人胎儿脾NPY，CGRP，SP和VIP神经的分布
作者：陈竺 张远强 蒋尔鹏 补永安 席芳
单位：陈竺 席芳(乌鲁木齐军医学院解剖学教研室，新疆 呼图壁 831200)；张远强 蒋尔鹏 补永安(第四军医大学基础部组织学与胚胎学教研室，陕西 西安 710033)
关键词：神经肽；肽能神经；脾；免疫组织化学；人胎儿
第四军医大学学报001015 摘 要： 目的 研究人胎儿脾NPY，CGRP，SP和VIP神经的分布和意义. 方法 应用抗NPY，CGRP，SP和VIP的ABC免疫组织化学法结合GDN显色技术研究人胎儿脾肽能神经的定位和分布. 结果 NPY-IR神经纤维沿脾的动脉、静脉及其分支走行，在被膜、小梁、白髓、红髓和边缘区亦有分布.CGRP-IR和SP-IR神经纤维在脾脏的分布相同，主要沿脾动脉走行，中央动脉周围尤为丰富，白髓和红髓的淋巴组织中有少许分布.VIP-IR神经纤维主要分布在中央动脉周围，白髓和边缘区有零星分布.人脾肽能神经纤维末梢与免疫细胞接触密切，揭示它们对免疫细胞的发育和活性具有调节作用. 结论 人脾含NPY，CGRP，SP和VIP神经的发现，为研究神经肽调节人脾的免疫功能提供了形态学基础.
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中图号：R329 文献标识码：A
文章编号：1000-2790(2000)10-1215-04
Distribution of NPY-, CGRP-, SP-, VIP- nerves in spleen of human fetus
CHEN Zhu,XI Fang
(Department of Anatomy, Urumqi Military Medical College, Hutubi 831200, China)
ZHANG Yuan-Qiang, JIANG Er-Peng, BU Yong-An
(Department of Histology and Embryology, Faculty of Preclinical Medicine, Fourth Military Medical University, Xi'an 710033)
, 百拇医药
Abstract: AIM To study the distribution and significance of NPY-, CGRP-, SP-, VIP-containing nerves in the spleen of human fetus. METHODS The localization and distribution of peptidergic nerves in the human fetal spleen were identified with anti-NPY, CGRP, SP, VIP immunohistochemical ABC method combined with nickel enhancement technique. RESULTS The nerve fibers containing NPY immunoreactivity were mainly distributed along the branches of arteries and veins. They were also observed in the capsule, in the lymphoid tissues of white pulp, red pulp and marginal zone. Fibers staining for CGRP and SP were completely overlapped indicating coexistence. They were present in perivascular plexus supplying arteries. Some CGRP-IR and SP-IR fibers traveled between the lymphoid tissue of white pulp and red pulp. VIP-IR nerve fibers occurred around the central arterioles. Only very rarely did they course in the lymphoid parenchyma. The positive fibers were closely contacted with immunocytes, which suggested that they might regulate the development and activity of immunocytes. CONCLUSION These findings provide morphological evidence for studies concerning the neuropeptide involved in the regulation of the local spleen immune function.
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Keywords: neuropeptide; peptidergic nerve; spleen; immunohistochemistry; human fetus
0 引言
免疫器官的神经支配是当今神经免疫调节的重要研究课题之一.较早的研究资料表明，哺乳类淋巴结有儿茶酚胺能神经纤维分布[1].近几年来，一些学者陆续在胸腺、脾、淋巴结及粘膜相关的淋巴组织中发现数种含肽神经支配，但多数资料主要来自对大鼠、豚鼠等动物的研究，尚未见到有关人胎儿脾肽能神经支配的报道[2-6].我们采用敏感的ABC免疫组织化学方法结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍胺显色技术(ABC-GDN法)，研究了神经肽Y(neuropeptide Y， NPY)，降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide， CGRP)，P物质(substance P， SP)，血管活性肠肽(vasoactive intestinal polypeptide， VIP)免疫反应(immunoreactive, IR)阳性神经纤维在人胎儿脾的定位和分布，并对其作用途径和生理意义进行了讨论.
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1 材料和方法
1.1 材料 水囊引产人胎儿9(男4，女5)例.按末次月经计算胎龄，4～6 mo 4例，7～9 mo 5例.
