补肾生血胶囊对雌性金黄地鼠性周期和超排卵效果的影响
作者：张树成 郭海洲 吴志奎
单位：
张树成(国家计划生育委员会科学技术研究所 北京 100081)；郭海洲(河南医科大学第二附属医院 郑州 450003)；吴志奎(中国中医研究院广安门医院 北京 100053)
关键词：补肾生血胶囊；性周期；超排卵
中国中医基础医学杂志990710 补肾生血胶囊是根据肾生髓、生血理论和临床实践总结的中药，由生地、熟地、山萸肉、龟板胶等十一味中药组成。研究表明此药具有明显的生髓、造血、生血功能，维持和促进老龄鹌鹑产蛋率[1，2]。为了研究该药在妇科调经、调节排卵功能方面应用的可能性，验证中医肾主生殖和“经水出诸于肾”理论，我们选择雌性金黄地鼠(Golden Hamster, GH)进行了观察。
, 百拇医药 GH是观察排卵和超排卵效果很好的实验动物[3]。平均寿命2年，青春期和性成熟期为4～6周和6～8周，生育期1年，性周期4d。性成熟期后的性周期，可由阴道分泌物清楚地识别，判定每天所处周期状态。本研究选择无规律性周期的老龄和性成熟期GH，连续给药7个周期进行了动态观察，报告如下。
材料和方法
1 动物的选择与分组
选择11个月龄老龄雌性GH80只，实验前连续观察4个周期(16d)表明均已无规律动情周期。同时伴有弓背、怕冷、皮毛稀疏卷曲不贴背、毛色无光泽、脱毛、倦怠和对外界刺激不敏感等症状，符合老年生理性肾虚证表现。体重130g±10g。随机分为对照组20只和高、低剂量实验组各30只。
选择8周龄年青雌性GH66只，实验前观察1个周期表明有规律动情周期，体重95g±5g。随机分为对照组26只和高、低剂量实验组各20只。
, 百拇医药
GH动情周期对外界环境和饲养条件敏感[4]。实验过程中严格控制可能的影响因素，恒温22℃～24℃、恒湿70%、14h光照及营养、噪音、卫生、饮水、空气等。
2 药物和给药剂量
补肾生血胶囊由中国中医研究院广安门医院制剂室生产。直接灌胃给药，实验组服成人临床用药量2、5倍，分别为0.12g/kg和0.3g/kg的低、高剂量组，对照组给等量水。每日定时给药1次，连续给药7个周期(28d)。
3 实验观察
给药后每日定时(上午9：00)检查每只动物阴道分泌物情况，统计每周期(4d)具有动情周期的动物数，并连续观察其规律。在第7个周期内，选择第1d动物进行超排卵处理，孕马血清40IU/只，55h～60h后HCG 40IU/只(均为腹腔注射)，16h～18h后处死动物，由输卵管取出卵丘细胞团，0.1%透明质酸酶去除颗粒细胞，记数排卵细胞数。
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结果
1 对性周期的影响
年青动物的对照组和实验组，动情周期均未受影响，均表现为规律的动情周期(100%)。表明该药对正常周期无影响。
老龄动物给药后，第二周期开始有恢复动情周期动物出现。见表1。表明该药具有恢复老龄动物动情周期的作用。
2 对超排卵效果的影响
表1 老龄GH恢复动情周期的动物数
动情周期
0
1
2
, 百拇医药
3
4
5
6
7
中药低剂量组
0
0
2(6.7)
5(16.7)
7(23.3)
14(46.7)
16(53.3)
, 百拇医药
24(80.0)
中药高剂量组
0
0
7(23.3)
11(36.7)
14(46.7)
17(56.7)
23(76.7)
28(93.3)
对照组
0
0
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0
0
0
0
0
0
( )为百分率
2.1 年青动物：对照组超排卵数目907个，平均34.9±8.0个/只，范围为24～55个/只；中药低、高剂量组超排卵数目976个、1226个，平均48.8±12.5、61.3±16.6个/只，范围为30～67、32～89个/只。中药低、高剂量组超排卵数目分别比对照组增加40%、76%，且均具有显著性统计学差异(P<0.01)。表明该药具有增加年青GH超排卵能力的作用，对卵巢排卵功能有明显促进作用。
, http://www.100md.com 2.2 老龄动物：对照组超排卵数目60个，平均3.0±2.8个/只；中药低、高剂量分别超排卵数目为447个、735个、平均14.9±5.3、24.5±5.9个/只。中药低、高剂量组均比对照组显著增加，且有极显著性统计学差异(均P<0.01)，分别达到年青正常动物超排卵数的43%、70%。表明该药促进老龄GH卵巢排卵功能恢复，使超排卵能力显著增加。 讨论
