外阴白斑和鳞癌细胞中p53蛋白的表达
作者：余春艳 魏峰 顾群 刘娟
单位：余春艳(第四军医大学唐都医院皮肤科，陕西 西安 710038)；魏峰(第四军医大学唐都医院皮肤科，陕西 西安 710038)；顾群(第四军医大学唐都医院皮肤科，陕西 西安 710038) ；刘娟(第四军医大学唐都医院皮肤科，陕西 西安 710038)
关键词：p53蛋白；外阴白斑；鳞癌
第四军医大学学报000422 摘 要：目的 研究p53蛋白对外阴白斑和鳞癌细胞中的表达. 方法 采用ABC免疫组化法，对102例外阴白斑和鳞癌患者进行p53蛋白检测. 结果 各组 与鳞癌组相比，经χ2检验，有非常显著差别(P<0.01). 正常组21例χ2=2 4.02，增生组20例χ2=9.23，硬化萎缩组28例χ2=53.23， 混合组23例χ2=138.39，不典型增生组8例χ2=13.53. 结论 p53 蛋白的表达与鳞癌有密切关系，为肿瘤的恶性标志，说明p53蛋白检测可作为 良恶性病变之间的鉴别手段.
, 百拇医药
中图号：R739.5 文献标识码：A
文章编号：1000-2790(2000)04-0462-02
p53 protein expression in genitalia luekoplakia and squamous cell carcinoma
YU Chun-Yan, WEI Feng, GU Qun, LIU Juan
(Department of Dermatology, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University , Xi'an 710038, China)
Abstract: AIM To study the expression of p53 protein in genitalia luekoplakia and squamous cells carcinoma. METHODS The genitalia luekoplakia and squamous cell carcinoma in 102 cases were detected with p53 protein by ABC immunohi stoche mical technique. RESULTS χ2 test showed significant di fference between the group of squamous cell carcinoma and the other groups of benign pathological cha nges: Normal group 21 cases, χ2=24.02; hyperplasia type group 20 cases, χ2 =9.23; sclerotic atrophic type group 28 cases, χ2=53.23; mixed type group 23 cases, χ2=138.39; and atypical hyperplasia group 8 cases, χ2=13.53 (P<0.01). CONCLUSION Expression of the p53 protein correlates closely with the squamous cell ca rcinoma. The p53 protein expression implicates potential malignant transfo rmation, which is a marker helpful in the differential diagnosis.
, 百拇医药
Keywords:p53 protein; luekoplakia; squamous cell ca rcinoma
0 引言
p53基因在正常细胞增殖调控过程中起着重要作用，但当p53基因缺失或突 变时，却能引发恶 性细胞增殖，说明它是肿瘤发生的一个环节. 我们采用p53单克隆抗体(mAb)，对外 阴白斑及鳞癌进行了免疫组化方法检测，探讨该基因蛋白表达与外阴白斑及鳞癌的关系.
1 材料和方法
1.1 材料 西安市5家医院1970/1991年病理HE染色确诊标本102份，根据Friedric h命名[1]，其 中外阴白斑增生型20例，硬化萎缩型28例，混合型23例，不典型增生型8例，鳞癌23例，并 设正常对照组21例，标本取自门诊手术室良性病变手术切缘胸、腹部正常皮肤.
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1.2 方法 标本经160 mL.L-1福尔马林固定24 h，常规石蜡 包埋，连续切片4 μm厚，玻片用胶处 理. p53 mAb购于中心生物技术公司，采用ABC免疫组化染色：石蜡切片常规脱蜡，逐 级乙醇至水；2 mL.L-1 H2O2 0.01 mol.L-1 PBS中阻断内源性过氧化物 酶30 min, 0.1 mol.L-1 PBS洗3 min (pH 7.4)3次；加入200 mL.L-1牛血清白蛋白孵育30 min；加一抗单 克隆抗体p5 3工作稀释度(1∶40)，置湿盒中4℃过夜；0.01 mol.L-1 PBS振洗5 min 3次；加 生物素化二抗37℃ 60 min；0.01 mol.L-1 PBS振洗5 min 3次；加入预先混合好的ABC复合物，37℃ 45～60 min；0.01 mol.L-1 PBS振洗5 min 3次；硫酸镍铵-DAB染色，光镜观察，及时终止；苏木精复染，乙醇脱水，二甲苯透明， 树胶封片. 镜下观察：免疫组化阳性为细胞核有蓝色着色，阴性为无染色或可疑者，观察切 片中10个具有代表性的高倍视野，阳性细胞数<10%为阴性(-)，≥10%定为阳性(+)(低 倍镜见Fig 1,高倍镜见Fig 2).
