抗表皮生长因子受体单克隆抗体在胶质瘤导向治疗的实验研究
作者：费智敏 张尚权 王勇 邱永明 王宇 金萍茜 罗其中
单位：费智敏 王勇 邱永明 王宇 金萍茜 罗其中 上海第二医科大学附属仁济医院神经外科(上海 200001)；张尚权 中国科学院上海细胞生物学研究所
关键词：胶质瘤；放射免疫测定；免疫疗法；抗体，单克隆；表皮生长因子受体
肿瘤990407 目的 观察同位素标记的抗表皮生长因子单克隆抗体EQ75对胶质瘤细胞的亲和力及杀伤力。方法 体外实验：采用荧光显微镜及流式细胞仪荧光强度定量分析进行EQ75对人胶质瘤细胞株BT325表面抗原特异性鉴定。体内试验：建立裸小鼠移植性胶质瘤模型，随机分组，经尾静脉分别注入111In-EQ75和111In-IgG，48 h后测定各脏器组织T/NT放射性比值，连续2周观测肿瘤移植物的大小，比较荷瘤小鼠的生存时间。结果 体外试验：EQ75对BT325有高度的亲和性。体内试验：EQ75组T/NT、肿瘤移植物的抑制率以及荷瘤小鼠的生存时间均高于对照组(P<0.01)。 结论 111In-EQ75对胶质瘤细胞有良好的亲和力及杀伤力。
, 百拇医药
EXPERIMENTAL RADIOIMMUNOTHERAPY OF GLIOMA USING 111In-LABELED MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR
Fei Zhimin, Zhang Shangquan, Wang Yong, et al.
Department of Neurosurgery, RenjiHospital, Shanghai Second Medical University 200001
Objective：To observe affinity and tumoricidal power of monoclonal antibody EQ75 to epidermal growth factor receptor on glioma cells.Methods：In vitro binding specificity of EQ75 was studied with fluoromicroscope and FACs. In vivo nude mice bearing BT325 glioma xenografts were injected with either 111In-EQ75 or 111In-IgG intravenously. Specific activity ratios in tumors compare to normal mouse tissue (T/NT) were determined at 2nd day following antibody injection. The volumes of tumor xenografts were measured for 2 weeks consecutively. The survival time of the nude mice in 111In-EQ75 group was compared to the control group.Results：111In-EQ75 showed a high affinity to BT325 target cells. The tumor growth inhibitory rate and T/NT in nude mice treated with 111In-EQ75 were significantly higher than the control group (P<0.01). The survival time was prolonged than the control group (P<0.01).Conclusion：This study demonstrated that 111In-EQ75 showed a good affinity and tumoricidal power against glioma.
, 百拇医药
Key words Antibodies, monoclonal Immunotherapy Glioma Receptors, epidermal growth factor Radioimmunodetection