在评价中药对女性生殖系统功能影响的实验研究中，能够正确地选择一种合适的实验动物模型十分重要。近年来，兼有或直接用于女性生殖系统功能的中药制剂，在新药研制和开发上受到重视。为了充分证实药物的作用，选择最有效的实验动物的观察指标受到了人们的重视。目前，观察动物动情周期和排卵功能，多采用大、小鼠完成，实验方法麻烦(如去势处理)或影响因素不易控制(如阴道细胞涂片)，并非最理想的实验动物。在取得相同结果的前提下，选用金黄地鼠(或中国地鼠)为实验动物更方便、有效，并可直接反映药物的作用。我们认为：观察动情周期、排卵功能和卵巢功能等指标，可选择金黄地鼠为实验动物。
, http://www.100md.com
本实验结果显示：补肾生血胶囊具有促进动物排卵功能增强的作用。老龄GH排卵数恢复到年青动物的43%和70%，相当于35.5和23.5周龄GH排卵水平[3]，而此时老龄动物为54周龄。延缓、促进老龄动物的排卵能力，表示其卵巢功能的恢复，对机体的生命活动有重要意义，不但对动物、特别是珍惜动物和濒危动物具有重要意义，而且对妇女同样重要。随着妇女初产年龄的增大，生育力和排卵能力也逐渐下降，延缓生育能力，促进生育能力的维持或恢复，将对机体抗衰老产生积极意义。
中医认为：“肾主生殖”，“肾为先天之本”，机体的生长发育与生殖功能，和肾气盛衰、肾精的盈亏有密切的关系。”月经全借肾水施化”，“经水出诸于肾”，妇女月经周期的物质基础是血，补肾生精，精血同源，相互资生。本实验表明，补肾生血方剂具有的作用，体现了中医“肾主生殖”“经水出诸于肾”的理论。
作者简介：张树成，男，37岁，助理研究员。从事中药促排卵分子机理的研究。
, 百拇医药
参考文献
1 吴志奎，等.肾生髓理论分子基础的研究.中医杂志，1996，37(2)：109
2 吴志奎，等.补肾生血方对β-地中海贫血基因水平的影响.中医杂志，1997，38：91
3 张树成，等.金黄仓鼠年龄和超排卵的关系.生殖与避孕,1993,13:73
4 张树成，等.金黄地鼠超排卵效果的影响因素.中国实验动物学杂志，1992，(2)：86
(收稿日期 1999—02—21 修回日期 1999—04—03), http://www.100md.com
单位：
张树成(国家计划生育委员会科学技术研究所 北京 100081)；郭海洲(河南医科大学第二附属医院 郑州 450003)；吴志奎(中国中医研究院广安门医院 北京 100053)
关键词：补肾生血胶囊；性周期；超排卵
中国中医基础医学杂志990710 补肾生血胶囊是根据肾生髓、生血理论和临床实践总结的中药，由生地、熟地、山萸肉、龟板胶等十一味中药组成。研究表明此药具有明显的生髓、造血、生血功能，维持和促进老龄鹌鹑产蛋率[1，2]。为了研究该药在妇科调经、调节排卵功能方面应用的可能性，验证中医肾主生殖和“经水出诸于肾”理论，我们选择雌性金黄地鼠(Golden Hamster, GH)进行了观察。
, 百拇医药 GH是观察排卵和超排卵效果很好的实验动物[3]。平均寿命2年，青春期和性成熟期为4～6周和6～8周，生育期1年，性周期4d。性成熟期后的性周期，可由阴道分泌物清楚地识别，判定每天所处周期状态。本研究选择无规律性周期的老龄和性成熟期GH，连续给药7个周期进行了动态观察，报告如下。
材料和方法
1 动物的选择与分组
选择11个月龄老龄雌性GH80只，实验前连续观察4个周期(16d)表明均已无规律动情周期。同时伴有弓背、怕冷、皮毛稀疏卷曲不贴背、毛色无光泽、脱毛、倦怠和对外界刺激不敏感等症状，符合老年生理性肾虚证表现。体重130g±10g。随机分为对照组20只和高、低剂量实验组各30只。
选择8周龄年青雌性GH66只，实验前观察1个周期表明有规律动情周期，体重95g±5g。随机分为对照组26只和高、低剂量实验组各20只。
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GH动情周期对外界环境和饲养条件敏感[4]。实验过程中严格控制可能的影响因素，恒温22℃～24℃、恒湿70%、14h光照及营养、噪音、卫生、饮水、空气等。
2 药物和给药剂量
补肾生血胶囊由中国中医研究院广安门医院制剂室生产。直接灌胃给药，实验组服成人临床用药量2、5倍，分别为0.12g/kg和0.3g/kg的低、高剂量组，对照组给等量水。每日定时给药1次，连续给药7个周期(28d)。
3 实验观察
给药后每日定时(上午9：00)检查每只动物阴道分泌物情况，统计每周期(4d)具有动情周期的动物数，并连续观察其规律。在第7个周期内，选择第1d动物进行超排卵处理，孕马血清40IU/只，55h～60h后HCG 40IU/只(均为腹腔注射)，16h～18h后处死动物，由输卵管取出卵丘细胞团，0.1%透明质酸酶去除颗粒细胞，记数排卵细胞数。