1.2 方法 胎儿于死后0.5～4 h内经左心室相继灌注：①生理盐水300～500 mL；②固定液(40 mL*L-1多聚甲醛+2 mL*L-1苦味酸，溶于0.1 mol*L-1PB pH 6.9～7.0)约500～800 mL于室温下速灌，约500～1000 mL慢速灌约1.5～2 h；之后立即取出脾浸入相同固定液4℃下12～24 h，再转入200 g*L-1蔗糖PB液4℃下1～3 d.恒冷箱连续切片，厚20～25 μm，裱贴于预先涂有10 g*L-1铬矾明胶的玻片上，室温干燥1 h，用ABC法进行免疫组织化学染色：①5 g*L-1Triton X-100 37℃,30 min；②10 mL*L-1猪血清封闭30 min，室温；③分别入兔抗NPY(Serotec, 1∶4000),兔抗CGRP(Serotec, 1∶5000)，兔抗VIP(INC， 1∶3000)，兔抗SP(INC， 1∶5000)，4℃，48 h；④生物素化猪抗兔IgG(Dako, 1∶500)，室温，3 h；⑤卵白素-生物素复合物(ABC， Dako, 1∶200)，室温，2 h；⑥GDN显色反应(硫酸镍胺100 mg，氯化铵4 mg，β-D葡萄糖20 mg，DAB 2 mg溶于10 mL 0.1 mol*L-1(pH 6.0)的醋酸缓冲液中，完全溶解后，加入葡萄糖氧化酶0.5 mg，滴片显色10 min，镜下控制显色程度[7].以上各步骤之间均用0.01 mol*L-1磷酸缓冲液(PBS, pH 7.2)洗15 min (5 min×3).空气干燥，10 mL*L-1中性红复染，脱水透明，DPX封片.
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阴性对照：每种抗体染色均设空白(PBS取代一抗)和替代(正常兔血清取代一抗)对照.标本用Olympus BHS显微镜观察并照相.
2 结果
经ABC-GDN法染色的人胎脾恒冷箱切片标本内具有NPY-IR，CGRP-IR，SP-IR和VIP-IR阳性神经纤维.免疫反应性神经纤维呈深蓝色，多数沿脾血管分支走行，纤维和膨体清晰完整，呈串球状或点线状，膨体明显，背景组织着色浅淡，对比明显，各个体标本间阳性结果一致.所有阴性对照未见特异性着色.NPY-IR 阳性神经纤维随脾动、静脉血管分支走行.在脾动、静脉和小梁动、静脉，NPY-IR阳性纤维主要沿血管外膜和中膜环行(Fig 1，4).走行白髓动脉周围淋巴鞘和脾小体中的中央动脉周围的 NPY-IR阳性纤维尤为丰富(Fig 2)，阳性纤维位于血管中膜的平滑肌层，主要以环行走向为主，其间穿插少许纵向走行纤维，互相交织成网.NPY-IR阳性纤维也见于脾被膜中并随脾小梁深入到脾实质中(Fig 5).在白髓、红髓和边缘区也有含 NPY神经的分布(Fig 1，3)，这些纤维穿行于淋巴细胞之间，与淋巴细胞发生联系.走行于脾索中的神经纤维伸出分支到脾血窦壁上(Fig 3).CGRP-IR和SP-IR阳性神经纤维的分布似乎完全一致，呈典型的点线状分布，膨体明显.但其数量SP少于CGRP.主要沿脾动脉分支而走行，在中央动脉周围尤为丰富，纵向走行为主，少量环行或斜行纤维穿插其间(Fig 6).白髓和红髓的淋巴组织中亦有少许CGRP和SP阳性纤维分布，并与淋巴细胞和脾血窦发生接触(Fig 7).VIP-IR阳性神经纤维在脾小梁动、静脉的分布极少，主要分布在白髓的动脉周围淋巴鞘和脾小体的中央动脉周围，纵走为主，并深入到白髓及边缘区的淋巴组织中，穿行于淋巴细胞之间，与淋巴细胞接触密切(Fig 8).在白髓及被膜中未见到VIP-IR纤维.
