加味一贯煎对实验性肝肾阴虚证大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的影响
作者：任小巧 卢跃卿 邓伟 李华利 楚延春
单位：任小巧(河南中医学院，河南 郑州 450003)；卢跃卿(河南中医学院，河南 郑州 450003)；邓伟(河南中医学院，河南 郑州 450003)；李华利(平顶山市中医院，河南 平顶山 467000)；楚延春(平顶山市中医院，河南 平顶山 467000)
关键词：加味一贯煎；肝肾阴虚；下丘脑-垂体-甲状腺轴
中国中药杂志000316 摘 要：目的：探讨加味一贯煎滋补肝肾作用的机理。方法：以慢性激怒应激法制造大鼠肝肾阴虚证模型，以下丘脑、血清TRH，垂体、血清TSH，血清FT4，FT3，rT3为指标，观察加味一贯煎对下丘脑-垂体-甲状腺轴的影响。结果：肝肾阴虚证大鼠下丘脑TRH分泌增加(P<0.05)，垂体TSH，血清TSH降低(P<0.05)，血清FT3，FT4同时降低，rT3增多；加味一贯煎治疗组上述指标与正常对照组比较无显著差异。结论：加味一贯煎有调节下丘脑-垂体-甲状腺轴功能的作用。
, 百拇医药
Effect of Jiaweiyiguanjian Decoction on Hyphthalamus-Pituitary-Thypoid
Gland (HPT) in Rat Model with Yin-defficiency of Liver and
Kidney Induced by Slow Irritation
REN Xiao-qiao LU Yao-qing DENG Wei
(Henan College of Traditional Chinese Medicine,Zhengzhou 450003,Henan,China)
LI Hua-li CHU Yan-chun
, 百拇医药
(Pingdingshan Hospital of Traditional Chinese Medicine, Pingdingshan 467000,Henan，China)
Abstract：Objective:To explore the mechanism of Jiaweiyiguanjian decoction in nourishing the liver and kidney.Method:A rat model with Yin-defficiency of liver and kidney was made by way of slow irritation. Thyrotropin-releasing-hormone(TRH)of thyron and blood,TSH of pituitary and blood,thyroxine,3,5,3',5-tetraiodothyronine(FT4) and 3,3',5-traiodothyronine(FT4),3,3',5-traiodothyronine(rT3) were used as indexes to study the effect of the decoction on HPT.Result:The TRH Secretion from hyphthalamus increased (P<0.05),TSH of pituitary and blood reduced(P<0.05),FT3 and FT4 of blood decreased at the same time and rT3 of blood. increased. The indexes of the treatment group were found almost the same as the those of the normal control group.Conclusion:Jiaweiyiguanjian Decoction could adjust HPT.
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Key words：jiaweiyiguanjian；Yin-difficiency of liver and kidney; Hyphthalamus-pituitary-thypoid gland▲
