降脂通脉冲剂对动物实验性血栓形成和血液流变学的影响
作者：李春梅 刘莉
单位：李春梅(山西医科大学 030001)；刘莉(山西医科大学 030001)
关键词：
山西医药杂志000213 高脂血症是引起人类动脉粥样硬化的危险因素并增加冠心病的发生趋势[1]。近年来，采用有效中草药防治心血管疾病已成为当今的重要研究方向。降脂通脉冲剂是一种纯中药复方制剂，方中主要由山楂(Fructus crataegi)、沙棘(Fructus hippophae)、泽泻(Rhizoma alismatis)、决明子(Semen cassiae)、葛根(Radix puerariae)等组成。文献[1，2]指出，能抑制血小板聚集，增加红细胞变形能力，降低血液粘滞度的药物均可治疗血栓性疾病。为进一步评价降脂通脉冲剂对动物实验性血栓形成和血流变的影响，我们采用电刺激大鼠颈总动脉和家兔颈动-静脉旁路血栓形成两种模型，观察了该药对实验性血栓形成的影响，同时采集家兔颈动脉血测定其对ADP和胶原诱导血小板聚集以及全血粘度和红细胞压积的作用。
, http://www.100md.com
1 一般资料
1.1 动物：新西兰大耳白兔，体重(2.3±0.3)kg；Wistar大鼠，体重(254±12)g；以上动物雄雌兼用，由山西医科大学实验动物中心提供。
1.2 药品及试剂：降脂通脉冲剂(JZTMCJ，1∶10)由山西医科大学制药厂生产；ADP钠盐和胶原均购于美国Sigma药学公司。
1.3 仪器：电刺激用恒流-恒压刺激器(上海红旗仪表厂生产)；血管表面测温用95-型半导体点温度计(上海医用仪表厂生产)；血小板计数用PAM-2型PPP血小板计平衡聚集仪(江苏无线电厂)；血小板聚集采用600型单通道血小板聚集仪(美国CHRONOLG公司生产)；全血粘度测定用NXE-I型锥板粘度计(成都仪器厂仿日产品)；红细胞压积测定用H-25FI型毛细管压积离心机(KOKUSANH-25FI)。
, 百拇医药
2 方 法
2.1 对实验性血栓形成的影响
2.1.1 对电刺激大鼠颈总动脉血栓形成的影响：大鼠30只，随机分成三组，每组10只。用40%戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉。实验按照Hladovec法[3]稍加改良，剥离左侧颈总动脉长约15 mm。术毕，大鼠腹膜内注射降脂通脉冲剂5.0～10.0 mg/kg；对照组腹膜内注射等体积生理盐水。用药后15 min，用两根直径0.8 mm，间隔1.5 mm的不锈钢双极电极轻轻挑起颈总动脉，持续恒流刺激。电刺激方波宽为2 ms，强度5 mA，持续时间为7 min。用温度计测定远心端血管表面温度。当动脉内血栓形成堵塞血流，使血管远端温度突降时记录从电刺激开始到血管表面温度突降所需时间作为堵塞时间(occlusion time，OT)，以OT长短作为判断药效的指标。如果60 min后仍未见血管被堵塞时，停止测温，按照60 min统计。实验结束时，剪取刺激部位血管，用10%甲醛溶液固定，作病理切片检查。
, 百拇医药
2.1.2 对家兔实验性血栓形成的影响：取新西兰白兔30只，随机分成3组，每组10只。静注戊巴比妥钠30 mg/kg麻醉。仿Umetsu法[4]稍加改良，造颈动-静脉血流旁路。术毕，立即腹膜内注射降脂通脉冲剂5.0～10.0 mg/kg，对照组腹膜内注射等体积生理盐水。开放血流20 min时取出丝线称重，总重减去线重为血栓湿重，所获数据用t检验处理。
2.2 对ADP和胶原诱导血小板聚集的影响
以上家兔血栓形成实验毕，立即由兔颈总动脉采血5 mL。取3 mL血，用枸橼酸钠(0.1 g/L)溶液按1∶9抗凝。根据Born法[5]制备富血小板血浆(platelet-rich-plasma,PRP)及贫血小板血浆(platelet-poor-plasma,PPP)，用PPP调PRP使血小板计数为(40±5)×1010/L。采用单通道血小板聚集仪，以PPP为参比，观察加入诱导剂后的透光率变化、聚集速度和聚集程度，描记聚集曲线，取5 min时最大血小板聚集率记算聚集抑制率，各兔PRP标本按区组法随机操作，所获数据用t检验处理。
