慢性乙型肝炎患者干扰素治疗与HBV PreC基因nt1896突变
作者：严新民 华映坤 董虹 高建梅 张平 张丽平
单位：650032 昆明，云南省人民医院
关键词：
中华传染病杂志980316 大剂量干扰素治疗慢性乙型肝炎是有效的，一些报道认为，HBV PreC基因nt1896的突变与血清HBeAg的表达和干扰素的治疗效果密切相关[1]。而血清HBeAg的转变常常作为乙型肝炎患者的治疗效果与临床病变观察指标。为了认识干扰素治疗与PreC基因nt1896“G”向“A”突变的关系，我们观察了21例干扰素治疗患者血清HBV PreC基因突变情况，现将资料报告如下。
材料与方法
一、临床资料
21例均为1995年6月至12月我院门诊与住院患者，全部病例均有半年以上的HBV感染病史，血清ALT多大于50单位，最高250单位，血清总胆红素高于20μmol/L,最高62μmol/L，诊断按1995年全国传染病与寄生虫病学术会议修订标准。血清HBeAg阳性12例，抗-HBe阳性9例。血清HBV DNA斑点杂交全部阳性，PCR法阳性。IFNα-2b为基因工程美国仙灵葆雅产品，治疗方法为一个月内每天肌注γ-IFNα-2b 300万单位，连续30天，以后隔日一次，连续60天。
, http://www.100md.com
二、方法
(一) 血清标本的采集 分别于治疗前1～3天、治疗结束时、治疗结束后3个月进行血清ALT、总胆红素、抗-HBe、HBeAg检测；HBV DNA分别采用斑点杂交和PCR法检测，检测试剂盒由上海医科大学免疫学教研室和华美公司提供，操作按说明书进行。另取血清0.5ml 60°C贮存，以备检测PreC基因点突变。
(二) HBV PreC基因nt 1896位碱基突变检测 采用错配碱基PCR法。即有“G”向“A”突变的设计引物HBVC2：5′-TCCAAGCTGTGCCTT-
GGGTGGTTTA-3′，正常无突变引物HBVC3：5′-TCCAAGCTGTGCCTT-
GGGTGGTTTG-3′，共同下游引物
附表 HBV PreC基因nt1896突变与干扰素治疗反应 编号
, 百拇医药
性别
年龄
感染
(M)
治疗前
治疗后3个月
治疗后6个月
抗-E
ALT
DNA
nt1896
抗-E
ALT
, http://www.100md.com
DNA
nt1896
抗-E
ALT
DNA
nt1896
1
24 /M
8
-
79
+
G
, 百拇医药 _
63
-
G
2
20 /M
7
-
61
+
G
-
42
-
, http://www.100md.com
G
+
44
PCR(-)
3
26 /M
11
-
72
+
G
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37
-
, http://www.100md.com
G
+
38
PCR(-)
4
22 /F
18
-
86
+
G
-
46
+
, 百拇医药
G
5
28 /M
9
-
284
+
G
+
48
-
G
6
42 /M
, 百拇医药
10
-
164
+
G
+
59
-
G
+
46
PCR(-)
7
29 /F
, 百拇医药
8
-
98
+
G
+
32
-
G
+
42
PCR(-)
8
19 /M
, 百拇医药
60
-
124
+
G /A
-
69
+
G /A
-
157
+
G /A
9
, 百拇医药
33 /M
25
-
68
+
G /A
-
68
+
G /A
-
64
+
G /A
, 百拇医药
10
25 /M
24
-
121
+
G /A
-
58
+
G /A
-
84
+
, http://www.100md.com
G /A
11
31 /M
24
-
165
+
G /A
-
150
+
G /A
-
, 百拇医药 132
+
G /A
12
39 /M
36
-
250
+
G /A
-
80
+
G /A
, 百拇医药
13
33 /M
106
+
142
+
G /A
+
47
+
G /A
+
420
+
, 百拇医药
A
14
40 /M
38
+
86
+
G /A
+
48
+
G /A
+
G /A
, http://www.100md.com
15
29 /M
26
+
124
+
G /A
+
142
-
G /A
16
28 /F
, 百拇医药 48
+
105
+
G /A
+
98
+
G /A
17
36 /F
33
+
78
, 百拇医药
+
G /A
+
82
+
G /A
18
29 /M
37
+
46
+
G /A
+
, 百拇医药
44
+
G /A
19
28 /F
17
+
101
+
+
87
+
20
40 /M
, http://www.100md.com
26
+
122
+
+
40
-
21
22 /M
8
+
38
+
+
, http://www.100md.com
36
+
注：DNA：HBV/DNA斑点杂交法；PCR(-)：HBV/DNA PCR法检测阴性；ALT：血清ALT(U/L)
HBVC4：5′-TGTGGAGGAGATCT-CGAATAGA-3′(我室自行设计合成)。PCR为标准三温循环。产物为127bp双链DNA，结果判别采用2%的琼脂糖和12%的聚丙酰胺凝胶电泳分析，由HBVC2/HBVC4扩增的模板是nt1896/“A”突变株，而由HBVC3/HBVC4扩增的模板则为“G”野生株。
结 果
21例患者中，有18例进行了HBV PreC基因nt1896位碱基突变的追踪观察，但6个月后的观察血清仅有10份，资料见附表。
, 百拇医药 讨 论