加味一贯煎是临床治疗肝肾阴虚证的有效方[1，2]，但对其滋补肝肾的药理机制研究较少，作者曾从脂质过氧化等方面进行了初步探讨[3]，为了进一步探讨其作用机制，又从下丘脑-垂体-甲状腺轴方面进行了深入探讨，现报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 动物 健康SD大鼠，雄性，体重(220±20) g，由河南医科大学实验动物中心提供，饲养条件为室温20～28 ℃，每天光照12 h(7：00 Am～19:00 Pm)，黑暗12 h(19：00 pm～7：00 Am)，普通饲料。
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1.1.2 药品与试剂
1.1.2.1 中药 加味一贯煎：生地24 g，北沙参20 g，当归15 g，枸杞子12 g，麦冬15 g，川楝子10 g，丹参30 g，郁金15 g，山萸肉12 g等。柴胡舒肝散：柴胡12 g，陈皮12 g，香附15 g，川芎12 g，枳壳10 g，白芍18 g，甘草5 g。以上药品均购于河南省药材公司，并经中药教研室鉴定均符合药典规定。加味一贯煎经水煎3次，滤渣，浓缩至2.0 g.ml-1(含生药量)；柴胡疏肝散经蒸馏，提取挥发油后浓缩至0.75 g.ml-1(含生药量)，兑入挥发油中。
1.1.2.2 主要试剂 游离3，5，3’，5-三碘甲腺原氨酸(FT3)试剂盒，游离四碘甲腺原氨酸(FT4)放射免疫试剂盒，3，3’，5-三碘甲腺原氨酸(rT3)放射免疫试剂盒，血清促甲状腺素(TSH)放射免疫试剂盒，促甲状腺激素释放激素(TRH)放射免疫试剂盒，均为北方生物技术研究所生产，批号9809。
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1.2 方法
1.2.1 分组与造模 取大鼠33只，按随机数字法将大鼠分为空白对照组8只，肝肾阴虚模型组9只，加味一贯煎治疗组8只，柴胡疏肝散治疗组8只；除空白对照组外，余组大鼠均双后肢束缚，立式固定于网笼底盖上，每两只一笼，以引起明显激怒，表现为粗叫，站立对峙和扭打、嘶咬等，首次维持应激20 min，以后隔日增加10 min，共20 d，对照组除不固定后肢外，余处理同其他组，同时记录每日大鼠体重，饮水量，大、小便情况，测量肛温等。
1.2.2 给药方法 按人和大鼠体表面积系数换算量计算，加味一贯煎治疗组从造模第1天起以20 g.kg-1.d-1的剂量灌服加味一贯煎煎剂，柴胡疏肝散组以7.5g.kg-1.d-1的剂量灌服柴胡疏肝散浓缩液，空白对照组和肝肾阴虚模型组灌服生理盐水，剂量为10 ml.kg-1.d-1。
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1.2.3 取材与样本制备 于实验第21天，第22天9：00 Am～11：00 Am处死动物取材，处死前2 h不再给药，间断给予铃声刺激20 min，每次2 min，作为新异刺激，为避免时差，把各组动物配组处死，断头取血，采血分两管，一管预先加入TRH抗灭活剂50 μl，放入冰水浴中，15 min内低温离心，取上清液放-40 ℃冰箱保存，待测TRH；另一管取血3～4 ml，常温下静置沉淀后离心，取血清，低温冰箱保存，待测TSH，FT3，FT4，rT3。
处死后，迅速打开颅腔，分离出垂体和大脑，置沸腾的生理盐水中煮沸5 min；用小打孔器在大脑腹侧视交叉后，打孔取组织柱2～3 mm，即下丘脑，称重后，加入HCl 1 mol.L-1 2 ml，匀浆1 min，以NaOH 1 mol.L-1 2ml中和，离心后取上清液置-40 ℃冰箱保存，待测下丘脑TRH；将垂体去除后叶后称重，加入HCl 1 mol.L-1 1 ml，匀浆1 min，以NaOH 1 mol.L-1中和，离心，取上清液置-40 ℃冰箱保存，待测垂体TSH。
, 百拇医药
2 结果与分析
2.1 一般情况 造模组大鼠体重明显减轻，皮毛干燥无泽，饮水量有所增加，小便短黄，大便干结，肛温有所上升(但无统计学意义)，而加味一贯煎治疗组无明显变化(与正常对照组比较)。
2.2 加味一贯煎对肝肾阴虚证大鼠血清FT3，FT4，rT3的影响 结果见表1，表内数据采用双样本异方差假设，t检验。
从表1可知，造模组FT3，FT4均显著低于正常对照组(P<0.01～0.05)，加味一贯煎治疗组FT3，FT4与正常组比无显著性差异(P>0.05)，柴胡疏肝散治疗组FT3，FT4显著降低，与正常对照组比P<0.01。模型组血清rT3水平显著增高(P<0.05)，加味一贯煎治疗组血清rT3含量无明显变化，与正常对照组比P>0.05，柴胡疏肝散治疗组rT3反而更高(P<0.05)，说明加味一贯煎可纠正肝肾阴虚大鼠FT4，FT3，rT3的紊乱状态，而柴胡疏肝散则几乎无作用。
