黄喉拟水龟板中三种甾体化合物的分离和鉴定
作者：孙苏亚 李发美
单位：孙苏亚(沈阳药科大学 基础部，辽宁 沈阳 110015)；李发美(沈阳药科大学 基础部，辽宁 沈阳 110015)
关键词：黄喉拟水龟板；甾体化合物
中国中药杂志000313 摘 要：目的：对黄喉拟水龟板中甾体类成分进行研究。方法：采用真空液相色谱、薄层色谱进行分离，理化、光谱、色谱方法鉴定化合物结构。结果：分得3个甾体化合物，分别为胆甾醇、十二烯酸胆甾醇酯、甾醇-4-烯-3-酮。结论：首次从黄喉拟水龟板中分离、鉴定出3种甾体。
Isolation and Identification of Three Steroid Compounds
from Mauremys mutics Plastron
, http://www.100md.com
SUN Su-ya，LI Fa-mei
(Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110015，Liaoling，China)
Abstract：Objective:To investigate the steroid components from extract of Mauremys mutics.Method:The steroid compounds were isolated by using vacuum liquid chromatography and PTLC. The structures of three compounds were determined by spectral, chromatographic and chemical analysis.Results:Three steroids were isolated from M. mutics and identified as cholesterol，elcosenoic acid cholesterol ester,cholester-4-ene-3-one.Conclusion:All thethree compounds were isolated from M. mutics for the first time.
, 百拇医药
Key word：Mauremys mutics；steroid compounds▲
龟板始载于神农本草经，列为中品。正品龟板是动物乌龟Chinemys reevesi (Gray )的干燥腹甲。具有滋阴潜阳，益肾强骨，养血，补心等功能[1]。市售龟板中常有各种代用品和混淆品，黄喉拟水龟Mauremys mutics为常见的市售品之一。我们曾发现黄喉拟水龟板提取液对去势造成的大鼠骨质疏松有一定的治疗作用[2]。对龟板成分的研究多集中于含量较高的蛋白质、氨基酸与无机盐[3,4]，其脂溶性成分的研究尚未见报道。有报道龟板提取液具有甾体化合物反应[5]，但没有更深入的研究。本文对黄喉拟水龟板脂溶性成分中的分子量较大的化合物进行分析，分离、鉴定出其中的3种甾体化合物。
1 仪器和材料
Bruker ARX-300(300 MHz)核磁共振仪(溶剂氘代氯仿，内标TMS),Yanaco显微熔点仪。甲醇、氯仿、石油醚和环己烷均为分析纯。硅胶G和硅胶H为薄层色谱用(青岛海洋化工厂)。黄喉拟水龟板为市售生品(沈阳药科大学生药鉴定教研室许春泉高级工程师鉴定为M. mutics Plastron)，按文献醋制[6]，粉碎，过40目筛。
, 百拇医药
2 提取分离
黄喉拟水龟板粉末，氯仿-甲醇(1∶2)超声提取1 h(50 g加300 ml)，重复2次(50 g加150 ml)，过滤，滤液合并，旋转蒸发仪(40～50 ℃)浓缩，用2倍量硅胶H吸附得粗品。粗品通过真空液相色谱(VLC)[7,8]分离，环己烷-氯仿-甲醇梯度洗脱，薄层色谱检查合并相同部分，环己烷-氯仿(4∶1)洗脱得Ⅰ；环己烷-氯仿(3∶2)洗脱得Ⅱ；氯仿洗脱得Ⅲ；氯仿-甲醇洗脱得Ⅳ。Ⅰ经制备薄层，石油醚-氯仿(2∶1)展开，刮取呈紫红色带，甲醇洗脱得无色针状结晶1(丙酮)。Ⅱ经制备薄层，甲醇-氯仿(1∶10)展开，刮取呈紫红色带，甲醇洗脱得白色针簇状结晶(甲醇-氯仿)；再经制备薄层，石油醚-氯仿-甲酸(7.5∶1.0∶0.1)展开,刮取呈紫红色带，甲醇洗脱,得白色针状结晶2(甲醇-氯仿)及白色片状结晶3(甲醇-氯仿)。
3 鉴定
化合物1 无色针状结晶。1H NMR(CDCl3)δ:0.70(s,3H,CH3),0.87(d,6H,2×CH3),0.91
, 百拇医药
(d,3H,CH3),1.07(s,3H,CH3),5.70(s,1H,C-4烯氢)。13C NMR(CDCl3)δ:197.7,130.1,143.0
(α,β-不饱和酮)。与对照品Rf值一致，确认为甾醇-4-烯-3-酮。
化合物2 白色细针状结晶，mp 148～150 ℃，Liebermann-burchard阳性。1H NMR(CDCl3)
δ:0.71(s,3H,CH3),0.88(d,6H,2×CH3),0.91(d,3H,CH3),1.04(s,3H,CH3),4.20(m,1H,3-H),5.38
, http://www.100md.com
(d,1H,烯氢)。13C NMR(CDCl3)δ:11.89(C-18),18.76(C-21),19.42(C-19),21.13(C-11),22.57
(C-26),22.82(C-27),28.04(C-5),28.26(C-16),71.86(C-3)。与胆甾醇的1H，13C NMR标准图谱对照一致，确认为胆甾醇。
化合物3 白色片状结晶，Liebermann-burchard反应阳性。1H NMR(CDCl3)δ:0.71(s,3H,CH3),0.88(d,6H,2×CH3),0.91(d,3H,CH3),1.04(s,3H,CH3),4.66(m,1H,3-H),5.39(d,1H,烯
, http://www.100md.com
氢)。13C NMR(CDCl3)δ: ～29(多个CH2),73.70(C-3),129.8(烯碳),130.0(烯碳),173.3(酯羰
基)。与十二烯酸胆甾醇酯的1H，13C NMR标准图谱对照一致，确认为十二烯酸胆甾醇酯。
基金项目：国家教委留学回国人员科研起动基金和沈阳市科技基金资助项目(1996B,K048)
参考文献：
[1]中国药典.一部.1995.154.
