四君子汤对脾虚患者血浆细胞因子的影响
作者：章梅 夏天 张仲海 靳风烁 颜真 崔大祥
单位：章梅(第四军医大学：西京医院中医科，陕西 西安 710033)；夏天(第四军医大学：西京医院中医科，陕西 西安 710033)；张仲海(第四军医大学：西京医院中医科， 陕西 西安 710033)；颜真(第四军医大学：生物技术中心， 陕西 西安 710033)；崔大祥(第四军医大学：生物技术中心， 陕西 西安 710033)；靳风烁(第三军医大学大坪医院泌尿外科)
关键词：脾虚患者；四君子汤；细胞因子；医学；中国传统
摘 要摘 要：目的 观察四君子汤对脾虚患者血浆细胞因子的影响，探讨脾虚与细胞因子的关系. 方法 66例脾虚患者分为四君子汤治疗组和六味地黄汤治疗组,采用免 疫分析技术对脾虚患者 及其血浆IL-2,IL-2R,IL-4,IL-5,TNF-α，IgE,sICAM-1等细胞因子水平进行测定，用逆转录聚合酶链反应技术(RT- PCR) 对外周淋巴细胞IL-4 mRNA，IL-5 mRNA表达进行定量分析，用斑 点杂交法检测外周血CD2 mRNA. 结果 脾虚患者IL-2,IL-4,IL-5,TNF-α ,IgE水平下降，sI CAM-1和sIL-2R水平升高，外周淋巴细胞IL-4 mRNA，IL-5 mRNA和CD2 mRNA弱表达， 表现为免疫 功能下降， 经过四君子汤治疗，上述各项指标恢复正常. 结论 四君子汤可 通过益气健脾调节细胞因子的水平和功能,从而达到增强免疫功能的作用.
, http://www.100md.com
中图号:R286.20 文献标识码:A
文章编号：1000-2790(2000)04-0411-03
Effects of Sijunzi decoctum on plasma cytokines in patients with TCM pixu
WTBX ZHANG Mei XIA Tian ZHANG Zhong-Hai
(Department of Traditional Chinese Medicine, Xijing Hospital)
YAN Zhen,CUI Da-Xiang
(Centre of Biologic Technology,Fourth Military Medical University, Xi’an 710033, China)
, http://www.100md.com
JIN Feng-Shuo
(Department of Urology Surgery,Daping Hospital,Thira Military Medical University)
Abstract:AIM To investigate the effect of Sijunzi decoctu m on plasma cytoki nes in patients with TCM Pixu (spleen-asthenia). METHODS Sixty-s ix patients of s pleen-asthenia were divided into two groups: The Sijunzi decoctum group and the Liuweidihuang decoctum group. The plasma of IL-2,sIL-2R, IL-4, IL-5, TNF-α, Ig E and sICAM-1 were measured with radio immunoassay and ELISA. Meanwhile, IL-4m RN A and IL-5mRNA expressions in lymphocytes were detected with RT-PCR. CD2mRNA w as detected by dot hybridization. RESULTS The plasma levels of IL- 2,IL-4,IL- 5, TNF-α, IgE of patients with TCM-Pixu were significantly lower than those of the normals. The plasma levels of sIL- 2R and sICAM-1 were high er than those of the normals. The expression of IL-4mRNA, IL-5mRNA and CD2mRNA in the peripheral blood lymphocytes of patients decreased. After the treatment with Sijunzi decoctum, all the indexes returned to normal. CONCLUSION The imbalance of cytokines may be an important factor in the progression of P ixu and Sijunzi deco ctum can adjust them.
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Keywords:Pixu (spleen-asthenia); Sijunzi decoctum; cytokines; Medicine, Traditional Chinese
0 引言
脾虚证见于临床诸多疾病，四君子汤是补气健脾的代表方，主要用于治疗脾虚证. 我们 对脾虚患者外周血中的细胞因子及部分细胞因子受体进行检测，对一些细胞因子的基因表达 状况进行研究，同时并用四君子汤进行反证治疗，和六味地黄汤进行对比研究，以对四君子 汤的健脾机制能有进一步的认识.