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3 讨论
已有充分证据表明,免疫系统和外周神经系统之间存在着密切的相互关系.神经肽通过神经纤维与免疫细胞直接接触影响并调节免疫功能，免疫系统通过免疫细胞和免疫因子反馈作用于神经和内分泌系统，形成相互影响和制约的网络状复杂体系，如P物质(SP)即可影响非特异性免疫，亦能增强特异性免疫反应.但这些神经肽通过什么途径接近并影响免疫细胞并不清楚，因此研究免疫器官的肽能神经支配及其与免疫细胞的关系具有重要意义.我们通过ABC-GDN免疫组织化学方法研究了人胎脾NPY，CGRP，SP和VIP肽能神经的分布，所得结果与我们前期对大鼠、猴等动物脾的研究结果基本一致，即上述四种肽能神经主要沿脾脏血管系统分支走行[2-6].除此之外，我们还发现人脾被膜，脾实质的白髓、红髓和边缘区亦有肽能神经分布，但不同肽能神经的分布区域和密度有差异，这或许与不同神经肽在脾脏的作用途径及受体分布差异有关[8].
双重免疫标记证实多数支配大鼠脾脏血管系统的NPY-IR阳性神经纤维亦呈TH和DBH免疫反应阳性，且逆行标记也证明这些神经纤维主要来自腹腔肠系膜神经丛，部分来自胸交感神经节，这些神经节内大部分神经元呈NPY-IR阳性，说明脾脏含NPY的神经属交感性质，并且已有报道NPY与去甲肾上腺素在大鼠脾内神经末梢共存，在交感神经兴奋时一起释放，起协同作用[9]. NPY-IR神经纤维主要沿脾血管分支走行，且分支深入到管壁的平滑肌层. 现已明确NPY神经可能通过支配血管平滑肌，调节血管舒缩，并影响脾脏血流量和容积，从而间接影响脾脏
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图1 人胎儿脾NPY-IR神经纤维主要沿血管分布，在白髓和红髓也有散在分布
Fig 1 NPY-IR nerve fibers were mainly distributed along the arteries and veins. They were also seen in the lymphoid tissues of white pulp and red pulp ×100
RP: red pulp; CA: central arteriole; SC: splenic corpuscle.
图2 中央动脉外周NPY-IR神经纤维
Fig 2 NPY-IR nerve fibers around the central arteriole ×400
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图3 红髓脾索中NPY-IR神经纤维
Fig 3 NPY-IR nerve fibers in the splenic cord of the red pulp ×400
+S: sinusoid.
图4 脾静脉管壁中的NPY-IR神经纤维
Fig 4 NPY-IR nerve fibers around the splenic vein ×100
V: vein.
图5 脾被膜中的NPY-IR神经纤维
Fig 5 NPY-IR nerve fibers in the capsule ×100
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图6 中央动脉周围CGRP-IR神经纤维
Fig 6 CGRP-IR nerve fibers around the central arteriole ×400
图7 脾红髓脾索中的SP-IR神经纤维
Fig 7 SP-IR nerve fibers in the splenic cord of the red pulp ×100
图8 中央动脉外周VIP-IR神经纤维
Fig 8 VIP-IR nerve fibers in the central arteriole ×400
免疫细胞的发育和活性[10，11].我们发现NPY-IR神经纤维走行于脾淋巴组织中，与淋巴细胞发生密切接触，揭示含NPY神经对脾内淋巴细胞的发育和活性具有直接的调制作用.然而，目前还未在脾淋巴细胞上发现有NPY受体的报道，因此NPY在脾内分布的意义尚待进一步阐明.
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CGRP和SP神经纤维在人脾的分布几乎完全一致，主要沿脾动脉分布，在动脉周围淋巴鞘和脾小体的中央动脉管壁外周尤为丰富.在大鼠背根神经节中，CGRP-IR细胞较含其他神经肽的细胞多，约占节内神经细胞的35%～70%，且90%的含CGRP的神经元呈SP免疫反应阳性，CGRP和SP共存于同一背神经节细胞中.在大鼠腹腔神经节中未见含CGRP和SP的神经元胞体，但存在CGRP-IR神经纤维.由此我们推测，脾内CGRP-IR和SP-IR神经纤维可能来自背根神经节，为感觉神经元的周围分支.目前认为CGRP具有强烈的血管扩张作用，可能是最强的一种血管扩张剂.CGRP能增强缓激肽所致血管通透性增加，促进SP，神经激肽A和B的血浆外渗作用.CGRP的血管扩张作用在脑、胃肠道等部的小血管反应强烈，在股动脉、主动脉反应较弱，提示CGRP可能主要作用于小血管的平滑肌，从而调节血流，SP亦有同样作用，但不如CGRP强[12].我们所见CGRP-IR和SP-IR纤维主要于脾小血管和脾血窦分布.由此推测脾内含CGRP-IR纤维可能通过扩张血管及血窦调节脾血循环，间接影响免疫细胞的发育和功能.利用放射配体受体分析和放射自显影证实SP特异性受体主要见于大鼠脾脏边缘区的B细胞，小鼠脾脏白髓区的T细胞和B细胞.现已明确SP能促进B细胞合成免疫球蛋白(Ig)，并促进对抗原刺激的抗体分泌反应.同时SP可增加T细胞3H-TdR和3H-亮氨酸掺入，并可被SP受体阻断剂抑制；SP亦可增强由ConA和PHA所致的T淋巴细胞增殖反应.揭示SP可能是T细胞分裂原或辅助分裂原[8].体外实验证明CGRP可调制T细胞和巨噬细胞的免疫功能.
