糖尿病和贫血患者血浆中乳酸质量浓度的测定
作者：李晓晔 吴红 姜茹 柳巍 许兵
单位：李晓晔(第四军医大学基础部化学教研室， 陕西 西安 710033)；吴红(第四军医大学基础部化学教研室， 陕西 西安 710033)；姜茹(第四军医大学基础部化学教研室， 陕西 西安 710033)；柳巍(第四军医大学基础部化学教研室， 陕西 西安 710033)；许兵(上海师范大学化学系)
关键词：糖尿病；贫血；血浆；乳酸
第四军医大学学报000421 摘 要：目的 探讨糖尿病和贫血患者血浆中乳酸质量浓度与正常人和献血员间的关 系. 方法 利用气相色谱对血浆乳酸值进行外标法测定. 实验分4组：A组： 糖尿病患者7例(男4，女3，年龄30～60岁)，B组：贫血患者9例(男6，女3，年龄20 ～60岁)，C组：正常人15例(男9,女6，年龄20～50岁)，D组：献血员28例(男19, 女9，年龄20～30岁). 结果 糖尿病和贫血患者、正常人和献血员血浆中乳 酸质量浓度分别为(472±215)mg.L-1，(340±125)mg.L-1，(130±31 )mg.L-1和(147±46)mg.L -1. 糖尿病和贫血患者血浆乳酸质量浓度明显高于正常人和献血员(P<0.01). [ HTH]结论 我们测 定的乳酸值可作为糖尿病和贫血患者临床诊断指标之一.
, 百拇医药
中图号：R744.12 文献标识码:A
文章编号：1000-2790(2000)04-0460-02
Determination of mass concentration of lactic acid in the plasma of patients wit h diabetes and anemia
LI Xiao-Ye WU Hong JIANG Ru LIU Wei
(Department of Chemistry, Faculty of Preclinical Medicine, Fourth Military Medical University, Xi'an 710033, China)
XU Bing
, http://www.100md.com
(Department of Chemistry,Shanghai Nor mal College)
Abstract: AIM To assay the relations of the mass concentra tion of lactic acid in the plasma of patients with diabetes and anemia. ME THODS The value of l actic acid in the plasma was determined with gas chromatography. The subjects in the experiment were divided into four groups, A: 7 patients with diabetes ( mal e 3, female 4, thirty ～ sixty years old ), B: 9 patients with anemia ( male 6, female 3, twenty ～ sixty years old ), C: 15 normal (male 9, female 6, twenty ～ thirty years old ),and D: 28 volunteers ( male 19, female 9,twenty ～ thirty years old ). RESULTS The mass concentration of lactic acid was 472±215，340±125，130±31 and 147±46 mg.L-1,respectively. The ma ss concentration of lactic acid in the plasma from the patients was remarkably h igher than that from normal volunteers (P<0.01). CONCLUSION Th e va lue we determined can be used as one of the markers in the clinical diagnosis of patients with diabetes and anemia.
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Keywords:diabetes; anemia; plasma; lactic acid
0 引言
乳酸是机体内无氧糖酵解的最终产物，在机体的所有组织都可产生，特别是骨胳肌、 脑和红血球， 大部分在肝和肾作为三羧酸循环和糖新生系的基质被利用，乳酸的产生和利 用不均衡，就要产生疾病，血中乳酸值就会产生异常. 例如，贫血、白血病、心肌梗塞、急 性肝萎缩、糖尿病……等血浆乳酸值升高[1]. 因此，测定患者血浆乳酸值，对这 些 疾病的诊断具有重要的参考价值，我们应用气相色谱法测定糖尿病和贫血病患者血浆乳酸值 [2,3]，并和正常人与献血员的血浆乳酸值作对照.
1 材料和方法
1.1 材料 仪器和试剂103型气相色谱仪，氢焰离子化检测器(上海分析仪器厂) ，800型离心 沉淀器(上海手术器械十厂). 甲醇、浓硫酸均为分析纯，西安化学试剂厂；氯仿,分析纯， 北京化工厂；乳酸锂，化学纯，北京化工厂；500 mL.L-1H2SO4由分析纯浓 硫酸配制.
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1.2 方法
1.2.1 色谱条件 色谱柱为不锈钢柱3 mm×1000 mm，填充涂渍15 g.kg-1聚 乙 二醇丁二酸酯的102白色担体(60～80目). 柱温114℃，检测器温度150℃，气化器温度160℃. 气体流速：氮气20 mL.min-1，空气300 mL.min-1，氢气40 mL.min-1 .
