胃癌单克隆抗体临床诊断应用及与CP相关性的探讨
作者：吕同德 于兰 陈新民 曾玮 贺建萍 邢传平
单位：吕同德(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；于兰(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；陈新民(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；曾玮(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；贺建萍(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；邢传平(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)
关键词：胃癌；单克隆抗体；诊断
西北国防医学杂志000325 摘要：目的：研究胃癌单克隆抗体的表达及临床意义。方法：用本室制备的对胃癌有较强特异性的McAbGMG1：1D1-2对151例内窥镜活检组织压印片进行免疫组织化学检查。结果：用本法检查组织印片中的癌细胞以及具有癌细胞相关抗原的癌前病变组织，特异性强，反应灵敏，结果可靠。结论：如果与内窥镜和常规病理学检查联合应用，会提高早期癌的检出率，本文还就抗人胃癌McAb与CP的相关性进行了初步探讨。
, 百拇医药
中图分类号：R 735.2 文献标识码：A 文章编号：1007-8622(2000)03-0223-02
The application of McAb against gastric carcinoma in clinic and the relationship with CP
Lü Tong-de,YU Lan,CHEN Xin-min,et al.
(Department of Clinical Experiments,Lanzhou General Hospital，Lanzhou Command,PLA,730050)
Abstract:Objective:To study the expression and clinical significance of McAb against gastric carcinoma.Methods:151 samples of print/press sections from gastric endoscope biopsy were examined by the monoclonal antibody GMG1∶1D1-2 which was specific to gastric carcinoma and made by author's laboratory.Results:The results showed that the method had a high specificity and sensitivity for examination and recognition of the gastric carcinoma cells and cells of precancerous lesions with related antigen of carcinomatous cells in print sections and the examination results was reliable.Conclusion:The method is very useful to promote the diagnosis rate of earlier lesion,especially combining the endoscopy and routine pathological examination.The relationship of McAb and CP was also discussed in this paper.
, 百拇医药
Key words:Stomach carcinoma； Monoclonal antibody； Diagnosis
目前，胃癌的诊断除了靠临床表现和体检外，主要靠X线、胃镜以及病理形态学检查，但是，对于早期胃癌的诊断，胃镜和病理活检也存在不少问题。为此，本文选用自制的胃癌单克隆抗体(McAb)GMG1∶1D1-2对内窥镜活检组织压印片进行检查。并与病理组织学检查进行了比较，同时还进行了McAb与幽门弯曲菌(Camplobacter pyloridis-CP)相关性的探讨。
1 材料与方法
1.1 材料来源：
1.1.1 活检组织：取自本院胃镜活检组织共151例，其中胃癌17例，胃溃疡7例，肠上皮化生性慢性萎缩性胃炎(CAG)27例，单纯性CAG 20例，慢性浅表性胃炎(CSG)31例，胃息肉2例，胃癌术后吻合口2例，正常胃粘膜10例，没有明确诊断的慢性胃病15例。食管癌4例，正常食管粘膜10例。结肠镜活检组织共6例，其中乙状结肠癌术后1例，直肠癌术后1例，正常结肠粘膜4例。年龄18～81岁。
, 百拇医药