1984年，Libermann等[1]首次证实，多种脑部肿瘤的细胞表面过度表达表皮生长因子受体(EGFr)。1987年，Takahashi等[2]发现EGFr在胶质瘤中过度表达，其表达率高出正常脑组织近100倍。1992年，Jaros等[3]认为胶质瘤的预后与EGFr的数量增多有关，而且EGFr的表达率与肿瘤的恶性程度呈正相关。由于胶质瘤细胞表面EGFr过度表达的特性，使得利用EGFr单克隆抗体作为导向载体成为可能。本研究通过体外及同位素标记的单克隆抗体进行动物实验，以了解其对胶质瘤细胞的亲和力及杀伤力，为临床诊断胶质瘤的复发及其免疫治疗提供实验依据。
材料与方法
, http://www.100md.com
一、实验动物 裸小鼠BALB/c，鼠龄4～6周，体重18 g～22 g，雌雄兼用。
二、实验材料 人脑恶性胶质瘤细胞系BT325，配制含瘤细胞数5×107/ml混悬液备用。
三、胶质瘤裸鼠模型的建立 注射器吸取瘤细胞混悬液0.1 ml(5×106/0.1 ml)注射于裸小鼠的左侧腋部皮下。共移植裸小鼠60只，待肿瘤体积长至1 cm3时，随机分成6组，每组10只待用。
四、单抗制备及同位素交联 EQ75由中科院上海细胞所提供(用表皮癌细胞株A431免疫小鼠后制备成单抗，已作专一性分析及鉴定[4])，单抗属小鼠IgG1，所针对的抗原位于细胞膜表面的EGFr，经高压液相Hitrap Protein G柱分离纯化，标记的单抗经0.22 μm滤膜过滤除菌。兔抗鼠正常IgG作为对照组。
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五、EQ75单抗的免疫荧光鉴定 对BT325(5×105/管)加入50 μl EQ75单抗细胞株培养上清，及加入非相关性抗体作为对照组，30 min 4 ℃，洗涤后加羊抗鼠IgG-FITC，30 min 4 ℃，洗涤后经荧光显微镜及流式细胞仪(美国，Becton-Dickinson公司FACStarplus型)荧光强度定量分析。
六、体内实验 A1、A2、A3组：每鼠尾静脉注射111In-EQ75各0.1 ml，B1、B2、B3组：每鼠尾静脉注射111In-IgG各0.1 ml。
七、观察指标
1.肿瘤显像 于注入示踪剂后2、4 h行γ照相，工作条件取窗宽±10%，高能平行孔准直器，总计数100 K。
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2.标记抗体的体内分布 测定全身放射性计数后，在48 h，分别将A1和B1组动物处死，取肿瘤、血液、内脏器官及肌肉组织，分别测其放射性，以推算肿瘤与非肿瘤组织的放射性比值(T/NT)。
3.肿瘤生长抑制率 连续2周用游标卡尺测量肿瘤长径(a)和短径(b)，按公式(1)计算肿瘤体积(v)，绘制2周内A2、B2组裸鼠腋下肿瘤大小变化曲线，并于2周后处死动物，剥取肿瘤标本，按公式(2)计算肿瘤生长抑制率。
V=a.b2/2 (1)
(2)
4.生存时间 比较A3和B3两组小鼠自接受治疗之时起至自然死亡的天数。
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5.统计学处理 以上数据经Student T及Wilcoxon检验处理。
结果
一、荧光显微镜下可见：胶质瘤细胞周围有荧光素聚集。
二、EQ75单抗与BT325表面抗原特异性鉴定，经流式细胞分离仪荧光分析为阳性(见图1)。
图1 EQ75单抗与BT325表面抗原特异性鉴定
对照组、实验组的靶细胞BT325分别为5×104 ml，对照组加入非相关性抗体Tac，实验组加入EQ75细胞株培养上清，然后分别加入羊抗鼠IgG-FITC，流式细胞仪检测，BT325显示阳性。
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三、2 h γ照相显示：A组荷瘤小鼠左侧腋下肿瘤及膀胱显像，4 h后腋下肿瘤影像进一步增强，而B组荷瘤小鼠仅见膀胱影像，肿瘤区未见显影。
四、48 h后A1、B1组T/NT有高度显著差异(见表1)，A1组的各组织中放射活性物质的吸附率见表2。
表1 48 h后A1、B1组各脏器组织的T/NT放射性比值
A1组
B1组
血
2.152±0.398*
, http://www.100md.com