1 对象和方法
1.1 对象 所选患者66例，为本院中医科门诊与住院患者， 均符合脾虚证辨证 参考标准[1] ，即纳差、乏力，食后或午后腹胀，便溏，消瘦，面色不华， 舌淡苔白，脉虚无力，具备3 项. 以上病程在0.5 a以上. 将66例脾虚患者随机分为，四君子汤治疗组(SJZ)和六味地黄汤 治疗 组(LWD). 四君子汤治疗组33例，年龄32～59岁，平均(48±8)岁. 六味地黄汤治疗组33例， 年龄31～61岁，平均(47±8)岁，2组资料具有可比性. 正常对照组15(男8，女7)例，均 来自本院血库健康献血者.
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 给药方法 受试者停用中西药物2 wk，采用双盲给药法，经配对的患者 按随机数字表达法分为脾虚组和六味地黄汤治疗组，由专人发药，服药剂量为200 mL/次,2 次/d，早晚空腹服用，疗程5～6 wk，给药前后复查指标. 四君子汤：人参48 g，白术36 g， 茯苓36 g，炙甘草18 g，水煎分装200 mL/袋，水煎液浓度60 g.L-1，本院中药房. 六味地黄汤，熟地48 g，山药36 g，山萸36 g，丹皮36 g，泽泻18 g，茯苓18 g，水煎分装 ，200 mL/袋，水煎液浓度60 g.L-1，对照组为水煎液. 以上两种药物在外观及包装 方面均一致.
1.2.2 测定方法 早晨8∶00空腹抽肘静脉血，分装于2支肝素抗凝管内， 一支试管立即分离血 浆，-20℃冻存，一支即刻分离淋巴细胞，Hanks液洗2次，用于 CD2 mRNA, IL-4 mRNA,I L-5 mRNA测定. 采集动脉血用于sICAM-1测定. sIL- 2R 采用ELISA法，试剂购自深圳晶 美生物工 程公司，光密度测定用奥地利产STL全自动酶标分析仪. IL-4，IL-5采用ELISA法，人基 因 重组IL-4,IL-5，鼠抗人IL-4, IL-5单抗和生物素标记二抗为靳风烁博士惠赠，HRP 标 记的 链亲和素与生物素化二抗形成复合物450 nm测A(OD)值. 血清sICAM-1采用酶联免疫吸 附法测定 ，试剂由本校免疫教研室提供. IL-2，IgE，TNF-α等采用放射免疫法测定，IL-2 试剂 购自 上海安迪生物工程公司，IgE购自美国DPL公司，TNF-α购自北京东亚免疫技术研究所，用 芬 兰产多探头全自动计数仪检测. CD2基因探针由靳风烁博士惠赠，CD2 mRNA，测定采用 斑点杂交法,杂交结果用HPVectra PC 微机图像处理系统进行光密度扫描，用曝光斑点的平 均光密 度 值(A值)面积代表外周血淋巴细胞CD2 mRNA 相对含量. IL-4,IL-5 mRNA测定采用RT -PCR 法，将淋巴细胞用Hank′s洗涤2次，后移至1.5 mL Eppendorf管中，按酚-氯仿常规步骤进 行RNA提取[2]，按美国 Promega公司提供的逆转录PCR试剂盒进行操作，产物10 μ L在32 g.L-1 琼脂糖 凝胶上电泳，IL-4产物117 bp，IL-5产物113 bp，β-actin作为内参照， 用薄层扫描仪 ( cs-9000，日本)检测DNA含量，计算每标本IL-4/β-actin, IL-5/β-actin PCR 扩 增产物(DNA)比值以表达强弱.
