输血传播病毒(TTV)感染的肝病患者36例分析
作者：谭欣诚 王云 张希成 徐群丽 李小平 王乐农
单位：谭欣诚(兰州军区乌鲁木齐总医院肝病中心，新疆 乌鲁木齐 830000)；王云(兰州军区乌鲁木齐总医院肝病中心，新疆 乌鲁木齐 830000)；张希成(兰州军区乌鲁木齐总医院肝病中心，新疆 乌鲁木齐 830000)；徐群丽(兰州军区乌鲁木齐总医院肝病中心，新疆 乌鲁木齐 830000)；李小平(兰州军区乌鲁木齐总医院肝病中心，新疆 乌鲁木齐 830000)
关键词：病毒性肝炎；输血传播病毒；临床特征
西北国防医学杂志000306 摘要：目的：观察TTV(Transfusion transmitted virus,TTV)阳性肝病患者的临床特征。方法：用巢式PCR法检测血清TTV DNA，同时观察血清生化指标和肝组织学的变化。结果：TTV感染者的血清学模式以HBV、HCV、HAV、HEV混合感染为主，占61.1%(22/36)，临床表现以乏力、纳差为特征，TBL、ALT变化不明显；而TTV单独感染者为38.9%(14/36)，临床特征与急性黄疸性肝炎相似。结论：TTV可与各型已知肝炎病毒混合感染，可呈隐匿性发病。
, 百拇医药
中图分类号：R 512.6 文献标识码：A 文章编号：1007-8622(2000)03-0178-03
Analyses of 36 patients of liver disease with TTV infection
TAN Xin-cheng,WANG Yun,ZHANG Xi-cheng,et al
(Center of Liver Diseases,Urumqi General Hospital,Lanzhou Command,PLA,830000)
Abstract:Objective:To investigate the clinical features of patients with transfusion transmitted virus(TTV)positive hepatitis.Methods:To examine TTV DNA in serum sample by nested PCR in 36 patients with liver disease.Results:TTV positive patients were showed dominantly mixed infection of HBV,HCV,HAV and HEV,and counted up to 61.1%(22/36).The main clinical symptom was weak and poor appetite but the changes of TBL and ALT were not remarkably.38.9%(14/36) of patients were infected by single TTV,and their clinical appearances were similar with acute jaundice hepatitis.Conclusion:TTV may be infected mixing with various hepatitis viruses or may be a single infection.The clinical symptoms may be serious or cryptic.
, 百拇医药
Key words:Viral hepatitis； Transfusion transmitted virus(TTV)； Clinical feature
在临床诊断治疗各型病毒性肝炎和肝硬变、肝癌病例中，有相当一部分患者不能用现有的实验室诊断方法进行病原学分型，因此可能还存在尚未发现的致人类病毒性肝炎的其它病毒[1，2]。输血传播病毒(TTV)的发现，在全球引起广泛关注，国内学者周伯平等[3，4]率先报道了TTV的检测方法、克隆和测序，但对TTV感染的肝病患者的临床研究报道甚少。本文根据自行设计的方法检测了临床各类肝病患者168例，对其中的36例TTV阳性肝病患者的临床特征和血清生化指标进行总结，现报道如下。
1 材料与方法：
