之一；②子宫颈鳞癌细胞核中PCNA含量与鳞癌分级呈正相关；③CK13在子宫颈鳞癌细胞中的表达率可作为判断肿瘤恶性度、预测预后的指标。结论：子宫颈癌的发生与乳头瘤病毒HPV18型感染相关；PCNA、CK13在子宫颈癌的表达可作为判断宫颈癌恶性程度及预后的指标。三者之间尚无明确相关性。
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中图分类号：R 737.33 文献标识码：A 文章编号：1007-8622(1999)04-0282-02
Expressions of PCNA,CK13 and HPV in carcinomas of uterine cervix
ZHOU Hui-zhen,WEI Zhi-ying,DUAN Guo-lan,et al
(Gansu Academy of Medical Science,730050)
Abstract:Purpose:To understand the expressions of PCNA,CK13 and HPV in uterine cervix carcinomas and their correlationships with the occurence,development and prognosis of this tumour.Methods:Expressions of PCNA,CK13 and HPV of surgical or biopsy specimens taken from 30 uterine cervix carcinomas were determined by immunohistochemical SP method and PCR method.Results:The infective papilloma virus HPV18 was one of the causes of uterine cervix carcinoma.Content of PCNA in squamous cell carcinoma of uterine cervix was positively correlated with the grading(degree of cell differentiation) of this tumour.The expression rate of CK13 in squamous cell carcinoma of uterine cervix can be regarded as an index for judging the malignancy and prognosis of this tumour.Conclusion:Occurence of uterine cervix carcinoma is correlated with infective papilloma virus HPV18.Expressions of PCNA,CK13 in this tumour can be regarded as indexes to judge its malignancy and prognosis.There are no definite relations demonstrated among the expressions of PCNA,CK13 and HPV in carcinoma of uterine cervix.
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Key words:Carcinoma Uterine cervix;PCR;PCNA;CK13
国内外曾有关于增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞角蛋白13(CK13)和人乳头瘤病毒(HPV)在子宫颈癌的表达情况的研究，也有关于不同分子量角蛋白在前列腺癌组织中的表达，但尚少见有关三者在子宫颈癌表达的报道。为此，我们采用免疫组化SP法、多聚酶链反应(PCR)法，分别对30例确诊的子宫颈癌组织石蜡切片中PCNA、CK13和HPV的含量进行了观察分析。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料：选取30例确诊为子宫颈癌的手术或活检标本进行综合实验研究与观察。对照组为正常子宫颈活检标本5例。应用福州迈新生物技术开发公司生产的第一抗体PCNA、CK13与即用型免疫组织化学SP试剂盒。使用厦门泰伦生物工程有限公司生产的人乳头瘤病毒(HPV)DNAPCR试剂盒，军事医学科学院生产JK-232B基因扩增仪。阳、阴性对照每次检测各设一份。
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1.2 方法：HPV PCR扩增：石蜡切片10张，两次入二甲苯、无水乙醇脱蜡、加蛋白醇K消化过夜；相继加裂解液、洗涤液、上基因扩增仪；电泳走带，于紫外透射仪观察结果；与HE染色切片比较。免疫组化SP法：按说明书进行。