1.344±0.241
心
2.981±0.560*
2.344±0.511
肺
1.357±0.356*
0.840±0.788
肝
0.361±0.109*
0.210±0.065
肾
, http://www.100md.com
0.092±0.014*
0.054±0.030
脾
0.410±0.144*
0.172±0.042
骨
2.317±1.578*
0.424±0.224
肌
2.307±1.510*
0.833±0.794
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*P<0.01表2 48h A1组各组织中的放射活性物质的吸附率(%)
肿瘤
血
心
肺
肝
肾
脾
骨
肌
吸附率(%)
1.66
0.43
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0.06
0.12
0.06
0.18
0.10
0.06
0.04
五、动态观察肿瘤体积的大小变化(见图2)。计算其肿瘤生长抑制率，经Wilcoxon检验：A2组明显高于B2组(P<0.01)。
图2 2周内A2、B2组裸鼠移植性肿瘤体积的变化曲线
, 百拇医药
六、A3、B3两组小鼠生存时间曲线显示：A3组明显延长。生存时间曲线见图3。
图3 A3、B3两组荷瘤小鼠分别于尾静脉注射111In-EQ75和111In-IgG各0.1 ml，小鼠生存时间曲线显示：A3组明显长于B3组。
讨论
恶性肿瘤的导向治疗，即以亲肿瘤物质为载体，有细胞毒作用的物质作弹头，使后者能较多杀伤肿瘤而较少损伤正常组织细胞。早在100年前，就有人提出了“魔弹”的概念，但因各种载体、弹头的制备以及交联技术的限制，导向治疗的进展缓慢；近10年来，由于单克隆技术、基因工程以及交联技术的介入，导向治疗有了空前的发展，国内有学者[5，6]曾成功地将其应用于肝癌治疗，但在治疗胶质瘤方面仍是一个空白。
, 百拇医药
随着CT及MRI的普及，脑瘤的检出率正呈逐年增高的趋势，作为颅内发病率最高的恶性肿瘤棗胶质瘤约占脑瘤总数的45%，全国每年有6万个以上的胶质瘤新发病例。虽然外科手术及放化疗技术在过去的10年中均有长足的进步，但传统的治疗方法仍无法改变胶质瘤的预后，其中位生存期仅为69周。术后放疗有助于延长此类患者的平均生存期[7～10]，但是大剂量的放射治疗在控制局部病灶的同时，往往会导致致命的放射性脑坏死及放射性脑病[11]。胶质瘤细胞表面过度表达EGFr的特性，使得其作为导向载体成为可能。
本组资料中EQ75荧光显影及流式细胞仪荧光强度定量分析结果提示：EQ75在体外试验中与胶质瘤细胞株BT325之间有高度的亲和性。
体内分布试验(包括γ照相及T/NT)测定结果表明：在移植于裸鼠的胶质瘤组织中，EQ75的含量明显地高于对照组IgG，EQ75对胶质瘤细胞的亲和力极高，完全能鉴别胶质瘤和正常组织，而对照组IgG则无此功能。EQ75能抑制人胶质瘤移植物的生长，而且111In-EQ75在对肿瘤移植物的生长起抑制作用的同时，对周围其他正常器官组织的放射性损伤较小，体现了111In-EQ75在导向治疗中有良好的选择性。由于EGFr作为膜抗原不易发生抗原调变、脱落或表达的异质性，因而不会导致疗效降低或治疗无效。而且，同位素111In是近年来优良放射源的代表，111In与抗体交联物在靶细胞内滞留时间为125Ⅰ的5倍，给药后7天仍可残留50%，持续杀伤时间较长[12]。A3与B3两组小鼠的生存时间曲线显示：111In-EQ75能明显地延长荷瘤小鼠的生存时间。
, 百拇医药
综上所述：EQ75是一种优良的导向载体，与同位素111In交联物能抑制人胶质瘤移植物在裸鼠体内的生长，从而达到延长裸鼠生存时间的目的。本实验通过体外及同位素标记的单克隆抗体进行动物实验，以了解其对胶质瘤细胞的亲和力及杀伤力，为今后过渡到临床上诊断治疗胶质瘤提供实验室数据。
*本课题获上海市教委资助
第一作者简介 费智敏，男，学士，主治医师。
参考文献
1 Libermann TA, Razon N, Bartal AD, et al. Expression of epidermal growth factor receptors in human brain tumors. Cancer Res, 1984,44:753
, http://www.100md.com