1.1 材料：从168例肝病患者中检出TTV阳性者36例，男24例，女12例；年龄17～58岁。其中单一TTV阳性者14例，混合各型肝炎病毒感染者22例。诊断方法按1995年5月北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议讨论修订的病毒性肝炎防治方案(试行)。
, http://www.100md.com
1.2 方法
1.2.1 血清病原学检测：HCV RNA、HGV RNA，试剂购于北京医科大学肝炎试剂中心，抗-HAV-IgM、HBVM、抗-HCV、抗-HEV-IgM/IgG购于上海科华实业公司，抗-CMV-IgM、抗-EBV-IgM购于深圳晶美生物工程公司，抗-HGV购于北京302医院科卫试剂厂。
1.2.2 TTV DNA检测：采用巢式PCR法，引物设计参照日本株(AB008394)全基因序列，由赛百盛公司合成。其中：
外引物P1 5′-ACACCAGCAGCATATACAGAC-3′，P2 5′-CTGACTGTGCTAAAGCCGCTC-3′，内引物P3 5′-GACAGAGGAGGCGGCAACATG-3′，P4 5′-CTTTACTACTACCTCCTGGCA-3′。
, 百拇医药
1.2.3 TTV DNA提取用蛋白酶K法，扩增条件为30 μl体系，含内、外引物各0.1 μmol.L-1、10 mmol.L-1 dNTPs 0.6 μl、10×buffer 3μl， 25 mmol.L-1 MgCl23 μl，Taq酶1 U，94℃ 180 s，94℃ 30 s，56℃ 30 s，72℃ 40 s，35个循环，最后72℃延伸5 min。结果判定参照常规的琼脂糖凝胶电泳、出现278 bp DNA扩增带者为阳性。
1.2.4 TTV DNA PCR 产物分子克隆测序与日本株(AB008394)同源性比较：任选TTV DNA PCR阳性产物，纯化后直接与PGEM-T连接，转化Blue-XL宿主菌，挑取白色菌落用PCR鉴定，对阳性菌落按种培养，提取质粒DNA，通用引物T7 ABI310型全自动测定仪测序。
, 百拇医药
1.2.5 肝功能检测：采用全自动生化分析仪检测TBL、ALT、AST、A/G，同时测定凝血酶原时间(PT)。
1.2.6 肝组织学检查由B超引导下行肝脏穿刺术获取标本，病理组织学检查由本院病理科完成。
2 结果
2.1 本组共计36例TTV阳性病例，临床确诊均有不同程度的肝病史，其中急性肝炎17例，慢性肝炎12例，肝硬变2例，肝癌5例，混合感染者22例，单独TTV阳性者14例，见表1。14例单独TTV感染者中10例以无明显诱因，乏力、纳差、黄疸及ALT升高入院，其临床特征与急性黄疸性肝炎极相似；4例因无明显诱因，以ALT反复增高为特征入院。混合感染组中以慢性肝炎、肝硬变、肝癌者居多，ALT、TBL升高不明显或在正常范围内，见表2。
表1 TTV阳性肝病患者的临床类型与临床诊断的关系 感染类型
, http://www.100md.com
例数
急性肝炎
慢性肝炎
肝硬变
肝癌
单一TTV+
14
6
5
1
2
TTV+HBV
10
, http://www.100md.com 4
3
1
2
TTV+HCV
5
2
2
0
1
TTV+HAV
2
2
0
, http://www.100md.com
0
0
TTV+HEV
2
1
1
0
0
TTV+HGV
2
1
1
0
0
, http://www.100md.com
TTV+HCV+HBV
1
1
0
0
0
合 计
36
17
12
2
5
表2 单一TTV阳性与混合感染者血清生化指标 血清生化指标
, 百拇医药
TTV单独阳性(14例)
混合感染者(22例)
P
例数
±s
例数±s
TBL>17.1 μmol.L-1
10
270.93±368.90
18
, http://www.100md.com
81.19±39.87
>0.05
ALT>40 IU.L-1
14
156.96±131.98
16
67.24±45.12
>0.05
AST>40 IU.L-1
8
112.00±71.36
, 百拇医药
14
61.64±22.31
>0.05
A/G<1
1
0.95±0.01±
5
0.98±0.12
>0.05
PT>13 s
7
16.42±1.27
14
, 百拇医药
15.50±0.85
>0.05