2 结果
观察组30例，HPV6、11检查15例，均阴性；HPV18检查15例，10例阳性，HPV18阳性66.6%。PCNA阳性表达22例(73.3%，Ⅰ级4例、Ⅱ级10例、Ⅲ级8例)。CK13阳性表达22例(73.3%，Ⅰ级13例、Ⅱ级4例、Ⅲ级2例、可疑3例)。对照组5例，HPV、PVNA，均阴性，CK133例阴性，2例阳性。
3 讨论
3.1 1949年Sttauss首先在电镜下于普通疣的浸出液中观察到HPV颗粒。截止目前，已知HTV有70个型，其中25个型与生殖道关系密切。HPV为一双链闭环DNA病毒，其基因组按功能分早、晚上游调节三个区。早期还能编码7种病毒蛋白，所含E6F7和病毒的细胞转移、致病功能有关。基于HPV对人体危害程度可分为高危型、低危型两类。低危型HPV6、11常见于尖锐湿疣、良性增生性病变，高危型HPV16、18、33。DNA常常以单拷贝、多拷贝形式被整合入宿主细胞基因组，使细胞生活周期紊乱、基因突变，导致癌发生。有学者应用聚合酶链反应检测宫颈癌组织中HPV16、HPV18检出率明显升高[1]。本文在子宫颈癌组织中HPV18型检出明显增加(66.6%)，与文献报告相符，我们认为HPV18型感染是宫颈癌发病的病因之一。
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3.2 近年来，由于对细胞周期的深入研究，各种细胞周期核抗原不断被发现，PCNA就是其中之一。PCNA系36 000蛋白质，它是从细胞核内分离纯化的一种多肽链，能与DNA多聚酶辅助蛋白结合，参与细胞DNA的复制。PCNA在细胞周期后期合成最高，其表达水平与瘤细胞增殖相关。故它是细胞增殖活性的一个主要观察指标。国外有学者采用免疫组化法观察了C-erbB-2、P53、PCNA在104例膀胱移行细胞癌5μ石蜡切片中的表达率[2]，结果阳性率C-erbB-2 44%、P5328%，PCNA则为85%。且PCNA在肿瘤分级中，乳头状结构的分级高，则表达高。国外还有人[3]采用单克隆抗体PC10、PAP及APAAP法分析了甲醛固定石蜡包埋宫颈癌组织切片中PCNA的活性，计观察156例，其中正常宫颈上皮32例，子宫颈鳞癌Ⅰ级33例，Ⅱ级36例，Ⅲ级55例。发现整个上皮和上皮的每一层内PCNA标记指数与异形变严重程度明显相关，相对来说，PCNA阳性细胞上皮厚度与异形性变程度亦密切相关。我们观察30例，PCNA阳性表达22例，高表达随子宫颈癌分级增高而增加，即与肿物分化程度呈正相关，与报道一致，不过表达阳性率低于膀胱移行细胞癌。
, http://www.100md.com
3.3 有人研究高、低分子量角蛋白在前列腺癌及增生性病变中的表达[4]。结果表明，高分子量角蛋白34βE12在70例前列腺癌(PC)组织中表达均为阳性，而在其中45例癌周区腺体及20例前列腺非典型增生(PAH)腺体的基细胞区呈现断续的阳性或强阳性反应。低分子量角蛋白35βH11及其它指标对正常前列腺和癌均呈强阳性。本文应用免疫组化SP法观察CK13在30例子宫颈癌组织的表达，阳性6例，弱阳性16例，总阳性率73.2%。对照组5例中2例阳性，揭示它的含量是否与细胞分化程度亦呈负相关，此点有待进一步探讨。
综上所述，子宫颈癌的发生与乳头瘤病毒HPV18型感染相关；PCNA在子宫颈癌的表达率与其病理分级、临床分期、术后生存期相关；CK13在子宫颈癌的表达可作为判断宫颈癌恶性程度及预后的指标。三者之间尚无明确相关性。
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作者简介：，周惠珍(1943-)，女，副主任医师
参考文献
[1]陈涌芬，杨道理，王宝成，等.聚合酶链反应检测宫颈癌的前瞻性研究[J].现代诊断与治疗，1995，6(1)：11-13.
[2]Lipponen PE.Interreiationship between expression of P53，Proliferating cell nuclear antigen and C—erbB—2 in bladder cancer [J].pathobiology,1993,61(3～4)：178-182.
[3]Smela M,Chosia M,Domagala W.Proliferation cell nuelear antigen (PCNA pression in cerrica)intreapithelial neoplasia(CIN).An immunohistochemical study[J].Pol J pathol,1996,47(4):171-174.
[4]叶明福，谢 青，张哉根，等.高、低分子量角蛋白及前列腺特异性抗原在前列腺癌和前列腺增生性病变中的表达[J].中华病理学杂志，1997，26(4)：234-236.
收稿日期：1999-04-20 修回：1999-05-31, 百拇医药