肺癌P53蛋白表达与DNA含量及预后的关系
作者：邹 涛 梁 丽 邹 伟 杨梅怀
单位：邹 涛 沂南县(276300)山东省沂县人民医院；梁 丽昆明市(650102)云南省第二临狱医院；邹 伟 杨梅怀青岛市(266021)山东省青岛医学院病理学教研究
关键词：
齐鲁肿瘤杂志980342
P53基因是一种肿瘤抑制基因，对细胞的生长起负性调节作用，其突变失活在肿瘤演进过程中具有重要作用。本文应用免疫组化技术检测了P53蛋白在肺癌中的表达，并用图像分析方法测定DNA含量，初步探讨两者之间的关系及P53蛋白表达的临床病理意义。
1 材料和方法
1.1研究村料
, 百拇医药
青岛医学院胸外科1977～1988年间共手术切除且经病理诊断为原发性肺癌的组织标本167例，全部进行了术后5年以上随访。选取在预后方面有明显差异的标本82例。其中5年以上生存者48例(5年生存率为28.75%)，半年内死亡者34例。标本均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，HE染色，按WHO(1981)组织学分型标准分型，计有鳞癌40例，腺癌34例，小细胞癌7例，大细胞癌1例。
1.2 研究方法
免疫组织化学检测应用LS AB(1abelled stre ptav idin biot in)法。P53蛋白(Do-7)及LS AB试剂盒均购自Da ko 公司P53蛋白工作浓度为1:30,置于4℃冰箱过夜。阳性切片用已知乳腺癌阳性切片，阴性对照省略Ⅰ抗，用PBS代替。以细胞核内出现明显的棕色颗粒为阳性显色。
DNA含量应用德国VIDAS型多功能图像分析仪测定。切片经Feulgen 染色，将待测细胞在显微镜下定位，由电视摄像系统提取细胞图像，经数字化处理后输入计算机系统，能过后者求出视野内癌细胞(>100个)的积分光密度值(IOD)，同时测定同切片内淋巴细胞(>40个)的IOD做为正常二倍体(2C)对照。按下列公式求出DNA倍体值：
, 百拇医药
1.3 统计处理
根据资料性质不同，统计学分析分别采用X2检验和t检验。
2 结果
82例肺癌组织标本中，44例(53.65%)P53蛋白阳性表达，阳性显色定位于癌细胞核内，肿瘤间质及正常肺组织内均未见阳性表达。其中鳞癌P53蛋白阳性表达率为52.5%(21/40)，腺癌为52.9%(18/34)，小细胞癌为71.4%(5/7)，大细胞癌为0(0/1)。经统计学处理，各组织类型间P53蛋白阳性表达率无显著性差异(P>0.05)。
2.1 P53蛋白表达与淋巴结癌转移的关系
本文病例中，病理资料有淋巴结情况者71例(鳞癌34例，腺癌30例，小细胞癌7例)。经统计学处理，肺腺癌P53蛋白表达与淋巴结癌转移间有显著关系，淋巴结癌转移阳性组P53蛋白阳性表达率显著高于淋巴结癌转移阴性组(P=0.013)。而在鳞癌和小细胞癌，P53蛋白表达与淋巴结转移间关系不明显(P>0.05)。
, http://www.100md.com
表1 P53蛋白表达与淋巴结癌转移的关系 淋巴结
鳞 癌
腺 癌
小细胞癌
癌转移
P53+
P53-
P53+
P53-
P53+
P53-
, http://www.100md.com
阳 性
4
5
11
3
3
0
阴 性
13
12
5
11
2
2
, http://www.100md.com
2.2 P53蛋白表达与患者预后的关系(表2)
5年以上生存组P53蛋白阳性表达率(21/48)显著低于半年内死亡组 (23/34)(P<0.05)。在肺癌不同组织学类型中，腺癌P53蛋白表达与患者的预后明显相关，P53蛋白阳性表达组预后显著差于P53蛋白阴性组(P=0.045)。而在其它各组中差异不明显(P>0.05)。表2 P53蛋白表达与肺癌患者预后的关系
生存时间
鳞 癌
腺 癌
小细胞癌
大细胞癌
, 百拇医药
(年)
P53+
P53-
P53+
P53-
P53+
P53-
P53+
P53-
>5年
12
, 百拇医药
15
7
12
2
0
0
0
<0.5年
9
4
11
4
3
2
, http://www.100md.com
0
1
2.3 P53蛋白表达与DNA含量之间关系(表3)：
本文病例中，P53蛋白阳性表达组DNA含量 (8.91±2.84C)显著高于P53蛋白阴性组(6.60±1.47C)P<0.05)。在不同组织学类型中，鳞癌和腺癌的P53蛋白表达均与DNA含量之间存在显著相关性，P53蛋白阳性表达者DNA含量显著高于P53蛋白阴性者(P<0.05)。表3 肺癌P53蛋白表达与DNA含量的关系 组 织