, 百拇医药
2 结果
正常组21例，p53阳性0例，增生组20例，阳性11例，阳性率55%；硬化萎缩型28 例，阳性7例 ，阳性率25%；混合型23例，阳性6例，阳性率26%；不典型增生8例，阳性3例，阳性率38%； 鳞癌组23例，阳性23例，阳性率100%；各组与鳞癌组相比；经χ2检验，有非常显著 差别(P<0.01)，正常组χ2=24.02，增生组χ2=9.23，硬化萎缩组χ 2=53.23，混合组χ2=138.39，不典型增生组χ2=13.53.
表 1 外阴白斑和鳞癌中p53的表达
Tab 1 p53 protein expression in genitalia luekoplakia and squamous cell carcinoma Group
, 百拇医药
p53/(+/n)
positive rate (%)
Normal
0/21
0
Hyperplasia type
11/20
55
Sclerotic atrophic type
7/28
25
Mixed type
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6/23
26
Atypical hyerplasia
3/8
38
Squamous cell carcinoma
23/23
100
图 1 p53蛋白在鳞癌细胞中的表达
Fig 1 p53 protein expression in squamous cell carcinoma ×20
, http://www.100md.com
图 2 p53蛋白在鳞癌细胞中的表达
Fig 2 p53 protein expression in squamous cell carcinoma ×40
3 讨论
p53基因是以其蛋白质产物的分子量命名的，它的产物是一种位于细胞内Mr 53 0 00的核磷 酸蛋白质. p53基因作为抗癌抑制基因，定位于17号染色体的短臂上[2]. 最 初p53基因被认 为是一种癌基因[3]，随着对癌基因的研究深入，现认为，p53分为野生型和 突变型两种，前 者是抑癌基因，在机体内起负信号调节作用，抑制细胞进入细胞周期的S期(合成期)，使 细胞的分裂终止于G1/S期，监控部分有恶性倾向的细胞发生程序化死亡，并促进细胞发生成 熟分化. 后者是癌基因，其抑癌功能丧失后，通过正信号调节作用，促使细胞进入增殖周期 ，并持续增殖，使细胞不能及时分化和凋亡，发生永生化而形成肿瘤. p53正常功能 丧失是 野生型向突变型转化，表现为p53基因上某片断的丢失或突变，p53空间构象改 变，半衰期延 长. 正常细胞内p53基因，其产物为一种核蛋白，这种蛋白在G1期积聚在细胞质内 ，在S早期 进入细胞核，在细胞核内仅仅保留很短的时期[4]，不易由免疫组化方法测得. 起 癌基因作 用的是p53突变体，半衰期长，其蛋白产物积聚在细胞核内，可以被免疫组化方法发 现[5]. 从我们的检测结果看，各型良性病变和不典型增生仅有部分p53蛋白表达，而鳞癌为 完全表 达，提示p53蛋白的表达与恶性程度成正相关，突变型p53蛋白的表达可能与疾 病的良恶性及 恶性程度有关，同时对临床上指导鉴别良、恶性病变有一定参考价值. 进一步提示，临床上 应把治疗放在积极寻找和治疗引发外阴白斑的致癌因素上，以抑制良性病变向恶性病变的转 化.
, http://www.100md.com
作者简介：余春艳(1954-)，女(汉族)，安徽省长丰县. 硕士， 副主任 医师， 副教授， 中华医学会西安分会委员，陕西省医学会副主任委员， 发表论文20 余篇. Tel.(029)3577444(O)
参考文献：
[1] 陈忠年，杜心谷. 妇产科病理学[M]. 上海：上海科学技术出版社 ，1984：28-32.
[2] Sano T, Tsujino T, Yoshida K et al. Frequent loss of neterozy gosity on chr omosmes 1q, 5q and 17q in human gastric carcinomas[J]. Cancer Res, 1991; 5 1 (11): 2926-2931.
[3] Shaulsky G, Ben-Ze'er A, Rotter V. Subcelluar distribution of the p53 protei n during the cell cycle of BALB/c 3T3 cells[J]. Oncogene, 1990; 5(11): 170 7-1711.
, http://www.100md.com
[4] Prokocimer M, Rotter V. Structure and function of p53 in nor mal cells and th eir aberrantions in cancer cells:Projection on the hematologic cell lineages [J]. Blood, 1994; 84(8):2391-2411.
[5] Reihaus E, Kohler M, Krais S et al. Regulation of the level of the oncopro tein p53 in non-transformed and transformed cell[J]. Oncogene, 1990 ; 5(1): 137-142.