1.2.2 乳酸锂溶液的配制及外标乳酸甲酯的制备 准确称取乳酸锂，配制相当 于 0.50～0.80 g.L-1浓度的乳酸锂水溶液(准确计算浓度)，吸取乳酸锂溶液0.50 ～1. 00 mL，于具塞离心 管中，加入500 mL.L-1硫酸0.50 mL，再加甲醇2.00 mL，摇匀. 在56℃水浴中酯化3 0 min， 取出离心管冷至室温，加蒸馏水1.00 mL，摇匀，再加氯仿1.00 mL，具塞振摇3 min，萃取 乳酸甲酯，于3000 r.min-1离心5 min，吸去上层水层，吸出氯仿萃取液于微型漏斗 上过滤，收集滤液备用. 此为外标乳酸甲酯溶液.
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1.2.3 血浆样品中乳酸甲酯的制备 吸取糖尿病和贫血病血浆0.50～1.00 mL， 分别置于具塞离心管中，按上述方法平行操作，制成样品乳酸甲酯氯仿液备用.
1.2.4 色谱分析及血浆中乳酸浓度的计算 在上述色谱条件下，分别吸取血 浆样品乳酸甲酯 溶液及外标乳酸甲酯溶液各3.0 μL平行进样，进行色谱分析. 血浆样品中乳酸浓度按外标 法计算.
2 结果
2.1 质量浓度与峰高的线性关系 在容量瓶中分别配制质量浓度为0.50，1.00 ，1.50，2.00 ，2.50 g.L-1的乳酸锂标准溶液，各吸取1.00 mL，按上述方法衍生化制成乳酸甲 酯氯仿 溶液，在上述色谱条件下，分别吸取1.0 μL进样，各重复进样3次，准确测量峰高，绘制质 量浓度与峰高曲线，质量浓度与峰高的线性关系较好(Fig 1).
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2.2 测量精度试验 吸取血浆1 mL，按上述方法制成乳酸甲酯 ， 吸取3 μL重复进样5次，进行色谱分析，测量峰高值，其相对偏差为0.70%，重现性较好.
图 1 质量浓度与峰高线性关系
Fig 1 Linear relationship of mass concentration and peak value
2.3 样品中乳酸回收率 取具塞刻度试管3支，在1号管加血浆0.50 mL和蒸馏水0.50 mL，2号 管加入血浆0.50 mL和乳酸锂标准溶液0.50 mL(质量浓度为0.5550 g.L-1)，3号管 加入乳 酸锂标准溶液0.50 mL和蒸馏水0.50 mL，3管同时按上述方法衍生化制备乳酸甲酯，各吸取 3.0 μL进样，进行色谱分析，各重复进样3次，取平均值，计算回收率为102%.
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2.4 糖尿病和贫血患者血浆乳酸质量浓度 我们按上述方法测定糖 尿病患者血浆乳酸值7例、 贫血病患者血浆乳酸值9例、正常人血浆乳酸值15例、献血员血浆乳酸值28例，其结果分别 为(472±215)mg.L-1，(340±125) mg.L-1，(130±31)mg.L-1 和(147±46)mg. L-1. 糖尿病患者和贫血病患者血浆乳酸浓度分别和正常人组和献血员组比较，均相 差非常显著(P<0.01).
3 讨论
本研究正常人组为住院查体人员、糖尿病和贫血患者也均为住院患者，早晨空腹抽血 ，献 血员均未限制饮食，据文献报道[1]，饭后乳酸值升高，尽管献血员饭后抽血血浆 乳酸值比 正常人高，但和糖尿病患者和贫血病患者比较，仍然相差非常显著，因此在没有正常人血浆 乳酸值作对照组的情况下，用献血员组作为糖尿病和贫血患者血浆乳酸值的对照组也是可行 的.
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乳酸酯化反应常用0.5 mol.L-1 H2SO4及BF3为催化剂，我们用500 mL .L-1H2SO4为催化 剂，酯化结果也很满意，BF3毒性大，不用BF3则对临床操作更为方便. 实验结果表明， 气相 色谱法测定血浆乳酸浓度的方法，较比色法的程序简单，可节省时间，提高工作效率，而且 灵敏度高，回收率好. 因此，气液色谱法可为临床和实验研究提供一种精确度较高的微量测 定方法. 我们测定的乳酸值可作为糖尿病和贫血患者临床诊断指标之一.
作者简介：李晓晔(1963-)，男(汉族)，吉林省九台市人. 医学学 士，实验师，发表论文30篇. Tel.(029)3374473 Email. Huaxue@fmmu.edu.cn.
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参考文献：
[1] 岭尾郁夫，垂井清一郎. 乳酸[J]. 日本临床，1982;40(增刊):2 39-241.
[2] 许自超,尹浔,沈素芸et al. 气相色谱法测定恶性血液病患者血浆中乳 酸的浓度[J]. 色谱，1986；4(6)：321-323.
[3] Nadimiti Y. Lactic acidosis associated with Hodgkin's disease [J ]. New Engl J Med, 1980;303(6):15-17.