, 百拇医药
2.3 对家兔全血粘度和红细胞压积的影响
2.3.1 对全血粘度的影响：取肝素化兔血1.3 mL，用锥板粘度计，从切变率5.75 s-1到230 s-1分八档测定。选定5.75 s-1和230 s-1切速下的全血粘度值反映降脂通脉冲剂对红细胞聚集性和变形性的影响。实验中控制测定温度在(25±0.1)℃。
2.3.2 对红细胞压积的影响：采用国际血液学会规定的毛细管离心法测定。将戊巴比妥钠麻醉条件下采取的肝素化兔血吸入长约70 mm，内径1.5 mm的玻璃毛细管内，下端用橡皮泥封闭，平置于毛细管压积离心机转子的槽内。转速为12 000 r/min，相应离心力为15 000 g，离心5 min后，将毛细管置于红细胞压积(HCT)读数器上读取红细胞压积值。
3 结 果
, 百拇医药
3.1 对实验性血栓形成的作用：结果见表1～2。电刺激对照鼠颈总动脉(20±4)min时，10/10鼠血管表面温度突降，较刺激前降低(2.8±0.3)℃。降脂通脉冲剂两组鼠大部分颈总动脉堵塞，但堵塞程度轻。少数鼠60 min后仍未见血栓形成。表1表明，与对照组比较，给药两组大鼠血栓形成时间明显延长，与对照组间有显著性差异(P<0.01)。表2表明，降脂通脉冲剂两种剂量给药，亦可使家兔血栓湿重减轻，与对照组比较，差异有显著性。说明降脂通脉冲剂可以抑制大鼠和家兔实验性血栓形成。
表1 降脂通脉冲剂对大鼠实验性血栓形成的影响(
±s) 组别
只数
OT(min)
延长率(%)
, 百拇医药
对照组
10
19.5±4.2
0
JZTM5 mg
10
42.3±2.81)
116.91)
JZTM10 mg
10
45.1±3.61)
131.31)
, http://www.100md.com
1) 与对照组比较P<0.01。
表2 降脂通脉冲剂对家兔实验性血栓形成的影响(±s) 组别
办数
血栓湿重(mg)
抑制率(%)
对照组
10
59±4
0
JZTM5 mg
10
, http://www.100md.com
36±61)
39.71)
JZTM10 mg
10
29±31)
52.01)
1) 与对照组比较P<0.01。
3.2 对ADP和胶原诱导兔血小板聚集的影响：分别用ADP 2 μL(含ADP 2 mol)或胶原2 μL加到200 μL PRP中诱导血小板聚集测定结果见表2。与对照组比较，腹膜内注射降脂通脉冲剂两种剂量，可使ADP诱导血小板聚集程度降低，与对照组比较，差异非常显著。同时亦可使加入胶原后透光度下降值减小〔对照组为：(3.9±2.8)%，降脂通脉冲剂5 mg、10 mg组分别为：(1.1±0.8)%和(0.8±0.7)%，P<0.01)〕，可见降脂通脉冲剂可抑制胶原诱导血小板变形，使血小板聚集速度减慢，聚集程度降低，与对照组间差异具有显著性，结果见表3。表3 降脂通脉冲剂对ADP和胶原诱导兔血小板聚集的影响(±s) 组别
, 百拇医药
只数
ADP(2 mol)
胶原(2 μL)
聚集率(%)
抑制率(%)
聚集率(%)
抑制率(%)
对照组
10
26±8
0
30±5
0
, http://www.100md.com
JZTM5 mg
10
13±71)
49.41)
19±51)
37.81)
JZTM10 mg
10
11±61)
58.91)
15±41)
, 百拇医药
49.21)
1) 与对照组比较P<0.01。
3.3 对家兔全血粘度和红细胞压积的影响：通过八档测定腹膜内注射降脂通脉冲剂两组家兔的全血粘度均显示降低趋势。表4表明，在高切和低切变率下测定的全血粘度值均低于对照组，统计学上差异具有显著性。给药组家兔红细胞压积测定值，降脂通脉冲剂5 mg组虽略低于对照组，但统计学上差异无显著性(P>0.05)。而10 mg组HCT值明显低于对照组，差异具有显著性。表4 降脂通脉冲剂对家兔全血粘度和红细胞压积的影响(±s) 组别