收稿日期：1999-09-22； 修回日期：1999-11-16, 百拇医药
单位：余春艳(第四军医大学唐都医院皮肤科，陕西 西安 710038)；魏峰(第四军医大学唐都医院皮肤科，陕西 西安 710038)；顾群(第四军医大学唐都医院皮肤科，陕西 西安 710038) ；刘娟(第四军医大学唐都医院皮肤科，陕西 西安 710038)
关键词：p53蛋白；外阴白斑；鳞癌
第四军医大学学报000422 摘 要：目的 研究p53蛋白对外阴白斑和鳞癌细胞中的表达. 方法 采用ABC免疫组化法，对102例外阴白斑和鳞癌患者进行p53蛋白检测. 结果 各组 与鳞癌组相比，经χ2检验，有非常显著差别(P<0.01). 正常组21例χ2=2 4.02，增生组20例χ2=9.23，硬化萎缩组28例χ2=53.23， 混合组23例χ2=138.39，不典型增生组8例χ2=13.53. 结论 p53 蛋白的表达与鳞癌有密切关系，为肿瘤的恶性标志，说明p53蛋白检测可作为 良恶性病变之间的鉴别手段.
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中图号：R739.5 文献标识码：A
文章编号：1000-2790(2000)04-0462-02
p53 protein expression in genitalia luekoplakia and squamous cell carcinoma
YU Chun-Yan, WEI Feng, GU Qun, LIU Juan
(Department of Dermatology, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University , Xi'an 710038, China)
Abstract: AIM To study the expression of p53 protein in genitalia luekoplakia and squamous cells carcinoma. METHODS The genitalia luekoplakia and squamous cell carcinoma in 102 cases were detected with p53 protein by ABC immunohi stoche mical technique. RESULTS χ2 test showed significant di fference between the group of squamous cell carcinoma and the other groups of benign pathological cha nges: Normal group 21 cases, χ2=24.02; hyperplasia type group 20 cases, χ2 =9.23; sclerotic atrophic type group 28 cases, χ2=53.23; mixed type group 23 cases, χ2=138.39; and atypical hyperplasia group 8 cases, χ2=13.53 (P<0.01). CONCLUSION Expression of the p53 protein correlates closely with the squamous cell ca rcinoma. The p53 protein expression implicates potential malignant transfo rmation, which is a marker helpful in the differential diagnosis.
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Keywords:p53 protein; luekoplakia; squamous cell ca rcinoma
0 引言
p53基因在正常细胞增殖调控过程中起着重要作用，但当p53基因缺失或突 变时，却能引发恶 性细胞增殖，说明它是肿瘤发生的一个环节. 我们采用p53单克隆抗体(mAb)，对外 阴白斑及鳞癌进行了免疫组化方法检测，探讨该基因蛋白表达与外阴白斑及鳞癌的关系.
1 材料和方法
1.1 材料 西安市5家医院1970/1991年病理HE染色确诊标本102份，根据Friedric h命名[1]，其 中外阴白斑增生型20例，硬化萎缩型28例，混合型23例，不典型增生型8例，鳞癌23例，并 设正常对照组21例，标本取自门诊手术室良性病变手术切缘胸、腹部正常皮肤.
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1.2 方法 标本经160 mL.L-1福尔马林固定24 h，常规石蜡 包埋，连续切片4 μm厚，玻片用胶处 理. p53 mAb购于中心生物技术公司，采用ABC免疫组化染色：石蜡切片常规脱蜡，逐 级乙醇至水；2 mL.L-1 H2O2 0.01 mol.L-1 PBS中阻断内源性过氧化物 酶30 min, 0.1 mol.L-1 PBS洗3 min (pH 7.4)3次；加入200 mL.L-1牛血清白蛋白孵育30 min；加一抗单 克隆抗体p5 3工作稀释度(1∶40)，置湿盒中4℃过夜；0.01 mol.L-1 PBS振洗5 min 3次；加 生物素化二抗37℃ 60 min；0.01 mol.L-1 PBS振洗5 min 3次；加入预先混合好的ABC复合物，37℃ 45～60 min；0.01 mol.L-1 PBS振洗5 min 3次；硫酸镍铵-DAB染色，光镜观察，及时终止；苏木精复染，乙醇脱水，二甲苯透明， 树胶封片. 镜下观察：免疫组化阳性为细胞核有蓝色着色，阴性为无染色或可疑者，观察切 片中10个具有代表性的高倍视野，阳性细胞数<10%为阴性(-)，≥10%定为阳性(+)(低 倍镜见Fig 1,高倍镜见Fig 2).