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统计学处理:检测结果以均值±标准差表示，组间比较用方差分析 和Q 检测法，每组治疗前后自身比较用t检验
2 结果
四君子汤对脾虚患者外周血中细胞因子水平变化的影响见Tab 1,四君子汤对脾虚患者外周血 淋巴细胞CD2 mRNA，IL-4/β-actin, IL-5/β-actin DNA值的影响见Tab 2。
表 1 四君子汤对脾虚患者外周血中细胞因子水平变化的影响
Tab 1 Effect of Sijunzi decoctum on plasma cytokines in Pixu patien ts (
±s)
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Group
IgE(IU/ mL)
IL-2(IU.L-1)
sIL-IR(U.L-1)
IL-4( ng.L-1)
IL-5( ng.L-1)
sICAM-1(μg.L-1)
TNF-α (IU.L-1)
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Normals
381±132
9.8±3.2
294±93
544±213
430.2±185.4
1.31±0.17
2.8±0.14
Pixu
142±24bd
7.5±2.1bd
, 百拇医药 655±80bd
218±89 bd
120.6±74.3bd
4.65±0.68bd
1.6±0.32bd
SJZ
439±146
13.9±1.8a
279±88
676±146a
, http://www.100md.com
528.9± 120.6b
1.27±0.14
3.9±0.17a
LWD
145±63bd
6.8±1.9bd
679±74bd
220±96 bd
118.3±95.4d
4.57±0.53bd
, 百拇医药
1.5±0.28bd
aP<0.05，bP<0.01 vs normals,cP<0.05,dP<0.01 vs SJZ; SJZ:Sijunzi tang (chinese herb); LWD:Liuweidihuang tang(chinese herb).表 2 四君子汤对脾虚患者外周血淋巴细胞CD2 mRNA，IL-4/β-actin, IL-5 /β-actin DNA值的影响
Tab 2 Effect of SijunZi decoctum on CD2 mRNA，IL-4/β-actin,IL-5/β-actin in Pixu patients (±s)
, 百拇医药
Group
CD2 mRNA
IL-4/β-actin
IL- 5/β-actin
relativ e r1
coefficient r2
Normals
26.7±2.4
0.89±0.41
0.77±0.32
0.28
, 百拇医药
0.19
Pixu
43.8±5.9bd
0.33±0.17bd
0.25±0.11bd
0.65b
0.73b
SJZ
25.8±4.3
1.03±0.52a
0.98±0.15a
, 百拇医药
LWD
44.1±4.5bd
0.34±0.23bd
0.29±0.22bd
aP<0.05，bP<0.01 vs normals,cP<0.05,dP<0.01 vs S JZ; SJZ,LWD:the same as Tab 1 r1 is IL-4/IL-5DNA，r2 is IL-5/IL-5DNA3 讨论
脾在中医基础理论中为后天之本，气血生化之源， 与机体的免疫功能和营养状况有 关，脾运失常，消化障碍，就会导致食欲不振，腹泻，消瘦，气血生化不足，导致免疫力下 降，机体抵抗力下降. IL-2,sIL-2R和CD2是淋巴细胞活化的重要标志. 我们曾在以往的 研究中 观察到脾虚患者外周血辅助性T细胞(Th)减少，抑制性T细胞(Ts)升高，T细胞分化能力下降 [3 ]IL-2主要是由Th细胞在抗原丝裂原刺激下和IL-1诱导下分泌的，Ts细胞抑制IL-2产 生，IL- 2具有促进细胞增殖，促进T细胞杀伤的作用，能增强巨噬细胞，NK细胞活性，调节T细胞和B 细胞的分化与增殖[4,5]sIL-2R能以低亲和力结合IL-2，可与淋巴细 胞膜上的IL-2R竞争IL-2，从而抑制IL-2对淋巴细胞的增殖刺激作用，中和细胞周围的IL -2，减弱机体的自分泌效 应而起类似封闭因子的作用[6]. 正常人血清中存在少量sIL-2R. 人淋巴细胞CD 2分子是参 与细胞粘附和活化的重要糖蛋白分子，CD2参与T细胞活化，T细胞被激活，CD2 mRNA水 平上升 ，激活受抑制状态下降[7]. 我们研究表明， 脾虚患者血浆IL-2和CD2 mRNA水 平下降，sIL-2 R水平明显升高， 提示脾虚患者外周淋巴细胞处于抑制状态，活化的T细胞静息下来， 从而 表现为脾虚患者免疫功能低下.