注：正常值TBL7～17.1 μmol.L-1，ALT、AST均<40 IU.L-1，PT<14 s
2.2 TTV PCR产物测序结果：新疆地区TTV阳性株与日本株二对应的核苷酸位置进行比较同源性为94.6%，见图1。
图1 TTV新疆分离株(EC026)部分核苷酸序列与日本株(AB008394)核苷酸序列的比较，1.AB008394 2.TTV EC026
2.3 TTV单独阳性肝病患者临床和病理诊断关系：对20例肝病患者行肝组织学检查，其中以单独TTV阳性者10例之病理诊断为急性肝炎2例(肝细胞组织学示肝细胞肿胀、点状坏死，炎细胞浸润明显)；慢性肝炎(中度)3例(光镜下显示炎细胞浸润并破坏界板、形成碎屑样坏死)；早期肝硬化1例(肝小叶和汇管区有轻度的纤维组织增生和炎细胞浸润)；亚急性肝坏死2例(肝小叶显示有大片肝组织坏死，肝细胞消失)，脂肪肝及肝癌各1例。
, 百拇医药
3 讨论
参照文献[5]报道的TTV全基因序列，设计两对引物，建立了TTV巢式PCR检测法，随机选择TTV阳性结果，进行分子克隆和测序，与日本N22的部分基因序列相对应的核苷酸比较，二者间的同源性为92.6%。表明新疆地区的肝病患者中存在TTV的感染。
TTV的发现医学领域反应强烈，TTV是否致病已成为当前关注的焦点。本文主要对TTV阳性病例的临床特征和主要血清生化指标进行观察，TTV感染的临床模式有单独感染和混合感染之分。以TTV与HBV、HCV、HAV、HEV、HGV混合感染为主，占61.1%(22/36)。其中以TTV+HBV、TTV+HCV较常见。TTV混合感染者的临床特征，主要表现为乏力、纳差、腹胀、轻度的TBL、ALT增高或在正常范围内，且在慢性肝病患者中较常见。TTV单独感染者占38.9%(14/36)，临床表现多以无明显诱因的乏力、纳差、尿黄为主诉入院，血清生化指标TBL、ALT呈中、重度升高，与急性黄疸性肝炎的临床特征相似。
, http://www.100md.com
TTV的感染与输血、血液制品的关系各地报道不一，据我们初步观察本组TTV阳性中有33.3 %(12/36)有输血、血液制品病史，而有66.7%(24/36)的TTV阳性与此无关，说明TTV存在着输血以外的传播途径。我们在168名新疆地区的正常人(汉族、维吾尔族、蒙古族)中检出22例TTV DNA阳性，阳性率为13.1%。还对14例TTV单独阳性肝病患者的治疗过程进行观察，治疗措施与急性黄疸性肝炎治疗原则相似，抗病毒药、干扰素对其有明显抑制作用。根据临床特征和肝组织病理学改变的初步观察，TTV阳性伴ALT、TBL反复增高者，其慢性化程度也较大。TTV与HBV、HCV等病毒性肝炎混合感染者，估计可能相互加重病情使之迁延。TTV的流行病学及临床意义等问题还有待进一步探索和阐明[6]，由于观察病例少，尚待积累资料，进一步深入观察。
作者简介：谭欣诚(1962—)，男，主管技师
参考文献：
, 百拇医药
[1]Buti M,Jardi R,Rodriguez-Frais F,et al.Etiology of acute poradic hepatitis in Spain:The role of hepatitis C and E viruses[J].J Hepatol,1994,20:589-592.
[2]Kunadask,Patel VM,Hollinger B,et al.Non-A,non-B fulminant hepatitis is also non-E and non-C[J].Am J Gastroenterol,1994,89:57-61.
[3]周伯平，马为民，孙 彤，等.TTV在非甲-庚型肝炎患者的检测、克隆及测序[J].中华传染病杂志，1998，3(16)：131-133.
[4]魏 来，陶其敏，潘修成，等.TTV病毒核酸的检测[J].中华医学检验杂志，1998，5(21)：275-277.
[5]Okamoto H,Nishizawa T,Kato N,et al.Molecular cloning and charactreization of a novel DNA virus(TTV)associated with posttransfusion hepatitis of unknown etioligy[J].Hepatol Res,1998,10:1-16.