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基金项目：新疆军区卫生部资助课题
作者简介：陈竺(1969-)，男(汉族)，四川省仁寿县人. 讲师. Tel.(0994)4500033参考文献：
[1] Felton DL, Livnat S, Felton SY et al. Sympathetic innervation of lymph nodes in mice [J]. Brain Res Ball, 1984;13(6)：693-703.
[2] 吴中亮， 张远强， 苏慧慈. 神经肽Y免疫反应阳性神经纤维在大鼠脾脏内的分布[J]. 解剖学报， 1993；24(1)：27-29.
[3] 吴中亮， 张远强， 苏慧慈. 降钙素基因相关肽免疫反应神经纤维在大鼠脾的分布[J]. 解剖学报， 1993；24(4)：410-412.
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[4] 张金山， 苏慧慈， 张远强. 豚鼠回肠Peyer's结神经肽Y、P物质和降钙素基因相关肽神经的分布[J]. 解剖学报， 1995；26(2)：180-184.
[5] 张金山， 苏慧慈， 张远强. 神经肽Y免疫反应神经纤维在豚鼠肠系膜淋巴结的分布[J]. 解剖学报， 1995；26(4)：367-370.
[6] 张金山， 张远强， 苏慧慈. 豚鼠胸腺含P物质、降钙素基因相关肽和神经肽Y神经的定位研究[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志， 1996；5(3)：244-248.
[7] 张远强， 苏慧慈. 葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵法在免疫酶双重染色技术中的应用[J]. 动物学杂志， 1990；25(5)：35-38.
[8] 张万会， 朱运龙. P物质的免疫调节效应[J]. 生理科学进展， 1992；23(2)：116-120.
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[9] Nance EM, Burns J. Innervation of the spleen in the rat: Absence of afferent innervation [J]. Soc Neurosci Abstr Washington， 1989；15(Pt1)：714.
[10] Modin A, Pernow, Lundberg JM. Neuropeptide Y and differential sympathetic control of splenic blood flow and capacitance function in the pig and dog [J]. Acta Physiol Scand, 1993;147(1): 15-21.
[11] Modin A, Pernow, Lundberg JM. Comparison of the acute influence of neuropeptide Y and sympathetic stimulation on the composition of blood cells in the splenic vein in vivo [J]. Regul Pept， 1993；47(2)：159-164.
[12] 张远强， 苏慧慈. 心血管系统调节肽[J]. 国外医学心血管疾病分册， 1990；7(4)：222-226.
收稿日期：1999-12-24； 修回日期：2000-05-22, 百拇医药
单位：陈竺 席芳(乌鲁木齐军医学院解剖学教研室，新疆 呼图壁 831200)；张远强 蒋尔鹏 补永安(第四军医大学基础部组织学与胚胎学教研室，陕西 西安 710033)
关键词：神经肽；肽能神经；脾；免疫组织化学；人胎儿
第四军医大学学报001015 摘 要： 目的 研究人胎儿脾NPY，CGRP，SP和VIP神经的分布和意义. 方法 应用抗NPY，CGRP，SP和VIP的ABC免疫组织化学法结合GDN显色技术研究人胎儿脾肽能神经的定位和分布. 结果 NPY-IR神经纤维沿脾的动脉、静脉及其分支走行，在被膜、小梁、白髓、红髓和边缘区亦有分布.CGRP-IR和SP-IR神经纤维在脾脏的分布相同，主要沿脾动脉走行，中央动脉周围尤为丰富，白髓和红髓的淋巴组织中有少许分布.VIP-IR神经纤维主要分布在中央动脉周围，白髓和边缘区有零星分布.人脾肽能神经纤维末梢与免疫细胞接触密切，揭示它们对免疫细胞的发育和活性具有调节作用. 结论 人脾含NPY，CGRP，SP和VIP神经的发现，为研究神经肽调节人脾的免疫功能提供了形态学基础.
