HMBA对K562巨噬细胞样分化过程中细胞周期的影响
作者：王哲 黄高升
单位：王哲(第四军医大学基础部病理学教研室, 陕西 西安 710033)；黄高升(第四军医大学基础部病理学教研室, 陕西 西安 710033)
关键词：HMBA；K562细胞；分化；巨噬细胞
第四军医大学学报000448 中图号：R753 文献标识码：D
文章编号：1000-2790(2000)04-S0057- 02
0 引言
K652细胞系建立于慢性髓性白血病患者胸水， 它可在多种分化诱导剂的诱导下向红细胞系[1]和巨核细胞系[2]分化. 最 近有人[3]报道K562细胞在诱导剂Hex amethylene bisacetamide (HMBA) 诱导下可向巨噬细胞样分化. 但在分化中HMBA对K562细 胞增殖的影响如何,尚未见文献报道.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 诱导方法 白血病细胞系K562由本校免疫学教研室金伯泉主任惠 赠. HMBA购自Sigma公司，水溶后配制为0.5 mol.L-1. 培养K562细胞至对数生长期 ，加HMBA至 培养液中，作用浓度为5 mmol.L-1，继续培养7 d后用于各种指标测定. 并设未加药 处理的对照组.
1.2 联苯胺染色 2 mL 0.02 g.L-1联苯胺乙酸溶液中加入10 μL 300 mL.L-1 H2O2，与等体积细胞 培养液混合5 min后滴于玻片上显微镜下观察，细胞被蓝染者为阳性，随机计数100个细胞， 计算蓝染细胞百分比.
1.3 萘酚AS-D氯醋酸酯酶染色 制备K562细胞甩片，以萘酚AS-D氯醋酸酯( 购自Sigma公司)为底物按文献[4]方法染色.
, 百拇医药
1.4 吉姆萨-瑞氏染色、电镜观察、流式细胞仪 常规方法染色细胞甩片. 细 胞离心后用戊二醛固定制备超微切片经电镜观察并照相. 细胞固定后离心上流式细胞仪测定 细胞周期分布.
2 结果
HMBA处理7 d后的K562细胞经联苯胺染色后计数未见1个阳 性细胞，而对照组阳性率为12%. 萘酚AS-D氯醋酸酯酶染色对照组和处理组均未见阳性. 吉 姆萨-瑞氏染色显示经HMBA处理 的细胞呈巨噬细胞样改变，较对照组细胞核质比例减小，胞质嗜碱性减少，颗粒增多，核染 色质松散，胞膜皱折增多(图 1). 电镜下可见诱导后的细胞胞质内出现一种卵圆形或菱形颗 粒，中间有一晶状核心(图 2). HMBA处理后的细胞在流式细胞仪结果中可见G0/G1期峰明 显升高，而G2，S期峰明显降低(图 3).
图 1 K562细胞经HMBA诱导前后细胞的形态变化
, http://www.100md.com
A. HMBA诱导前； B. HMBA诱导后.
图 2 电镜观察K562细胞经HMBA诱导后出现细胞内特征性颗粒
图 3 流式细胞仪观察K562细胞经HMBA诱导后细胞周期分布的变化
A.HMBA诱导前；B. HMBA诱导后.
3 讨论
联苯胺染色主要是显示细胞内的血红蛋白,HMBA诱导的K56 2细胞在联苯胺染色后未出现 阳性细胞,表明HMBA诱导后K562细胞没有向红系分化. 萘酚AS-D氯醋酸酯酶染色阴性则表明 诱导后的细胞也未向中性粒细胞分化,吉姆萨-瑞氏染色后的细胞形态与巨噬细胞形态特别 相 似. 在电镜下观察到的K562细胞在诱导后出现的细胞内特征性颗粒只在嗜酸性粒细胞和巨噬 细胞中出现,因此我们推断HMBA诱导后的K562细胞是向巨噬细胞样方向分化. 这一结果与文 献 中相同[3]. 表明我们成功地复制了这一模型. 同时我们还观察了HMBA对K562细胞 增殖抑制的 作用,流式细胞仪检测的细胞周期的分布结果显示HMBA诱导后的K562细胞的增殖受到明显抑 制. 当然在HMBA的诱导下K562细胞向巨噬细胞分化这一结论还需要有一些细胞表面标志抗原 的检测,因此我们的研究还需进一步深入.同时,HMBA为何会引起K562细胞向巨噬细胞样分化, 为何引起细胞周期明显的改变,其分子机制尚需深入研究.
, http://www.100md.com
作者简介：王哲(1970-)，男(汉族),内蒙古包头市人. 博士，医师. Te l.(029)3374541 Ext.318
参考文献：
[1] Andersson LC, Jokinen M, Gahmberg CG. Induction of erythroid differentiat ion in the human leukemia cell line K562[J]. Nature, 1979; 278(3):364-370.
[2] Alitalo R. Induced differentiation of K562 leukemia cells:A model for stu dies of gene expression in early megakaryoblasts[J]. Leuk Res, 1990; 14(6) :501-508.
, 百拇医药
[3] Green ARS, Rockmen S, Deluca E et al. Induced myeloid differen tiation of K 562. cells downregulation of erythroid and megakaryocytic trascription factors:A novel experimental model for hemopoietic lineage restriction[J]. Exp Hemato l， 1993; 21(5):525-531.
[4] Stansfeld AG. Lymph node biopsy interpretation[M]. Edinburgh : Churchill livingstone, 1985:35-37.