1.1.2 抗人胃癌细胞McAb∶GMG1∶1D1-2是本室用胃癌细胞株免疫BaLB/c小鼠，取其脾细胞与Sp 2/0骨髓瘤细胞株融合而成的杂交瘤分泌的。经免疫组化鉴定，证明这个抗体对胃癌有较高特异性[1]。取其腹水型抗体，用0.1%BSA-PBS做1∶10稀释。
1.1.3 冻干FITC-SAM IgG荧光抗体：由二医大孔宪涛教授惠赠，应用效价为1∶20。
1.2 活检标本的处理：①取胃镜活检第一块组织做双项快速CP反应。②根据病变情况，分别取胃的贲门，窦，体，角等部位的活检组织制作组织压印复合片，丙酮4℃固定30 min备用。③将与压印片相同的活检组织送病理学检查。
1.3 间接免疫荧光染色及摄影：①压印片用95%乙醇固定10 min。②加3%BSA-PBS，37℃作用30 min。③加McAb，37℃作用45 min。④加荧光抗体，室温作用30 min(3、4两步均经PBS洗涤、吹干)。甘油缓冲液封片，荧光显微镜下观察结果并摄影，用胃癌细胞株做阳性抗原对照。以Sp 2/0上清代替McAb做阴性对照。
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1.4 双快CP检查：将活检组织块插入尿素试验的平面中，3～15 min即可观察结果，组织块周围出现红色反应环者为阳性，否则为阴性。尿素试验后将原组织块放在滤纸上滴加氧化酶。3～15 min内组织块粘膜部分变黑者为阳性，否则为阴性。
2 结果
2.1 阳性标本的反应特征：经McAb免疫荧光法检查阳性的细胞大多数呈现黄绿色膜荧光，有的细胞浆内呈均匀较浅的荧光模型，多数阳性病例聚集呈团块状的细胞群染色，有的着染细胞多，有的则成区域性或巢性染色，荧光染色模型与HE染色细胞分布一致。正常上皮细胞及血液细胞无上述反应特征。
2.2 McAb在胃癌诊断与胃镜及病理学方法的比较：胃镜检查诊断为胃癌的20例病人，分别在贲门、胃体、胃窦处取材送检。病理学检查：17例诊断为不同分化期的胃腺癌，1例为肠化型CAG，1例为伴有不典型增生的胃溃疡，1例为伴有肠化型CAG的胃溃疡，McAb免疫法检测：19例显示不同程度的阳性反应，1例为阴性反应。
, 百拇医药
2.3 McAb在消化道疾病诊断中的应用结果以及与CP的相关性(见表1)。
表1 McAb诊断消化道疾病的结果及McAb与CP的关系 病例(病理法确诊)
总例数
McAb免疫法
CP检查
阳性
(%)
阳性
(%)
胃癌
17
16
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94.1
0
胃溃疡
7
3
42.9
4
57.1
肠化型CAG
27
19
70.4
4
, http://www.100md.com 18.5
单纯型CAG
20
2
10.0
6
30
胃息肉
2
0
0
胃癌术后吻合口炎
2
1
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50.0
0
CSG
31
3
9.7
10
32.3
不明诊断慢性胃病
15
7
46.6
5
, 百拇医药 33.3
正常胃粘膜
10
0
NT
食管癌
4
1
25.0
NT
正常食道粘膜
10
0
NT
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结肠癌术后(未见癌细胞)
2
0
NT
正常结肠粘膜
4
0
NT
3 讨论
本方法对胃癌的阳性检出率为94.1%，高于以前用冰冻切片免疫组化染色结果(74.2%)[1]。并且证明胃癌的阳性检出率与其起源部位、分化程度亦无明显关系。
对胃溃疡和肠化生型CAG的阳性检出率分别为42.9%和70.4%。众所周知，胃癌的病因除了与遗传、环境、饮食等因素有关外，与胃溃疡、CAG及肠上皮化生有着密切的关系，这种关系不仅在病理组织学检查中常常表现为二者同时并存，而且从长期观察追踪的病例中可以发现CAG中发生癌变者约为10%，胃溃疡为5%～10%。本文结果提示，在这些阳性反应病例中，虽然细胞形态尚无癌细胞化，但其表达的抗原成分是一种肿瘤相关抗原[2]，亦即功能改变可能先于形态改变。是否可把McAb免疫法检测阳性视为一个癌变的危险信号，进行密切监护，追踪随访，以期及早发现癌变病例。
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McAb免疫法对单纯型CAG和CSG的阳性检出率分别为10%和9.7%，与胃癌、胃溃疡及肠化生型CAG比较有非常显著的差异(P<0.01，见表1)。显然，这两种慢性胃病中个别阳性病例也是抗人胃癌细胞McAb对应抗原在细胞上表达的结果。作者认为，McAb免疫法检测阳性而病理学认为正常病例可能原因有：①因为病变灶小，取材后制片困难，造成病检假阴性。②因为McAb免疫法本身较病理形态学敏感，这种现象在McAb免疫法对胃癌术后吻合口炎以及其它慢性胃病的检出率中得到同样的显示。
McAb免疫法对正常胃、食管和结肠粘膜细胞以及炎细胞，红细胞的检查均为阴性，从而说明这种方法对胃癌以及具有胃癌细胞相关抗原的病变具有较高的特异性和灵敏性。可以作为一个免疫学指标与内窥镜以及病理学检查联合应用，进行胃癌的诊断。除诊断胃癌外，尤其对于那些内窥镜、病理学认为正常而McAb免疫法显示阳性的病例，可引起重视，防止漏诊。并且还可以作为一种查体的过筛方法。