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中图号：R329 文献标识码：A
文章编号：1000-2790(2000)10-1215-04
Distribution of NPY-, CGRP-, SP-, VIP- nerves in spleen of human fetus
CHEN Zhu,XI Fang
(Department of Anatomy, Urumqi Military Medical College, Hutubi 831200, China)
ZHANG Yuan-Qiang, JIANG Er-Peng, BU Yong-An
(Department of Histology and Embryology, Faculty of Preclinical Medicine, Fourth Military Medical University, Xi'an 710033)
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Abstract: AIM To study the distribution and significance of NPY-, CGRP-, SP-, VIP-containing nerves in the spleen of human fetus. METHODS The localization and distribution of peptidergic nerves in the human fetal spleen were identified with anti-NPY, CGRP, SP, VIP immunohistochemical ABC method combined with nickel enhancement technique. RESULTS The nerve fibers containing NPY immunoreactivity were mainly distributed along the branches of arteries and veins. They were also observed in the capsule, in the lymphoid tissues of white pulp, red pulp and marginal zone. Fibers staining for CGRP and SP were completely overlapped indicating coexistence. They were present in perivascular plexus supplying arteries. Some CGRP-IR and SP-IR fibers traveled between the lymphoid tissue of white pulp and red pulp. VIP-IR nerve fibers occurred around the central arterioles. Only very rarely did they course in the lymphoid parenchyma. The positive fibers were closely contacted with immunocytes, which suggested that they might regulate the development and activity of immunocytes. CONCLUSION These findings provide morphological evidence for studies concerning the neuropeptide involved in the regulation of the local spleen immune function.
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Keywords: neuropeptide; peptidergic nerve; spleen; immunohistochemistry; human fetus
0 引言
免疫器官的神经支配是当今神经免疫调节的重要研究课题之一.较早的研究资料表明，哺乳类淋巴结有儿茶酚胺能神经纤维分布[1].近几年来，一些学者陆续在胸腺、脾、淋巴结及粘膜相关的淋巴组织中发现数种含肽神经支配，但多数资料主要来自对大鼠、豚鼠等动物的研究，尚未见到有关人胎儿脾肽能神经支配的报道[2-6].我们采用敏感的ABC免疫组织化学方法结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍胺显色技术(ABC-GDN法)，研究了神经肽Y(neuropeptide Y， NPY)，降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide， CGRP)，P物质(substance P， SP)，血管活性肠肽(vasoactive intestinal polypeptide， VIP)免疫反应(immunoreactive, IR)阳性神经纤维在人胎儿脾的定位和分布，并对其作用途径和生理意义进行了讨论.
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1 材料和方法
1.1 材料 水囊引产人胎儿9(男4，女5)例.按末次月经计算胎龄，4～6 mo 4例，7～9 mo 5例.
1.2 方法 胎儿于死后0.5～4 h内经左心室相继灌注：①生理盐水300～500 mL；②固定液(40 mL*L-1多聚甲醛+2 mL*L-1苦味酸，溶于0.1 mol*L-1PB pH 6.9～7.0)约500～800 mL于室温下速灌，约500～1000 mL慢速灌约1.5～2 h；之后立即取出脾浸入相同固定液4℃下12～24 h，再转入200 g*L-1蔗糖PB液4℃下1～3 d.恒冷箱连续切片，厚20～25 μm，裱贴于预先涂有10 g*L-1铬矾明胶的玻片上，室温干燥1 h，用ABC法进行免疫组织化学染色：①5 g*L-1Triton X-100 37℃,30 min；②10 mL*L-1猪血清封闭30 min，室温；③分别入兔抗NPY(Serotec, 1∶4000),兔抗CGRP(Serotec, 1∶5000)，兔抗VIP(INC， 1∶3000)，兔抗SP(INC， 1∶5000)，4℃，48 h；④生物素化猪抗兔IgG(Dako, 1∶500)，室温，3 h；⑤卵白素-生物素复合物(ABC， Dako, 1∶200)，室温，2 h；⑥GDN显色反应(硫酸镍胺100 mg，氯化铵4 mg，β-D葡萄糖20 mg，DAB 2 mg溶于10 mL 0.1 mol*L-1(pH 6.0)的醋酸缓冲液中，完全溶解后，加入葡萄糖氧化酶0.5 mg，滴片显色10 min，镜下控制显色程度[7].以上各步骤之间均用0.01 mol*L-1磷酸缓冲液(PBS, pH 7.2)洗15 min (5 min×3).空气干燥，10 mL*L-1中性红复染，脱水透明，DPX封片.