收稿日期：1999-06-07； 修回日期：2000-01-25, http://www.100md.com
单位：李晓晔(第四军医大学基础部化学教研室， 陕西 西安 710033)；吴红(第四军医大学基础部化学教研室， 陕西 西安 710033)；姜茹(第四军医大学基础部化学教研室， 陕西 西安 710033)；柳巍(第四军医大学基础部化学教研室， 陕西 西安 710033)；许兵(上海师范大学化学系)
关键词：糖尿病；贫血；血浆；乳酸
第四军医大学学报000421 摘 要：目的 探讨糖尿病和贫血患者血浆中乳酸质量浓度与正常人和献血员间的关 系. 方法 利用气相色谱对血浆乳酸值进行外标法测定. 实验分4组：A组： 糖尿病患者7例(男4，女3，年龄30～60岁)，B组：贫血患者9例(男6，女3，年龄20 ～60岁)，C组：正常人15例(男9,女6，年龄20～50岁)，D组：献血员28例(男19, 女9，年龄20～30岁). 结果 糖尿病和贫血患者、正常人和献血员血浆中乳 酸质量浓度分别为(472±215)mg.L-1，(340±125)mg.L-1，(130±31 )mg.L-1和(147±46)mg.L -1. 糖尿病和贫血患者血浆乳酸质量浓度明显高于正常人和献血员(P<0.01). [ HTH]结论 我们测 定的乳酸值可作为糖尿病和贫血患者临床诊断指标之一.
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文章编号：1000-2790(2000)04-0460-02
Determination of mass concentration of lactic acid in the plasma of patients wit h diabetes and anemia
LI Xiao-Ye WU Hong JIANG Ru LIU Wei
(Department of Chemistry, Faculty of Preclinical Medicine, Fourth Military Medical University, Xi'an 710033, China)
XU Bing
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(Department of Chemistry,Shanghai Nor mal College)
Abstract: AIM To assay the relations of the mass concentra tion of lactic acid in the plasma of patients with diabetes and anemia. ME THODS The value of l actic acid in the plasma was determined with gas chromatography. The subjects in the experiment were divided into four groups, A: 7 patients with diabetes ( mal e 3, female 4, thirty ～ sixty years old ), B: 9 patients with anemia ( male 6, female 3, twenty ～ sixty years old ), C: 15 normal (male 9, female 6, twenty ～ thirty years old ),and D: 28 volunteers ( male 19, female 9,twenty ～ thirty years old ). RESULTS The mass concentration of lactic acid was 472±215，340±125，130±31 and 147±46 mg.L-1,respectively. The ma ss concentration of lactic acid in the plasma from the patients was remarkably h igher than that from normal volunteers (P<0.01). CONCLUSION Th e va lue we determined can be used as one of the markers in the clinical diagnosis of patients with diabetes and anemia.
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Keywords:diabetes; anemia; plasma; lactic acid
0 引言
乳酸是机体内无氧糖酵解的最终产物，在机体的所有组织都可产生，特别是骨胳肌、 脑和红血球， 大部分在肝和肾作为三羧酸循环和糖新生系的基质被利用，乳酸的产生和利 用不均衡，就要产生疾病，血中乳酸值就会产生异常. 例如，贫血、白血病、心肌梗塞、急 性肝萎缩、糖尿病……等血浆乳酸值升高[1]. 因此，测定患者血浆乳酸值，对这 些 疾病的诊断具有重要的参考价值，我们应用气相色谱法测定糖尿病和贫血病患者血浆乳酸值 [2,3]，并和正常人与献血员的血浆乳酸值作对照.
1 材料和方法
1.1 材料 仪器和试剂103型气相色谱仪，氢焰离子化检测器(上海分析仪器厂) ，800型离心 沉淀器(上海手术器械十厂). 甲醇、浓硫酸均为分析纯，西安化学试剂厂；氯仿,分析纯， 北京化工厂；乳酸锂，化学纯，北京化工厂；500 mL.L-1H2SO4由分析纯浓 硫酸配制.
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1.2 方法
1.2.1 色谱条件 色谱柱为不锈钢柱3 mm×1000 mm，填充涂渍15 g.kg-1聚 乙 二醇丁二酸酯的102白色担体(60～80目). 柱温114℃，检测器温度150℃，气化器温度160℃. 气体流速：氮气20 mL.min-1，空气300 mL.min-1，氢气40 mL.min-1 .