有人报道CP在胃癌高发区检出率高于低发区，并证明它与慢性胃炎和胃溃疡的发生有关。从组织切片上可见这种杂色曲菌常覆盖在粘膜上的粘液层内和附着在胃上皮细胞表面，还证明80%的细菌聚集在细胞连接处。因作者制备的抗人胃癌细胞McAb GMG1：1D1-2相应抗原也常表达在腺上皮细胞膜及表面部位，为了解它是否与CP有反应关系，经我们探索，发现在同组病例中McAb免疫法检查的阳性结果与CP的阳性反应结果无正比关系，间接地说明两者无相关性。
, 百拇医药
作者简介：吕同德(1955—)，男，硕士，主任技师
贺建萍(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)
邢传平(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)
参考文献：
[1]吕同德，赵淑琴，张元平，等.抗人胃癌细胞单克隆抗体的反应性研究[J].癌症，1990，9(2)：97-98.
[2]于 兰，吕同德，陈新民，等.体液中TAA测定及临床应用[J].兰医学报，1996，22(增刊)：7-8.
收稿日期：1999-09-01 修回：1999-12-08, http://www.100md.com
单位：吕同德(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；于兰(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；陈新民(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；曾玮(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；贺建萍(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；邢传平(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)
关键词：胃癌；单克隆抗体；诊断
西北国防医学杂志000325 摘要：目的：研究胃癌单克隆抗体的表达及临床意义。方法：用本室制备的对胃癌有较强特异性的McAbGMG1：1D1-2对151例内窥镜活检组织压印片进行免疫组织化学检查。结果：用本法检查组织印片中的癌细胞以及具有癌细胞相关抗原的癌前病变组织，特异性强，反应灵敏，结果可靠。结论：如果与内窥镜和常规病理学检查联合应用，会提高早期癌的检出率，本文还就抗人胃癌McAb与CP的相关性进行了初步探讨。
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中图分类号：R 735.2 文献标识码：A 文章编号：1007-8622(2000)03-0223-02
The application of McAb against gastric carcinoma in clinic and the relationship with CP
Lü Tong-de,YU Lan,CHEN Xin-min,et al.
(Department of Clinical Experiments,Lanzhou General Hospital，Lanzhou Command,PLA,730050)
Abstract:Objective:To study the expression and clinical significance of McAb against gastric carcinoma.Methods:151 samples of print/press sections from gastric endoscope biopsy were examined by the monoclonal antibody GMG1∶1D1-2 which was specific to gastric carcinoma and made by author's laboratory.Results:The results showed that the method had a high specificity and sensitivity for examination and recognition of the gastric carcinoma cells and cells of precancerous lesions with related antigen of carcinomatous cells in print sections and the examination results was reliable.Conclusion:The method is very useful to promote the diagnosis rate of earlier lesion,especially combining the endoscopy and routine pathological examination.The relationship of McAb and CP was also discussed in this paper.
