无细胞猪真皮植入鼠皮下组织形态学的观察
作者：吴志谷 耿淼 盛志勇 郭振荣 孙同柱 周宝桐
单位：解放军304医院烧伤研究所，北京 100037
关键词：无细胞真皮；移植；鼠
军医进修学院学报990429
中国图书资料分类法分类号 R 622.1
1 材料和方法
1.1 真皮的制备 Wistar鼠，雄性，体重 200 g，处死，胸背部剃毛，取下全层皮肤，用鼓式取皮机制成中厚皮片 (0.4～0.6 mm)。用胰蛋白酶和Triton-100 清除皮中所有的细胞，置-28 ℃ 冰箱冻存。使用前将真皮切成 10 mm × 10 mm 小片，置庆大霉素-生理盐水备用。中国五指山小型猪 30 kg，雄性，处死，背部剃毛，取全层皮肤。用鼓式取皮机制成中厚皮片 (0.6～1.0 mm)，其余步骤按上述方法处理。
, 百拇医药
1.2 真皮的埋藏 Wistar鼠 12 只，雄性，体重 300 g。在戊巴比妥钠 (2%， 每只 0.3～0.4 ml) 腹腔注射全麻下，背部剃毛，酒精消毒，于脊背中线切 15 mm 小口至深筋膜，用止血钳向切口两侧游离 20 mm。分别将鼠真皮或猪真皮埋藏在皮下(每组鼠 n＝6)，每侧各两块真皮。切口间断缝合 3 针，包扎固定，单笼饲养。
1.3 观察项目 定时观察切口及真皮埋藏部位组织有无红肿、感染。术后 2 周， 4 周、 8 和 24 周，分别取出皮下埋藏的真皮小片 (n＝4～8)，大体观察真皮、周围组织有无明显炎症反应并测定真皮面积。真皮组织学检查采用常规切片，HE染色，光学显微镜下观察炎细胞浸润及新生毛细血管长入真皮组织以及胶原结构的变化情况。
1.4 统计处理 对埋藏不同时间的真皮面积变化进行统计学处理，以平均和标准差表示，并以 P<0.05 表示差异有显著性意义。
, 百拇医药 2 结 果
2.1 一般情况 埋藏猪真皮和鼠真皮的Wistar鼠切口愈合良好， 2 周至 24 周真皮组织外观均无明显变化。但随着时间的延长，见真皮周围包有一层带血管的薄层组织。剥去该组织后真皮完整，呈瓷白色，柔软，富有弹性。术后 2 周真皮面积变化不明显； 4 周后真皮稍缩小。
2.2 埋藏不同时间真皮的面积 术后 2 周，两种真皮面积与对照组(最初真皮面积)没有显著差异(P>0.05)，鼠真皮和猪真皮面积分别为对照组真皮面积的 (97.5±13.0)% 和 (100.0±5.5)%。 4 周后两组真皮面积均有不同程度的缩小，鼠真皮为 75.5%～79.3%，猪真皮为 80.1%～85.5%，均与对照组差异非常显著(P<0.01)。但 4 周后直到 24 周两组真皮面积变化不显著。
2.3 组织学观察 术后 2 周，见两种真皮组织的浅层均有少许中性淋巴细胞-组织细胞浸润，包裹在真皮上的薄层组织中有较多的毛细血管。 4 至 8 周此类细胞继续向真皮中心浸润，真皮中可见到少许长入的毛细血管； 24 周真皮内仍有极少的炎细胞，但毛细血管增多且大。整个观察期间两种真皮仍保持最初的胶原结构。
, 百拇医药
3 讨论
本实验使用的真皮为胰蛋白酶和Triton-100 联合制备的无细胞猪皮，经植入Wistar鼠皮下 24 周的连续观察发现该真皮胶原结构良好、性能稳定，且埋藏真皮周围的组织无明显的炎症反应。猪异种真皮移植材料与同种异体Wistar鼠真皮在组织学上没有明显的差异。与之相反，我们以前按同样方法制作的Wistar鼠真皮，冻干后在常温下保存，在埋藏在Wistar鼠皮下埋藏 2 周后，其真皮几乎全部被消化吸收，显然是胶原变性所致。本实验采用 -28 ℃ 冰箱冷冻保存无细胞新鲜真皮，植入前用生理盐水解冻即可，此法不仅使用方便，而且保持了新鲜真皮良好的生物特性。
(1999—03—22收稿，1999—05—04修回), http://www.100md.com
单位：解放军304医院烧伤研究所，北京 100037