[2]孙苏亚，王 锦，刘 铮，等.龟板提取液对去势大鼠骨质疏松的作用.中药药理与临床，1998,14(4):20.
, 百拇医药
[3]方达任，张克兰，刘焱文.龟板、鳖甲炮制前后化学成分的变化.中国药学杂志，1989,24(1):26.
[4]吴丹勇，张淑环.药用龟甲与其混淆品中22种元素的比较.中药材，1992,15(5):13.
[5]章通荣，周胜辉.两种闭壳龟板的鉴别及其化学成分的初步测定.中草药，1985,16(2):10.
[6]曾祥林.对龟板、鳖甲、穿山甲炮制的改进.中国医院药学杂志，1988,8(2):82.
[7]胡 柯，董爱军，姚新生.真空液相色谱法在天然化合物分离中的应用.沈阳药科大学学报，1995,12(2):146.
[8]郑国樨.真空液相色谱——一种高效快速的有机分离方法.有机化学，1989, 9(3):286.
收稿日期：1999-04-27, http://www.100md.com
单位：孙苏亚(沈阳药科大学 基础部，辽宁 沈阳 110015)；李发美(沈阳药科大学 基础部，辽宁 沈阳 110015)
关键词：黄喉拟水龟板；甾体化合物
中国中药杂志000313 摘 要：目的：对黄喉拟水龟板中甾体类成分进行研究。方法：采用真空液相色谱、薄层色谱进行分离，理化、光谱、色谱方法鉴定化合物结构。结果：分得3个甾体化合物，分别为胆甾醇、十二烯酸胆甾醇酯、甾醇-4-烯-3-酮。结论：首次从黄喉拟水龟板中分离、鉴定出3种甾体。
Isolation and Identification of Three Steroid Compounds
from Mauremys mutics Plastron
, http://www.100md.com
SUN Su-ya，LI Fa-mei
(Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110015，Liaoling，China)
Abstract：Objective:To investigate the steroid components from extract of Mauremys mutics.Method:The steroid compounds were isolated by using vacuum liquid chromatography and PTLC. The structures of three compounds were determined by spectral, chromatographic and chemical analysis.Results:Three steroids were isolated from M. mutics and identified as cholesterol，elcosenoic acid cholesterol ester,cholester-4-ene-3-one.Conclusion:All thethree compounds were isolated from M. mutics for the first time.