2 Takahashi H, Herlyn D, Atkinson B, et al. Radioimmuno-detection of human glioma xenografts by monoclonal antibody to epidermal growth factor receptor. CancerRes, 1987,47:3847
3 Jaros E, Perry RH, Adam L，et al. Prognostic implications of p53 protein, epidermal growth factor receptor, and Ki-67 labelling in brain tumors. Br J Cancer, 1992,66:373
4 张尚权，袁金辉，赵峰，等.抗表皮生长因子与抗CD3双功能抗体的制备及细胞毒的研究.肿瘤，1997，17：355
, 百拇医药
5 施乐华，吴孟超，陈汉，等.抗人肝癌单克隆抗体对荷瘤裸鼠的放射免疫定位及治疗。中华肿瘤杂志，1995，17：20
6 施乐华，吴孟超，陈汉，等.抗人肝癌单克隆抗体的人体放射免疫定位及治疗。中华肿瘤杂志，1997，19：146
7 Dedparvar S, Krishna L, Miyamoto C，et al. Indium-111-Iabeled anti-EGFr-425 scintigraphy in the detection of malignant gliomas. Cancer 1994,73(Suppl):884
8 费智敏，王勇，金萍茜，等.联合应用IL-2和LAK细胞治疗脑星型细胞瘤预后分析.肿瘤，1997，17：420
9 王勇，罗其中，费智敏，等.颅内星型细胞瘤术后生存期影响因素分析.肿瘤，1996，16(3)：395
, 百拇医药
10 Delia MG, Keith HF, James EM. The value of radiation therapy in addition to surgery for astrocytomas of the adult cerebrum. Cancer, 1985,55:919
11 Youman JK，et al. Neurological Surgery, Vol 3, Philadelphia, USA, W.B. Saunders Co, 1992:36
12 Mattes Cl, Griffiths GL, Diril H, et al. Processing of antibody radioisotopeconjugates after binding to the surface of tumor cell. Antibody Immunoconjug Radiopharm, 1992,5:329
(收稿：1998-04-14 修回：1998-08-17), 百拇医药
单位：费智敏 王勇 邱永明 王宇 金萍茜 罗其中 上海第二医科大学附属仁济医院神经外科(上海 200001)；张尚权 中国科学院上海细胞生物学研究所
关键词：胶质瘤；放射免疫测定；免疫疗法；抗体，单克隆；表皮生长因子受体
肿瘤990407 目的 观察同位素标记的抗表皮生长因子单克隆抗体EQ75对胶质瘤细胞的亲和力及杀伤力。方法 体外实验：采用荧光显微镜及流式细胞仪荧光强度定量分析进行EQ75对人胶质瘤细胞株BT325表面抗原特异性鉴定。体内试验：建立裸小鼠移植性胶质瘤模型，随机分组，经尾静脉分别注入111In-EQ75和111In-IgG，48 h后测定各脏器组织T/NT放射性比值，连续2周观测肿瘤移植物的大小，比较荷瘤小鼠的生存时间。结果 体外试验：EQ75对BT325有高度的亲和性。体内试验：EQ75组T/NT、肿瘤移植物的抑制率以及荷瘤小鼠的生存时间均高于对照组(P<0.01)。 结论 111In-EQ75对胶质瘤细胞有良好的亲和力及杀伤力。
, 百拇医药
EXPERIMENTAL RADIOIMMUNOTHERAPY OF GLIOMA USING 111In-LABELED MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR
Fei Zhimin, Zhang Shangquan, Wang Yong, et al.