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2.3 加味一贯煎对肝肾阴虚证大鼠血清、垂体TSH及下丘脑、血清TRH的影响 结果见表2，表内数据采用双样本假设，t检验。
表1 加味一贯煎对肝肾阴虚证大鼠血清FT4，FT3，rT3的影响 组别
n
FT3/pmol.L-1
FT4/pmol.L-1
rT3/ng.L-1
正常组
, 百拇医药
8
2.12±0.75
7.69±3.67
5.37±2.57
模型组
9
1.04±0.482)
3.14±1.231)
7.88±1.851)
加味一贯煎组
8
, 百拇医药 1.75±0.45
5.69±1.88
5.65±2.563)
柴胡疏肝散组
8
1.17±0.435)
4.23±1.495)
7.89±1.954)
注：①
±s ②模型组与正常组比 1)P<0.05 2)P<0.01 ③加味一贯煎组与模型组比 3)P<0.05 ④柴胡疏肝散组与正常组比 4)P<0.05 5)P<0.01 表2 加味一贯煎对肝肾阴虚大鼠TSH，TRH的影响 组别
, http://www.100md.com
n
血清TSH/
μU.ml-1
垂体TSH/
μU.ml-1
血清TRH/
pg.ml-1
下丘脑TRH/
pg.ml-1
正常组
, 百拇医药
8
0.82±0.12
1.92±0.67
44.43±5.28
8.23±1.62
模型组
9
0.67±0.111)
1.25±0.391)
40.22±5.49
21.37±9.092)
, 百拇医药
加味一贯煎组
8
0.75±0.12
1.69±0.55
45.00±4.74
11.39±2.923)
柴胡舒肝散组
8
0.67±0.124)
1.53±0.41
40.78±6.65
, 百拇医药 15.39±3.174)
注：①±s ②模型组与正常组比 1)P<0.05 2)P<0.01 ③加味一贯煎组与模型组比 3)P<0.05 ④柴胡疏肝散组与正常组比 4)P<0.05
由表2可知模型组血清、垂体TSH均显著降低(P<0.05)，下丘脑TRH水平明显高于正常对照组(P<0.01)，血清TRH各组间比较差异不明显，经加味一贯煎治疗的加味一贯煎组各指标趋于正常，与模型组比较P<0.05，与正常组比较P>0.05，柴胡疏肝散组上述指标有所改善，但与空白对照组比较仍未能恢复正常水平(P<0.05)，说明加味一贯煎能纠正下丘脑-垂体-甲状腺轴的紊乱状。
3 讨论
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我们以往的实验表明加味一贯煎滋补肝肾作用表现在降低甘油三酯，降低肝胆固醇含量、降低血清过氧化脂质等方面[3]，为了进一步探讨其作用机制，我们通过长期应激激怒法制作肝肾阴虚证模型，从神经-内分泌-免疫网络进一步探讨其作用机制，结果显示应激激怒法所制肝肾阴虚证大鼠下丘脑TRH分泌量显著增加，与正常组比较P<0.01，血清TRH变化不大，与正常组比较P>0.05，而垂体、血清TSH明显降低，血清FT4，FT3含量明显降低，与报道一致[4]，rT3含量各组均显著增高，此结果说明肝肾阴虚时下丘脑TRH分泌增加，但可能由于应激源持续存在或其他方面的原因而致其释放减少，进而引起垂体TSH及血清TSH降低(P<0.05)，血清FT3，FT4亦同时降低，然rT3却增多，使其亲和力增强，使机体处于虚性兴奋状态而呈现五心烦热，皮毛干燥无泽，便干，小便短少等现象，上述现象经滋补肝肾之加味一贯煎治疗后得到明显改善，说明加味一贯煎有调节下丘脑-垂体-甲状腺轴功能作用，此有可能是其滋补肝肾，调整甘油三酯，降低脂质过氧化之关键，但仍需进一步探讨。
, 百拇医药
基金项目：河南省教委自然科学基金资助项目(98360003)
参考文献：
[1]章真如.加味一贯煎治疗肝病阴虚型疗效观察.中医杂志，1985，26(8)：26.
[2]赵晓林，李 恩，贾漪涛，等.滋补肝肾方药对慢性激怒应激大鼠下丘脑肝脏核糖体聚态的影响.中国中医基础医学杂志，1997，3(5)：28.
[3]任小巧.加味一贯煎滋补肝肾作用的研究.河南中医，1995，15(2)：86.
[4]武文斌，郭恒岳，赵青海，等.阴虚，阳虚证与血清rT3浓度的关系.山东中医学院学报，1991，15(2)：24.