, 百拇医药
T细胞对B淋巴细胞合成IgE具有调节作用，在CD4T细胞系Th1细胞产生IL- 2,干 扰素-γ ，Th2细胞能分泌IL-4，IL-5. 本实验结果表明脾虚患者血浆IL-4, IL-5及IgE水平低 于正 常组，同时外周淋巴细胞中IL-4,IL-5 mRNA弱表达，并与血浆IL-4,IL-5水平呈明显相 关关系 . 我们发现脾虚患者Th2淋巴细胞亚群被抑制可能是一系列细胞因子释放减少的促发因素，T 淋巴细胞的激素使其IL-4,IL-5基因表达减弱，分泌至血浆的IL-4,IL-5随之减少，IL- 4又是 激活B细胞使之表达 IgE的重要因素之一，伴随IL-4下降，IgE也呈下降态势， 脾虚患者表 现为细胞免疫和体液免疫功能的下降.
细胞粘附因子(cellular adhesion moleculs,CAM) 是位于多种细胞表面的一类 大分子 蛋白，它通过介导细胞与细胞间，细胞与细胞外基质间的粘附作用，参与一系列生理、病理 过程，是维持机体正常防御功能的重要基础. 正常人血清中存在低水平sICAM-1，它与位于 细胞表面的配体结合后，可抑制细胞过度粘附，从而参与细胞粘附功能的调节. 在低浓度时 ，sICAM-1的抗粘附作用很弱， 在病理情况时，sICAM水平升高,抗粘附作用显著增强， 使 白 细胞粘附功能明显降低，从而导致患者免疫能力的降低[8-10]. TNF-α由激活的 单核巨 噬细胞产生的一种具有多种生物学效应的细胞调节因子，有多种免疫调节功能. 本研究结果 显示，脾虚患者sICAM-1水平升高，TNF-α下降，表现为非特异性免疫功能的失调. 我们发现脾虚时其各种细胞因子分泌紊乱，功能失常，表现为细胞免疫和体液免疫功能 的低下，与中医对“脾为之卫”、“脾旺不受邪”认识相符合. 经用四君子汤治疗后，患者 各项症状缓解，血浆IL-2,IL-4,IL-5和TNF-α水平升高，IgE分泌增多，CD2 mRNA,IL -4 mRNA, IL-5 mRNA呈高表达，sICAM-1和sIL-2R 水平下降，说明脾不仅与免疫具有密切关系，而 且说 明四君子汤可通过健脾补气增加脾的胃气和卫气功能从而调节免疫功能. 同时表明血浆IL- 2 ,IL-4,IL-5,TNF- α，IgE及CD2 mRNA，IL-4 mRNA，IL-5 mRNA和sICAM-1，sIL-2 R 水平的变化 是脾虚证的重要参考指标之一，也说明四君子汤可调整机体内细胞因子的水平高低及功能状 态.
, 百拇医药
为验证四君子汤治疗脾虚证患者的作用，设立脾虚六味地黄汤治疗组，从同一证 型对不 同药物的反应性来说明实验的可靠性，结果脾虚六味地黄汤治疗组其各细胞因子水平的变化 及功能较脾虚组无明显改善. 中医理论重视整体观念，人体是有机的整体，结构上不可分割 ，功能上相互协调，病理上相互影响，这为脾虚时患者体内细胞因子水平及功能的改变提供 理论依据. 四君子汤益气健脾，调整胃肠道功能，可通过促进脾主运化，改善机体各种虚损 状况，增强机体的免疫功能，印证了中医对“脾为之卫”“脾旺不受邪”的认识. 至于四君 子汤对细胞因子的影响途径有待进一步探讨.
基金项目:国家自然科学基金资助项目(39270864)
作者简介：章梅(1966-)，女(汉族)，山西省临汾市人. 硕士,主治医师,讲师,发表论文32篇. Tel.(029)3375351
参考文献:
, http://www.100md.com
[1] 沈自尹，中医虚证辨证参考标准[J]. 中国中西医结合杂志, 1986; 110: 598-599.