Department of Neurosurgery, RenjiHospital, Shanghai Second Medical University 200001
Objective：To observe affinity and tumoricidal power of monoclonal antibody EQ75 to epidermal growth factor receptor on glioma cells.Methods：In vitro binding specificity of EQ75 was studied with fluoromicroscope and FACs. In vivo nude mice bearing BT325 glioma xenografts were injected with either 111In-EQ75 or 111In-IgG intravenously. Specific activity ratios in tumors compare to normal mouse tissue (T/NT) were determined at 2nd day following antibody injection. The volumes of tumor xenografts were measured for 2 weeks consecutively. The survival time of the nude mice in 111In-EQ75 group was compared to the control group.Results：111In-EQ75 showed a high affinity to BT325 target cells. The tumor growth inhibitory rate and T/NT in nude mice treated with 111In-EQ75 were significantly higher than the control group (P<0.01). The survival time was prolonged than the control group (P<0.01).Conclusion：This study demonstrated that 111In-EQ75 showed a good affinity and tumoricidal power against glioma.
, 百拇医药
Key words Antibodies, monoclonal Immunotherapy Glioma Receptors, epidermal growth factor Radioimmunodetection
1984年，Libermann等[1]首次证实，多种脑部肿瘤的细胞表面过度表达表皮生长因子受体(EGFr)。1987年，Takahashi等[2]发现EGFr在胶质瘤中过度表达，其表达率高出正常脑组织近100倍。1992年，Jaros等[3]认为胶质瘤的预后与EGFr的数量增多有关，而且EGFr的表达率与肿瘤的恶性程度呈正相关。由于胶质瘤细胞表面EGFr过度表达的特性，使得利用EGFr单克隆抗体作为导向载体成为可能。本研究通过体外及同位素标记的单克隆抗体进行动物实验，以了解其对胶质瘤细胞的亲和力及杀伤力，为临床诊断胶质瘤的复发及其免疫治疗提供实验依据。
材料与方法
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一、实验动物 裸小鼠BALB/c，鼠龄4～6周，体重18 g～22 g，雌雄兼用。
二、实验材料 人脑恶性胶质瘤细胞系BT325，配制含瘤细胞数5×107/ml混悬液备用。
三、胶质瘤裸鼠模型的建立 注射器吸取瘤细胞混悬液0.1 ml(5×106/0.1 ml)注射于裸小鼠的左侧腋部皮下。共移植裸小鼠60只，待肿瘤体积长至1 cm3时，随机分成6组，每组10只待用。
四、单抗制备及同位素交联 EQ75由中科院上海细胞所提供(用表皮癌细胞株A431免疫小鼠后制备成单抗，已作专一性分析及鉴定[4])，单抗属小鼠IgG1，所针对的抗原位于细胞膜表面的EGFr，经高压液相Hitrap Protein G柱分离纯化，标记的单抗经0.22 μm滤膜过滤除菌。兔抗鼠正常IgG作为对照组。
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五、EQ75单抗的免疫荧光鉴定 对BT325(5×105/管)加入50 μl EQ75单抗细胞株培养上清，及加入非相关性抗体作为对照组，30 min 4 ℃，洗涤后加羊抗鼠IgG-FITC，30 min 4 ℃，洗涤后经荧光显微镜及流式细胞仪(美国，Becton-Dickinson公司FACStarplus型)荧光强度定量分析。