大剂量干扰素治疗慢性病毒性肝炎是常采用的方法。临床发现，干扰素治疗慢性乙型病毒性肝炎的效果仍不十分理想。有些病例在治疗3个月后甚至产生严重的反复。有效治疗反应的也仅在50%左右，疗效多限于血清病毒量的减少和部分肝功能改善。怎样选择适应干扰素治疗的病例和正确预测治疗反应，是临床医生所面临的重要问题。一些研究发现，血清HBeAg消失是由于HBV PreC基因nt1896位碱基突变，TGG密码突变为TAG终止密码，PreC基因不能顺利地转录前C基因信息，故HBeAg不能形成[2]。干扰素治疗对HBV病毒的抑制，血清HBeAg转阴很可能与病毒突变相关[3]。我们在21例干扰素治疗病例中发现，治疗较好的7例病例(例：1、2、3、4、5、6、7)均为野生nt1896“G”型，而治疗不太敏感的患者均有突变型“A”病毒，特别是一例严重反复的患者(例13)治疗后病毒全部转变为1896/“A”，我们的结果似说明nt1896“A”的突变病毒株不利于干扰素的治疗。突变病毒“G/A”混合感染患者血清ALT有不同程度的下降，这说明干扰素对“G/A”混合感染病毒也有抑制作用，但ALT下降没有“G”组明显。一例治疗后严重反复的患者，可解释为干扰素抑制了敏感的非突变病毒株后，不敏感的突变病毒大量增殖，结果造成病变的反复发展。同时我们还发现所有9例抗-HBe阳性的病例，干扰素治疗反应低下。在7例“G”野生型病毒感染患者中，有4例治疗后6个月血清HBV DNA PCR法检测阳性，HBeAg转为阴性，而“G/A”混合感染患者治疗后3个月仅一例血清HBV DNA探针法检测阴性，我们的结果显示，干扰素治疗对nt1896野生型病毒较好。
, http://www.100md.com
云南省自然科学基金资助课题
参考文献
1 Albert A, Fallovich G. Interferon
treapy for the anti-HBe positive form of chronic hepatitis B. Antiviral Res, 1994, 24:145-148.
2 Karasawa T, Aizawa Y, Zeniya M, et al. Genetic hetrogeneity in the precore region of hepatitis B virus in hepatitis B e antigen-negative chronic hepatitis B patients: spontanous seroconversion and interferon-induced seroconversion. J Med Virol, 1995, 45:373-376.
3 Hamasaki K, Natatak, Nagayama Y, et al. Changes in the prevalence of HBeAg-negative mutant hepatitis B virus during the course of chronic hepatitis B. Hepatology, 1994, 20:8-11., 百拇医药
单位：650032 昆明，云南省人民医院
关键词：
中华传染病杂志980316 大剂量干扰素治疗慢性乙型肝炎是有效的，一些报道认为，HBV PreC基因nt1896的突变与血清HBeAg的表达和干扰素的治疗效果密切相关[1]。而血清HBeAg的转变常常作为乙型肝炎患者的治疗效果与临床病变观察指标。为了认识干扰素治疗与PreC基因nt1896“G”向“A”突变的关系，我们观察了21例干扰素治疗患者血清HBV PreC基因突变情况，现将资料报告如下。
材料与方法
一、临床资料
21例均为1995年6月至12月我院门诊与住院患者，全部病例均有半年以上的HBV感染病史，血清ALT多大于50单位，最高250单位，血清总胆红素高于20μmol/L,最高62μmol/L，诊断按1995年全国传染病与寄生虫病学术会议修订标准。血清HBeAg阳性12例，抗-HBe阳性9例。血清HBV DNA斑点杂交全部阳性，PCR法阳性。IFNα-2b为基因工程美国仙灵葆雅产品，治疗方法为一个月内每天肌注γ-IFNα-2b 300万单位，连续30天，以后隔日一次，连续60天。
, http://www.100md.com
二、方法
(一) 血清标本的采集 分别于治疗前1～3天、治疗结束时、治疗结束后3个月进行血清ALT、总胆红素、抗-HBe、HBeAg检测；HBV DNA分别采用斑点杂交和PCR法检测，检测试剂盒由上海医科大学免疫学教研室和华美公司提供，操作按说明书进行。另取血清0.5ml 60°C贮存，以备检测PreC基因点突变。
(二) HBV PreC基因nt 1896位碱基突变检测 采用错配碱基PCR法。即有“G”向“A”突变的设计引物HBVC2：5′-TCCAAGCTGTGCCTT-
GGGTGGTTTA-3′，正常无突变引物HBVC3：5′-TCCAAGCTGTGCCTT-
GGGTGGTTTG-3′，共同下游引物
附表 HBV PreC基因nt1896突变与干扰素治疗反应 编号
, 百拇医药
性别
年龄
感染
(M)
治疗前
治疗后3个月
治疗后6个月
抗-E
ALT
DNA
nt1896
抗-E
ALT
, http://www.100md.com
DNA
nt1896
抗-E
ALT
DNA
nt1896
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-
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, http://www.100md.com
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+
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PCR(-)