只数
全血粘度(mPas)
红细胞压积
, 百拇医药
(%)
5.75 s-1
230 s-1
对照组
10
11.38±3.12
4.09±0.76
29.7±2.5
JZTM5 mg
10
8.81±2.431)
, 百拇医药 3.21±0.281)
28.2±3.1
JZTM10 mg
10
6.39±2.101)
2.96±0.321)
26.3±1.61)
1) 与对照组比较P<0.01。
4 讨 论
电刺激引起大鼠颈总动脉损伤，可致血管内膜粗皱不平，由此激活内源性和外源性凝血机制，血小板极易粘附于粗皱内膜表面，促使动脉腔内形成肉眼可见的混合血栓[6]。腹膜内注射降脂通脉冲剂两组大鼠经电刺激后剖开动脉，肉眼可见该段管壁呈粗皱不平，有少许纤维蛋白细丝，大部分无血栓形成，对照组大鼠全部形成肉眼可见的混合血栓。同时降脂通脉冲剂可明显延长电刺激大鼠颈总动脉血栓形成时间，亦可减轻家兔颈动-静脉血流旁路血栓湿重，对两种动物实验性血栓形成均产生抑制作用。
, 百拇医药
降脂通脉冲剂两种剂量给药，明显降低ADP诱导家兔血小板聚集的最大反应，提示血小板聚集过程受到不可克服的抑制。同时可抑制胶原诱导家兔血小板变形性和聚集性。胶原诱导血小板聚集的机制主要依赖于血小板释放的ADP和血小板中形成花生四烯酸代谢产物[7]。该制剂对其产生抑制作用可能与阻断胶原诱导血小板聚集的两条途径有关。血液属非牛顿液体，其粘度随切变率的增高而明显降低。在低切变率下，血液粘度受HCT和红细胞聚集等因素的影响，尤以HCT变化影响更重要。HCT增高可使各种切变率下的血液粘度明显增高[8，9]。降脂通脉冲剂可降低家兔全血粘度，其机制可能和降低红细胞压积及抑制红细胞聚集性有关。其抗血栓形成作用则可能与抑制血小板聚集、降低全血粘度和红细胞压积有关。
作者简介：李春梅，女，1958年5月生，主管技师，山西医科大学，030001
参考文献：
1，江明性，杨藻宸，主编.药理学.第4版.北京：人民卫生出版社.1996，143
, 百拇医药
2，Roberts R.Thrombolysis and its sequelae calcium antagonists as potential adjunctive therapy.Circulation,1989,80(Suppl):93-101
3，Hladovec J.Experimental arterial thrombosis in rats with continuous registration.Thromb Haemost,1971,26:407
4，Umets UT.Effect of an imidazol derivative on experimental thrombosis.Thromb Haemost,1978,39:74
5，Born GVR.Observation on the change in shape of blood platelet brought about by adenosine diphosphate.J Physiol,1970,209:487-511
, 百拇医药
6，李麟山，李树清，张晓霏，等.去纤酶对大鼠实验性血栓形成的预防作用.中华医学杂志，1982，62：328-330
7，Wilkison GN.Statistical estimations in enzyme kinetics.Biochem J,1961,80-224
8，马新亮，范家骏，朱妙章，等.急性心肌缺血时低切变率下全血流粘度变化机理研究.生理学报，1988，40(3)：289-291
9，Begg TB,Hearns JB.Components in blood viscosity.Clin Sci,1966,31:87-90
收稿日期：1999-10-25, 百拇医药
