涎腺腺样囊性癌CKs及MSA免疫组化观察
作者：刘荣森 袁志萍 张海钟
单位：解放军总医院口腔科，北京 100853
关键词：涎腺；腺样囊性癌；免疫组化
军医进修学院学报990413 摘要 目的：应用一组抗体探讨涎腺腺样囊性癌(ACC)的免疫组化表型特征。方法：通过ABC免疫组化染色检测了 30 例涎腺ACC中 54 Kd 及 66/57 Kd 细胞角蛋白(CKs)及肌特异性肌动蛋白(MSA)的分布。结果：ACC基本上由 54 Kd 阳性细胞和MSA阳性细胞构成，这两类细胞不同比例的肿瘤性增生形成ACC的不同组织学构型。结论：ACC免疫组化表型与正常涎腺组织中的导管/腺泡单位的表型特征相似。
中国图书资料分类法分类号 R 781
Immunohistochemical expression of cytokeratins and muscle-specific actin in salivary gland adenoid cystic carcinoma
, 百拇医药
Liu Rongsen,Yuan Zhiping, Zhang Haizhong
(Department of Dentistry, General Hospital of PLA,Beijing 100853)
Abstract Objective: The purpose of this study was to determine the immunohistochemical profile of salivary gland adenoid cystic carcinoma(ACC). Methods:ABC immunohistochemical staining was used to demonstrate the expression of 54Kd, 66/57Kd cytokeratins (CKs) and muscle-specific actin(MSA) in 30 cases of ACC. Results: ACC was primarily composed of 54 Kd CK positive luminal epithelial and MSA positive modified myoepithelial cells. The proliferation of both cell types in varying proportion resulted in different cellular arrangements of ACC. Conclusions: The immunoprofile of ACC,for the studied antigens,is similar to that exhibited by the duct-acinar unit of normal salivary glands.
, 百拇医药
Key words salivary gland;immunohistochemistry; adenoid cystic carcinoma
腺样囊性癌(ACC)是较常见的涎腺恶性肿瘤之一，组织学上ACC大致由两类细胞构成：一类核小深染呈梭形或不规则形，另一种胞体较大呈椭圆或立方形。瘤细胞常排列成特征性的筛孔状结构。有人认为ACC起源于闰管储备细胞〔1,2〕 。不同观点认为起源于整个的导管/腺泡单位〔3〕 ，即肿瘤由仍具有相当分化潜能的腺泡细胞、闰管上皮及它们外周的肌上皮细胞增生而来〔4〕 。肌特异性肌动蛋白(MSA)已被证明是一种理想的肌上皮细胞标记物〔5〕 ，细胞角蛋白(CKs)在肿瘤组织中分布特征很大程度上与其起源的上皮细胞一致〔6〕 。
本研究使用抗CKs单抗(35 βH11, 34 βE12 )及抗MSA单抗HHF35标记ACC，建立ACC免疫组化表型特征并以期了解ACC的某些分化特征。
, 百拇医药
1 材料和方法
取用第四军医大学口腔医院病理科确诊的 30 例大小涎腺来源的ACC标本及10例正常涎腺组织，均为 10% 福尔马林固定，常规石蜡包埋， 4 μ 切片，0.1% 胰酶(difico)作用 30 min后行ABC免疫组化染色(ABC Kit,Victor)，所用一抗见表 1，方法基本同Hsu〔7〕 。以部分标本中的口腔粘膜上皮为CKs阳性对照，组织中小血管壁平滑肌为MSA阳性对照，不加一抗为阴性对照。
表1 ACC免疫组化染色用抗体 单抗
识别抗原
工作浓度
孵育时间
35βH11
, 百拇医药
54 Kd CK
1∶500
室温 l h
34βE12
66/57 Kd CK
1∶500
室温 l h
HHF35
MSA
1∶500
室温 l h
抗体为华盛顿大学医学院病理系提供
, 百拇医药
2 结 果