1.2.2 乳酸锂溶液的配制及外标乳酸甲酯的制备 准确称取乳酸锂，配制相当 于 0.50～0.80 g.L-1浓度的乳酸锂水溶液(准确计算浓度)，吸取乳酸锂溶液0.50 ～1. 00 mL，于具塞离心 管中，加入500 mL.L-1硫酸0.50 mL，再加甲醇2.00 mL，摇匀. 在56℃水浴中酯化3 0 min， 取出离心管冷至室温，加蒸馏水1.00 mL，摇匀，再加氯仿1.00 mL，具塞振摇3 min，萃取 乳酸甲酯，于3000 r.min-1离心5 min，吸去上层水层，吸出氯仿萃取液于微型漏斗 上过滤，收集滤液备用. 此为外标乳酸甲酯溶液.
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1.2.3 血浆样品中乳酸甲酯的制备 吸取糖尿病和贫血病血浆0.50～1.00 mL， 分别置于具塞离心管中，按上述方法平行操作，制成样品乳酸甲酯氯仿液备用.
1.2.4 色谱分析及血浆中乳酸浓度的计算 在上述色谱条件下，分别吸取血 浆样品乳酸甲酯 溶液及外标乳酸甲酯溶液各3.0 μL平行进样，进行色谱分析. 血浆样品中乳酸浓度按外标 法计算.
2 结果
2.1 质量浓度与峰高的线性关系 在容量瓶中分别配制质量浓度为0.50，1.00 ，1.50，2.00 ，2.50 g.L-1的乳酸锂标准溶液，各吸取1.00 mL，按上述方法衍生化制成乳酸甲 酯氯仿 溶液，在上述色谱条件下，分别吸取1.0 μL进样，各重复进样3次，准确测量峰高，绘制质 量浓度与峰高曲线，质量浓度与峰高的线性关系较好(Fig 1).
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2.2 测量精度试验 吸取血浆1 mL，按上述方法制成乳酸甲酯 ， 吸取3 μL重复进样5次，进行色谱分析，测量峰高值，其相对偏差为0.70%，重现性较好.
图 1 质量浓度与峰高线性关系
Fig 1 Linear relationship of mass concentration and peak value
2.3 样品中乳酸回收率 取具塞刻度试管3支，在1号管加血浆0.50 mL和蒸馏水0.50 mL，2号 管加入血浆0.50 mL和乳酸锂标准溶液0.50 mL(质量浓度为0.5550 g.L-1)，3号管 加入乳 酸锂标准溶液0.50 mL和蒸馏水0.50 mL，3管同时按上述方法衍生化制备乳酸甲酯，各吸取 3.0 μL进样，进行色谱分析，各重复进样3次，取平均值，计算回收率为102%.
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2.4 糖尿病和贫血患者血浆乳酸质量浓度 我们按上述方法测定糖 尿病患者血浆乳酸值7例、 贫血病患者血浆乳酸值9例、正常人血浆乳酸值15例、献血员血浆乳酸值28例，其结果分别 为(472±215)mg.L-1，(340±125) mg.L-1，(130±31)mg.L-1 和(147±46)mg. L-1. 糖尿病患者和贫血病患者血浆乳酸浓度分别和正常人组和献血员组比较，均相 差非常显著(P<0.01).
3 讨论
本研究正常人组为住院查体人员、糖尿病和贫血患者也均为住院患者，早晨空腹抽血 ，献 血员均未限制饮食，据文献报道[1]，饭后乳酸值升高，尽管献血员饭后抽血血浆 乳酸值比 正常人高，但和糖尿病患者和贫血病患者比较，仍然相差非常显著，因此在没有正常人血浆 乳酸值作对照组的情况下，用献血员组作为糖尿病和贫血患者血浆乳酸值的对照组也是可行 的.
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乳酸酯化反应常用0.5 mol.L-1 H2SO4及BF3为催化剂，我们用500 mL .L-1H2SO4为催化 剂，酯化结果也很满意，BF3毒性大，不用BF3则对临床操作更为方便. 实验结果表明， 气相 色谱法测定血浆乳酸浓度的方法，较比色法的程序简单，可节省时间，提高工作效率，而且 灵敏度高，回收率好. 因此，气液色谱法可为临床和实验研究提供一种精确度较高的微量测 定方法. 我们测定的乳酸值可作为糖尿病和贫血患者临床诊断指标之一.
作者简介：李晓晔(1963-)，男(汉族)，吉林省九台市人. 医学学 士，实验师，发表论文30篇. Tel.(029)3374473 Email. Huaxue@fmmu.edu.cn.
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参考文献：
[1] 岭尾郁夫，垂井清一郎. 乳酸[J]. 日本临床，1982;40(增刊):2 39-241.
[2] 许自超,尹浔,沈素芸et al. 气相色谱法测定恶性血液病患者血浆中乳 酸的浓度[J]. 色谱，1986；4(6)：321-323.
[3] Nadimiti Y. Lactic acidosis associated with Hodgkin's disease [J ]. New Engl J Med, 1980;303(6):15-17.
收稿日期：1999-06-07； 修回日期：2000-01-25, http://www.100md.com