[6]凌斌华.输血传播病毒(TTV)研究近况[J].国外医学：流行病学传染病学分册，1998，25(3)：97-99.
收稿日期：1999-11-16, 百拇医药
单位：谭欣诚(兰州军区乌鲁木齐总医院肝病中心，新疆 乌鲁木齐 830000)；王云(兰州军区乌鲁木齐总医院肝病中心，新疆 乌鲁木齐 830000)；张希成(兰州军区乌鲁木齐总医院肝病中心，新疆 乌鲁木齐 830000)；徐群丽(兰州军区乌鲁木齐总医院肝病中心，新疆 乌鲁木齐 830000)；李小平(兰州军区乌鲁木齐总医院肝病中心，新疆 乌鲁木齐 830000)
关键词：病毒性肝炎；输血传播病毒；临床特征
西北国防医学杂志000306 摘要：目的：观察TTV(Transfusion transmitted virus,TTV)阳性肝病患者的临床特征。方法：用巢式PCR法检测血清TTV DNA，同时观察血清生化指标和肝组织学的变化。结果：TTV感染者的血清学模式以HBV、HCV、HAV、HEV混合感染为主，占61.1%(22/36)，临床表现以乏力、纳差为特征，TBL、ALT变化不明显；而TTV单独感染者为38.9%(14/36)，临床特征与急性黄疸性肝炎相似。结论：TTV可与各型已知肝炎病毒混合感染，可呈隐匿性发病。
, 百拇医药
中图分类号：R 512.6 文献标识码：A 文章编号：1007-8622(2000)03-0178-03
Analyses of 36 patients of liver disease with TTV infection
TAN Xin-cheng,WANG Yun,ZHANG Xi-cheng,et al
(Center of Liver Diseases,Urumqi General Hospital,Lanzhou Command,PLA,830000)
Abstract:Objective:To investigate the clinical features of patients with transfusion transmitted virus(TTV)positive hepatitis.Methods:To examine TTV DNA in serum sample by nested PCR in 36 patients with liver disease.Results:TTV positive patients were showed dominantly mixed infection of HBV,HCV,HAV and HEV,and counted up to 61.1%(22/36).The main clinical symptom was weak and poor appetite but the changes of TBL and ALT were not remarkably.38.9%(14/36) of patients were infected by single TTV,and their clinical appearances were similar with acute jaundice hepatitis.Conclusion:TTV may be infected mixing with various hepatitis viruses or may be a single infection.The clinical symptoms may be serious or cryptic.
, 百拇医药
Key words:Viral hepatitis； Transfusion transmitted virus(TTV)； Clinical feature
在临床诊断治疗各型病毒性肝炎和肝硬变、肝癌病例中，有相当一部分患者不能用现有的实验室诊断方法进行病原学分型，因此可能还存在尚未发现的致人类病毒性肝炎的其它病毒[1，2]。输血传播病毒(TTV)的发现，在全球引起广泛关注，国内学者周伯平等[3，4]率先报道了TTV的检测方法、克隆和测序，但对TTV感染的肝病患者的临床研究报道甚少。本文根据自行设计的方法检测了临床各类肝病患者168例，对其中的36例TTV阳性肝病患者的临床特征和血清生化指标进行总结，现报道如下。
1 材料与方法：
1.1 材料：从168例肝病患者中检出TTV阳性者36例，男24例，女12例；年龄17～58岁。其中单一TTV阳性者14例，混合各型肝炎病毒感染者22例。诊断方法按1995年5月北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议讨论修订的病毒性肝炎防治方案(试行)。