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Key words:Stomach carcinoma； Monoclonal antibody； Diagnosis
目前，胃癌的诊断除了靠临床表现和体检外，主要靠X线、胃镜以及病理形态学检查，但是，对于早期胃癌的诊断，胃镜和病理活检也存在不少问题。为此，本文选用自制的胃癌单克隆抗体(McAb)GMG1∶1D1-2对内窥镜活检组织压印片进行检查。并与病理组织学检查进行了比较，同时还进行了McAb与幽门弯曲菌(Camplobacter pyloridis-CP)相关性的探讨。
1 材料与方法
1.1 材料来源：
1.1.1 活检组织：取自本院胃镜活检组织共151例，其中胃癌17例，胃溃疡7例，肠上皮化生性慢性萎缩性胃炎(CAG)27例，单纯性CAG 20例，慢性浅表性胃炎(CSG)31例，胃息肉2例，胃癌术后吻合口2例，正常胃粘膜10例，没有明确诊断的慢性胃病15例。食管癌4例，正常食管粘膜10例。结肠镜活检组织共6例，其中乙状结肠癌术后1例，直肠癌术后1例，正常结肠粘膜4例。年龄18～81岁。
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1.1.2 抗人胃癌细胞McAb∶GMG1∶1D1-2是本室用胃癌细胞株免疫BaLB/c小鼠，取其脾细胞与Sp 2/0骨髓瘤细胞株融合而成的杂交瘤分泌的。经免疫组化鉴定，证明这个抗体对胃癌有较高特异性[1]。取其腹水型抗体，用0.1%BSA-PBS做1∶10稀释。
1.1.3 冻干FITC-SAM IgG荧光抗体：由二医大孔宪涛教授惠赠，应用效价为1∶20。
1.2 活检标本的处理：①取胃镜活检第一块组织做双项快速CP反应。②根据病变情况，分别取胃的贲门，窦，体，角等部位的活检组织制作组织压印复合片，丙酮4℃固定30 min备用。③将与压印片相同的活检组织送病理学检查。
1.3 间接免疫荧光染色及摄影：①压印片用95%乙醇固定10 min。②加3%BSA-PBS，37℃作用30 min。③加McAb，37℃作用45 min。④加荧光抗体，室温作用30 min(3、4两步均经PBS洗涤、吹干)。甘油缓冲液封片，荧光显微镜下观察结果并摄影，用胃癌细胞株做阳性抗原对照。以Sp 2/0上清代替McAb做阴性对照。
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1.4 双快CP检查：将活检组织块插入尿素试验的平面中，3～15 min即可观察结果，组织块周围出现红色反应环者为阳性，否则为阴性。尿素试验后将原组织块放在滤纸上滴加氧化酶。3～15 min内组织块粘膜部分变黑者为阳性，否则为阴性。
2 结果
2.1 阳性标本的反应特征：经McAb免疫荧光法检查阳性的细胞大多数呈现黄绿色膜荧光，有的细胞浆内呈均匀较浅的荧光模型，多数阳性病例聚集呈团块状的细胞群染色，有的着染细胞多，有的则成区域性或巢性染色，荧光染色模型与HE染色细胞分布一致。正常上皮细胞及血液细胞无上述反应特征。
2.2 McAb在胃癌诊断与胃镜及病理学方法的比较：胃镜检查诊断为胃癌的20例病人，分别在贲门、胃体、胃窦处取材送检。病理学检查：17例诊断为不同分化期的胃腺癌，1例为肠化型CAG，1例为伴有不典型增生的胃溃疡，1例为伴有肠化型CAG的胃溃疡，McAb免疫法检测：19例显示不同程度的阳性反应，1例为阴性反应。
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2.3 McAb在消化道疾病诊断中的应用结果以及与CP的相关性(见表1)。
表1 McAb诊断消化道疾病的结果及McAb与CP的关系 病例(病理法确诊)
总例数
McAb免疫法
CP检查
阳性
(%)
阳性
(%)
胃癌
17
16
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94.1
0
胃溃疡
7
3
42.9
4
57.1
肠化型CAG
27
19
70.4