单位：李春梅(山西医科大学 030001)；刘莉(山西医科大学 030001)
关键词：
山西医药杂志000213 高脂血症是引起人类动脉粥样硬化的危险因素并增加冠心病的发生趋势[1]。近年来，采用有效中草药防治心血管疾病已成为当今的重要研究方向。降脂通脉冲剂是一种纯中药复方制剂，方中主要由山楂(Fructus crataegi)、沙棘(Fructus hippophae)、泽泻(Rhizoma alismatis)、决明子(Semen cassiae)、葛根(Radix puerariae)等组成。文献[1，2]指出，能抑制血小板聚集，增加红细胞变形能力，降低血液粘滞度的药物均可治疗血栓性疾病。为进一步评价降脂通脉冲剂对动物实验性血栓形成和血流变的影响，我们采用电刺激大鼠颈总动脉和家兔颈动-静脉旁路血栓形成两种模型，观察了该药对实验性血栓形成的影响，同时采集家兔颈动脉血测定其对ADP和胶原诱导血小板聚集以及全血粘度和红细胞压积的作用。
, http://www.100md.com
1 一般资料
1.1 动物：新西兰大耳白兔，体重(2.3±0.3)kg；Wistar大鼠，体重(254±12)g；以上动物雄雌兼用，由山西医科大学实验动物中心提供。
1.2 药品及试剂：降脂通脉冲剂(JZTMCJ，1∶10)由山西医科大学制药厂生产；ADP钠盐和胶原均购于美国Sigma药学公司。
1.3 仪器：电刺激用恒流-恒压刺激器(上海红旗仪表厂生产)；血管表面测温用95-型半导体点温度计(上海医用仪表厂生产)；血小板计数用PAM-2型PPP血小板计平衡聚集仪(江苏无线电厂)；血小板聚集采用600型单通道血小板聚集仪(美国CHRONOLG公司生产)；全血粘度测定用NXE-I型锥板粘度计(成都仪器厂仿日产品)；红细胞压积测定用H-25FI型毛细管压积离心机(KOKUSANH-25FI)。
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2 方 法
2.1 对实验性血栓形成的影响
2.1.1 对电刺激大鼠颈总动脉血栓形成的影响：大鼠30只，随机分成三组，每组10只。用40%戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉。实验按照Hladovec法[3]稍加改良，剥离左侧颈总动脉长约15 mm。术毕，大鼠腹膜内注射降脂通脉冲剂5.0～10.0 mg/kg；对照组腹膜内注射等体积生理盐水。用药后15 min，用两根直径0.8 mm，间隔1.5 mm的不锈钢双极电极轻轻挑起颈总动脉，持续恒流刺激。电刺激方波宽为2 ms，强度5 mA，持续时间为7 min。用温度计测定远心端血管表面温度。当动脉内血栓形成堵塞血流，使血管远端温度突降时记录从电刺激开始到血管表面温度突降所需时间作为堵塞时间(occlusion time，OT)，以OT长短作为判断药效的指标。如果60 min后仍未见血管被堵塞时，停止测温，按照60 min统计。实验结束时，剪取刺激部位血管，用10%甲醛溶液固定，作病理切片检查。
, 百拇医药
2.1.2 对家兔实验性血栓形成的影响：取新西兰白兔30只，随机分成3组，每组10只。静注戊巴比妥钠30 mg/kg麻醉。仿Umetsu法[4]稍加改良，造颈动-静脉血流旁路。术毕，立即腹膜内注射降脂通脉冲剂5.0～10.0 mg/kg，对照组腹膜内注射等体积生理盐水。开放血流20 min时取出丝线称重，总重减去线重为血栓湿重，所获数据用t检验处理。
2.2 对ADP和胶原诱导血小板聚集的影响
以上家兔血栓形成实验毕，立即由兔颈总动脉采血5 mL。取3 mL血，用枸橼酸钠(0.1 g/L)溶液按1∶9抗凝。根据Born法[5]制备富血小板血浆(platelet-rich-plasma,PRP)及贫血小板血浆(platelet-poor-plasma,PPP)，用PPP调PRP使血小板计数为(40±5)×1010/L。采用单通道血小板聚集仪，以PPP为参比，观察加入诱导剂后的透光率变化、聚集速度和聚集程度，描记聚集曲线，取5 min时最大血小板聚集率记算聚集抑制率，各兔PRP标本按区组法随机操作，所获数据用t检验处理。