收稿日期：1999-04-07, 百拇医药
单位：任小巧(河南中医学院，河南 郑州 450003)；卢跃卿(河南中医学院，河南 郑州 450003)；邓伟(河南中医学院，河南 郑州 450003)；李华利(平顶山市中医院，河南 平顶山 467000)；楚延春(平顶山市中医院，河南 平顶山 467000)
关键词：加味一贯煎；肝肾阴虚；下丘脑-垂体-甲状腺轴
中国中药杂志000316 摘 要：目的：探讨加味一贯煎滋补肝肾作用的机理。方法：以慢性激怒应激法制造大鼠肝肾阴虚证模型，以下丘脑、血清TRH，垂体、血清TSH，血清FT4，FT3，rT3为指标，观察加味一贯煎对下丘脑-垂体-甲状腺轴的影响。结果：肝肾阴虚证大鼠下丘脑TRH分泌增加(P<0.05)，垂体TSH，血清TSH降低(P<0.05)，血清FT3，FT4同时降低，rT3增多；加味一贯煎治疗组上述指标与正常对照组比较无显著差异。结论：加味一贯煎有调节下丘脑-垂体-甲状腺轴功能的作用。
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Effect of Jiaweiyiguanjian Decoction on Hyphthalamus-Pituitary-Thypoid
Gland (HPT) in Rat Model with Yin-defficiency of Liver and
Kidney Induced by Slow Irritation
REN Xiao-qiao LU Yao-qing DENG Wei
(Henan College of Traditional Chinese Medicine,Zhengzhou 450003,Henan,China)
LI Hua-li CHU Yan-chun
, 百拇医药
(Pingdingshan Hospital of Traditional Chinese Medicine, Pingdingshan 467000,Henan，China)
Abstract：Objective:To explore the mechanism of Jiaweiyiguanjian decoction in nourishing the liver and kidney.Method:A rat model with Yin-defficiency of liver and kidney was made by way of slow irritation. Thyrotropin-releasing-hormone(TRH)of thyron and blood,TSH of pituitary and blood,thyroxine,3,5,3',5-tetraiodothyronine(FT4) and 3,3',5-traiodothyronine(FT4),3,3',5-traiodothyronine(rT3) were used as indexes to study the effect of the decoction on HPT.Result:The TRH Secretion from hyphthalamus increased (P<0.05),TSH of pituitary and blood reduced(P<0.05),FT3 and FT4 of blood decreased at the same time and rT3 of blood. increased. The indexes of the treatment group were found almost the same as the those of the normal control group.Conclusion:Jiaweiyiguanjian Decoction could adjust HPT.
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Key words：jiaweiyiguanjian；Yin-difficiency of liver and kidney; Hyphthalamus-pituitary-thypoid gland▲
