舌癌及癌前病变ras癌基因产物P21和DNA倍体的研究
作者：许彦枝 王晓玲 唐全勇张洁英 左连富 刘忆林
单位：050011 石家庄,河北医科大学第四医院(许彦枝、王晓玲、左连富、刘忆林)；河北医科大学第二医院(唐全勇、张洁英)
关键词：
近年的研究发现 近年的研究发现,人类肿瘤的发生、发展与癌基因的激活有关。ras基因是人体一个重要的
原癌基因,当该基因被激活时,其效应分子的蛋白产物P21对人体正常细胞的转化及肿瘤的发生起
着重要作用。有关ras基因产物P21在口腔恶性肿瘤的表达研究已有一些报道〔1〕,但针对不同发
生部位研究P21表达及DNA含量与临床的关系报道不多。舌癌是常见的口腔癌,因舌体具有丰富
, 百拇医药
的淋巴管和血液循环,加以舌的机械运动频繁常引起早期淋巴结转移。为进一步探讨舌癌的生
物学行为与组织发生、临床特点的关系,本研究应用流式细胞术和细胞免疫荧光技术,对舌癌和
口腔粘膜癌前病变ras P21表达量和DNA含量进行了定量检测,现报道如下。
材 料 与 方 法
①标本来源为存档的石蜡包埋组织块中的舌鳞癌37例。其中分化Ⅰ级20例,Ⅱ级11例,Ⅲ级
6例(根据1971年WHO国际肿瘤分类)。口腔粘膜癌前病变组织10例,取正常口腔粘膜组织3例作
为对照。②将石蜡包埋组织切40 μm厚的组织片经二甲苯脱蜡,梯度酒精水化后用搓网方法制
, 百拇医药
备单细胞悬液并采用间接免疫荧光染色方法进行ras P21单克隆抗体标记〔2〕。采用溴化乙啶荧
光染液对细胞DNA进行染色。③应用美国BD公司生产的FACS 420型流式细胞仪,分别进行单参
数检测、测量数据及资料处理。DNA含量以DNA指数(DI)表示相对DNA含量,依据DI值判定DNA
倍体,DI=1.0±2 CV为二倍体,DI≠1.0±2 CV为异倍体。应用计算机细胞周期分析软件计算出各
时相百分比,以增殖指数PI表示增殖活性。按照Morkve〔3〕提出的荧光指数(FI)分析方法表示P21表达的相对含量。FI>1.0表示P21表达阳性,FI=1.0或<1.0为阴性。所有资料的统计学方法采用t检
, 百拇医药
验。
结 果
一、舌癌及口腔粘膜癌前病变ras P21表达结果
按照荧光指数判定,3例正常口腔粘膜组织P21表达均为阴性。舌癌及癌前病变组织P21表达
的荧光指数见表1。
表1 舌癌和癌前病变P21表达的荧光指数
病变组织
组织学分级
例数
, 百拇医药
FI范围
FI(
±s)
舌 癌
分化Ⅰ级
20
0.79～1.59
1.19±0.24
Ⅱ级
11
0.88～1.67
1.25±0.22
, http://www.100md.com
Ⅲ级
6
1.24～2.16
1.58±0.31
癌前病变
10
0.74～1.24
1.04±0.10
由表1可见,ras基因产物P21表达与组织学分级密切相关,随着组织学分级的增高P21阳性表
达率也增高,舌癌P21表达阳性的病例其荧光指数明显高于癌前病变组织的荧光指数,两者相比,有显著性差异(P<0.01)。
, 百拇医药
二、舌癌ras P21表达与DNA倍体及PI值的关系
37例舌癌患者中,异倍体肿瘤22例,其中19例为P21阳性表达,占86.3%。二倍体肿瘤15例,其
P21阳性表达仅有7例,占46.7%。异倍体肿瘤患者P21阳性表达率明显高于二倍体肿瘤患者(P<0.05)。
同时,P21阳性表达的肿瘤其PI值也高于P21阴性表达的肿瘤。
三、流式细胞结果与舌癌临床分期的关系
舌癌组织的异倍体检出率、FI值及DI值都随着临床分期及肿瘤大小的增加而增高,表现了
, 百拇医药 良好的相关性(P?.05)。PI值未能显示出明显的改变。见表2。
讨 论
ras癌基因在人体细胞的增殖分化等生物过程中起着重要作用。ras癌基因的表达产物为
P21蛋白分子量为21 kd,如果ras癌基因被激活后,P21异常表达,引起细胞代谢变化异常,最终导
致向恶性转化。本组37例舌癌中,26例P21表达阳性,P21表达量与舌癌组织学分级密切相关,分
化越差,P21表达阳性率越高,提示我们可根据P21表达量判断肿瘤的恶性程度。口腔鳞癌异倍
, 百拇医药