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收稿日期:1999-01-14; 修回日期:1999-03-21, http://www.100md.com
单位：章梅(第四军医大学：西京医院中医科，陕西 西安 710033)；夏天(第四军医大学：西京医院中医科，陕西 西安 710033)；张仲海(第四军医大学：西京医院中医科， 陕西 西安 710033)；颜真(第四军医大学：生物技术中心， 陕西 西安 710033)；崔大祥(第四军医大学：生物技术中心， 陕西 西安 710033)；靳风烁(第三军医大学大坪医院泌尿外科)
关键词：脾虚患者；四君子汤；细胞因子；医学；中国传统
摘 要摘 要：目的 观察四君子汤对脾虚患者血浆细胞因子的影响，探讨脾虚与细胞因子的关系. 方法 66例脾虚患者分为四君子汤治疗组和六味地黄汤治疗组,采用免 疫分析技术对脾虚患者 及其血浆IL-2,IL-2R,IL-4,IL-5,TNF-α，IgE,sICAM-1等细胞因子水平进行测定，用逆转录聚合酶链反应技术(RT- PCR) 对外周淋巴细胞IL-4 mRNA，IL-5 mRNA表达进行定量分析，用斑 点杂交法检测外周血CD2 mRNA. 结果 脾虚患者IL-2,IL-4,IL-5,TNF-α ,IgE水平下降，sI CAM-1和sIL-2R水平升高，外周淋巴细胞IL-4 mRNA，IL-5 mRNA和CD2 mRNA弱表达， 表现为免疫 功能下降， 经过四君子汤治疗，上述各项指标恢复正常. 结论 四君子汤可 通过益气健脾调节细胞因子的水平和功能,从而达到增强免疫功能的作用.
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中图号:R286.20 文献标识码:A
文章编号：1000-2790(2000)04-0411-03
Effects of Sijunzi decoctum on plasma cytokines in patients with TCM pixu
WTBX ZHANG Mei XIA Tian ZHANG Zhong-Hai
(Department of Traditional Chinese Medicine, Xijing Hospital)
YAN Zhen,CUI Da-Xiang
(Centre of Biologic Technology,Fourth Military Medical University, Xi’an 710033, China)
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JIN Feng-Shuo
(Department of Urology Surgery,Daping Hospital,Thira Military Medical University)
Abstract:AIM To investigate the effect of Sijunzi decoctu m on plasma cytoki nes in patients with TCM Pixu (spleen-asthenia). METHODS Sixty-s ix patients of s pleen-asthenia were divided into two groups: The Sijunzi decoctum group and the Liuweidihuang decoctum group. The plasma of IL-2,sIL-2R, IL-4, IL-5, TNF-α, Ig E and sICAM-1 were measured with radio immunoassay and ELISA. Meanwhile, IL-4m RN A and IL-5mRNA expressions in lymphocytes were detected with RT-PCR. CD2mRNA w as detected by dot hybridization. RESULTS The plasma levels of IL- 2,IL-4,IL- 5, TNF-α, IgE of patients with TCM-Pixu were significantly lower than those of the normals. The plasma levels of sIL- 2R and sICAM-1 were high er than those of the normals. The expression of IL-4mRNA, IL-5mRNA and CD2mRNA in the peripheral blood lymphocytes of patients decreased. After the treatment with Sijunzi decoctum, all the indexes returned to normal. CONCLUSION The imbalance of cytokines may be an important factor in the progression of P ixu and Sijunzi deco ctum can adjust them.
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Keywords:Pixu (spleen-asthenia); Sijunzi decoctum; cytokines; Medicine, Traditional Chinese
0 引言
脾虚证见于临床诸多疾病，四君子汤是补气健脾的代表方，主要用于治疗脾虚证. 我们 对脾虚患者外周血中的细胞因子及部分细胞因子受体进行检测，对一些细胞因子的基因表达 状况进行研究，同时并用四君子汤进行反证治疗，和六味地黄汤进行对比研究，以对四君子 汤的健脾机制能有进一步的认识.