加味一贯煎是临床治疗肝肾阴虚证的有效方[1，2]，但对其滋补肝肾的药理机制研究较少，作者曾从脂质过氧化等方面进行了初步探讨[3]，为了进一步探讨其作用机制，又从下丘脑-垂体-甲状腺轴方面进行了深入探讨，现报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 动物 健康SD大鼠，雄性，体重(220±20) g，由河南医科大学实验动物中心提供，饲养条件为室温20～28 ℃，每天光照12 h(7：00 Am～19:00 Pm)，黑暗12 h(19：00 pm～7：00 Am)，普通饲料。
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1.1.2 药品与试剂
1.1.2.1 中药 加味一贯煎：生地24 g，北沙参20 g，当归15 g，枸杞子12 g，麦冬15 g，川楝子10 g，丹参30 g，郁金15 g，山萸肉12 g等。柴胡舒肝散：柴胡12 g，陈皮12 g，香附15 g，川芎12 g，枳壳10 g，白芍18 g，甘草5 g。以上药品均购于河南省药材公司，并经中药教研室鉴定均符合药典规定。加味一贯煎经水煎3次，滤渣，浓缩至2.0 g.ml-1(含生药量)；柴胡疏肝散经蒸馏，提取挥发油后浓缩至0.75 g.ml-1(含生药量)，兑入挥发油中。
1.1.2.2 主要试剂 游离3，5，3’，5-三碘甲腺原氨酸(FT3)试剂盒，游离四碘甲腺原氨酸(FT4)放射免疫试剂盒，3，3’，5-三碘甲腺原氨酸(rT3)放射免疫试剂盒，血清促甲状腺素(TSH)放射免疫试剂盒，促甲状腺激素释放激素(TRH)放射免疫试剂盒，均为北方生物技术研究所生产，批号9809。
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1.2 方法
1.2.1 分组与造模 取大鼠33只，按随机数字法将大鼠分为空白对照组8只，肝肾阴虚模型组9只，加味一贯煎治疗组8只，柴胡疏肝散治疗组8只；除空白对照组外，余组大鼠均双后肢束缚，立式固定于网笼底盖上，每两只一笼，以引起明显激怒，表现为粗叫，站立对峙和扭打、嘶咬等，首次维持应激20 min，以后隔日增加10 min，共20 d，对照组除不固定后肢外，余处理同其他组，同时记录每日大鼠体重，饮水量，大、小便情况，测量肛温等。
1.2.2 给药方法 按人和大鼠体表面积系数换算量计算，加味一贯煎治疗组从造模第1天起以20 g.kg-1.d-1的剂量灌服加味一贯煎煎剂，柴胡疏肝散组以7.5g.kg-1.d-1的剂量灌服柴胡疏肝散浓缩液，空白对照组和肝肾阴虚模型组灌服生理盐水，剂量为10 ml.kg-1.d-1。
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1.2.3 取材与样本制备 于实验第21天，第22天9：00 Am～11：00 Am处死动物取材，处死前2 h不再给药，间断给予铃声刺激20 min，每次2 min，作为新异刺激，为避免时差，把各组动物配组处死，断头取血，采血分两管，一管预先加入TRH抗灭活剂50 μl，放入冰水浴中，15 min内低温离心，取上清液放-40 ℃冰箱保存，待测TRH；另一管取血3～4 ml，常温下静置沉淀后离心，取血清，低温冰箱保存，待测TSH，FT3，FT4，rT3。
处死后，迅速打开颅腔，分离出垂体和大脑，置沸腾的生理盐水中煮沸5 min；用小打孔器在大脑腹侧视交叉后，打孔取组织柱2～3 mm，即下丘脑，称重后，加入HCl 1 mol.L-1 2 ml，匀浆1 min，以NaOH 1 mol.L-1 2ml中和，离心后取上清液置-40 ℃冰箱保存，待测下丘脑TRH；将垂体去除后叶后称重，加入HCl 1 mol.L-1 1 ml，匀浆1 min，以NaOH 1 mol.L-1中和，离心，取上清液置-40 ℃冰箱保存，待测垂体TSH。
, 百拇医药
2 结果与分析
2.1 一般情况 造模组大鼠体重明显减轻，皮毛干燥无泽，饮水量有所增加，小便短黄，大便干结，肛温有所上升(但无统计学意义)，而加味一贯煎治疗组无明显变化(与正常对照组比较)。
2.2 加味一贯煎对肝肾阴虚证大鼠血清FT3，FT4，rT3的影响 结果见表1，表内数据采用双样本异方差假设，t检验。
从表1可知，造模组FT3，FT4均显著低于正常对照组(P<0.01～0.05)，加味一贯煎治疗组FT3，FT4与正常组比无显著性差异(P>0.05)，柴胡疏肝散治疗组FT3，FT4显著降低，与正常对照组比P<0.01。模型组血清rT3水平显著增高(P<0.05)，加味一贯煎治疗组血清rT3含量无明显变化，与正常对照组比P>0.05，柴胡疏肝散治疗组rT3反而更高(P<0.05)，说明加味一贯煎可纠正肝肾阴虚大鼠FT4，FT3，rT3的紊乱状态，而柴胡疏肝散则几乎无作用。