体检出率文献中最低为21%,最高为71%,本组资料中,舌癌异倍体检出率为59.45%,笔者认为,舌癌异倍体的增高和DNA含量的增加,反映了舌癌恶性程度高的生物学行为。在10例口腔癌
前病变中,P21阳性表达3例,其中2例出现异倍体,说明P21在肿瘤细胞生长增殖过程中起着重要
的调控作用。
表2 流式细胞结果与舌癌临床分期的关系
临床分期
例数
异倍体
FI
DI
, http://www.100md.com
PI
T1
7
3(42.8)
1.21±0.30
1.07±0.05
21.13±6.34
T2
15
8(53.3)
1.22±0.24
1.11±0.11
, http://www.100md.com
21.92±5.68
T3
10
6(60)
1.26±0.22
1.16±0.09
21.93±5.51
T4
5
5(100)
1.56±0.35
1.23±0.09
, 百拇医药
21.78±5.25
本组资料还表明,异倍体检出率、DI值、FI值与临床分期具有明显的相关性,各值均随着
临床分期的增高而增高,说明随着舌癌的生长时间的延长,其DNA干系水平也是发生变化的。
因此,P21表达量及DNA定量分析对指导舌癌的临床分期,选择舌癌的临床治疗方法起着重要
作用。
参 考 文 献
1 刘新月,齐风英,侯琳,等.癌基因ras P21在口腔癌前病变和鳞癌表达的定量研究.中华口
腔医学杂志,1995,30(4):225-226.
, 百拇医药
2 左连富,刘洪祥,郭建文,等.流式细胞检测石蜡包埋肿瘤细胞DNA含量的样品制备方法.中
华病理学杂志,1988,17:232-233.
3 Morkve O,Laerum OD.Flow cytometric measurement of P21 protein expression and DNA content in
paraffin embedded tissue from bronchial carcinomas.Cytometry,1991,12(4):438-440.
(收稿 1996-10-30 修回 1997-07-02), 百拇医药
单位：050011 石家庄,河北医科大学第四医院(许彦枝、王晓玲、左连富、刘忆林)；河北医科大学第二医院(唐全勇、张洁英)
关键词：
近年的研究发现 近年的研究发现,人类肿瘤的发生、发展与癌基因的激活有关。ras基因是人体一个重要的
原癌基因,当该基因被激活时,其效应分子的蛋白产物P21对人体正常细胞的转化及肿瘤的发生起
着重要作用。有关ras基因产物P21在口腔恶性肿瘤的表达研究已有一些报道〔1〕,但针对不同发
生部位研究P21表达及DNA含量与临床的关系报道不多。舌癌是常见的口腔癌,因舌体具有丰富
, 百拇医药
的淋巴管和血液循环,加以舌的机械运动频繁常引起早期淋巴结转移。为进一步探讨舌癌的生
物学行为与组织发生、临床特点的关系,本研究应用流式细胞术和细胞免疫荧光技术,对舌癌和
口腔粘膜癌前病变ras P21表达量和DNA含量进行了定量检测,现报道如下。
材 料 与 方 法
①标本来源为存档的石蜡包埋组织块中的舌鳞癌37例。其中分化Ⅰ级20例,Ⅱ级11例,Ⅲ级
6例(根据1971年WHO国际肿瘤分类)。口腔粘膜癌前病变组织10例,取正常口腔粘膜组织3例作
为对照。②将石蜡包埋组织切40 μm厚的组织片经二甲苯脱蜡,梯度酒精水化后用搓网方法制
, 百拇医药
备单细胞悬液并采用间接免疫荧光染色方法进行ras P21单克隆抗体标记〔2〕。采用溴化乙啶荧
光染液对细胞DNA进行染色。③应用美国BD公司生产的FACS 420型流式细胞仪,分别进行单参
数检测、测量数据及资料处理。DNA含量以DNA指数(DI)表示相对DNA含量,依据DI值判定DNA
倍体,DI=1.0±2 CV为二倍体,DI≠1.0±2 CV为异倍体。应用计算机细胞周期分析软件计算出各
时相百分比,以增殖指数PI表示增殖活性。按照Morkve〔3〕提出的荧光指数(FI)分析方法表示P21表达的相对含量。FI>1.0表示P21表达阳性,FI=1.0或<1.0为阴性。所有资料的统计学方法采用t检
, 百拇医药
验。
