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编号:10276528
荧光法对胸水肿瘤细胞的鉴别诊断
http://www.100md.com 《西北国防医学杂志》 2000年第4期
     作者:苏明权 丁振若 于文彬 孙怡群 马越云 彭道荣 张建芳

    单位:苏明权(第四军医大学西京医院检验科,陕西 西安 710033);丁振若(第四军医大学西京医院检验科,陕西 西安 710033);于文彬(第四军医大学西京医院检验科,陕西 西安 710033);孙怡群(第四军医大学西京医院检验科,陕西 西安 710033);马越云(第四军医大学西京医院检验科,陕西 西安 710033)

    关键词:实验室诊断;荧光法;肿瘤细胞;胸水

    西北国防医学杂志000424摘要:目的:探讨荧光法检测胸水肿瘤细胞对恶性及良性 肿瘤 的鉴别诊断。方法:采用吖啶橙荧光法(AOF)、免疫荧光 法(IGF)、血卟啉荧光法(HOF)检测胸水肿瘤细胞。结果: 11例乳腺癌中三种方法的阳性率均为100%;42例肺癌阳性率分别为95.2%、95.2%、92.8 %;68例肺结核阳性检出率分别为4.41%、2.94%、1.47%;18例肺部感染阳性检出率分别 为1.11%、0.55%、0;5例自发性液气胸和5例慢性肺源性心脏病均为阴性。 结论:三种荧光法均可用于胸水肿瘤细胞的鉴别诊断。
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    中图分类号:R 446.69 文献标识码 :A 文章编号:1007-8622(2000)04-0306-02

    Differentiated diagnosis of tumor cells in thoracic liquid by fluo rescent method

    SU Ming-quan,DING Zhen-ruo,YU Wen-bin,et al.

    (Clinical Lab o f Xijing Hospital,The 4th Military Medical University,PLA,710032,China)

    Abstract:Objective:Discuss the role of fluorescence methods in differentiate di agnosis of carcinoid and malignant tumor cells in thoracic liquid. Methods:Tumor c ells in thoracic liquid of cancer patients diagnosed by pathology were detected by immunoglobulin G fluorescence(IGF),hematoporphyrin fluorescence(HOF)and acri dine orange fluorescence(AOF)methods.Results:In 11 t horacic ciquid samples of brea st carcinoma,the positive rates of these three methods were all 100%;The postit ve rates of AOF,IGF,HOF are 95.2%,95.2%,and92.8%respectively in 42 lung carci noma samples;In 68 thoracic liquid samples of pulmonary tuberculosis,the positiv e rates were 4.41%、2.94%、1.47%;and in about 18 pneumonia samples,they were 1.11%,0.55 %、0 respectively;All they were negative in 5 spontaneous fluid pneumothorax an d 5 chronic pulmony cardiac disease samples.Conclusion:The three fluorescence methods have high specificity for tumour cells.
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    Key words:Laboratory diagnosis; F luorescence; Tumor cells; Thoracic liquid

    寻找和改进胸水肿瘤细胞形态学的检查方法,对提高肿瘤的诊断和鉴别诊断十分必要。 我们以三种荧光物质为着色剂,建立荧光法检测胸水中的肿瘤细胞,获得较满意的结果。

    1 材料和方法

    1.1 研究对象:肺癌42例,乳 腺癌11例,弥漫性非何杰金氏淋巴瘤1例,肺结核68例, 肺部感染18例,自发性液气胸5例,慢性肺源性心脏病5例,共150例。其中恶性肿瘤54例, 非肿瘤96例,均经临床病理学及放射诊断确诊。

    1.2 仪器和试剂:多功能荧光 显微镜为美国AO-120型,血卟啉由上海第二军医大学药 物研究系提供,吖啶橙为Fluka公司产品;羊抗人IgG荧光素由华美生物工程公司提供。
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    1.3 免疫荧光法:自胸腔穿刺 取胸水10 ml,3 000 r.min-1离心15 min弃上清,收集胸水 沉淀细胞,用0.05 mol.L-1pH 7.4 PBS洗2次,收集沉集细胞涂片,自然干燥,95 %乙醇 固定5~10 min;再用上述PBS平衡30 s,加1:32稀释的异硫氰荧光素标记羊抗人IgG荧光抗 体0.2 ml,置湿盒内37℃恒温孵育30 min,用0.15 mol.L-1pH 7.4 PBS冲洗2次, 再用0.01 mol.L-1pH 7.4 PBS冲洗1次,待干后缓冲甘油封片,荧光显微镜下 观察结果,出现绿色或苹果绿色膜荧光为阳性。

    1.4 吖啶橙荧光法:细胞采集 、分离及涂片方法均同免疫荧光法,平衡30 s后加0.01% 吖啶橙缓冲染色液0.2 ml,置湿盒内37℃恒温孵育5 min,用0.15 mol.L-1pH7 .4PBS冲洗2次,再用0.1 mol.L-1氯化钙分色1 min,待干后缓冲甘油封片,荧光显 微镜下观察结果。除观察恶性肿瘤细胞形态外,核仁和胞浆呈现桔红色或火焰红色为阳性。
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    1.5 血卟啉荧光法:细胞采集 方法同前,收集沉集细胞1 ml,加细胞培养液3 ml,同时 加入30 μg血卟啉光敏剂,充分混匀,置湿盒内37℃恒温孵育18 h,生理盐水洗涤3次, 取沉淀荧光显微镜下观察结果,细胞浆呈现鲜桔红色为阳性。