, 百拇医药
2.3 对家兔全血粘度和红细胞压积的影响
2.3.1 对全血粘度的影响：取肝素化兔血1.3 mL，用锥板粘度计，从切变率5.75 s-1到230 s-1分八档测定。选定5.75 s-1和230 s-1切速下的全血粘度值反映降脂通脉冲剂对红细胞聚集性和变形性的影响。实验中控制测定温度在(25±0.1)℃。
2.3.2 对红细胞压积的影响：采用国际血液学会规定的毛细管离心法测定。将戊巴比妥钠麻醉条件下采取的肝素化兔血吸入长约70 mm，内径1.5 mm的玻璃毛细管内，下端用橡皮泥封闭，平置于毛细管压积离心机转子的槽内。转速为12 000 r/min，相应离心力为15 000 g，离心5 min后，将毛细管置于红细胞压积(HCT)读数器上读取红细胞压积值。
3 结 果
, 百拇医药
3.1 对实验性血栓形成的作用：结果见表1～2。电刺激对照鼠颈总动脉(20±4)min时，10/10鼠血管表面温度突降，较刺激前降低(2.8±0.3)℃。降脂通脉冲剂两组鼠大部分颈总动脉堵塞，但堵塞程度轻。少数鼠60 min后仍未见血栓形成。表1表明，与对照组比较，给药两组大鼠血栓形成时间明显延长，与对照组间有显著性差异(P<0.01)。表2表明，降脂通脉冲剂两种剂量给药，亦可使家兔血栓湿重减轻，与对照组比较，差异有显著性。说明降脂通脉冲剂可以抑制大鼠和家兔实验性血栓形成。
表1 降脂通脉冲剂对大鼠实验性血栓形成的影响(
±s) 组别只数
OT(min)
延长率(%)
, 百拇医药
对照组
10
19.5±4.2
0
JZTM5 mg
10
42.3±2.81)
116.91)
JZTM10 mg
10
45.1±3.61)
131.31)
, http://www.100md.com
1) 与对照组比较P<0.01。
表2 降脂通脉冲剂对家兔实验性血栓形成的影响(
±s) 组别办数
血栓湿重(mg)
抑制率(%)
对照组
10
59±4
0
JZTM5 mg
10
, http://www.100md.com
36±61)
39.71)
JZTM10 mg
10
29±31)
52.01)
1) 与对照组比较P<0.01。
3.2 对ADP和胶原诱导兔血小板聚集的影响：分别用ADP 2 μL(含ADP 2 mol)或胶原2 μL加到200 μL PRP中诱导血小板聚集测定结果见表2。与对照组比较，腹膜内注射降脂通脉冲剂两种剂量，可使ADP诱导血小板聚集程度降低，与对照组比较，差异非常显著。同时亦可使加入胶原后透光度下降值减小〔对照组为：(3.9±2.8)%，降脂通脉冲剂5 mg、10 mg组分别为：(1.1±0.8)%和(0.8±0.7)%，P<0.01)〕，可见降脂通脉冲剂可抑制胶原诱导血小板变形，使血小板聚集速度减慢，聚集程度降低，与对照组间差异具有显著性，结果见表3。表3 降脂通脉冲剂对ADP和胶原诱导兔血小板聚集的影响(
±s) 组别, 百拇医药
只数
ADP(2 mol)
胶原(2 μL)
聚集率(%)
抑制率(%)
聚集率(%)
抑制率(%)
对照组
10
26±8
0
30±5
0
, http://www.100md.com
JZTM5 mg
10
13±71)
49.41)
19±51)
37.81)
JZTM10 mg
10
11±61)
58.91)
15±41)
, 百拇医药
49.21)
1) 与对照组比较P<0.01。
3.3 对家兔全血粘度和红细胞压积的影响：通过八档测定腹膜内注射降脂通脉冲剂两组家兔的全血粘度均显示降低趋势。表4表明，在高切和低切变率下测定的全血粘度值均低于对照组，统计学上差异具有显著性。给药组家兔红细胞压积测定值，降脂通脉冲剂5 mg组虽略低于对照组，但统计学上差异无显著性(P>0.05)。而10 mg组HCT值明显低于对照组，差异具有显著性。表4 降脂通脉冲剂对家兔全血粘度和红细胞压积的影响(