1 对象和方法
1.1 对象 所选患者66例，为本院中医科门诊与住院患者， 均符合脾虚证辨证 参考标准[1] ，即纳差、乏力，食后或午后腹胀，便溏，消瘦，面色不华， 舌淡苔白，脉虚无力，具备3 项. 以上病程在0.5 a以上. 将66例脾虚患者随机分为，四君子汤治疗组(SJZ)和六味地黄汤 治疗 组(LWD). 四君子汤治疗组33例，年龄32～59岁，平均(48±8)岁. 六味地黄汤治疗组33例， 年龄31～61岁，平均(47±8)岁，2组资料具有可比性. 正常对照组15(男8，女7)例，均 来自本院血库健康献血者.
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 给药方法 受试者停用中西药物2 wk，采用双盲给药法，经配对的患者 按随机数字表达法分为脾虚组和六味地黄汤治疗组，由专人发药，服药剂量为200 mL/次,2 次/d，早晚空腹服用，疗程5～6 wk，给药前后复查指标. 四君子汤：人参48 g，白术36 g， 茯苓36 g，炙甘草18 g，水煎分装200 mL/袋，水煎液浓度60 g.L-1，本院中药房. 六味地黄汤，熟地48 g，山药36 g，山萸36 g，丹皮36 g，泽泻18 g，茯苓18 g，水煎分装 ，200 mL/袋，水煎液浓度60 g.L-1，对照组为水煎液. 以上两种药物在外观及包装 方面均一致.
1.2.2 测定方法 早晨8∶00空腹抽肘静脉血，分装于2支肝素抗凝管内， 一支试管立即分离血 浆，-20℃冻存，一支即刻分离淋巴细胞，Hanks液洗2次，用于 CD2 mRNA, IL-4 mRNA,I L-5 mRNA测定. 采集动脉血用于sICAM-1测定. sIL- 2R 采用ELISA法，试剂购自深圳晶 美生物工 程公司，光密度测定用奥地利产STL全自动酶标分析仪. IL-4，IL-5采用ELISA法，人基 因 重组IL-4,IL-5，鼠抗人IL-4, IL-5单抗和生物素标记二抗为靳风烁博士惠赠，HRP 标 记的 链亲和素与生物素化二抗形成复合物450 nm测A(OD)值. 血清sICAM-1采用酶联免疫吸 附法测定 ，试剂由本校免疫教研室提供. IL-2，IgE，TNF-α等采用放射免疫法测定，IL-2 试剂 购自 上海安迪生物工程公司，IgE购自美国DPL公司，TNF-α购自北京东亚免疫技术研究所，用 芬 兰产多探头全自动计数仪检测. CD2基因探针由靳风烁博士惠赠，CD2 mRNA，测定采用 斑点杂交法,杂交结果用HPVectra PC 微机图像处理系统进行光密度扫描，用曝光斑点的平 均光密 度 值(A值)面积代表外周血淋巴细胞CD2 mRNA 相对含量. IL-4,IL-5 mRNA测定采用RT -PCR 法，将淋巴细胞用Hank′s洗涤2次，后移至1.5 mL Eppendorf管中，按酚-氯仿常规步骤进 行RNA提取[2]，按美国 Promega公司提供的逆转录PCR试剂盒进行操作，产物10 μ L在32 g.L-1 琼脂糖 凝胶上电泳，IL-4产物117 bp，IL-5产物113 bp，β-actin作为内参照， 用薄层扫描仪 ( cs-9000，日本)检测DNA含量，计算每标本IL-4/β-actin, IL-5/β-actin PCR 扩 增产物(DNA)比值以表达强弱.