正常涎腺及ACC免疫组化结果见表 2。H-E染色下ACC细胞主要排列成以下三种结构：导管结构，由位于管腔面的立方状细胞和外周的梭形细胞构成；筛状结构，由梭形细胞围成许多称为“假囊”的囊腔，多个囊腔相连呈筛孔状，其间残留由立方状细胞围成的小管；团块状结构，由椭圆形瘤细胞围成实体团块。不同的病例中以上结构组合出现且多以某种结构为主，以此可将ACC分成导管型、筛状型和团块型。在本研究的 30 例ACC中，筛状结构在 25 例中存在，导管结构在 10 例中存在，团块结构只出现在 7 例中。图 1 A～C显示正常涎腺组织的免疫组化特征。图 2 A～F显示不同类型ACC的免疫组化特征。
表2 三种单抗标记正常涎腺及ACC组织结果 组织成分
抗 体
HHF35
, 百拇医药
35βH11
34βE12
正常涎腺
腺泡细胞
-
-/+
-
闰管上皮
-
+/++
+/++
肌上皮细胞
++
, 百拇医药
-
-/+
纹管细胞
-
-/+
-
排泄管腔面上皮
-
-/+
-
排泄管基底细胞
-
-
, 百拇医药 -/+
ACC组织
筛状型
梭形细胞
+/++
18(6)/25
-
0
-/+
(3)/25
立方状细胞
-
0
, 百拇医药
+/++
15(6)/25
+/++
22(1)/25
导管型
管腔上皮细胞
-
0
+/++
9(1)/10
+/++
9(1)/10
导管外周细胞
, http://www.100md.com
+/++
8(2)/10
-
0
-/+
2/10
实体团块型
团块主质细胞
-
0
+/++
6(1)/7
-/+
, 百拇医药
1(5)/7
团块外周细胞
+/++
4(2)/7
-
0
-
0
-，阴性染色；+，阳性染色；，强阳性染色；表中数字：分号下方为本型总例数，分号上方括号内为+例数，括号外为+例数
图1 正常涎腺组织免疫组化染色
, http://www.100md.com
A.35βH11，闰管细胞及腺泡细胞分别为强阳性和阳性 (×40)
B.34βE12，排泄管基底细胞阳性 (×20)
C.HHF35，肌上皮细胞强阳性 (×100)
图2 涎腺腺样囊性癌免疫组化染色
A.35βH11，肿瘤导管的腔面上皮阳性 (×40)
B.35βH11，筛状结构中残留的小导管上皮阳性 (×40)
C.35βH11，团块结构的主质细胞阳性 (×20)；
, 百拇医药
D.HHF35，肿瘤导管的管腔外周上皮阳性 (×40)
E.HHF35，筛状结构主质细胞阳性 (×40)
F.HHF35，团块结构外周细胞阳性，团块右下方有关似闰结构的肿
瘤性导管 (×40)
3 讨 论
本研究显示了不同分子量CK和MSA在ACC组织中的分布特点并与其在正常涎腺组织中的免疫组化表型相比较。正常涎腺细胞依其分布位置可分为二大类：管腔细胞和非管腔/基底细胞，前者包括腺泡细胞和各级导管临近管腔面的细胞，后者指位于腺泡及闰管外周的肌上皮细胞和排泄管外周的基底细胞。其中肌上皮细胞及其包绕的上皮构成导管/腺泡单位。一种观点认为ACC来源于闰管中的储备细胞，ACC是其增生分化的结果。另有研究提出ACC在组织学上模仿了导管/腺泡单位的结构，是肌上皮细胞及包绕的腺泡、闰管上皮肿瘤性增生的结果，因为已有证据表明正常腺泡细胞和肌上皮细胞仍有较强的分化潜能〔8〕 。ACC的不同细胞表型是二者不同程度分化增生的结果。ACC中的已修饰的肿瘤性肌上皮的存在及分布一直有争论，主要原因在于肿瘤性肌上皮在电镜下失去正常肌上皮的分化特点而难以辩认以及缺乏理想的肌上皮分化标记物〔9〕 。本实验结果显示，与文献报道一致，HHF35能特异、稳定清晰地标记正常涎腺中的肌上皮细胞，应是一种可靠的肌上皮分化指示标记物〔5〕。ACC基本上由35βH11阳性细胞和HHF35阳性细胞构成。前者位于肿瘤导管内层，筛状结构中残留小导管及团块结构主质内；后者则见于肿瘤导管外周、筛状结构主质细胞及团块外周。这两类细胞互补覆盖了ACC的几乎所有细胞成分。在导管状结构中二类细胞数目大致相当，筛状结构中HHF35阳性细胞占据绝大多数，团块结构中则35βH11阳性细胞占多数。结合正常涎腺组织结果可以看到ACC在结构上基本模仿涎腺中的导管/腺泡单位，即位于中央的35βH11阳性肿瘤性腺泡/闰管来源细胞及围绕在外周的HHF35阳性肿瘤性肌上皮细胞。腺泡/闰管分化来的瘤细胞与肌上皮细胞性分化的瘤细胞等量增生即可形成导管ACC结构；若肌上皮分化的瘤细胞过度增生可形成筛状结构，而肿瘤团块结构则是腺泡/闰管上皮来源的瘤细胞过度增生的结果。ACC的这些免疫组化表型特征提示ACC的发生与涎腺导管/腺泡单位的分化异常有关，且肌上皮来源的肿瘤性肌上皮细胞是ACC的主要构成细胞，这使ACC明显区别于组织学上与ACC类似的其它涎腺肿瘤如多形性腺瘤等，因为多形性腺瘤中很少见到呈MSA阳性的肌上皮分化的瘤细胞〔10〕，这在ACC的鉴别诊断中可能有一定意义。
, 百拇医药