±s) 组别只数
全血粘度(mPas)
红细胞压积
, 百拇医药
(%)
5.75 s-1
230 s-1
对照组
10
11.38±3.12
4.09±0.76
29.7±2.5
JZTM5 mg
10
8.81±2.431)
, 百拇医药 3.21±0.281)
28.2±3.1
JZTM10 mg
10
6.39±2.101)
2.96±0.321)
26.3±1.61)
1) 与对照组比较P<0.01。
4 讨 论
电刺激引起大鼠颈总动脉损伤，可致血管内膜粗皱不平，由此激活内源性和外源性凝血机制，血小板极易粘附于粗皱内膜表面，促使动脉腔内形成肉眼可见的混合血栓[6]。腹膜内注射降脂通脉冲剂两组大鼠经电刺激后剖开动脉，肉眼可见该段管壁呈粗皱不平，有少许纤维蛋白细丝，大部分无血栓形成，对照组大鼠全部形成肉眼可见的混合血栓。同时降脂通脉冲剂可明显延长电刺激大鼠颈总动脉血栓形成时间，亦可减轻家兔颈动-静脉血流旁路血栓湿重，对两种动物实验性血栓形成均产生抑制作用。
, 百拇医药
降脂通脉冲剂两种剂量给药，明显降低ADP诱导家兔血小板聚集的最大反应，提示血小板聚集过程受到不可克服的抑制。同时可抑制胶原诱导家兔血小板变形性和聚集性。胶原诱导血小板聚集的机制主要依赖于血小板释放的ADP和血小板中形成花生四烯酸代谢产物[7]。该制剂对其产生抑制作用可能与阻断胶原诱导血小板聚集的两条途径有关。血液属非牛顿液体，其粘度随切变率的增高而明显降低。在低切变率下，血液粘度受HCT和红细胞聚集等因素的影响，尤以HCT变化影响更重要。HCT增高可使各种切变率下的血液粘度明显增高[8，9]。降脂通脉冲剂可降低家兔全血粘度，其机制可能和降低红细胞压积及抑制红细胞聚集性有关。其抗血栓形成作用则可能与抑制血小板聚集、降低全血粘度和红细胞压积有关。
作者简介：李春梅，女，1958年5月生，主管技师，山西医科大学，030001
参考文献：
1，江明性，杨藻宸，主编.药理学.第4版.北京：人民卫生出版社.1996，143
, 百拇医药
2，Roberts R.Thrombolysis and its sequelae calcium antagonists as potential adjunctive therapy.Circulation,1989,80(Suppl):93-101
3，Hladovec J.Experimental arterial thrombosis in rats with continuous registration.Thromb Haemost,1971,26:407
4，Umets UT.Effect of an imidazol derivative on experimental thrombosis.Thromb Haemost,1978,39:74
5，Born GVR.Observation on the change in shape of blood platelet brought about by adenosine diphosphate.J Physiol,1970,209:487-511
, 百拇医药
6，李麟山，李树清，张晓霏，等.去纤酶对大鼠实验性血栓形成的预防作用.中华医学杂志，1982，62：328-330
7，Wilkison GN.Statistical estimations in enzyme kinetics.Biochem J,1961,80-224
8，马新亮，范家骏，朱妙章，等.急性心肌缺血时低切变率下全血流粘度变化机理研究.生理学报，1988，40(3)：289-291
9，Begg TB,Hearns JB.Components in blood viscosity.Clin Sci,1966,31:87-90
收稿日期：1999-10-25, 百拇医药