    2 结果

    2.1 采用免疫荧光法、血卟啉荧光法、吖啶橙荧光法对15 0例胸水肿瘤细胞的阳性检出结果,见表1。

    表1 三种荧光法对胸水肿瘤细胞的检测结果

    总例数(n)

    AOF阳性(%)

    IGF阳性(%)

    HOF阳性(%)
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    肺癌

    42

    40(95.2)

    40(95.2)

    39(92.8)

    乳腺癌

    11

    11(100)

    11(100)

    11(100)

    弥漫型非

    何杰金氏淋巴瘤

    1
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    1(100)

    0

    0

    肺结核

    68

    3(4.41)

    3(2.94)

    1(1.47)

    肺部感染

    18

    2(1.11)

    1(0.55)

    0
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    自发性液气胸

    5

    0

    0

    0

    慢性肺源性心脏病

    5

    0

    0

    0

    3 讨论

    荧光法检测胸水肿瘤细胞[1],是由于肿瘤细胞膜上具有免疫球蛋白受体或膜抗原 ,可与标记的荧光抗体发生抗原抗体结合,出现免疫学反应,在一定波长的荧光激发下形成 一 种可见光。肿瘤细胞膜上含有比正常细胞膜较丰富的Ig膜受体,当与荧光素物质结合后形成 明显的苹果绿色荧光膜荧光环,在荧光亮度上比正常细胞膜亮得多,再结合细胞形态即可将 两者区别开来。我们采用荧光染色对54例恶性肿瘤患者胸水的阳性检出率分别为:肺癌92 .8 %,乳腺癌100%,弥漫型非何杰金氏淋巴瘤0;而在非肿瘤患者胸水中的阳性检出率为: 肺结核1.47%,肺部感染、自发性液气胸和慢性肺源性心脏病均为0。
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    吖啶橙是一种具有异染性染料[2],以插入方式与双螺旋的DNA分子相结合,染料中 的依地酸可将RNA分子分解成为单链,并借助静电吸附作用与单链RNA分子相连接,逐渐形成 堆积。由于DNA与RNA对吖啶橙的吸附方式不同,它所发射的荧光也不相同。肿瘤细胞在胸水 中生长迅速,在核酸代谢上特别是DNA含量明显高于正常细胞的核酸代谢,此特性早于形态 学的改变。因此,根据肿瘤细胞DNA含量异常增高做为鉴定肿瘤细胞的重要标记。由于胸水 中 肿瘤细胞核酸含量的异常增高,经吖啶橙染色后发射出桔红色或火焰红色的高亮度荧光,再 借助肿瘤细胞的特殊形态结构,在荧光显微镜下,极易辨别恶性肿瘤细胞的形态特征。本观 测结果也同样显示此特征,54例恶性肿瘤患者胸水的阳性检出率分别为:肺癌95.2%,乳 腺癌100%,弥漫型非何杰金氏淋巴瘤100%;而在非肿瘤患者胸水中的阳性检出率为:肺结 核4.41%,肺部感染1.11%。我们认为:AOF检测胸水中的肿瘤细胞是一种简单、准确、 易于掌握、诊断率高的方法,对肿瘤的鉴别诊断具有一定的应用价值。
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    血卟啉是一种光敏剂[3],由于恶性肿瘤细胞真身在发育过程中缺乏产生血卟啉及 其前身物的血红蛋白酶,当在体外给予一定量的血卟啉类物质后,由于正常细胞与恶性肿瘤 细胞摄取血卟啉后正常细胞排泄快,而肿瘤细胞排泄慢,再加之肿瘤细胞与血卟啉具有特异 亲 合性的特征,我们采用血卟啉光敏剂荧光着色对胸水中的肿瘤细胞进行观察。在54例恶性肿 瘤患者胸水的阳性检出率分别为:肺癌95.2%,乳腺癌100%;而在非肿瘤患者胸水中 的阳 性检出率为:肺结核2.94%,肺部感染0.55%。结果显示:血卟啉荧光法观察胸水中的 肿瘤细胞,具有较强的特异性和敏感性。

    根据以上结果,应用免疫荧光法、血卟啉荧光法、吖啶橙荧光法观察胸水中的肿瘤细胞,从 方法学角度看,吖啶橙针对的是肿瘤细胞中的核酸物质,在荧光显微镜下极易识别,色彩鲜 艳并具有恶性肿瘤细胞形态的特征,这是AOF阳性率高的主要原因。血卟啉荧光方法,比 较稳定,形成完整,荧光清晰,易于鉴别。免疫荧光法,针对的是细胞膜抗原,当抗原抗体 结合后,在细胞膜上形成一种荧光环,加上肿瘤细胞的特殊形态,即可与正常细胞区别,从 而对胸水中的肿瘤细胞作出精确的诊断。
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    作者简介:苏明权(1959-),男,本科,主管技师

    彭道荣(第四军医大学西京医院检验科,陕西 西安 710033)

    张建芳(第四军医大学西京医院检验科,陕西 西安 710033)

    参考文献:

    [1]周道银,张乐之,主编.胸腹心包腔积液细胞诊断学图谱[M].北京:人 民军医出版社,1997.134-135.

    [2]许 屏,主编.荧光和免疫荧光染色技术及应用[M].第2版.北京:人 民卫生出版社,2000.111-112.

    [3]丁振若,苏明权,孙怡群,等.荧光法检测肿瘤细胞在泌尿系肿瘤诊断中 的作用[J].中华医学检验杂志,1989,12(3):167-169.

    收稿日期:2000-04-27 修回:2000-07-10, 百拇医药