, http://www.100md.com
1.2 方法
1.2.1 血清病原学检测：HCV RNA、HGV RNA，试剂购于北京医科大学肝炎试剂中心，抗-HAV-IgM、HBVM、抗-HCV、抗-HEV-IgM/IgG购于上海科华实业公司，抗-CMV-IgM、抗-EBV-IgM购于深圳晶美生物工程公司，抗-HGV购于北京302医院科卫试剂厂。
1.2.2 TTV DNA检测：采用巢式PCR法，引物设计参照日本株(AB008394)全基因序列，由赛百盛公司合成。其中：
外引物P1 5′-ACACCAGCAGCATATACAGAC-3′，P2 5′-CTGACTGTGCTAAAGCCGCTC-3′，内引物P3 5′-GACAGAGGAGGCGGCAACATG-3′，P4 5′-CTTTACTACTACCTCCTGGCA-3′。
, 百拇医药
1.2.3 TTV DNA提取用蛋白酶K法，扩增条件为30 μl体系，含内、外引物各0.1 μmol.L-1、10 mmol.L-1 dNTPs 0.6 μl、10×buffer 3μl， 25 mmol.L-1 MgCl23 μl，Taq酶1 U，94℃ 180 s，94℃ 30 s，56℃ 30 s，72℃ 40 s，35个循环，最后72℃延伸5 min。结果判定参照常规的琼脂糖凝胶电泳、出现278 bp DNA扩增带者为阳性。
1.2.4 TTV DNA PCR 产物分子克隆测序与日本株(AB008394)同源性比较：任选TTV DNA PCR阳性产物，纯化后直接与PGEM-T连接，转化Blue-XL宿主菌，挑取白色菌落用PCR鉴定，对阳性菌落按种培养，提取质粒DNA，通用引物T7 ABI310型全自动测定仪测序。
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1.2.5 肝功能检测：采用全自动生化分析仪检测TBL、ALT、AST、A/G，同时测定凝血酶原时间(PT)。
1.2.6 肝组织学检查由B超引导下行肝脏穿刺术获取标本，病理组织学检查由本院病理科完成。
2 结果
2.1 本组共计36例TTV阳性病例，临床确诊均有不同程度的肝病史，其中急性肝炎17例，慢性肝炎12例，肝硬变2例，肝癌5例，混合感染者22例，单独TTV阳性者14例，见表1。14例单独TTV感染者中10例以无明显诱因，乏力、纳差、黄疸及ALT升高入院，其临床特征与急性黄疸性肝炎极相似；4例因无明显诱因，以ALT反复增高为特征入院。混合感染组中以慢性肝炎、肝硬变、肝癌者居多，ALT、TBL升高不明显或在正常范围内，见表2。
表1 TTV阳性肝病患者的临床类型与临床诊断的关系 感染类型
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例数
急性肝炎
慢性肝炎
肝硬变
肝癌
单一TTV+
14
6
5
1
2
TTV+HBV
10
, http://www.100md.com 4
3
1
2
TTV+HCV
5
2
2
0
1
TTV+HAV
2
2
0
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0
0
TTV+HEV
2
1
1
0
0
TTV+HGV
2
1
1
0
0
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TTV+HCV+HBV
1
1
0
0
0
合 计
36
17
12
2
5
表2 单一TTV阳性与混合感染者血清生化指标 血清生化指标
, 百拇医药
TTV单独阳性(14例)
混合感染者(22例)
P
例数
±s例数
±sTBL>17.1 μmol.L-1
10
270.93±368.90
18
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81.19±39.87
>0.05
ALT>40 IU.L-1
14
156.96±131.98
16
67.24±45.12
>0.05
AST>40 IU.L-1
8
112.00±71.36
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14
61.64±22.31
>0.05
A/G<1
1
0.95±0.01±
5
0.98±0.12
>0.05
PT>13 s
7
16.42±1.27
14
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15.50±0.85
>0.05