参考文献
1 Batsakis SG, Regezi JA, Luna MA.Histogenesis of salivary gland neoplasms: a postulate with prognostic implications. J Laryngol Otol,1989, 103:939
2 Araujo VC, Sousa SOM.Expression of different keratins in salivary gland tumors. Oral Oncol Eur J Cancer, 1996, 32B(1):14
3 Burford-Mason AP,Dardick I,van Nostand P et al. Salivary gland neoplasms-stem cell histogenesis?J Laryngol Otol,1990, 104:521
, 百拇医药
4 Dardick I,Burford-Mason AP.Current status of histognetic and morphogenetic concepts of salivary gland tumorigenesis.Critical Rev Oral Bio Med,1993, 4:339
5 Zarbo RJ,Bacchi CE,Gown AM.Muscle-specific protein expression in normal salivary gland and pleomorohic adenomas;an immunocytochemical study with biochemical confirmation. Mod Pathol,1991, 4:621
6 Li C,Okamoto H,Ohmura K et al.Expression cytokeratins in Warthin's tumor of parotid gland:specific detection of individual cytokeratin type by monoclonal antibodies. Oral Oncol Eur J Cancer ,1996,32B(5):352
, 百拇医药
7 Hsu SM,Raine L,Franger H. Use of avidin-biotin peroxidase complex (ABC)in immunoperoxidase techniques. J Histochem Cytochem,1981, 29:577
8 Burford-Mason AP,Cummine MM,Brown DH et al. Immunhistochemical analysis of the proliferation capacity of duct and acinar cells during ligation-induced atrophy andsub- sequent regeneration of rat parotid gland. J Oral Pathol Med,1993, 22:440
9 Araujo VC, Araujo NS. Vimentin as a marker of myoepithelial cells in salivary gland tumors. Eur Arch Otorhinolaryngol,1990, 274:252
10 Araujo VC, Carvalho YR, Araujo NS. Actin versus vimentin in myoepithelial cells of salivary gland tumor. A comparative study.Oral Surg Oral Med Oral Pathol,1994, 77:387
(1999—05—04收稿，1999—06—12修回), 百拇医药
单位：解放军总医院口腔科，北京 100853
关键词：涎腺；腺样囊性癌；免疫组化
军医进修学院学报990413 摘要 目的：应用一组抗体探讨涎腺腺样囊性癌(ACC)的免疫组化表型特征。方法：通过ABC免疫组化染色检测了 30 例涎腺ACC中 54 Kd 及 66/57 Kd 细胞角蛋白(CKs)及肌特异性肌动蛋白(MSA)的分布。结果：ACC基本上由 54 Kd 阳性细胞和MSA阳性细胞构成，这两类细胞不同比例的肿瘤性增生形成ACC的不同组织学构型。结论：ACC免疫组化表型与正常涎腺组织中的导管/腺泡单位的表型特征相似。
中国图书资料分类法分类号 R 781
Immunohistochemical expression of cytokeratins and muscle-specific actin in salivary gland adenoid cystic carcinoma