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结果
1 对性周期的影响
年青动物的对照组和实验组，动情周期均未受影响，均表现为规律的动情周期(100%)。表明该药对正常周期无影响。
老龄动物给药后，第二周期开始有恢复动情周期动物出现。见表1。表明该药具有恢复老龄动物动情周期的作用。
2 对超排卵效果的影响
表1 老龄GH恢复动情周期的动物数
动情周期
0
1
2
, 百拇医药
3
4
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中药低剂量组
0
0
2(6.7)
5(16.7)
7(23.3)
14(46.7)
16(53.3)
, 百拇医药
24(80.0)
中药高剂量组
0
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7(23.3)
11(36.7)
14(46.7)
17(56.7)
23(76.7)
28(93.3)
对照组
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( )为百分率
2.1 年青动物：对照组超排卵数目907个，平均34.9±8.0个/只，范围为24～55个/只；中药低、高剂量组超排卵数目976个、1226个，平均48.8±12.5、61.3±16.6个/只，范围为30～67、32～89个/只。中药低、高剂量组超排卵数目分别比对照组增加40%、76%，且均具有显著性统计学差异(P<0.01)。表明该药具有增加年青GH超排卵能力的作用，对卵巢排卵功能有明显促进作用。
, http://www.100md.com 2.2 老龄动物：对照组超排卵数目60个，平均3.0±2.8个/只；中药低、高剂量分别超排卵数目为447个、735个、平均14.9±5.3、24.5±5.9个/只。中药低、高剂量组均比对照组显著增加，且有极显著性统计学差异(均P<0.01)，分别达到年青正常动物超排卵数的43%、70%。表明该药促进老龄GH卵巢排卵功能恢复，使超排卵能力显著增加。 讨论
在评价中药对女性生殖系统功能影响的实验研究中，能够正确地选择一种合适的实验动物模型十分重要。近年来，兼有或直接用于女性生殖系统功能的中药制剂，在新药研制和开发上受到重视。为了充分证实药物的作用，选择最有效的实验动物的观察指标受到了人们的重视。目前，观察动物动情周期和排卵功能，多采用大、小鼠完成，实验方法麻烦(如去势处理)或影响因素不易控制(如阴道细胞涂片)，并非最理想的实验动物。在取得相同结果的前提下，选用金黄地鼠(或中国地鼠)为实验动物更方便、有效，并可直接反映药物的作用。我们认为：观察动情周期、排卵功能和卵巢功能等指标，可选择金黄地鼠为实验动物。
, http://www.100md.com
本实验结果显示：补肾生血胶囊具有促进动物排卵功能增强的作用。老龄GH排卵数恢复到年青动物的43%和70%，相当于35.5和23.5周龄GH排卵水平[3]，而此时老龄动物为54周龄。延缓、促进老龄动物的排卵能力，表示其卵巢功能的恢复，对机体的生命活动有重要意义，不但对动物、特别是珍惜动物和濒危动物具有重要意义，而且对妇女同样重要。随着妇女初产年龄的增大，生育力和排卵能力也逐渐下降，延缓生育能力，促进生育能力的维持或恢复，将对机体抗衰老产生积极意义。
中医认为：“肾主生殖”，“肾为先天之本”，机体的生长发育与生殖功能，和肾气盛衰、肾精的盈亏有密切的关系。”月经全借肾水施化”，“经水出诸于肾”，妇女月经周期的物质基础是血，补肾生精，精血同源，相互资生。本实验表明，补肾生血方剂具有的作用，体现了中医“肾主生殖”“经水出诸于肾”的理论。
作者简介：张树成，男，37岁，助理研究员。从事中药促排卵分子机理的研究。
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参考文献
1 吴志奎，等.肾生髓理论分子基础的研究.中医杂志，1996，37(2)：109
2 吴志奎，等.补肾生血方对β-地中海贫血基因水平的影响.中医杂志，1997，38：91
3 张树成，等.金黄仓鼠年龄和超排卵的关系.生殖与避孕,1993,13:73
4 张树成，等.金黄地鼠超排卵效果的影响因素.中国实验动物学杂志，1992，(2)：86
(收稿日期 1999—02—21 修回日期 1999—04—03), http://www.100md.com