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阴性对照：每种抗体染色均设空白(PBS取代一抗)和替代(正常兔血清取代一抗)对照.标本用Olympus BHS显微镜观察并照相.
2 结果
经ABC-GDN法染色的人胎脾恒冷箱切片标本内具有NPY-IR，CGRP-IR，SP-IR和VIP-IR阳性神经纤维.免疫反应性神经纤维呈深蓝色，多数沿脾血管分支走行，纤维和膨体清晰完整，呈串球状或点线状，膨体明显，背景组织着色浅淡，对比明显，各个体标本间阳性结果一致.所有阴性对照未见特异性着色.NPY-IR 阳性神经纤维随脾动、静脉血管分支走行.在脾动、静脉和小梁动、静脉，NPY-IR阳性纤维主要沿血管外膜和中膜环行(Fig 1，4).走行白髓动脉周围淋巴鞘和脾小体中的中央动脉周围的 NPY-IR阳性纤维尤为丰富(Fig 2)，阳性纤维位于血管中膜的平滑肌层，主要以环行走向为主，其间穿插少许纵向走行纤维，互相交织成网.NPY-IR阳性纤维也见于脾被膜中并随脾小梁深入到脾实质中(Fig 5).在白髓、红髓和边缘区也有含 NPY神经的分布(Fig 1，3)，这些纤维穿行于淋巴细胞之间，与淋巴细胞发生联系.走行于脾索中的神经纤维伸出分支到脾血窦壁上(Fig 3).CGRP-IR和SP-IR阳性神经纤维的分布似乎完全一致，呈典型的点线状分布，膨体明显.但其数量SP少于CGRP.主要沿脾动脉分支而走行，在中央动脉周围尤为丰富，纵向走行为主，少量环行或斜行纤维穿插其间(Fig 6).白髓和红髓的淋巴组织中亦有少许CGRP和SP阳性纤维分布，并与淋巴细胞和脾血窦发生接触(Fig 7).VIP-IR阳性神经纤维在脾小梁动、静脉的分布极少，主要分布在白髓的动脉周围淋巴鞘和脾小体的中央动脉周围，纵走为主，并深入到白髓及边缘区的淋巴组织中，穿行于淋巴细胞之间，与淋巴细胞接触密切(Fig 8).在白髓及被膜中未见到VIP-IR纤维.
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3 讨论
已有充分证据表明,免疫系统和外周神经系统之间存在着密切的相互关系.神经肽通过神经纤维与免疫细胞直接接触影响并调节免疫功能，免疫系统通过免疫细胞和免疫因子反馈作用于神经和内分泌系统，形成相互影响和制约的网络状复杂体系，如P物质(SP)即可影响非特异性免疫，亦能增强特异性免疫反应.但这些神经肽通过什么途径接近并影响免疫细胞并不清楚，因此研究免疫器官的肽能神经支配及其与免疫细胞的关系具有重要意义.我们通过ABC-GDN免疫组织化学方法研究了人胎脾NPY，CGRP，SP和VIP肽能神经的分布，所得结果与我们前期对大鼠、猴等动物脾的研究结果基本一致，即上述四种肽能神经主要沿脾脏血管系统分支走行[2-6].除此之外，我们还发现人脾被膜，脾实质的白髓、红髓和边缘区亦有肽能神经分布，但不同肽能神经的分布区域和密度有差异，这或许与不同神经肽在脾脏的作用途径及受体分布差异有关[8].