, 百拇医药
Liu Rongsen,Yuan Zhiping, Zhang Haizhong
(Department of Dentistry, General Hospital of PLA,Beijing 100853)
Abstract Objective: The purpose of this study was to determine the immunohistochemical profile of salivary gland adenoid cystic carcinoma(ACC). Methods:ABC immunohistochemical staining was used to demonstrate the expression of 54Kd, 66/57Kd cytokeratins (CKs) and muscle-specific actin(MSA) in 30 cases of ACC. Results: ACC was primarily composed of 54 Kd CK positive luminal epithelial and MSA positive modified myoepithelial cells. The proliferation of both cell types in varying proportion resulted in different cellular arrangements of ACC. Conclusions: The immunoprofile of ACC,for the studied antigens,is similar to that exhibited by the duct-acinar unit of normal salivary glands.
, 百拇医药
Key words salivary gland;immunohistochemistry; adenoid cystic carcinoma
腺样囊性癌(ACC)是较常见的涎腺恶性肿瘤之一，组织学上ACC大致由两类细胞构成：一类核小深染呈梭形或不规则形，另一种胞体较大呈椭圆或立方形。瘤细胞常排列成特征性的筛孔状结构。有人认为ACC起源于闰管储备细胞〔1,2〕 。不同观点认为起源于整个的导管/腺泡单位〔3〕 ，即肿瘤由仍具有相当分化潜能的腺泡细胞、闰管上皮及它们外周的肌上皮细胞增生而来〔4〕 。肌特异性肌动蛋白(MSA)已被证明是一种理想的肌上皮细胞标记物〔5〕 ，细胞角蛋白(CKs)在肿瘤组织中分布特征很大程度上与其起源的上皮细胞一致〔6〕 。
本研究使用抗CKs单抗(35 βH11, 34 βE12 )及抗MSA单抗HHF35标记ACC，建立ACC免疫组化表型特征并以期了解ACC的某些分化特征。
, 百拇医药
1 材料和方法
取用第四军医大学口腔医院病理科确诊的 30 例大小涎腺来源的ACC标本及10例正常涎腺组织，均为 10% 福尔马林固定，常规石蜡包埋， 4 μ 切片，0.1% 胰酶(difico)作用 30 min后行ABC免疫组化染色(ABC Kit,Victor)，所用一抗见表 1，方法基本同Hsu〔7〕 。以部分标本中的口腔粘膜上皮为CKs阳性对照，组织中小血管壁平滑肌为MSA阳性对照，不加一抗为阴性对照。
表1 ACC免疫组化染色用抗体 单抗
识别抗原
工作浓度
孵育时间
35βH11
, 百拇医药
54 Kd CK
1∶500
室温 l h
34βE12
66/57 Kd CK
1∶500
室温 l h
HHF35
MSA
1∶500
室温 l h
抗体为华盛顿大学医学院病理系提供
, 百拇医药
2 结 果
正常涎腺及ACC免疫组化结果见表 2。H-E染色下ACC细胞主要排列成以下三种结构：导管结构，由位于管腔面的立方状细胞和外周的梭形细胞构成；筛状结构，由梭形细胞围成许多称为“假囊”的囊腔，多个囊腔相连呈筛孔状，其间残留由立方状细胞围成的小管；团块状结构，由椭圆形瘤细胞围成实体团块。不同的病例中以上结构组合出现且多以某种结构为主，以此可将ACC分成导管型、筛状型和团块型。在本研究的 30 例ACC中，筛状结构在 25 例中存在，导管结构在 10 例中存在，团块结构只出现在 7 例中。图 1 A～C显示正常涎腺组织的免疫组化特征。图 2 A～F显示不同类型ACC的免疫组化特征。
表2 三种单抗标记正常涎腺及ACC组织结果 组织成分
抗 体
HHF35
, 百拇医药
35βH11
34βE12
正常涎腺
腺泡细胞
-
-/+
-
闰管上皮
-
+/++
+/++
肌上皮细胞
++
, 百拇医药
-
-/+