结 果
一、舌癌及口腔粘膜癌前病变ras P21表达结果
按照荧光指数判定,3例正常口腔粘膜组织P21表达均为阴性。舌癌及癌前病变组织P21表达
的荧光指数见表1。
表1 舌癌和癌前病变P21表达的荧光指数
病变组织
组织学分级
例数
, 百拇医药
FI范围
FI(
±s)舌 癌
分化Ⅰ级
20
0.79～1.59
1.19±0.24
Ⅱ级
11
0.88～1.67
1.25±0.22
, http://www.100md.com
Ⅲ级
6
1.24～2.16
1.58±0.31
癌前病变
10
0.74～1.24
1.04±0.10
由表1可见,ras基因产物P21表达与组织学分级密切相关,随着组织学分级的增高P21阳性表
达率也增高,舌癌P21表达阳性的病例其荧光指数明显高于癌前病变组织的荧光指数,两者相比,有显著性差异(P<0.01)。
, 百拇医药
二、舌癌ras P21表达与DNA倍体及PI值的关系
37例舌癌患者中,异倍体肿瘤22例,其中19例为P21阳性表达,占86.3%。二倍体肿瘤15例,其
P21阳性表达仅有7例,占46.7%。异倍体肿瘤患者P21阳性表达率明显高于二倍体肿瘤患者(P<0.05)。
同时,P21阳性表达的肿瘤其PI值也高于P21阴性表达的肿瘤。
三、流式细胞结果与舌癌临床分期的关系
舌癌组织的异倍体检出率、FI值及DI值都随着临床分期及肿瘤大小的增加而增高,表现了
, 百拇医药 良好的相关性(P?.05)。PI值未能显示出明显的改变。见表2。
讨 论
ras癌基因在人体细胞的增殖分化等生物过程中起着重要作用。ras癌基因的表达产物为
P21蛋白分子量为21 kd,如果ras癌基因被激活后,P21异常表达,引起细胞代谢变化异常,最终导
致向恶性转化。本组37例舌癌中,26例P21表达阳性,P21表达量与舌癌组织学分级密切相关,分
化越差,P21表达阳性率越高,提示我们可根据P21表达量判断肿瘤的恶性程度。口腔鳞癌异倍
, 百拇医药
体检出率文献中最低为21%,最高为71%,本组资料中,舌癌异倍体检出率为59.45%,笔者认为,舌癌异倍体的增高和DNA含量的增加,反映了舌癌恶性程度高的生物学行为。在10例口腔癌
前病变中,P21阳性表达3例,其中2例出现异倍体,说明P21在肿瘤细胞生长增殖过程中起着重要
的调控作用。
表2 流式细胞结果与舌癌临床分期的关系
临床分期
例数
异倍体
FI
DI
, http://www.100md.com
PI
T1
7
3(42.8)
1.21±0.30
1.07±0.05
21.13±6.34
T2
15
8(53.3)
1.22±0.24
1.11±0.11
, http://www.100md.com
21.92±5.68
T3
10
6(60)
1.26±0.22
1.16±0.09
21.93±5.51
T4
5
5(100)
1.56±0.35
1.23±0.09
, 百拇医药
21.78±5.25
本组资料还表明,异倍体检出率、DI值、FI值与临床分期具有明显的相关性,各值均随着
临床分期的增高而增高,说明随着舌癌的生长时间的延长,其DNA干系水平也是发生变化的。
因此,P21表达量及DNA定量分析对指导舌癌的临床分期,选择舌癌的临床治疗方法起着重要
作用。
参 考 文 献
1 刘新月,齐风英,侯琳,等.癌基因ras P21在口腔癌前病变和鳞癌表达的定量研究.中华口
腔医学杂志,1995,30(4):225-226.
, 百拇医药
2 左连富,刘洪祥,郭建文,等.流式细胞检测石蜡包埋肿瘤细胞DNA含量的样品制备方法.中
华病理学杂志,1988,17:232-233.
3 Morkve O,Laerum OD.Flow cytometric measurement of P21 protein expression and DNA content in
paraffin embedded tissue from bronchial carcinomas.Cytometry,1991,12(4):438-440.
(收稿 1996-10-30 修回 1997-07-02), 百拇医药