收稿日期:1999-05-14; 修回日期:1999-06-20, http://www.100md.com
单位：王哲(第四军医大学基础部病理学教研室, 陕西 西安 710033)；黄高升(第四军医大学基础部病理学教研室, 陕西 西安 710033)
关键词：HMBA；K562细胞；分化；巨噬细胞
第四军医大学学报000448 中图号：R753 文献标识码：D
文章编号：1000-2790(2000)04-S0057- 02
0 引言
K652细胞系建立于慢性髓性白血病患者胸水， 它可在多种分化诱导剂的诱导下向红细胞系[1]和巨核细胞系[2]分化. 最 近有人[3]报道K562细胞在诱导剂Hex amethylene bisacetamide (HMBA) 诱导下可向巨噬细胞样分化. 但在分化中HMBA对K562细 胞增殖的影响如何,尚未见文献报道.
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1 材料和方法
1.1 诱导方法 白血病细胞系K562由本校免疫学教研室金伯泉主任惠 赠. HMBA购自Sigma公司，水溶后配制为0.5 mol.L-1. 培养K562细胞至对数生长期 ，加HMBA至 培养液中，作用浓度为5 mmol.L-1，继续培养7 d后用于各种指标测定. 并设未加药 处理的对照组.
1.2 联苯胺染色 2 mL 0.02 g.L-1联苯胺乙酸溶液中加入10 μL 300 mL.L-1 H2O2，与等体积细胞 培养液混合5 min后滴于玻片上显微镜下观察，细胞被蓝染者为阳性，随机计数100个细胞， 计算蓝染细胞百分比.
1.3 萘酚AS-D氯醋酸酯酶染色 制备K562细胞甩片，以萘酚AS-D氯醋酸酯( 购自Sigma公司)为底物按文献[4]方法染色.
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1.4 吉姆萨-瑞氏染色、电镜观察、流式细胞仪 常规方法染色细胞甩片. 细 胞离心后用戊二醛固定制备超微切片经电镜观察并照相. 细胞固定后离心上流式细胞仪测定 细胞周期分布.
2 结果
HMBA处理7 d后的K562细胞经联苯胺染色后计数未见1个阳 性细胞，而对照组阳性率为12%. 萘酚AS-D氯醋酸酯酶染色对照组和处理组均未见阳性. 吉 姆萨-瑞氏染色显示经HMBA处理 的细胞呈巨噬细胞样改变，较对照组细胞核质比例减小，胞质嗜碱性减少，颗粒增多，核染 色质松散，胞膜皱折增多(图 1). 电镜下可见诱导后的细胞胞质内出现一种卵圆形或菱形颗 粒，中间有一晶状核心(图 2). HMBA处理后的细胞在流式细胞仪结果中可见G0/G1期峰明 显升高，而G2，S期峰明显降低(图 3).
图 1 K562细胞经HMBA诱导前后细胞的形态变化
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A. HMBA诱导前； B. HMBA诱导后.
图 2 电镜观察K562细胞经HMBA诱导后出现细胞内特征性颗粒
图 3 流式细胞仪观察K562细胞经HMBA诱导后细胞周期分布的变化
A.HMBA诱导前；B. HMBA诱导后.
3 讨论
联苯胺染色主要是显示细胞内的血红蛋白,HMBA诱导的K56 2细胞在联苯胺染色后未出现 阳性细胞,表明HMBA诱导后K562细胞没有向红系分化. 萘酚AS-D氯醋酸酯酶染色阴性则表明 诱导后的细胞也未向中性粒细胞分化,吉姆萨-瑞氏染色后的细胞形态与巨噬细胞形态特别 相 似. 在电镜下观察到的K562细胞在诱导后出现的细胞内特征性颗粒只在嗜酸性粒细胞和巨噬 细胞中出现,因此我们推断HMBA诱导后的K562细胞是向巨噬细胞样方向分化. 这一结果与文 献 中相同[3]. 表明我们成功地复制了这一模型. 同时我们还观察了HMBA对K562细胞 增殖抑制的 作用,流式细胞仪检测的细胞周期的分布结果显示HMBA诱导后的K562细胞的增殖受到明显抑 制. 当然在HMBA的诱导下K562细胞向巨噬细胞分化这一结论还需要有一些细胞表面标志抗原 的检测,因此我们的研究还需进一步深入.同时,HMBA为何会引起K562细胞向巨噬细胞样分化, 为何引起细胞周期明显的改变,其分子机制尚需深入研究.
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作者简介：王哲(1970-)，男(汉族),内蒙古包头市人. 博士，医师. Te l.(029)3374541 Ext.318
参考文献：
[1] Andersson LC, Jokinen M, Gahmberg CG. Induction of erythroid differentiat ion in the human leukemia cell line K562[J]. Nature, 1979; 278(3):364-370.
[2] Alitalo R. Induced differentiation of K562 leukemia cells:A model for stu dies of gene expression in early megakaryoblasts[J]. Leuk Res, 1990; 14(6) :501-508.
, 百拇医药
[3] Green ARS, Rockmen S, Deluca E et al. Induced myeloid differen tiation of K 562. cells downregulation of erythroid and megakaryocytic trascription factors:A novel experimental model for hemopoietic lineage restriction[J]. Exp Hemato l， 1993; 21(5):525-531.
[4] Stansfeld AG. Lymph node biopsy interpretation[M]. Edinburgh : Churchill livingstone, 1985:35-37.
收稿日期:1999-05-14; 修回日期:1999-06-20, http://www.100md.com