纹管细胞
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-/+
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排泄管腔面上皮
-
-/+
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排泄管基底细胞
-
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, 百拇医药 -/+
ACC组织
筛状型
梭形细胞
+/++
18(6)/25
-
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-/+
(3)/25
立方状细胞
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0
, 百拇医药
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15(6)/25
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22(1)/25
导管型
管腔上皮细胞
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0
+/++
9(1)/10
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9(1)/10
导管外周细胞
, http://www.100md.com
+/++
8(2)/10
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实体团块型
团块主质细胞
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0
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6(1)/7
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1(5)/7
团块外周细胞
+/++
4(2)/7
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-，阴性染色；+，阳性染色；，强阳性染色；表中数字：分号下方为本型总例数，分号上方括号内为+例数，括号外为+例数
图1 正常涎腺组织免疫组化染色
, http://www.100md.com
A.35βH11，闰管细胞及腺泡细胞分别为强阳性和阳性 (×40)
B.34βE12，排泄管基底细胞阳性 (×20)
C.HHF35，肌上皮细胞强阳性 (×100)
图2 涎腺腺样囊性癌免疫组化染色
A.35βH11，肿瘤导管的腔面上皮阳性 (×40)
B.35βH11，筛状结构中残留的小导管上皮阳性 (×40)
C.35βH11，团块结构的主质细胞阳性 (×20)；
, 百拇医药
D.HHF35，肿瘤导管的管腔外周上皮阳性 (×40)
E.HHF35，筛状结构主质细胞阳性 (×40)
F.HHF35，团块结构外周细胞阳性，团块右下方有关似闰结构的肿
瘤性导管 (×40)
3 讨 论
本研究显示了不同分子量CK和MSA在ACC组织中的分布特点并与其在正常涎腺组织中的免疫组化表型相比较。正常涎腺细胞依其分布位置可分为二大类：管腔细胞和非管腔/基底细胞，前者包括腺泡细胞和各级导管临近管腔面的细胞，后者指位于腺泡及闰管外周的肌上皮细胞和排泄管外周的基底细胞。其中肌上皮细胞及其包绕的上皮构成导管/腺泡单位。一种观点认为ACC来源于闰管中的储备细胞，ACC是其增生分化的结果。另有研究提出ACC在组织学上模仿了导管/腺泡单位的结构，是肌上皮细胞及包绕的腺泡、闰管上皮肿瘤性增生的结果，因为已有证据表明正常腺泡细胞和肌上皮细胞仍有较强的分化潜能〔8〕 。ACC的不同细胞表型是二者不同程度分化增生的结果。ACC中的已修饰的肿瘤性肌上皮的存在及分布一直有争论，主要原因在于肿瘤性肌上皮在电镜下失去正常肌上皮的分化特点而难以辩认以及缺乏理想的肌上皮分化标记物〔9〕 。本实验结果显示，与文献报道一致，HHF35能特异、稳定清晰地标记正常涎腺中的肌上皮细胞，应是一种可靠的肌上皮分化指示标记物〔5〕。ACC基本上由35βH11阳性细胞和HHF35阳性细胞构成。前者位于肿瘤导管内层，筛状结构中残留小导管及团块结构主质内；后者则见于肿瘤导管外周、筛状结构主质细胞及团块外周。这两类细胞互补覆盖了ACC的几乎所有细胞成分。在导管状结构中二类细胞数目大致相当，筛状结构中HHF35阳性细胞占据绝大多数，团块结构中则35βH11阳性细胞占多数。