, 百拇医药
Key word：Mauremys mutics；steroid compounds▲
龟板始载于神农本草经，列为中品。正品龟板是动物乌龟Chinemys reevesi (Gray )的干燥腹甲。具有滋阴潜阳，益肾强骨，养血，补心等功能[1]。市售龟板中常有各种代用品和混淆品，黄喉拟水龟Mauremys mutics为常见的市售品之一。我们曾发现黄喉拟水龟板提取液对去势造成的大鼠骨质疏松有一定的治疗作用[2]。对龟板成分的研究多集中于含量较高的蛋白质、氨基酸与无机盐[3,4]，其脂溶性成分的研究尚未见报道。有报道龟板提取液具有甾体化合物反应[5]，但没有更深入的研究。本文对黄喉拟水龟板脂溶性成分中的分子量较大的化合物进行分析，分离、鉴定出其中的3种甾体化合物。
1 仪器和材料
Bruker ARX-300(300 MHz)核磁共振仪(溶剂氘代氯仿，内标TMS),Yanaco显微熔点仪。甲醇、氯仿、石油醚和环己烷均为分析纯。硅胶G和硅胶H为薄层色谱用(青岛海洋化工厂)。黄喉拟水龟板为市售生品(沈阳药科大学生药鉴定教研室许春泉高级工程师鉴定为M. mutics Plastron)，按文献醋制[6]，粉碎，过40目筛。
, 百拇医药
2 提取分离
黄喉拟水龟板粉末，氯仿-甲醇(1∶2)超声提取1 h(50 g加300 ml)，重复2次(50 g加150 ml)，过滤，滤液合并，旋转蒸发仪(40～50 ℃)浓缩，用2倍量硅胶H吸附得粗品。粗品通过真空液相色谱(VLC)[7,8]分离，环己烷-氯仿-甲醇梯度洗脱，薄层色谱检查合并相同部分，环己烷-氯仿(4∶1)洗脱得Ⅰ；环己烷-氯仿(3∶2)洗脱得Ⅱ；氯仿洗脱得Ⅲ；氯仿-甲醇洗脱得Ⅳ。Ⅰ经制备薄层，石油醚-氯仿(2∶1)展开，刮取呈紫红色带，甲醇洗脱得无色针状结晶1(丙酮)。Ⅱ经制备薄层，甲醇-氯仿(1∶10)展开，刮取呈紫红色带，甲醇洗脱得白色针簇状结晶(甲醇-氯仿)；再经制备薄层，石油醚-氯仿-甲酸(7.5∶1.0∶0.1)展开,刮取呈紫红色带，甲醇洗脱,得白色针状结晶2(甲醇-氯仿)及白色片状结晶3(甲醇-氯仿)。
3 鉴定
化合物1 无色针状结晶。1H NMR(CDCl3)δ:0.70(s,3H,CH3),0.87(d,6H,2×CH3),0.91
, 百拇医药
(d,3H,CH3),1.07(s,3H,CH3),5.70(s,1H,C-4烯氢)。13C NMR(CDCl3)δ:197.7,130.1,143.0
(α,β-不饱和酮)。与对照品Rf值一致，确认为甾醇-4-烯-3-酮。
化合物2 白色细针状结晶，mp 148～150 ℃，Liebermann-burchard阳性。1H NMR(CDCl3)
δ:0.71(s,3H,CH3),0.88(d,6H,2×CH3),0.91(d,3H,CH3),1.04(s,3H,CH3),4.20(m,1H,3-H),5.38
, http://www.100md.com
(d,1H,烯氢)。13C NMR(CDCl3)δ:11.89(C-18),18.76(C-21),19.42(C-19),21.13(C-11),22.57
(C-26),22.82(C-27),28.04(C-5),28.26(C-16),71.86(C-3)。与胆甾醇的1H，13C NMR标准图谱对照一致，确认为胆甾醇。
化合物3 白色片状结晶，Liebermann-burchard反应阳性。1H NMR(CDCl3)δ:0.71(s,3H,CH3),0.88(d,6H,2×CH3),0.91(d,3H,CH3),1.04(s,3H,CH3),4.66(m,1H,3-H),5.39(d,1H,烯
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氢)。13C NMR(CDCl3)δ: ～29(多个CH2),73.70(C-3),129.8(烯碳),130.0(烯碳),173.3(酯羰
基)。与十二烯酸胆甾醇酯的1H，13C NMR标准图谱对照一致，确认为十二烯酸胆甾醇酯。
基金项目：国家教委留学回国人员科研起动基金和沈阳市科技基金资助项目(1996B,K048)
参考文献：
[1]中国药典.一部.1995.154.
[2]孙苏亚，王 锦，刘 铮，等.龟板提取液对去势大鼠骨质疏松的作用.中药药理与临床，1998,14(4):20.
, 百拇医药
[3]方达任，张克兰，刘焱文.龟板、鳖甲炮制前后化学成分的变化.中国药学杂志，1989,24(1):26.
[4]吴丹勇，张淑环.药用龟甲与其混淆品中22种元素的比较.中药材，1992,15(5):13.
[5]章通荣，周胜辉.两种闭壳龟板的鉴别及其化学成分的初步测定.中草药，1985,16(2):10.
[6]曾祥林.对龟板、鳖甲、穿山甲炮制的改进.中国医院药学杂志，1988,8(2):82.
[7]胡 柯，董爱军，姚新生.真空液相色谱法在天然化合物分离中的应用.沈阳药科大学学报，1995,12(2):146.
[8]郑国樨.真空液相色谱——一种高效快速的有机分离方法.有机化学，1989, 9(3):286.
收稿日期：1999-04-27, http://www.100md.com