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2.3 加味一贯煎对肝肾阴虚证大鼠血清、垂体TSH及下丘脑、血清TRH的影响 结果见表2，表内数据采用双样本假设，t检验。
表1 加味一贯煎对肝肾阴虚证大鼠血清FT4，FT3，rT3的影响 组别
n
FT3/pmol.L-1
FT4/pmol.L-1
rT3/ng.L-1
正常组
, 百拇医药
8
2.12±0.75
7.69±3.67
5.37±2.57
模型组
9
1.04±0.482)
3.14±1.231)
7.88±1.851)
加味一贯煎组
8
, 百拇医药 1.75±0.45
5.69±1.88
5.65±2.563)
柴胡疏肝散组
8
1.17±0.435)
4.23±1.495)
7.89±1.954)
注：①
±s ②模型组与正常组比 1)P<0.05 2)P<0.01 ③加味一贯煎组与模型组比 3)P<0.05 ④柴胡疏肝散组与正常组比 4)P<0.05 5)P<0.01 表2 加味一贯煎对肝肾阴虚大鼠TSH，TRH的影响 组别, http://www.100md.com
n
血清TSH/
μU.ml-1
垂体TSH/
μU.ml-1
血清TRH/
pg.ml-1
下丘脑TRH/
pg.ml-1
正常组
, 百拇医药
8
0.82±0.12
1.92±0.67
44.43±5.28
8.23±1.62
模型组
9
0.67±0.111)
1.25±0.391)
40.22±5.49
21.37±9.092)
, 百拇医药
加味一贯煎组
8
0.75±0.12
1.69±0.55
45.00±4.74
11.39±2.923)
柴胡舒肝散组
8
0.67±0.124)
1.53±0.41
40.78±6.65
, 百拇医药 15.39±3.174)
注：①
±s ②模型组与正常组比 1)P<0.05 2)P<0.01 ③加味一贯煎组与模型组比 3)P<0.05 ④柴胡疏肝散组与正常组比 4)P<0.05由表2可知模型组血清、垂体TSH均显著降低(P<0.05)，下丘脑TRH水平明显高于正常对照组(P<0.01)，血清TRH各组间比较差异不明显，经加味一贯煎治疗的加味一贯煎组各指标趋于正常，与模型组比较P<0.05，与正常组比较P>0.05，柴胡疏肝散组上述指标有所改善，但与空白对照组比较仍未能恢复正常水平(P<0.05)，说明加味一贯煎能纠正下丘脑-垂体-甲状腺轴的紊乱状。
3 讨论
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我们以往的实验表明加味一贯煎滋补肝肾作用表现在降低甘油三酯，降低肝胆固醇含量、降低血清过氧化脂质等方面[3]，为了进一步探讨其作用机制，我们通过长期应激激怒法制作肝肾阴虚证模型，从神经-内分泌-免疫网络进一步探讨其作用机制，结果显示应激激怒法所制肝肾阴虚证大鼠下丘脑TRH分泌量显著增加，与正常组比较P<0.01，血清TRH变化不大，与正常组比较P>0.05，而垂体、血清TSH明显降低，血清FT4，FT3含量明显降低，与报道一致[4]，rT3含量各组均显著增高，此结果说明肝肾阴虚时下丘脑TRH分泌增加，但可能由于应激源持续存在或其他方面的原因而致其释放减少，进而引起垂体TSH及血清TSH降低(P<0.05)，血清FT3，FT4亦同时降低，然rT3却增多，使其亲和力增强，使机体处于虚性兴奋状态而呈现五心烦热，皮毛干燥无泽，便干，小便短少等现象，上述现象经滋补肝肾之加味一贯煎治疗后得到明显改善，说明加味一贯煎有调节下丘脑-垂体-甲状腺轴功能作用，此有可能是其滋补肝肾，调整甘油三酯，降低脂质过氧化之关键，但仍需进一步探讨。
, 百拇医药
基金项目：河南省教委自然科学基金资助项目(98360003)
参考文献：
[1]章真如.加味一贯煎治疗肝病阴虚型疗效观察.中医杂志，1985，26(8)：26.
[2]赵晓林，李 恩，贾漪涛，等.滋补肝肾方药对慢性激怒应激大鼠下丘脑肝脏核糖体聚态的影响.中国中医基础医学杂志，1997，3(5)：28.
[3]任小巧.加味一贯煎滋补肝肾作用的研究.河南中医，1995，15(2)：86.
[4]武文斌，郭恒岳，赵青海，等.阴虚，阳虚证与血清rT3浓度的关系.山东中医学院学报，1991，15(2)：24.
收稿日期：1999-04-07, 百拇医药