六、体内实验 A1、A2、A3组：每鼠尾静脉注射111In-EQ75各0.1 ml，B1、B2、B3组：每鼠尾静脉注射111In-IgG各0.1 ml。
七、观察指标
1.肿瘤显像 于注入示踪剂后2、4 h行γ照相，工作条件取窗宽±10%，高能平行孔准直器，总计数100 K。
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2.标记抗体的体内分布 测定全身放射性计数后，在48 h，分别将A1和B1组动物处死，取肿瘤、血液、内脏器官及肌肉组织，分别测其放射性，以推算肿瘤与非肿瘤组织的放射性比值(T/NT)。
3.肿瘤生长抑制率 连续2周用游标卡尺测量肿瘤长径(a)和短径(b)，按公式(1)计算肿瘤体积(v)，绘制2周内A2、B2组裸鼠腋下肿瘤大小变化曲线，并于2周后处死动物，剥取肿瘤标本，按公式(2)计算肿瘤生长抑制率。
V=a.b2/2 (1)
(2)4.生存时间 比较A3和B3两组小鼠自接受治疗之时起至自然死亡的天数。
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5.统计学处理 以上数据经Student T及Wilcoxon检验处理。
结果
一、荧光显微镜下可见：胶质瘤细胞周围有荧光素聚集。
二、EQ75单抗与BT325表面抗原特异性鉴定，经流式细胞分离仪荧光分析为阳性(见图1)。
图1 EQ75单抗与BT325表面抗原特异性鉴定
对照组、实验组的靶细胞BT325分别为5×104 ml，对照组加入非相关性抗体Tac，实验组加入EQ75细胞株培养上清，然后分别加入羊抗鼠IgG-FITC，流式细胞仪检测，BT325显示阳性。
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三、2 h γ照相显示：A组荷瘤小鼠左侧腋下肿瘤及膀胱显像，4 h后腋下肿瘤影像进一步增强，而B组荷瘤小鼠仅见膀胱影像，肿瘤区未见显影。
四、48 h后A1、B1组T/NT有高度显著差异(见表1)，A1组的各组织中放射活性物质的吸附率见表2。
表1 48 h后A1、B1组各脏器组织的T/NT放射性比值
A1组
B1组
血
2.152±0.398*
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1.344±0.241
心
2.981±0.560*
2.344±0.511
肺
1.357±0.356*
0.840±0.788
肝
0.361±0.109*
0.210±0.065
肾
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0.092±0.014*
0.054±0.030
脾
0.410±0.144*
0.172±0.042
骨
2.317±1.578*
0.424±0.224
肌
2.307±1.510*
0.833±0.794
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*P<0.01表2 48h A1组各组织中的放射活性物质的吸附率(%)
肿瘤
血
心
肺
肝
肾
脾
骨
肌
吸附率(%)
1.66
0.43
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0.06
0.12
0.06
0.18
0.10
0.06
0.04
五、动态观察肿瘤体积的大小变化(见图2)。计算其肿瘤生长抑制率，经Wilcoxon检验：A2组明显高于B2组(P<0.01)。
图2 2周内A2、B2组裸鼠移植性肿瘤体积的变化曲线
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六、A3、B3两组小鼠生存时间曲线显示：A3组明显延长。生存时间曲线见图3。
图3 A3、B3两组荷瘤小鼠分别于尾静脉注射111In-EQ75和111In-IgG各0.1 ml，小鼠生存时间曲线显示：A3组明显长于B3组。
讨论
恶性肿瘤的导向治疗，即以亲肿瘤物质为载体，有细胞毒作用的物质作弹头，使后者能较多杀伤肿瘤而较少损伤正常组织细胞。早在100年前，就有人提出了“魔弹”的概念，但因各种载体、弹头的制备以及交联技术的限制，导向治疗的进展缓慢；近10年来，由于单克隆技术、基因工程以及交联技术的介入，导向治疗有了空前的发展，国内有学者[5，6]曾成功地将其应用于肝癌治疗，但在治疗胶质瘤方面仍是一个空白。
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随着CT及MRI的普及，脑瘤的检出率正呈逐年增高的趋势，作为颅内发病率最高的恶性肿瘤棗胶质瘤约占脑瘤总数的45%，全国每年有6万个以上的胶质瘤新发病例。虽然外科手术及放化疗技术在过去的10年中均有长足的进步，但传统的治疗方法仍无法改变胶质瘤的预后，其中位生存期仅为69周。术后放疗有助于延长此类患者的平均生存期[7～10]，但是大剂量的放射治疗在控制局部病灶的同时，往往会导致致命的放射性脑坏死及放射性脑病[11]。胶质瘤细胞表面过度表达EGFr的特性，使得其作为导向载体成为可能。