类 型
P53表达
, 百拇医药
例数
DNA含量
(X±S)
P
鳞
癌
腺
癌
+
-
21
19
8.32±2.17
, 百拇医药 6.91±1.36
<0.01
+
-
18
16
10.16±3.35
6.21±1.67
<0.01
3 讨论
P53蛋白在调节细胞的增殖过程中起重要作用，它出现于细胞周期的G1晚期，调节细胞由G1期进入S期(DNA合成期)。P53蛋白功能异常可导致细胞获得旺盛增殖的能力，需要合成大量DNA以满足其旺盛增殖的需要。Manfred报道肺鳞癌异倍体与P53蛋白表达有明显相关性。因此对人体肿瘤同时进行P53蛋白表达和DNA含量检测，对深入认识肿瘤的发生发展过程有重要意义。本文结果表明，P53蛋白与DNA含量间存在显著正相关关系，肺鳞癌和腺癌P53蛋白阳性表达者DNA含量显著高于P53蛋白阴性者，说明P53基因突变后，其功能由抑癌变为促癌，导致细胞DNA合成增多，增殖能力旺盛。限于本文小细胞癌和大细胞癌例数较少，其结果有待进一部研究。
, 百拇医药
关于P53蛋白与肺癌预后关系的研究，文献报道不多。本文结果显示P53蛋白阳性表达者预后显著差于P53蛋白阴性者(P<0.05)。在不同组织学类型中，肺腺癌半年内死亡组P53蛋白阳性表达率显著高于5年以上生存组(P=0.045)，提示P53蛋白表达在评估肺腺癌预后方面是一个重要指标；同时P53蛋白表达与肺腺癌有无淋巴结癌转移之间也有明显相关性，P53蛋白阳性表达者癌转移阳性率高。文献报道肺献腺癌脑部转移瘤P53基因突变远比其原发瘤多见，亦支持本文结果。Nuorva报道P53蛋白表达在鳞癌的发生发展中是一个早期事件，与肿瘤的恶性转化有关，而与恶性转化后浸润转移的关系不明显。本文肺鳞癌P53蛋白表达与患者预后及淋巴结转移间无相关性，亦支持这一点。笔者认为，原位检测肺癌尤其是肺腺癌P53蛋白的表达，可以更为客观、准确地判断肺癌的生物学行为及预测患者的预后，在临床病理及外科治疗方面有一定的应用价值。, http://www.100md.com
单位：邹 涛 沂南县(276300)山东省沂县人民医院；梁 丽昆明市(650102)云南省第二临狱医院；邹 伟 杨梅怀青岛市(266021)山东省青岛医学院病理学教研究
关键词：
齐鲁肿瘤杂志980342
P53基因是一种肿瘤抑制基因，对细胞的生长起负性调节作用，其突变失活在肿瘤演进过程中具有重要作用。本文应用免疫组化技术检测了P53蛋白在肺癌中的表达，并用图像分析方法测定DNA含量，初步探讨两者之间的关系及P53蛋白表达的临床病理意义。
1 材料和方法
1.1研究村料
, 百拇医药
青岛医学院胸外科1977～1988年间共手术切除且经病理诊断为原发性肺癌的组织标本167例，全部进行了术后5年以上随访。选取在预后方面有明显差异的标本82例。其中5年以上生存者48例(5年生存率为28.75%)，半年内死亡者34例。标本均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，HE染色，按WHO(1981)组织学分型标准分型，计有鳞癌40例，腺癌34例，小细胞癌7例，大细胞癌1例。
1.2 研究方法
免疫组织化学检测应用LS AB(1abelled stre ptav idin biot in)法。P53蛋白(Do-7)及LS AB试剂盒均购自Da ko 公司P53蛋白工作浓度为1:30,置于4℃冰箱过夜。阳性切片用已知乳腺癌阳性切片，阴性对照省略Ⅰ抗，用PBS代替。以细胞核内出现明显的棕色颗粒为阳性显色。
DNA含量应用德国VIDAS型多功能图像分析仪测定。切片经Feulgen 染色，将待测细胞在显微镜下定位，由电视摄像系统提取细胞图像，经数字化处理后输入计算机系统，能过后者求出视野内癌细胞(>100个)的积分光密度值(IOD)，同时测定同切片内淋巴细胞(>40个)的IOD做为正常二倍体(2C)对照。按下列公式求出DNA倍体值：
, 百拇医药
1.3 统计处理
根据资料性质不同，统计学分析分别采用X2检验和t检验。
2 结果
82例肺癌组织标本中，44例(53.65%)P53蛋白阳性表达，阳性显色定位于癌细胞核内，肿瘤间质及正常肺组织内均未见阳性表达。其中鳞癌P53蛋白阳性表达率为52.5%(21/40)，腺癌为52.9%(18/34)，小细胞癌为71.4%(5/7)，大细胞癌为0(0/1)。经统计学处理，各组织类型间P53蛋白阳性表达率无显著性差异(P>0.05)。
2.1 P53蛋白表达与淋巴结癌转移的关系