4
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单纯型CAG
20
2
10.0
6
30
胃息肉
2
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0
胃癌术后吻合口炎
2
1
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0
CSG
31
3
9.7
10
32.3
不明诊断慢性胃病
15
7
46.6
5
, 百拇医药 33.3
正常胃粘膜
10
0
NT
食管癌
4
1
25.0
NT
正常食道粘膜
10
0
NT
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结肠癌术后(未见癌细胞)
2
0
NT
正常结肠粘膜
4
0
NT
3 讨论
本方法对胃癌的阳性检出率为94.1%，高于以前用冰冻切片免疫组化染色结果(74.2%)[1]。并且证明胃癌的阳性检出率与其起源部位、分化程度亦无明显关系。
对胃溃疡和肠化生型CAG的阳性检出率分别为42.9%和70.4%。众所周知，胃癌的病因除了与遗传、环境、饮食等因素有关外，与胃溃疡、CAG及肠上皮化生有着密切的关系，这种关系不仅在病理组织学检查中常常表现为二者同时并存，而且从长期观察追踪的病例中可以发现CAG中发生癌变者约为10%，胃溃疡为5%～10%。本文结果提示，在这些阳性反应病例中，虽然细胞形态尚无癌细胞化，但其表达的抗原成分是一种肿瘤相关抗原[2]，亦即功能改变可能先于形态改变。是否可把McAb免疫法检测阳性视为一个癌变的危险信号，进行密切监护，追踪随访，以期及早发现癌变病例。
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McAb免疫法对单纯型CAG和CSG的阳性检出率分别为10%和9.7%，与胃癌、胃溃疡及肠化生型CAG比较有非常显著的差异(P<0.01，见表1)。显然，这两种慢性胃病中个别阳性病例也是抗人胃癌细胞McAb对应抗原在细胞上表达的结果。作者认为，McAb免疫法检测阳性而病理学认为正常病例可能原因有：①因为病变灶小，取材后制片困难，造成病检假阴性。②因为McAb免疫法本身较病理形态学敏感，这种现象在McAb免疫法对胃癌术后吻合口炎以及其它慢性胃病的检出率中得到同样的显示。
McAb免疫法对正常胃、食管和结肠粘膜细胞以及炎细胞，红细胞的检查均为阴性，从而说明这种方法对胃癌以及具有胃癌细胞相关抗原的病变具有较高的特异性和灵敏性。可以作为一个免疫学指标与内窥镜以及病理学检查联合应用，进行胃癌的诊断。除诊断胃癌外，尤其对于那些内窥镜、病理学认为正常而McAb免疫法显示阳性的病例，可引起重视，防止漏诊。并且还可以作为一种查体的过筛方法。
有人报道CP在胃癌高发区检出率高于低发区，并证明它与慢性胃炎和胃溃疡的发生有关。从组织切片上可见这种杂色曲菌常覆盖在粘膜上的粘液层内和附着在胃上皮细胞表面，还证明80%的细菌聚集在细胞连接处。因作者制备的抗人胃癌细胞McAb GMG1：1D1-2相应抗原也常表达在腺上皮细胞膜及表面部位，为了解它是否与CP有反应关系，经我们探索，发现在同组病例中McAb免疫法检查的阳性结果与CP的阳性反应结果无正比关系，间接地说明两者无相关性。
, 百拇医药
作者简介：吕同德(1955—)，男，硕士，主任技师
贺建萍(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)
邢传平(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)
参考文献：
[1]吕同德，赵淑琴，张元平，等.抗人胃癌细胞单克隆抗体的反应性研究[J].癌症，1990，9(2)：97-98.
[2]于 兰，吕同德，陈新民，等.体液中TAA测定及临床应用[J].兰医学报，1996，22(增刊)：7-8.
收稿日期：1999-09-01 修回：1999-12-08, http://www.100md.com