本组资料中EQ75荧光显影及流式细胞仪荧光强度定量分析结果提示：EQ75在体外试验中与胶质瘤细胞株BT325之间有高度的亲和性。
体内分布试验(包括γ照相及T/NT)测定结果表明：在移植于裸鼠的胶质瘤组织中，EQ75的含量明显地高于对照组IgG，EQ75对胶质瘤细胞的亲和力极高，完全能鉴别胶质瘤和正常组织，而对照组IgG则无此功能。EQ75能抑制人胶质瘤移植物的生长，而且111In-EQ75在对肿瘤移植物的生长起抑制作用的同时，对周围其他正常器官组织的放射性损伤较小，体现了111In-EQ75在导向治疗中有良好的选择性。由于EGFr作为膜抗原不易发生抗原调变、脱落或表达的异质性，因而不会导致疗效降低或治疗无效。而且，同位素111In是近年来优良放射源的代表，111In与抗体交联物在靶细胞内滞留时间为125Ⅰ的5倍，给药后7天仍可残留50%，持续杀伤时间较长[12]。A3与B3两组小鼠的生存时间曲线显示：111In-EQ75能明显地延长荷瘤小鼠的生存时间。
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综上所述：EQ75是一种优良的导向载体，与同位素111In交联物能抑制人胶质瘤移植物在裸鼠体内的生长，从而达到延长裸鼠生存时间的目的。本实验通过体外及同位素标记的单克隆抗体进行动物实验，以了解其对胶质瘤细胞的亲和力及杀伤力，为今后过渡到临床上诊断治疗胶质瘤提供实验室数据。
*本课题获上海市教委资助
第一作者简介 费智敏，男，学士，主治医师。
参考文献
1 Libermann TA, Razon N, Bartal AD, et al. Expression of epidermal growth factor receptors in human brain tumors. Cancer Res, 1984,44:753
, http://www.100md.com
2 Takahashi H, Herlyn D, Atkinson B, et al. Radioimmuno-detection of human glioma xenografts by monoclonal antibody to epidermal growth factor receptor. CancerRes, 1987,47:3847
3 Jaros E, Perry RH, Adam L，et al. Prognostic implications of p53 protein, epidermal growth factor receptor, and Ki-67 labelling in brain tumors. Br J Cancer, 1992,66:373
4 张尚权，袁金辉，赵峰，等.抗表皮生长因子与抗CD3双功能抗体的制备及细胞毒的研究.肿瘤，1997，17：355
, 百拇医药
5 施乐华，吴孟超，陈汉，等.抗人肝癌单克隆抗体对荷瘤裸鼠的放射免疫定位及治疗。中华肿瘤杂志，1995，17：20
6 施乐华，吴孟超，陈汉，等.抗人肝癌单克隆抗体的人体放射免疫定位及治疗。中华肿瘤杂志，1997，19：146
7 Dedparvar S, Krishna L, Miyamoto C，et al. Indium-111-Iabeled anti-EGFr-425 scintigraphy in the detection of malignant gliomas. Cancer 1994,73(Suppl):884
8 费智敏，王勇，金萍茜，等.联合应用IL-2和LAK细胞治疗脑星型细胞瘤预后分析.肿瘤，1997，17：420
9 王勇，罗其中，费智敏，等.颅内星型细胞瘤术后生存期影响因素分析.肿瘤，1996，16(3)：395
, 百拇医药
10 Delia MG, Keith HF, James EM. The value of radiation therapy in addition to surgery for astrocytomas of the adult cerebrum. Cancer, 1985,55:919
11 Youman JK，et al. Neurological Surgery, Vol 3, Philadelphia, USA, W.B. Saunders Co, 1992:36
12 Mattes Cl, Griffiths GL, Diril H, et al. Processing of antibody radioisotopeconjugates after binding to the surface of tumor cell. Antibody Immunoconjug Radiopharm, 1992,5:329
(收稿：1998-04-14 修回：1998-08-17), 百拇医药