本文病例中，病理资料有淋巴结情况者71例(鳞癌34例，腺癌30例，小细胞癌7例)。经统计学处理，肺腺癌P53蛋白表达与淋巴结癌转移间有显著关系，淋巴结癌转移阳性组P53蛋白阳性表达率显著高于淋巴结癌转移阴性组(P=0.013)。而在鳞癌和小细胞癌，P53蛋白表达与淋巴结转移间关系不明显(P>0.05)。
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表1 P53蛋白表达与淋巴结癌转移的关系 淋巴结
鳞 癌
腺 癌
小细胞癌
癌转移
P53+
P53-
P53+
P53-
P53+
P53-
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阳 性
4
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阴 性
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2
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2.2 P53蛋白表达与患者预后的关系(表2)
5年以上生存组P53蛋白阳性表达率(21/48)显著低于半年内死亡组 (23/34)(P<0.05)。在肺癌不同组织学类型中，腺癌P53蛋白表达与患者的预后明显相关，P53蛋白阳性表达组预后显著差于P53蛋白阴性组(P=0.045)。而在其它各组中差异不明显(P>0.05)。表2 P53蛋白表达与肺癌患者预后的关系
生存时间
鳞 癌
腺 癌
小细胞癌
大细胞癌
, 百拇医药
(年)
P53+
P53-
P53+
P53-
P53+
P53-
P53+
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>5年
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2.3 P53蛋白表达与DNA含量之间关系(表3)：
本文病例中，P53蛋白阳性表达组DNA含量 (8.91±2.84C)显著高于P53蛋白阴性组(6.60±1.47C)P<0.05)。在不同组织学类型中，鳞癌和腺癌的P53蛋白表达均与DNA含量之间存在显著相关性，P53蛋白阳性表达者DNA含量显著高于P53蛋白阴性者(P<0.05)。表3 肺癌P53蛋白表达与DNA含量的关系 组 织
类 型
P53表达
, 百拇医药
例数
DNA含量
(X±S)
P
鳞
癌
腺
癌
+
-
21
19
8.32±2.17
, 百拇医药 6.91±1.36
<0.01
+
-
18
16
10.16±3.35
6.21±1.67
<0.01
3 讨论
P53蛋白在调节细胞的增殖过程中起重要作用，它出现于细胞周期的G1晚期，调节细胞由G1期进入S期(DNA合成期)。P53蛋白功能异常可导致细胞获得旺盛增殖的能力，需要合成大量DNA以满足其旺盛增殖的需要。Manfred报道肺鳞癌异倍体与P53蛋白表达有明显相关性。因此对人体肿瘤同时进行P53蛋白表达和DNA含量检测，对深入认识肿瘤的发生发展过程有重要意义。本文结果表明，P53蛋白与DNA含量间存在显著正相关关系，肺鳞癌和腺癌P53蛋白阳性表达者DNA含量显著高于P53蛋白阴性者，说明P53基因突变后，其功能由抑癌变为促癌，导致细胞DNA合成增多，增殖能力旺盛。限于本文小细胞癌和大细胞癌例数较少，其结果有待进一部研究。
, 百拇医药
关于P53蛋白与肺癌预后关系的研究，文献报道不多。本文结果显示P53蛋白阳性表达者预后显著差于P53蛋白阴性者(P<0.05)。在不同组织学类型中，肺腺癌半年内死亡组P53蛋白阳性表达率显著高于5年以上生存组(P=0.045)，提示P53蛋白表达在评估肺腺癌预后方面是一个重要指标；同时P53蛋白表达与肺腺癌有无淋巴结癌转移之间也有明显相关性，P53蛋白阳性表达者癌转移阳性率高。文献报道肺献腺癌脑部转移瘤P53基因突变远比其原发瘤多见，亦支持本文结果。Nuorva报道P53蛋白表达在鳞癌的发生发展中是一个早期事件，与肿瘤的恶性转化有关，而与恶性转化后浸润转移的关系不明显。本文肺鳞癌P53蛋白表达与患者预后及淋巴结转移间无相关性，亦支持这一点。笔者认为，原位检测肺癌尤其是肺腺癌P53蛋白的表达，可以更为客观、准确地判断肺癌的生物学行为及预测患者的预后，在临床病理及外科治疗方面有一定的应用价值。, http://www.100md.com