关键词：无细胞真皮；移植；鼠
军医进修学院学报990429
中国图书资料分类法分类号 R 622.1
1 材料和方法
1.1 真皮的制备 Wistar鼠，雄性，体重 200 g，处死，胸背部剃毛，取下全层皮肤，用鼓式取皮机制成中厚皮片 (0.4～0.6 mm)。用胰蛋白酶和Triton-100 清除皮中所有的细胞，置-28 ℃ 冰箱冻存。使用前将真皮切成 10 mm × 10 mm 小片，置庆大霉素-生理盐水备用。中国五指山小型猪 30 kg，雄性，处死，背部剃毛，取全层皮肤。用鼓式取皮机制成中厚皮片 (0.6～1.0 mm)，其余步骤按上述方法处理。
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1.2 真皮的埋藏 Wistar鼠 12 只，雄性，体重 300 g。在戊巴比妥钠 (2%， 每只 0.3～0.4 ml) 腹腔注射全麻下，背部剃毛，酒精消毒，于脊背中线切 15 mm 小口至深筋膜，用止血钳向切口两侧游离 20 mm。分别将鼠真皮或猪真皮埋藏在皮下(每组鼠 n＝6)，每侧各两块真皮。切口间断缝合 3 针，包扎固定，单笼饲养。
1.3 观察项目 定时观察切口及真皮埋藏部位组织有无红肿、感染。术后 2 周， 4 周、 8 和 24 周，分别取出皮下埋藏的真皮小片 (n＝4～8)，大体观察真皮、周围组织有无明显炎症反应并测定真皮面积。真皮组织学检查采用常规切片，HE染色，光学显微镜下观察炎细胞浸润及新生毛细血管长入真皮组织以及胶原结构的变化情况。
1.4 统计处理 对埋藏不同时间的真皮面积变化进行统计学处理，以平均和标准差表示，并以 P<0.05 表示差异有显著性意义。
, 百拇医药 2 结 果
2.1 一般情况 埋藏猪真皮和鼠真皮的Wistar鼠切口愈合良好， 2 周至 24 周真皮组织外观均无明显变化。但随着时间的延长，见真皮周围包有一层带血管的薄层组织。剥去该组织后真皮完整，呈瓷白色，柔软，富有弹性。术后 2 周真皮面积变化不明显； 4 周后真皮稍缩小。
2.2 埋藏不同时间真皮的面积 术后 2 周，两种真皮面积与对照组(最初真皮面积)没有显著差异(P>0.05)，鼠真皮和猪真皮面积分别为对照组真皮面积的 (97.5±13.0)% 和 (100.0±5.5)%。 4 周后两组真皮面积均有不同程度的缩小，鼠真皮为 75.5%～79.3%，猪真皮为 80.1%～85.5%，均与对照组差异非常显著(P<0.01)。但 4 周后直到 24 周两组真皮面积变化不显著。
2.3 组织学观察 术后 2 周，见两种真皮组织的浅层均有少许中性淋巴细胞-组织细胞浸润，包裹在真皮上的薄层组织中有较多的毛细血管。 4 至 8 周此类细胞继续向真皮中心浸润，真皮中可见到少许长入的毛细血管； 24 周真皮内仍有极少的炎细胞，但毛细血管增多且大。整个观察期间两种真皮仍保持最初的胶原结构。
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3 讨论
本实验使用的真皮为胰蛋白酶和Triton-100 联合制备的无细胞猪皮，经植入Wistar鼠皮下 24 周的连续观察发现该真皮胶原结构良好、性能稳定，且埋藏真皮周围的组织无明显的炎症反应。猪异种真皮移植材料与同种异体Wistar鼠真皮在组织学上没有明显的差异。与之相反，我们以前按同样方法制作的Wistar鼠真皮，冻干后在常温下保存，在埋藏在Wistar鼠皮下埋藏 2 周后，其真皮几乎全部被消化吸收，显然是胶原变性所致。本实验采用 -28 ℃ 冰箱冷冻保存无细胞新鲜真皮，植入前用生理盐水解冻即可，此法不仅使用方便，而且保持了新鲜真皮良好的生物特性。
(1999—03—22收稿，1999—05—04修回), http://www.100md.com