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统计学处理:检测结果以均值±标准差表示，组间比较用方差分析 和Q 检测法，每组治疗前后自身比较用t检验
2 结果
四君子汤对脾虚患者外周血中细胞因子水平变化的影响见Tab 1,四君子汤对脾虚患者外周血 淋巴细胞CD2 mRNA，IL-4/β-actin, IL-5/β-actin DNA值的影响见Tab 2。
表 1 四君子汤对脾虚患者外周血中细胞因子水平变化的影响
Tab 1 Effect of Sijunzi decoctum on plasma cytokines in Pixu patien ts (
±s), http://www.100md.com
Group
IgE(IU/ mL)
IL-2(IU.L-1)
sIL-IR(U.L-1)
IL-4( ng.L-1)
IL-5( ng.L-1)
sICAM-1(μg.L-1)
TNF-α (IU.L-1)
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Normals
381±132
9.8±3.2
294±93
544±213
430.2±185.4
1.31±0.17
2.8±0.14
Pixu
142±24bd
7.5±2.1bd
, 百拇医药 655±80bd
218±89 bd
120.6±74.3bd
4.65±0.68bd
1.6±0.32bd
SJZ
439±146
13.9±1.8a
279±88
676±146a
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528.9± 120.6b
1.27±0.14
3.9±0.17a
LWD
145±63bd
6.8±1.9bd
679±74bd
220±96 bd
118.3±95.4d
4.57±0.53bd
, 百拇医药
1.5±0.28bd
aP<0.05，bP<0.01 vs normals,cP<0.05,dP<0.01 vs SJZ; SJZ:Sijunzi tang (chinese herb); LWD:Liuweidihuang tang(chinese herb).表 2 四君子汤对脾虚患者外周血淋巴细胞CD2 mRNA，IL-4/β-actin, IL-5 /β-actin DNA值的影响
Tab 2 Effect of SijunZi decoctum on CD2 mRNA，IL-4/β-actin,IL-5/β-actin in Pixu patients (
±s), 百拇医药
Group
CD2 mRNA
IL-4/β-actin
IL- 5/β-actin
relativ e r1
coefficient r2
Normals
26.7±2.4
0.89±0.41
0.77±0.32
0.28
, 百拇医药
0.19
Pixu
43.8±5.9bd
0.33±0.17bd
0.25±0.11bd
0.65b
0.73b
SJZ
25.8±4.3
1.03±0.52a
0.98±0.15a
, 百拇医药
LWD
44.1±4.5bd
0.34±0.23bd
0.29±0.22bd
aP<0.05，bP<0.01 vs normals,cP<0.05,dP<0.01 vs S JZ; SJZ,LWD:the same as Tab 1 r1 is IL-4/IL-5DNA，r2 is IL-5/IL-5DNA3 讨论
脾在中医基础理论中为后天之本，气血生化之源， 与机体的免疫功能和营养状况有 关，脾运失常，消化障碍，就会导致食欲不振，腹泻，消瘦，气血生化不足，导致免疫力下 降，机体抵抗力下降. IL-2,sIL-2R和CD2是淋巴细胞活化的重要标志. 我们曾在以往的 研究中 观察到脾虚患者外周血辅助性T细胞(Th)减少，抑制性T细胞(Ts)升高，T细胞分化能力下降 [3 ]IL-2主要是由Th细胞在抗原丝裂原刺激下和IL-1诱导下分泌的，Ts细胞抑制IL-2产 生，IL- 2具有促进细胞增殖，促进T细胞杀伤的作用，能增强巨噬细胞，NK细胞活性，调节T细胞和B 细胞的分化与增殖[4,5]sIL-2R能以低亲和力结合IL-2，可与淋巴细 胞膜上的IL-2R竞争IL-2，从而抑制IL-2对淋巴细胞的增殖刺激作用，中和细胞周围的IL -2，减弱机体的自分泌效 应而起类似封闭因子的作用[6]. 正常人血清中存在少量sIL-2R. 人淋巴细胞CD 2分子是参 与细胞粘附和活化的重要糖蛋白分子，CD2参与T细胞活化，T细胞被激活，CD2 mRNA水 平上升 ，激活受抑制状态下降[7]. 我们研究表明， 脾虚患者血浆IL-2和CD2 mRNA水 平下降，sIL-2 R水平明显升高， 提示脾虚患者外周淋巴细胞处于抑制状态，活化的T细胞静息下来， 从而 表现为脾虚患者免疫功能低下.