结合正常涎腺组织结果可以看到ACC在结构上基本模仿涎腺中的导管/腺泡单位，即位于中央的35βH11阳性肿瘤性腺泡/闰管来源细胞及围绕在外周的HHF35阳性肿瘤性肌上皮细胞。腺泡/闰管分化来的瘤细胞与肌上皮细胞性分化的瘤细胞等量增生即可形成导管ACC结构；若肌上皮分化的瘤细胞过度增生可形成筛状结构，而肿瘤团块结构则是腺泡/闰管上皮来源的瘤细胞过度增生的结果。ACC的这些免疫组化表型特征提示ACC的发生与涎腺导管/腺泡单位的分化异常有关，且肌上皮来源的肿瘤性肌上皮细胞是ACC的主要构成细胞，这使ACC明显区别于组织学上与ACC类似的其它涎腺肿瘤如多形性腺瘤等，因为多形性腺瘤中很少见到呈MSA阳性的肌上皮分化的瘤细胞〔10〕，这在ACC的鉴别诊断中可能有一定意义。
, 百拇医药
参考文献
1 Batsakis SG, Regezi JA, Luna MA.Histogenesis of salivary gland neoplasms: a postulate with prognostic implications. J Laryngol Otol,1989, 103:939
2 Araujo VC, Sousa SOM.Expression of different keratins in salivary gland tumors. Oral Oncol Eur J Cancer, 1996, 32B(1):14
3 Burford-Mason AP,Dardick I,van Nostand P et al. Salivary gland neoplasms-stem cell histogenesis?J Laryngol Otol,1990, 104:521
, 百拇医药
4 Dardick I,Burford-Mason AP.Current status of histognetic and morphogenetic concepts of salivary gland tumorigenesis.Critical Rev Oral Bio Med,1993, 4:339
5 Zarbo RJ,Bacchi CE,Gown AM.Muscle-specific protein expression in normal salivary gland and pleomorohic adenomas;an immunocytochemical study with biochemical confirmation. Mod Pathol,1991, 4:621
6 Li C,Okamoto H,Ohmura K et al.Expression cytokeratins in Warthin's tumor of parotid gland:specific detection of individual cytokeratin type by monoclonal antibodies. Oral Oncol Eur J Cancer ,1996,32B(5):352
, 百拇医药
7 Hsu SM,Raine L,Franger H. Use of avidin-biotin peroxidase complex (ABC)in immunoperoxidase techniques. J Histochem Cytochem,1981, 29:577
8 Burford-Mason AP,Cummine MM,Brown DH et al. Immunhistochemical analysis of the proliferation capacity of duct and acinar cells during ligation-induced atrophy andsub- sequent regeneration of rat parotid gland. J Oral Pathol Med,1993, 22:440
9 Araujo VC, Araujo NS. Vimentin as a marker of myoepithelial cells in salivary gland tumors. Eur Arch Otorhinolaryngol,1990, 274:252
10 Araujo VC, Carvalho YR, Araujo NS. Actin versus vimentin in myoepithelial cells of salivary gland tumor. A comparative study.Oral Surg Oral Med Oral Pathol,1994, 77:387
(1999—05—04收稿，1999—06—12修回), 百拇医药