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2 结果
正常组21例，p53阳性0例，增生组20例，阳性11例，阳性率55%；硬化萎缩型28 例，阳性7例 ，阳性率25%；混合型23例，阳性6例，阳性率26%；不典型增生8例，阳性3例，阳性率38%； 鳞癌组23例，阳性23例，阳性率100%；各组与鳞癌组相比；经χ2检验，有非常显著 差别(P<0.01)，正常组χ2=24.02，增生组χ2=9.23，硬化萎缩组χ 2=53.23，混合组χ2=138.39，不典型增生组χ2=13.53.
表 1 外阴白斑和鳞癌中p53的表达
Tab 1 p53 protein expression in genitalia luekoplakia and squamous cell carcinoma Group
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p53/(+/n)
positive rate (%)
Normal
0/21
0
Hyperplasia type
11/20
55
Sclerotic atrophic type
7/28
25
Mixed type
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6/23
26
Atypical hyerplasia
3/8
38
Squamous cell carcinoma
23/23
100
图 1 p53蛋白在鳞癌细胞中的表达
Fig 1 p53 protein expression in squamous cell carcinoma ×20
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图 2 p53蛋白在鳞癌细胞中的表达
Fig 2 p53 protein expression in squamous cell carcinoma ×40
3 讨论
p53基因是以其蛋白质产物的分子量命名的，它的产物是一种位于细胞内Mr 53 0 00的核磷 酸蛋白质. p53基因作为抗癌抑制基因，定位于17号染色体的短臂上[2]. 最 初p53基因被认 为是一种癌基因[3]，随着对癌基因的研究深入，现认为，p53分为野生型和 突变型两种，前 者是抑癌基因，在机体内起负信号调节作用，抑制细胞进入细胞周期的S期(合成期)，使 细胞的分裂终止于G1/S期，监控部分有恶性倾向的细胞发生程序化死亡，并促进细胞发生成 熟分化. 后者是癌基因，其抑癌功能丧失后，通过正信号调节作用，促使细胞进入增殖周期 ，并持续增殖，使细胞不能及时分化和凋亡，发生永生化而形成肿瘤. p53正常功能 丧失是 野生型向突变型转化，表现为p53基因上某片断的丢失或突变，p53空间构象改 变，半衰期延 长. 正常细胞内p53基因，其产物为一种核蛋白，这种蛋白在G1期积聚在细胞质内 ，在S早期 进入细胞核，在细胞核内仅仅保留很短的时期[4]，不易由免疫组化方法测得. 起 癌基因作 用的是p53突变体，半衰期长，其蛋白产物积聚在细胞核内，可以被免疫组化方法发 现[5]. 从我们的检测结果看，各型良性病变和不典型增生仅有部分p53蛋白表达，而鳞癌为 完全表 达，提示p53蛋白的表达与恶性程度成正相关，突变型p53蛋白的表达可能与疾 病的良恶性及 恶性程度有关，同时对临床上指导鉴别良、恶性病变有一定参考价值. 进一步提示，临床上 应把治疗放在积极寻找和治疗引发外阴白斑的致癌因素上，以抑制良性病变向恶性病变的转 化.
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作者简介：余春艳(1954-)，女(汉族)，安徽省长丰县. 硕士， 副主任 医师， 副教授， 中华医学会西安分会委员，陕西省医学会副主任委员， 发表论文20 余篇. Tel.(029)3577444(O)
参考文献：
[1] 陈忠年，杜心谷. 妇产科病理学[M]. 上海：上海科学技术出版社 ，1984：28-32.
[2] Sano T, Tsujino T, Yoshida K et al. Frequent loss of neterozy gosity on chr omosmes 1q, 5q and 17q in human gastric carcinomas[J]. Cancer Res, 1991; 5 1 (11): 2926-2931.
[3] Shaulsky G, Ben-Ze'er A, Rotter V. Subcelluar distribution of the p53 protei n during the cell cycle of BALB/c 3T3 cells[J]. Oncogene, 1990; 5(11): 170 7-1711.
, http://www.100md.com
[4] Prokocimer M, Rotter V. Structure and function of p53 in nor mal cells and th eir aberrantions in cancer cells:Projection on the hematologic cell lineages [J]. Blood, 1994; 84(8):2391-2411.
[5] Reihaus E, Kohler M, Krais S et al. Regulation of the level of the oncopro tein p53 in non-transformed and transformed cell[J]. Oncogene, 1990 ; 5(1): 137-142.
收稿日期：1999-09-22； 修回日期：1999-11-16, 百拇医药