3
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-
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-
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, http://www.100md.com
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+
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-
86
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-
46
+
, 百拇医药
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5
28 /M
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-
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+
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PCR(-)
7
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PCR(-)
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, 百拇医药
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A
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注：DNA：HBV/DNA斑点杂交法；PCR(-)：HBV/DNA PCR法检测阴性；ALT：血清ALT(U/L)
HBVC4：5′-TGTGGAGGAGATCT-CGAATAGA-3′(我室自行设计合成)。PCR为标准三温循环。产物为127bp双链DNA，结果判别采用2%的琼脂糖和12%的聚丙酰胺凝胶电泳分析，由HBVC2/HBVC4扩增的模板是nt1896/“A”突变株，而由HBVC3/HBVC4扩增的模板则为“G”野生株。
结 果
21例患者中，有18例进行了HBV PreC基因nt1896位碱基突变的追踪观察，但6个月后的观察血清仅有10份，资料见附表。
, 百拇医药 讨 论
大剂量干扰素治疗慢性病毒性肝炎是常采用的方法。临床发现，干扰素治疗慢性乙型病毒性肝炎的效果仍不十分理想。有些病例在治疗3个月后甚至产生严重的反复。有效治疗反应的也仅在50%左右，疗效多限于血清病毒量的减少和部分肝功能改善。怎样选择适应干扰素治疗的病例和正确预测治疗反应，是临床医生所面临的重要问题。一些研究发现，血清HBeAg消失是由于HBV PreC基因nt1896位碱基突变，TGG密码突变为TAG终止密码，PreC基因不能顺利地转录前C基因信息，故HBeAg不能形成[2]。干扰素治疗对HBV病毒的抑制，血清HBeAg转阴很可能与病毒突变相关[3]。我们在21例干扰素治疗病例中发现，治疗较好的7例病例(例：1、2、3、4、5、6、7)均为野生nt1896“G”型，而治疗不太敏感的患者均有突变型“A”病毒，特别是一例严重反复的患者(例13)治疗后病毒全部转变为1896/“A”，我们的结果似说明nt1896“A”的突变病毒株不利于干扰素的治疗。突变病毒“G/A”混合感染患者血清ALT有不同程度的下降，这说明干扰素对“G/A”混合感染病毒也有抑制作用，但ALT下降没有“G”组明显。一例治疗后严重反复的患者，可解释为干扰素抑制了敏感的非突变病毒株后，不敏感的突变病毒大量增殖，结果造成病变的反复发展。同时我们还发现所有9例抗-HBe阳性的病例，干扰素治疗反应低下。在7例“G”野生型病毒感染患者中，有4例治疗后6个月血清HBV DNA PCR法检测阳性，HBeAg转为阴性，而“G/A”混合感染患者治疗后3个月仅一例血清HBV DNA探针法检测阴性，我们的结果显示，干扰素治疗对nt1896野生型病毒较好。
, http://www.100md.com
云南省自然科学基金资助课题
参考文献
1 Albert A, Fallovich G. Interferon
treapy for the anti-HBe positive form of chronic hepatitis B. Antiviral Res, 1994, 24:145-148.
2 Karasawa T, Aizawa Y, Zeniya M, et al. Genetic hetrogeneity in the precore region of hepatitis B virus in hepatitis B e antigen-negative chronic hepatitis B patients: spontanous seroconversion and interferon-induced seroconversion. J Med Virol, 1995, 45:373-376.
3 Hamasaki K, Natatak, Nagayama Y, et al. Changes in the prevalence of HBeAg-negative mutant hepatitis B virus during the course of chronic hepatitis B. Hepatology, 1994, 20:8-11., 百拇医药