, 百拇医药
T细胞对B淋巴细胞合成IgE具有调节作用，在CD4T细胞系Th1细胞产生IL- 2,干 扰素-γ ，Th2细胞能分泌IL-4，IL-5. 本实验结果表明脾虚患者血浆IL-4, IL-5及IgE水平低 于正 常组，同时外周淋巴细胞中IL-4,IL-5 mRNA弱表达，并与血浆IL-4,IL-5水平呈明显相 关关系 . 我们发现脾虚患者Th2淋巴细胞亚群被抑制可能是一系列细胞因子释放减少的促发因素，T 淋巴细胞的激素使其IL-4,IL-5基因表达减弱，分泌至血浆的IL-4,IL-5随之减少，IL- 4又是 激活B细胞使之表达 IgE的重要因素之一，伴随IL-4下降，IgE也呈下降态势， 脾虚患者表 现为细胞免疫和体液免疫功能的下降.
细胞粘附因子(cellular adhesion moleculs,CAM) 是位于多种细胞表面的一类 大分子 蛋白，它通过介导细胞与细胞间，细胞与细胞外基质间的粘附作用，参与一系列生理、病理 过程，是维持机体正常防御功能的重要基础. 正常人血清中存在低水平sICAM-1，它与位于 细胞表面的配体结合后，可抑制细胞过度粘附，从而参与细胞粘附功能的调节. 在低浓度时 ，sICAM-1的抗粘附作用很弱， 在病理情况时，sICAM水平升高,抗粘附作用显著增强， 使 白 细胞粘附功能明显降低，从而导致患者免疫能力的降低[8-10]. TNF-α由激活的 单核巨 噬细胞产生的一种具有多种生物学效应的细胞调节因子，有多种免疫调节功能. 本研究结果 显示，脾虚患者sICAM-1水平升高，TNF-α下降，表现为非特异性免疫功能的失调. 我们发现脾虚时其各种细胞因子分泌紊乱，功能失常，表现为细胞免疫和体液免疫功能 的低下，与中医对“脾为之卫”、“脾旺不受邪”认识相符合. 经用四君子汤治疗后，患者 各项症状缓解，血浆IL-2,IL-4,IL-5和TNF-α水平升高，IgE分泌增多，CD2 mRNA,IL -4 mRNA, IL-5 mRNA呈高表达，sICAM-1和sIL-2R 水平下降，说明脾不仅与免疫具有密切关系，而 且说 明四君子汤可通过健脾补气增加脾的胃气和卫气功能从而调节免疫功能. 同时表明血浆IL- 2 ,IL-4,IL-5,TNF- α，IgE及CD2 mRNA，IL-4 mRNA，IL-5 mRNA和sICAM-1，sIL-2 R 水平的变化 是脾虚证的重要参考指标之一，也说明四君子汤可调整机体内细胞因子的水平高低及功能状 态.
, 百拇医药
为验证四君子汤治疗脾虚证患者的作用，设立脾虚六味地黄汤治疗组，从同一证 型对不 同药物的反应性来说明实验的可靠性，结果脾虚六味地黄汤治疗组其各细胞因子水平的变化 及功能较脾虚组无明显改善. 中医理论重视整体观念，人体是有机的整体，结构上不可分割 ，功能上相互协调，病理上相互影响，这为脾虚时患者体内细胞因子水平及功能的改变提供 理论依据. 四君子汤益气健脾，调整胃肠道功能，可通过促进脾主运化，改善机体各种虚损 状况，增强机体的免疫功能，印证了中医对“脾为之卫”“脾旺不受邪”的认识. 至于四君 子汤对细胞因子的影响途径有待进一步探讨.
基金项目:国家自然科学基金资助项目(39270864)
作者简介：章梅(1966-)，女(汉族)，山西省临汾市人. 硕士,主治医师,讲师,发表论文32篇. Tel.(029)3375351
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收稿日期:1999-01-14; 修回日期:1999-03-21, http://www.100md.com
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