双重免疫标记证实多数支配大鼠脾脏血管系统的NPY-IR阳性神经纤维亦呈TH和DBH免疫反应阳性，且逆行标记也证明这些神经纤维主要来自腹腔肠系膜神经丛，部分来自胸交感神经节，这些神经节内大部分神经元呈NPY-IR阳性，说明脾脏含NPY的神经属交感性质，并且已有报道NPY与去甲肾上腺素在大鼠脾内神经末梢共存，在交感神经兴奋时一起释放，起协同作用[9]. NPY-IR神经纤维主要沿脾血管分支走行，且分支深入到管壁的平滑肌层. 现已明确NPY神经可能通过支配血管平滑肌，调节血管舒缩，并影响脾脏血流量和容积，从而间接影响脾脏
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图1 人胎儿脾NPY-IR神经纤维主要沿血管分布，在白髓和红髓也有散在分布
Fig 1 NPY-IR nerve fibers were mainly distributed along the arteries and veins. They were also seen in the lymphoid tissues of white pulp and red pulp ×100
RP: red pulp; CA: central arteriole; SC: splenic corpuscle.
图2 中央动脉外周NPY-IR神经纤维
Fig 2 NPY-IR nerve fibers around the central arteriole ×400
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图3 红髓脾索中NPY-IR神经纤维
Fig 3 NPY-IR nerve fibers in the splenic cord of the red pulp ×400
+S: sinusoid.
图4 脾静脉管壁中的NPY-IR神经纤维
Fig 4 NPY-IR nerve fibers around the splenic vein ×100
V: vein.
图5 脾被膜中的NPY-IR神经纤维
Fig 5 NPY-IR nerve fibers in the capsule ×100
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图6 中央动脉周围CGRP-IR神经纤维
Fig 6 CGRP-IR nerve fibers around the central arteriole ×400
图7 脾红髓脾索中的SP-IR神经纤维
Fig 7 SP-IR nerve fibers in the splenic cord of the red pulp ×100
图8 中央动脉外周VIP-IR神经纤维
Fig 8 VIP-IR nerve fibers in the central arteriole ×400
免疫细胞的发育和活性[10，11].我们发现NPY-IR神经纤维走行于脾淋巴组织中，与淋巴细胞发生密切接触，揭示含NPY神经对脾内淋巴细胞的发育和活性具有直接的调制作用.然而，目前还未在脾淋巴细胞上发现有NPY受体的报道，因此NPY在脾内分布的意义尚待进一步阐明.
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CGRP和SP神经纤维在人脾的分布几乎完全一致，主要沿脾动脉分布，在动脉周围淋巴鞘和脾小体的中央动脉管壁外周尤为丰富.在大鼠背根神经节中，CGRP-IR细胞较含其他神经肽的细胞多，约占节内神经细胞的35%～70%，且90%的含CGRP的神经元呈SP免疫反应阳性，CGRP和SP共存于同一背神经节细胞中.在大鼠腹腔神经节中未见含CGRP和SP的神经元胞体，但存在CGRP-IR神经纤维.由此我们推测，脾内CGRP-IR和SP-IR神经纤维可能来自背根神经节，为感觉神经元的周围分支.目前认为CGRP具有强烈的血管扩张作用，可能是最强的一种血管扩张剂.CGRP能增强缓激肽所致血管通透性增加，促进SP，神经激肽A和B的血浆外渗作用.CGRP的血管扩张作用在脑、胃肠道等部的小血管反应强烈，在股动脉、主动脉反应较弱，提示CGRP可能主要作用于小血管的平滑肌，从而调节血流，SP亦有同样作用，但不如CGRP强[12].我们所见CGRP-IR和SP-IR纤维主要于脾小血管和脾血窦分布.由此推测脾内含CGRP-IR纤维可能通过扩张血管及血窦调节脾血循环，间接影响免疫细胞的发育和功能.利用放射配体受体分析和放射自显影证实SP特异性受体主要见于大鼠脾脏边缘区的B细胞，小鼠脾脏白髓区的T细胞和B细胞.现已明确SP能促进B细胞合成免疫球蛋白(Ig)，并促进对抗原刺激的抗体分泌反应.同时SP可增加T细胞3H-TdR和3H-亮氨酸掺入，并可被SP受体阻断剂抑制；SP亦可增强由ConA和PHA所致的T淋巴细胞增殖反应.揭示SP可能是T细胞分裂原或辅助分裂原[8].体外实验证明CGRP可调制T细胞和巨噬细胞的免疫功能.
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基金项目：新疆军区卫生部资助课题
作者简介：陈竺(1969-)，男(汉族)，四川省仁寿县人. 讲师. Tel.(0994)4500033参考文献：
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收稿日期：1999-12-24； 修回日期：2000-05-22, 百拇医药