注：正常值TBL7～17.1 μmol.L-1，ALT、AST均<40 IU.L-1，PT<14 s
2.2 TTV PCR产物测序结果：新疆地区TTV阳性株与日本株二对应的核苷酸位置进行比较同源性为94.6%，见图1。
图1 TTV新疆分离株(EC026)部分核苷酸序列与日本株(AB008394)核苷酸序列的比较，1.AB008394 2.TTV EC026
2.3 TTV单独阳性肝病患者临床和病理诊断关系：对20例肝病患者行肝组织学检查，其中以单独TTV阳性者10例之病理诊断为急性肝炎2例(肝细胞组织学示肝细胞肿胀、点状坏死，炎细胞浸润明显)；慢性肝炎(中度)3例(光镜下显示炎细胞浸润并破坏界板、形成碎屑样坏死)；早期肝硬化1例(肝小叶和汇管区有轻度的纤维组织增生和炎细胞浸润)；亚急性肝坏死2例(肝小叶显示有大片肝组织坏死，肝细胞消失)，脂肪肝及肝癌各1例。
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3 讨论
参照文献[5]报道的TTV全基因序列，设计两对引物，建立了TTV巢式PCR检测法，随机选择TTV阳性结果，进行分子克隆和测序，与日本N22的部分基因序列相对应的核苷酸比较，二者间的同源性为92.6%。表明新疆地区的肝病患者中存在TTV的感染。
TTV的发现医学领域反应强烈，TTV是否致病已成为当前关注的焦点。本文主要对TTV阳性病例的临床特征和主要血清生化指标进行观察，TTV感染的临床模式有单独感染和混合感染之分。以TTV与HBV、HCV、HAV、HEV、HGV混合感染为主，占61.1%(22/36)。其中以TTV+HBV、TTV+HCV较常见。TTV混合感染者的临床特征，主要表现为乏力、纳差、腹胀、轻度的TBL、ALT增高或在正常范围内，且在慢性肝病患者中较常见。TTV单独感染者占38.9%(14/36)，临床表现多以无明显诱因的乏力、纳差、尿黄为主诉入院，血清生化指标TBL、ALT呈中、重度升高，与急性黄疸性肝炎的临床特征相似。
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TTV的感染与输血、血液制品的关系各地报道不一，据我们初步观察本组TTV阳性中有33.3 %(12/36)有输血、血液制品病史，而有66.7%(24/36)的TTV阳性与此无关，说明TTV存在着输血以外的传播途径。我们在168名新疆地区的正常人(汉族、维吾尔族、蒙古族)中检出22例TTV DNA阳性，阳性率为13.1%。还对14例TTV单独阳性肝病患者的治疗过程进行观察，治疗措施与急性黄疸性肝炎治疗原则相似，抗病毒药、干扰素对其有明显抑制作用。根据临床特征和肝组织病理学改变的初步观察，TTV阳性伴ALT、TBL反复增高者，其慢性化程度也较大。TTV与HBV、HCV等病毒性肝炎混合感染者，估计可能相互加重病情使之迁延。TTV的流行病学及临床意义等问题还有待进一步探索和阐明[6]，由于观察病例少，尚待积累资料，进一步深入观察。
作者简介：谭欣诚(1962—)，男，主管技师
参考文献：
, 百拇医药
[1]Buti M,Jardi R,Rodriguez-Frais F,et al.Etiology of acute poradic hepatitis in Spain:The role of hepatitis C and E viruses[J].J Hepatol,1994,20:589-592.
[2]Kunadask,Patel VM,Hollinger B,et al.Non-A,non-B fulminant hepatitis is also non-E and non-C[J].Am J Gastroenterol,1994,89:57-61.
[3]周伯平，马为民，孙 彤，等.TTV在非甲-庚型肝炎患者的检测、克隆及测序[J].中华传染病杂志，1998，3(16)：131-133.
[4]魏 来，陶其敏，潘修成，等.TTV病毒核酸的检测[J].中华医学检验杂志，1998，5(21)：275-277.
[5]Okamoto H,Nishizawa T,Kato N,et al.Molecular cloning and charactreization of a novel DNA virus(TTV)associated with posttransfusion hepatitis of unknown etioligy[J].Hepatol Res,1998,10:1-16.
[6]凌斌华.输血传播病毒(TTV)研究近况[J].国外医学：流行病学传染病学分册，1998，25(3)：97-99.
收稿日期：1999-11-16, 百拇医药